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二烯丙基三硫90d经口染毒对Wistar大鼠的亚慢性毒性作用
目的 研究二烯丙基三硫(Diallyl Trisulfide,DATS)对Wistar大鼠的亚慢性毒性作用.方法 SPF级Wistar大鼠80只,按体重随机分为玉米油对照组、DATS低(30 mg/kg)、中(60 mg/kg)、高(90 mg/kg)剂量组每组20只,雌雄各半.连续灌胃染毒90 d,实验结束后,处死大鼠,检测血常规、血清生化和脏器系数等,并观察病理改变.结果 雄性DATS低、中、高剂量组白细胞数均高于对照组(P＜0.05),高剂量组血小板高于对照组(P＜0.05);雌性低、高剂量组白细胞高于对照组(P＜0.05);雄性DATS中、高剂量组肝脏系数高于对照组(P＜0.05),高剂量组脾脏系数高于对照组(P＜0.05),中剂量组肾脏系数高于对照组(P＜0.05),雌性DATS染毒组肝脏系数、肾脏系数高于对照组(P＜0.01,P ＜0.05),肉眼观察雌雄大鼠均出现组肝、脾、肾增大,颜色变深,病理切片雌雄中、高剂量组肾脏、脾脏出现明显病理学改变.结论 DATS经口染毒可引起大鼠白细胞升高和肝、脾肿大,高剂量DATS对大鼠肝、脾可能有一定毒性.
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不同产地大蒜中二烯丙基二硫和二烯丙基三硫的含量测定
目的考察了不同产地大蒜中二烯丙基二硫和二烯丙基三硫的含量.方法采用高效液相色谱法,色谱柱:Zorbax extend-C18(4.6 mm×250mm,5 μm);流动相:甲醇-0.17%甲酸溶液(80:20);检测波长:240 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:35℃.结果二烯丙基二硫在0.368～7.36 μg(r=0.9999)范围内、二烯丙基三硫在0.2288～4.576 μg(r=0.9999)范围内,线性关系良好;二烯丙基二硫和二烯丙基三硫的平均回收率分别为96.53%(RSD=0.93%)和97.57%(RSD=1.36%).结论不同产地大蒜中二烯丙基二硫和二烯丙基三硫的含量差别较大,应选择使用.
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大蒜油中二烯丙基二硫与二烯丙基三硫的热稳定性实验研究
目的：探讨大蒜油中二烯丙基三硫(简称为DATS)、二烯丙基二硫(简称为DADS)的热稳定性。方法：采用气相色谱法、高效液相色谱法测定大蒜油在100 ℃加热不同时间后DATS，DADS的相对含量变化以及单一的DATS，DADS在100 ℃加热0.5 h后，DATS相对含量变化，比较其热稳定性。结果：大蒜油100 ℃加热0.5 h后，DATS相对含量下降19.45%，DADS相对含量升高12.71%；单一的DATS，DADS(含量在90%以上)在100 ℃加热0.5 h后，DATS相对含量下降6.28%，DADS相对含量下降2.56%。结论：大蒜油中DADS热稳定性较DATS为好。
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大蒜挥发油水蒸气蒸馏提取工艺
大蒜为百合科葱属植物Allium stativam L.的鳞茎.大蒜油是采用水蒸气蒸馏法从大蒜中提取的挥发油,为低分子硫醚类组成的混合物,其中以二烯丙基三硫(DATS)和二烯丙基二硫(DADS)为主要成分,二者占挥发油总量的50%～75%[1].
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二烯丙基三硫通过NF-κB抑制脂多糖诱导小鼠肺组织IL-1β表达
目的 探讨核因子-κB(NF-κB)在二烯丙基三硫(DATS)抑制脂多糖(LPS)致急性肺损伤(ALI)小鼠IL-1β表达中的作用.方法 小鼠随机分为对照组、ALI组、DATS组、DATS预防组和DATS治疗组.RT-PCR检测肺组织中IL-1β mRNA表达.电泳迁移率改变(EMSA)检测肺组织NF-κB活性,Western blot检测肺组织中磷酸化及非磷酸化IκB的表达.结果 ALI组小鼠肺组织中IL-1β mRNA表达明显升高(P＜0.01),NF-κB活性及磷酸化IκB表达也明显高于对照组(P＜0.05).DATS预防组可显著抑制肺组织中IL-1β mRNA表达(P＜0.05)、NF-κB活性及磷酸化IκB表达(P＜0.05),但DATS治疗组的抑制效果不明显.结论 DATS可通过抑制LPS诱导的IκB磷酸化及随后的NF-κB活化,进而抑制ALI小鼠肺组织IL-1β mRNA表达,这是DATS发挥抗ALI作用的信号传导机制之一.
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二烯丙基三硫抑制Hela细胞的迁移和侵袭能力观察
目的 研究二烯丙基三硫(diallyl trisulfide,DATS)对Hela细胞迁移能力和侵袭力的影响.方法 用100μmol/L的DATS处理Hela细胞24h(以等量的PBS为对照),Transwell小室观察细胞体外迁移能力的变化,Matrigel和Transwell小室检测Hela细胞侵袭力的变化.结果 DATS处理组Hela细胞的迁移能力比对照组明显减弱(P＜0.01),处理组Hela细胞的侵袭力较对照组也明显降低(P＜0.01).结论 DATS能够抑制Hela细胞的迁移能力和侵袭力.
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二烯丙基三硫化物诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究进展
目前临床上广泛应用的一般化疗药物在杀死肿瘤细胞的同时会无选择地损伤正常组织和细胞,对患者的身体造成严重的不可逆性的损伤,影响患者的生存质量.流行病学调查显示,长期食用大蒜可降低多种恶性肿瘤的发病率.其抗癌作用主要归功于它所含的有机硫化物,主要包括二烯丙基硫化物(diallyl sulfide,DAS)、二烯丙基二硫(diallyl disulfidIe,DADS)、二烯丙基三硫(diallyl trisulfide,DATS)等.有效浓度的上述物质可引起多种恶性肿瘤细胞发生凋亡.当抗肿瘤药物以诱导肿瘤细胞凋亡的方式诱导肿瘤细胞死亡时,不会引发机体的炎症反应,对机体正常细胞影响小.DATS在一些实验中显示出优于其他烯丙基硫化物的抗癌作用.下面就一些实验研究结果对其引起的恶性肿瘤细胞凋亡机制的研究进展进行简要综述.
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RP-HPLC法测定大蒜油中二烯丙基三硫和二烯丙基二硫
大蒜油是百合科葱属植物大蒜Allium sativum L.的地下鳞茎外皮干燥后经水蒸气蒸馏提取而得到的挥发油.大蒜油具有抗菌、调血脂、降血糖、降压利尿、抗血小板凝集、增加纤维蛋白溶解性、保肝、抗衰老、抗肿瘤等多种功能[1,2],特别是对心血管、肿瘤有很好的生理活性,使其在新药开发、保健品生产上存在着很大潜力.我国每年约有20t大蒜油出口,也给大蒜油的生产厂家带来巨大的商机.但我国目前没有完善的大蒜油生产质量标准,仅依据挥发油的物理常数,使生产和出口受到一定的限制.为此本实验选择大蒜油中主要活性成分二烯丙基三硫和二烯丙基二硫为质量控制指标,对大蒜油的质量进行监控,旨在为制定国家标准提供依据.
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大蒜素对小鼠实验性肝损伤的保护作用
大蒜富含多种氨基酸、维生素、微量元素等,其作为民间用药在我国及世界各地皆有数千年的历史.现已证明大蒜具有卓越的抗菌、抗病毒、降血脂、抗肿瘤、抗氧化、解毒及提高机体免疫功能等多种功效.迄今,对大蒜有效成分的研究及新制剂的开发在国际上仍很活跃,本研究分别建立小鼠四氯化碳(CCl4)肝损伤、对乙酰氨基酚(APAP)肝损伤模型,以血清天冬氨酸转氨酶(AST)、谷胱甘肽-转移酶(GST)、肝组织谷胱甘肽(GSH)及MDA含量为测定指标,观察大蒜特有活性成分之一二烯丙基三硫即大蒜素(allitridi,Alt)对实验性肝损伤的影响,并探讨其作用机制.1 材料与方法
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二烯丙基三硫对急性肺损伤小鼠肿瘤坏死因子-α表达及核转录因子-κB活性的影响
目的 探讨二烯丙基三硫(DATS)对脂多糖(LPS)致急性肺损伤(ALI)小鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达及核转录因子-κB(NF-κB)活性的影响.方法 复制LPS致ALI小鼠模型.实验动物按随机数字表法分为生理盐水对照组、ALI模型组、DATS预防组、DATS治疗组和DATS对照组.采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组血清和肺组织匀浆上清液中TNF-α浓度;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组肺组织TNF-α mRNA表达;凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)检测肺组织NF-κB活性.结果 ALI模型组2 h血清及肺组织TNF-α含量明显升高(P均＜0.01),6 h有所降低,但仍高于生理盐水和DATS对照组(P均＜0.01);DATS预防组2 h和6 h血清及肺组织TNF-α含量较ALI模型组均明显降低(P＜0.05或P＜0.01),但DATS治疗组无明显效果(P均＞0.05).ALI模型组2 h肺组织TNF-α mRNA表达较生理盐水对照组和DATS对照组均明显升高(P均＜0.01),DATS预防组可明显抑制肺组织中TNF-α mRNA表达(P＜0.05),但DATS治疗组无明显效果.ALI模型组肺组织NF-κB活性较生理盐水对照组和DATS对照组均明显升高(P均＜0.05),DATS预防组可明显抑制肺组织NF-κB活性(P＜0.05),但DATS治疗组的抑制效果不明显.结论 预先给予DATS可抑制LPS诱导的ALI小鼠肺组织NF-κB活性和TNF-α mRNA表达,减少血清及肺组织中TNF-α的生成,具有一定的抗ALI作用.
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二烯丙基三硫诱导人胃癌细胞凋亡与活性氧之间的关系
目的:探讨二烯丙基三硫(dially trisulfide,DATS)诱导人胃癌细胞系MGC-803凋亡与细胞内活性氧(re-active oxygen species,ROS)之间的关系.方法:用12mg/L的DATS作用于体外培养的MGC-803细胞24h后,用流式细胞术检测凋亡率及细胞内活性氧水平.结果:12mg/L DATS作用于MGC-803细胞24h后,细胞凋亡率明显上升;细胞内活性氧水平与DATS呈浓度依赖性升高.用抗氧化剂NAC预处理细胞,能抑制细胞内活性氧水平的升高及DATS诱导的细胞凋亡.结论:DATS诱导胃癌细胞凋亡与细胞内活性氧产生增加有关.
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二烯丙基三硫对脂多糖诱导小鼠肺泡巨噬细胞株MH-S细胞因子生成的影响
目的 探讨二烯丙基三硫(DATS)对脂多糖(LPS)诱导小鼠肺泡巨噬细胞株MH-S细胞因子生成的影响.方法 体外培养MH-S细胞,用DATS和(或)LPS进行干预.酶联免疫吸附法测定细胞上清液中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)浓度.反转录PCR检测细胞中TNF-α、IL-1β mRNA表达.结果 LPS(1 mg/L)孵育细胞1、2、3、6 h,TNF-α、IL-1β的蛋白生成及其mRNA表达均较对照组明显增加(P＜0.01),呈时间依赖性.用DATS(0.1、0.5、2.5、5.0 mg/L)预处理细胞30 min后再给予LPS刺激3 h,可使TNF-α、IL-1β含量及其mRNA表达明显降低,并呈剂量依赖性,其中TNF-α含量仍高于对照组(P＜0.05),但IL-1β含量在2.5、5 mg/LDATS作用下可降至对照组水平.单独DATS对TNF-α及IL-1β的生成及其mRNA表达无明显影响(P＞0.05).结论 DATS通过抑制LPS诱导的小鼠MH-S细胞TNF-α、IL-1β mR-NA表达而减少其蛋白生成,具有直接的抗炎效应,这是DATS预防ALI发生、减轻肺组织损伤的重要机制.
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GC法测定大蒜油中二烯丙基三硫和二烯丙基二硫的含量
目的:建立测定大蒜油中二烯丙基三硫和二烯丙基二硫含量的GC分析方法,同时将GC与HPLC分析相比较,考察两种方法测定结果是否有差异.方法:色谱条件:DM-WAX石英弹性毛细管色谱柱(30 m×0.25 mm,df0.25 μm,Dikma Technologies);载气:氮气;流速:50 ml/min;检测器FID:H2 50 mL/min,Air 500 mL/min;内标物为十七烷.结果:二烯丙基三硫和二烯丙基二硫分别在0.08～0.40 mg/mL和0.15～0.73 mg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系;平均回收率分别为98.84%和99.28%,RSD分别为2.61%和1.95%.结论:本法操作准确,可用于大蒜油中二烯丙基三硫和二烯丙基二硫的含量测定;样品经GC与LPLC含量测定,结果无显著性差异.
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二烯丙基三硫通过miR-34a调控人白血病细胞中NADPH氧化酶的机制研究
目的:研究二烯丙基三硫(diallyl trisulfide,DATS)对人白血病细胞HL-60细胞中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶活性的影响及可能的作用机制.方法:DATS(150 μmol/L)作用于HL-60细胞不同时间后,采用硝基四氮唑蓝(nitro blue-tetrazolium,NBT)还原实验检测NADPH氧化酶的活性;实时荧光定量PCR检测DATS对微RNA-34a(microRNA-34a,miR-34a)以及S rc、Gab1和Shp-2 mRNA表达的影响及miR-34a对Src、Gab1和Shp-2 mRNA表达的影响;蛋白质印迹法检测DATS及miR-34a对Src、Gab1和Shp-2蛋白磷酸化的影响;细胞计数实验检测DATS和miR-34a对HL-60细胞增殖的影响.结果:DATS作用于HL-60细胞后能明显提高细胞中NADPH氧化酶的活性,且呈时间依赖性,而S rc激酶抑制剂PP2可抑制这种作用;DATS能上调HL-60细胞中miR-34a的表达水平,呈时间依赖性;miR-34a过表达可抑制Src、Gab1和Shp-2 mRNA及磷酸化蛋白的表达;DATS能抑制磷酸化Src、Gab1和Shp-2蛋白的表达水平.DATS和miR-34a过表达能抑制HL-60细胞的增殖,而抑制miR-34a的表达则可提高白血病细胞的增殖能力.结论:DATS可能通过促进HL-60细胞miR-34a-Src-Gab1-Shp途径调控NADPH的氧化酶活性,从而起到抑制白血病细胞增殖的作用.
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二烯丙基三硫对人白血病HL-60细胞凋亡作用的实验研究
目的 研究二烯丙基三硫对HL-60细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 将浓度为30 mg/L 的二烯丙基三硫与HL-60细胞体外共培养48小时后,采用Wright染色在光学显微镜下观察细胞形态学变化;以流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡率;应用免疫组化方法检测细胞内Bcl-2、survivin蛋白的表达.结果 光镜下可见二烯丙基三硫作用后细胞形态出现凋亡的形态特征,空白对照和30 mg/L的二烯丙基三硫分别与HL-60细胞作用48小时,细胞的凋亡率分别为(12.42±O.76)%和(60.57±3.24)%(P
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DATS通过p38MAPK通路抑制LPS诱导的小鼠MH-S细胞TNF-α及IL-1β表达
目的 探讨p38MAPK在二烯丙基三硫(DATS)抑制脂多糖(LPS)诱导小鼠肺泡巨噬细胞促炎细胞因子表达中的作用.方法体外培养MH-S细胞,用DATS和(或)LPS进行干预,Western blot检测细胞p38及磷酸化p38(p-p38)的表达;用LPS和(或)SB203580孵育细胞,反转录PCR检测细胞中TNF-α、IL-1β mRNA表达,Western blot检测细胞磷酸化(p-IκB)及非磷酸化IκB的表达.结果 LPS刺激MH-S细胞可导致p-p38表达增加,呈时间依赖性;用DATS(0.1、0.5、2.5、5.0 mg·L-1)预处理细胞30 min后再给予LPS刺激,p-p38表达呈剂量依赖性下降;单独DATS对p-p38表达无明显影响.p38特异性抑制剂SB203580可剂量依赖性地抑制LPS诱导的p-IκB蛋白、TNF-α及IL-1β mRNA表达.结论 DATS可通过抑制p38MAPK通路抑制IκB磷酸化及NF-κB活化,进而下调LPS诱导小鼠肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-1β mRNA表达.
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DATS对LPS诱导ALI小鼠抗氧化功能及ICAM-1表达的影响
目的 探讨二烯丙基三硫(DATS)对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)小鼠抗氧化功能及细胞间黏附分子-1( ICAM-1)的影响.方法 腹腔注射LPS复制小鼠ALI模型,实验动物随机分为生理盐水对照组、ALI组、DATS预防组、DATS治疗组.测定肺系数、肺组织湿/干重量比值(W/D),以及肺组织丙二醛(MDA)含量、髓过氧化物酶(MPO)活性、超氧化物歧化酶( SOD)活性、总抗氧化能力(T-AOC)活性及ICAM-1的表达.结果 ALI组肺系数、肺组织W/D明显升高,肺组织MDA含量增加,MPO活性升高、SOD活性及T-AOC活性降低,ICAM-1表达增加；预防性应用DATS可减轻肺水肿,减少MDA生成,降低MPO活性、增加SOD活性及T-AOC活性,并使ICAM-1表达减少.DATS治疗组与ALI组相比,各指标均无明显变化.结论 预防性应用DATS对LPS诱导的ALI小鼠可发挥抗氧化作用,减轻肺损伤程度.
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二烯丙基三硫诱导人胃癌细胞凋亡相关基因的差异表达
目的 探讨二烯丙基三硫(diallyl trisulfide, DATS)诱导人胃癌MGC803细胞凋亡的分子机制.方法 MTT法检测DATS对MGC803细胞的生长抑制作用,荧光显微镜和流式细胞仪观察DATS作用后的细胞凋亡.人细胞凋亡基因芯片检测DATS作用MGC803细胞的凋亡相关基因表达谱,RT-PCR验证凋亡相关基因.结果 MTT结果显示,4、8、12、16、24 mg*L-1 DATS对MGC803细胞生长的抑制率从11%增至78%,呈明显量效关系(P<0.05).荧光显微镜下,DATS处理后的MGC803细胞核染色质着橘红色并呈固缩状或片段状.流式细胞仪检测显示,8、12、16、24 mg*L-1 DATS作用24 h后,出现典型亚二倍体峰,平均凋亡率分别为11.4%、23.7%、27.4%、31.1%(P<0.05).人细胞凋亡基因芯片检测结果表明,16 mg*L-1的DATS作用4 h后出现16个凋亡相关基因表达差异,RT-PCR证实,SODD基因mRNA表达上调、Apaf-1基因mRNA表达下调(P<0.05).结论 DATS诱导人胃癌MGC803细胞凋亡可能与多个基因和信号转导通路作用有关.
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DATS通过NF-κB抑制LPS诱导小鼠肺泡巨噬细胞促炎细胞因子表达
目的 探讨二烯丙基三硫(DATS)抑制脂多糖(LPS)诱导小鼠肺泡巨噬细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白介素-1β表达的信号转导机制.方法 体外培养MH-S细胞,用DATS和(或)LPS进行干预.反转录PCR检测细胞中TNF-α、IL-1β mRNA表达,电泳迁移率改变分析(EMSA)检测细胞核因子-κB(NF-κB)活性,Western blot检测细胞磷酸化(p-IκB)及非磷酸化IκB的表达.结果 LPS刺激MH-S细胞可导致TNF-α、IL-1βmRNA、p-IκB表达增加及NF-κB活性升高.用DATS(0.1、0.5、2.5、5.0 mg·L-1)预处理细胞30 min后再给予LPS刺激,可使TNF-α、IL-1β mRNA表达降低,并呈剂量依赖性;升高的NF-κB活性及p-IκB表达均显不同程度的抑制.单独DATS对TNF-α、IL-1β mRNA表达及NF-κB活性无影响.结论 DATS可通过抑制IκB磷酸化及NF-κB活化,进而下调LPS诱导小鼠肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-1β mRNA表达.
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二烯丙基三硫诱导人胃癌细胞凋亡与钙稳态失衡相关
目的探讨二烯丙基三硫(DATS)对人胃癌MGC-803细胞的促凋亡作用及钙稳态失衡与该作用的相关性.方法体外培养MGC-803细胞,采用MTr法,Tunnel法及流式细胞光度术分析经DATS处理后,对细胞增殖和凋亡的影响以及细胞内游离钙水平的改变.结果DATS处理后,培养的MGC-803细胞增殖抑制.4、8、12、16、24mg·L-1的DATS对细胞生长的抑制率分别为0.231±0.037,0.305±0.036,0.455±0.029,0.607±0.058,0.751±0.019.Tunnel检测结果显示,对照组表达阴性,DATS处理组细胞呈阳性表达.流式细胞分析结果显示DATS呈浓度依赖性诱导胃癌MGC-803细胞凋亡,16 mg·L-1组凋亡率达0.242.细胞内游离钙水平呈浓度依赖性上升,16 mg·L-1组荧光强度为对照组的4倍多.用细胞内游离钙特异性阻断剂BAPTA-AM预处理细胞后,细胞内游离钙水平不再上升,且能抑制DATS诱导的凋亡.结论DATS能诱导胃癌MGC-803细胞凋亡,DATS诱导胃癌MGC-803细胞凋亡的作用与钙稳态失衡相关.
