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体外细胞毒性研究中阳性药物苯酚对试验系统的影响
医疗器械生物学评价包括体外细胞毒性实验,根据<国家医疗器械生物学评价国家标准选择苯酚做为医疗器械浸提物的阳性对照[1].在进行一项医疗器械生物学体外细胞毒性评价3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)中发现:相同处理条件下,于供试品浸提液相邻列中加与不加苯酚溶液,其细胞增值情况差别很大.于是进行了苯酚溶液对同一微孔内其他细胞的毒性评价,同时平行进行了水饱和酚和抗肿瘤药物阿糖胞苷(Ara-C)的细胞毒性评价.
关键词： 体外细胞毒性 阳性对照 小鼠成纤维细胞(L929细胞) -
体外方法在化学物质急性毒性评价中的应用
急性毒性分析是评估化学物质健康危害的第一步,主要研究24 h内单次或多次给药后动物所产生的毒性反应及死亡情况.半数致死剂量(LD50),即能引起实验动物50%死亡的受试物剂量,是其检测的重要指标.急性毒性试验可对物质进行分类和标记,并为其他毒性试验剂量选择提供依据,但其动物消耗量大,利用动物数据评价人体毒性,存在一定程度的不确定性,特别是近年随着3Rs(减少、替代和优化实验动物的使用)原则的实施,整体动物试验面临严重挑战.急性毒性分类法、上下法和固定剂量法等替代方法迅速发展,且被国际经济合作与发展组织(OECD)广泛接受.新研究表明,体外方法有助于预测化学物质体内急性毒性及作用浓度.
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三种方法检测和评价美洲商陆叶和果的急性毒性
目的 分别使用经典的小鼠急性经口毒性试验、体外细胞毒性试验及线虫毒性试验三种方法对美洲商陆叶子和果实进行急性毒性检测和评估.方法 小鼠急性经口毒性试验中,美洲商陆叶使用一次大限量法,美洲商陆果使用霍恩氏法;体外细胞毒性试验使用CHL(中国仓鼠肺细胞)中性红染色法;线虫毒性试验采用96孔板对同步化的秀丽隐杆线虫L4期幼虫进行24 h染毒.结果 小鼠急性经口毒性试验表明美洲商陆叶的小鼠经口大耐受剂量(MTD)≥20.00 g/kg BW,为无毒级,而果的LD5o＞ 10.00 g/kg BW,为实际无毒,果的小鼠急性毒性大于叶的毒性;在细胞毒性试验中,叶和果的IC50分别为7.4和5.6 μg/ml;在线虫毒性试验中,经215.0 mg/ml的美洲商陆叶染毒24 h后,仍未出现死亡,而果的LC50=16.5 mg/ml.结论 经典小鼠和线虫染毒模型均显示果的毒性大于叶的毒性;在细胞毒性试验中,虽然果的细胞毒性略大于叶的毒性,但差别比较微弱.提示线虫模型比细胞模型更具有毒性预筛的潜在应用价值.
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浸提方法对药用卤化丁基橡胶塞体外细胞毒性评价的影响
目的:研究不同浸提方法对药用卤化丁基橡胶塞体外细胞毒性评价的影响.方法:采用不同的浸提方法制备了浸提液,以MTT 法评价药用卤化丁基橡胶塞浸提液对小鼠成纤维细胞L929活性与增殖的影响.结果:通过不同的浸提方法制备的浸提液,11批中的9批样品体外细胞毒性实验出现了有统计学意义的差异.结论:破坏原有样品的正常形态即改变表面积与体积比对于评价卤化丁基橡胶塞的体外细胞毒性实验(MTT)是有影响的.
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掺锶对磷酸锶钙骨支架体外细胞毒性的影响研究
背景:通过离子置换的方法,将锶离子部分置换磷酸钙骨支架的钙离子,有望能改善骨支架材料的骨诱导性.但是,目前尚不知道掺锶是否对磷酸钙骨支架材料有体外细胞毒性的影响.目的:探讨掺锶对磷酸锶钙骨支架体外细胞毒性的影响.方法:骨支架的原始反应物包括粉剂和液体.粉剂包括磷酸四钙(tetracalcium phosphate, TTCP)、无水磷酸二钙(dicalcium phosphate anhydrous, DCPA)、磷酸氢锶(strontium hydrogen phosphate, DSPA).液体为含20wt%的柠檬酸和12wt%的聚乙烯吡咯烷酮混合液,调整液体pH为4.粉剂与液体按2 g/ml比例混合,固化后制备出骨支架.本研究按锶/(锶+钙)[Sr/(Sr+Ca)]离子摩尔百分比0、5%、10%和20%分为4组:Sr-0组、Sr-5组、Sr-10组和Sr-20组.然后进行细胞毒性实验、骨支架表面细胞增殖和碱性磷酸酶活性实验,并观察细胞在材料表面的形态学特征.结果:各组浸提液均没有细胞毒性.MG-63细胞在材料表面增殖良好,开始呈扁平状,并通过较长的突触连接支架表面.在培养后期,细胞全部覆盖骨支架表面.掺锶促进细胞增殖,并提高碱性磷酸酶活性.结论:添加了锶离子的磷酸锶钙骨支架材料没有细胞毒性,反而提高了细胞的碱性磷酸酶活性.
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注射用磷酸川芎嗪及注射用盐酸川芎嗪体外细胞毒性研究
目的 采用L929细胞体外培养方法研究国家评价性抽验品种注射用磷酸川芎嗪和注射用盐酸川芎嗪及其中的杂质、原料、辅料的细胞毒性.方法 选取L929细胞,将注射用磷酸川芎嗪和注射用盐酸川芎嗪及其杂质、原料、辅料,分别与L929细胞孵育48 h,采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT Assay)测得各各样品的细胞存活率.结果 乳糖和1.3.5-三甲基吡嗪对L929细胞无明显毒性;盐酸川芎嗪原料的细胞毒性低于磷酸川芎嗪原料;注射用盐酸川芎嗪的细胞毒性低于注射用磷酸川芎嗪.结论 细胞毒性试验方法结果表明该方法具有较高的可靠性和灵敏度,可用该方法对川芎嗪注射剂进行安全性评价.
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贻贝粘蛋白创面修复敷料体外细胞毒性的检测方法
背景：在贻贝粘蛋白创面修复敷料的体外细胞毒性检测中，由于蛋白分子表面带正电荷，1∶9的浸提比会使细胞聚团而导致测定产生误差，影响测定结果。
目的：在已有标准的基础上，根据贻贝粘蛋白特殊的性质及使用状态，改进贻贝粘蛋白创面修复敷料的浸提比例或前处理方法。
方法：①浸提液法：将贻贝粘蛋白创面修复敷料与细胞培养液分别以1∶9、1∶131浸提比例制备浸提液，分别以贻贝粘蛋白创面修复敷料浸提液、天然乳胶浸提液、高密度聚乙烯浸提液及细胞培养液培养L929小鼠成纤维细胞。②直接接触法：分别以蒸馏水、贻贝粘蛋白创面修复敷料溶液、二甲基亚砜及细胞培养液培养L929小鼠成纤维细胞。
结果与结论：采用浸提比1∶9测定样品体外细胞毒性时，细胞产生聚团作用，不适用于样品毒性的检测；调整浸提比为1∶131后，絮凝作用和细胞聚团现象明显降低，提高了检测结果的可信度，显示样品无细胞毒性。直接接触法显示样品无细胞毒性。采用经调整过的浸提液法或直接接触法均可适用于贻贝粘蛋白创面修复敷料体外细胞毒性的检测。 -
丝素蛋白／左旋聚乳酸复合组织工程纳米材料的生物相容性及安全性评价
目的：研究新型组织工程纳米材料丝素蛋白／左旋聚乳酸（SF／PLLA）无纺网的生物相容性和安全性，探讨其作为生物植入材料的可行性。方法：采用静电纺丝方法制备 SF／PLLA复合组织工程纳米材料，制备浸提液，并以生理盐水作为对照，注射入小鼠体内，观察2周内小鼠的一般情况和不良反应；将材料植入小鼠背部，以3-0缝线作为对照，于术后1、2、3和4周分别取材， HE染色并拍照，比较实验组与对照组周围组织的炎症反应情况；培养兔膝关节软骨细胞，传代后接种至材料表面，在体外继续培养，倒置光学显微镜观察细胞的黏附和生长情况。将关节软骨细胞分为阴性对照组（空白培养液）、实验组（含材料的培养液）和阳性对照组（含苯酚培养液），不同组材料浸提液与细胞共培养24和48 h，MTT法检测材料对软骨细胞增殖的影响。结果：注射浸提液后小鼠的全身状况与注射生理盐水后无差别；材料植入小鼠背部后，开始有少量成纤维细胞长入材料中，伴随出现少量的淋巴细胞及异物巨细胞，随后成纤维细胞数量增加，淋巴细胞及异物巨细胞无明显增多，材料慢慢降解，直至第4周时材料出现明显的降解；材料周围组织炎症反应，第2周时严重，然后逐渐减轻，其周围组织炎症反应与缝线周围组织一致或略轻；将细胞接种于支架上24 h 后有细胞贴附于材料纤维上，48 h后贴附于纤维上的细胞数量增多。MTT法检测，实验组24和48 h细胞毒性均为Ⅰ级。除阳性对照组外，其他各组随着培养时间的延长，吸光度（A）值均增加；同一时间点，实验组与阴性对照组 A值比较差异无统计学意义（P＞0.05），与阳性对照组比较 A值明显升高（P＜0.01）。结论：SF／PLLA无纺网支架材料属于安全植入性材料，具有良好的生物相容性。
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蛋白保护剂对蛇毒抗肿瘤活性物质ACTX-6的保护作用
目的:找到一种冻干赋形剂, 能有效用于蛇毒中抗肿瘤活性物质ACTX-6的保护作用.方法:采用正交实验设计原理和方法,以海藻糖、丙氨酸、NaCl作为冻干赋形剂的组成,筛选了它们的配比,考察样品冻干后的电泳区带和细胞毒性.结果:所找到的赋型剂的配方不仅可以使ACTX-6在冻干后电泳区带和细胞毒性都不改变,并且能够明显改善样品蛋白对动物的毒性,腹腔注射的LD50在加了保护剂后得到提高,静脉给药时局部组织坏死现象得到改善.
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含活性炭纤维敷料类产品的体外细胞毒性研究
活性炭纤维因其高效吸附特性而广泛应用于医疗卫生领域。我们设计不同的浸提液制备方法，通过MTT法评价该浸提液对小鼠成纤维细胞L929活性及增殖的影响，以寻找适合评价含活性炭产品体外细胞毒性的浸提方法。结果显示，由于活性碳纤维的强吸附性，相对于传统的含血清细胞培养基直接作为浸提介质，采用无血清培养基浸提，试验前在浸提液中加入10％血清更适合评价含活性炭产品的体外细胞毒性。
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不同浸提介质对一次性使用球囊扩张导管体外细胞毒性评价的影响
研究不同浸提介质对一次性使用球囊扩张导管体外细胞毒性评价的影响.采用不同的浸提介质制备了一次性使用球囊扩张导管浸提液,以MTT法评价浸提液对小鼠成纤维细胞L929活性与增殖的影响,计算相对增殖率(RGR).一次性使用球囊扩张导管不同浸提液之间的OD值存在差异,四种浸提液的RGR值均＞80％,细胞毒性均为1级.选择含血清的MEM是评价介入类医疗器械体外细胞毒性实验的理想浸提介质.
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冬凌草醇提物体外肝肾细胞毒性的MTT法测定
目的 用MTT法评价冬凌草醇提物及水提物对HL -7702细胞和HEK - 293细胞的毒性.方法 采用MTT法进行研究.结果 HL -7702细胞分别经柴胡皂苷d、冬凌草醇提物和水提物处理24,48 h后,柴胡皂苷d的IC50分别为3.42,1.98 μg/ml,冬凌草醇提物的IC50分别为295.167,78.349μg/ml,冬凌草水提物的IC50分别为4 357.310,2 134.194 μg/mlHEK - 293细胞分别经马兜铃酸Ⅰ、冬凌草醇提物和水提物处理24,48 h后,测得马兜铃酸Ⅰ的IC50为34.708,15.274μg/ml,冬凌草醇提物的IC50为224.544,106.292 μg/ml,冬凌草水提物的IC50为2 252.899,1 153.267μg/ml.结论 冬凌草醇提物和水提物的体外肝肾细胞毒性均不明显.
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补骨脂素对HepG2细胞BSEP、NTCP的影响
目的 观察补骨脂素对人肝癌细胞HepG2的体外细胞毒性,并研究其可能的机制.方法 采用MTT法观察补骨脂素对HepG2细胞增殖的影响,考察其体外毒性.运用Western印迹法、ELISA试剂盒检测补骨脂素作用HepG2细胞24h后胆盐输出泵(BSEP)、Na+胆盐共转运体(NTCP)蛋白的表达.结果 补骨脂素对HepG2细胞有体外细胞毒性.药物作用24h补骨脂素的IC50为176.5813 μmol/L,补骨脂素能够抑制BSEP蛋白的表达,促进NTCP蛋白的表达.结论 补骨脂素对HepG2有体外细胞毒性,且这种毒性可能与其影响了胆汁酸转运体有关.
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柔红霉素和三尖杉酯碱对急性髓性白血病细胞体外细胞毒性的相关研究
目的:化疗药物对急性髓性白血病细胞体外毒性进行相关性研究.方法:用微孔液体培养、MTT法检测柔红霉素(DNR)和三尖杉酯碱(H)对39例急性髓性白血病(AML)患者白血病细胞的细胞毒性.结果:显示二者的细胞毒性呈直线正相关(r=0.7290,P＜0.0005).结论:白血病细胞对上述两种药物有交叉耐药性.
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反复熔铸钴铬烤瓷合金对人牙龈成纤维细胞的体外细胞毒性实验
目的:评价反复熔铸后钴铬合金的细胞毒性.方法:原代培养人牙龈成纤维细胞(HGFs),按照ISO10993标准,制备经1～3次熔铸钴铬烤瓷合金浸提液,CCK-8法测定其对HGFs增殖的影响,倒置相差显微镜观察HGFs生长情况,初步评价经1～3次熔铸后钴铬烤瓷合金的生物相容性.结果:经1～3次熔铸后的钴铬烤瓷合金细胞毒性级为1～2级,各实验组细胞形态良好,经2、3次熔铸的钴铬烤瓷合金A值与经1次熔铸的钴铬烤瓷合金差异无统计学意义.结论:初步认为经1～3次后熔铸的钴铬烤瓷合金具有较好的生物相容性.
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尼莫地平注射液的体外细胞毒性考察
目的 用体外细胞毒性试验考察尼莫地平注射液的安全性,并考察辅料和有关物质对注射液安全性的影响.方法 选用L-929细胞,采用MTT比色法测定不同厂家尼莫地平注射液的体外细胞毒性.结果 不同厂家尼莫地平注射液的安全浓度有差异；辅料吐温-80增加尼莫地平注射液的细胞毒性；有关物质合格的注射液的安全浓度高于不合格的注射液.结论 吐温-80和有关物质可能影响尼莫地平注射液的安全性.
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盐酸洛拉曲克壳聚糖纳米粒的制备及其特性研究
目的:以壳聚糖为载体材料,盐酸洛拉曲克为模型药物,优化实验条件,制备较为理想的壳聚糖纳米粒,并考察其理化特性及体外抑瘤效应.方法:采用离子交联法制备负载洛拉曲克的壳聚糖纳米粒(NLTX-CS NPs),扫描电镜观察其形态学特征,激光粒度分析仪测定纳米粒粒径大小及分布,在磷酸盐缓冲液(PBS,pH 7.4)中对NLTX-CS NPs进行体外缓释研究,通过MTT法测定NLTX-CS NPs对鼻咽癌细胞株的增殖抑制率.结果:壳聚糖/盐酸洛拉曲克的质量比为6∶1的载药纳米粒为类圆形,粒径分布较为均匀,平均粒径为232 nm,载药率为(19.17 ± 0.35)%,包封率为(63.56 ± 0.25)%,体外对CNE-1细胞株的增殖抑制作用具有时间和浓度依赖性.结论:NLTX-CS NPs制备工艺简单,在体外显示了其较好的缓释性能,可以弥补盐酸洛拉曲克在体内半衰期较短的缺点.
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甘草次酸长循环固体脂质纳米粒的制备与体外性能研究
目的:制备甘草次酸长循环固体脂质纳米粒(GA-LSLN),并对其体外性能进行考察.方法:采用乳化溶剂挥发-高压匀质法制备GA-LSLN,测定其粒径、Zeta电位、包封率和载药量,并对其体外释药进行研究；同时以地塞米松(DEXA)、游离甘草次酸(GA)和GA-LSLN作用于肝癌细胞SK-Hep-1和急性髓细胞白血病细胞MV 4-11,采用MTT法考察细胞毒性.结果:GA-LSLN的平均粒径为130.1nm,Zeta电位为-36.2 mV,包封率为94.6％,载药量为11.3％,其体外释放规律符合一级速率过程.DEXA、GA和GA-LSLN对SK-Hep-1细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为(199±10)、(32±7)、(141±5)μmol· L-1,对MV 4-11的IC50分别为(25±3)、(20±5)、(63±4) μmol· L-1.结论:制备的GA-LSLN粒径、包封率和载药量均较理想,药物能达到缓释的作用,GA和GA-LSLN对肝癌细胞和白血病细胞均有较强的细胞毒性.
关键词： 甘草次酸 长循环固体脂质纳米粒 体外释放度 体外细胞毒性 -
脂蟾毒配基PLGA-TPGS纳米粒的体外细胞摄取及毒性研究
目的:研究脂蟾毒配基(RBG)乳酸羟基乙酸共聚物-水溶性维生素E(PLGA-TPGS)纳米粒(RPTN)体外被人肝癌HepG2细胞、小鼠腹水型高淋巴道转移肿瘤HCa-F细胞的摄取情况和对HepG2细胞的毒性.方法:制备包载RBG和荧光标记物香豆素6的PLGA-TPGS纳米粒(RCPTN),荧光倒置显微镜观察HepG2、HCa-F细胞对RCPTN的体外摄取情况.将试验分为阴性对照组、空白PLGA-TPGS纳米粒(EPTN)组、5-氟尿嘧啶溶液(FS)组、RBG溶液(RS)组、RBG/PLGA纳米粒(RPN)组、RPTN组,采用水溶性四氮唑(WST-1)法考察不同终质量浓度(1.25、2.5、5、10、20μg/mL)的FS、RS、RPN和RPTN作用24、48、72 h后HepG2细胞在450 nm波长下的光密度,计算细胞存活率(CV)和半数抑制浓度(IC50).结果:RCPTN分布在HepG2、HCa-F细胞的细胞核周围.RPN组和RPTN组细胞的CV随RBG浓度增加而减小,随作用时间延长而减小;与FS组比较,RPTN组细胞的CV均减小(P<0.05或P<0.01).FS、RS、RPN和RPTN作用于HepG2细胞的IC50随时间的延长而减小,且IC50的大小依次为RS>FS>RPN>RPTN;RPN和RPTN作用48、72 h的IC50明显小于FS与RS(P<0.05或P<0.01).结论:RPTN可将RBG带入HepG2、HCa-F细胞内部,其对HepG2细胞具有抑制作用,且作用强于RPN、RS和FS.
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皂苷Rbl活性代谢产物NG701聚合物载药胶束的制备及其体外细胞毒性评价
目的:制备二醇类皂苷Rb1活性代谢产物(NG701)的聚合物载药胶束,并对其进行体外细胞毒性评价.方法:合成两亲性嵌段共聚物即聚乙二醇.聚天冬氨酸苄酯(PEG-PBLA)并借助红外光谱和核磁共振氢谱进行表征;采用透析法制备NG701/PEG.PBLA聚合物载药胶束,观察其形态和粒径分布,建立高效液相色谱法测定其含量并计算载药量和包封率.以Hela细胞为模型,采用MTT法评价聚合物载药胶束的细胞毒性作用,并与NG701原料药比较.结果:红外光谱和核磁共振氢谱证实形成了PEG-PBLA,所制备的聚合物载药胶束呈球形,粒径小于200 nm,载药量高达32.7%,包封率高为93.2%.与原料药发挥细胞毒性作用的有效浓度100 μg·mL<'-1>比较,聚合物载药胶束为50lag·mL<'-1>(P<0.05).结论:以PEG-PBLA为载体制备的载药胶束聚合物,可有效提高NG701的细胞毒性作用.
关键词： 皂苷Rb1活性代谢产物 NG701 聚合物载药胶束 制备 体外细胞毒性
