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牙本质表面状态对粘结界面影响的激光扫描共聚焦显微镜研究
目的:研究不同表面状态下形成的牙本质湿粘结界面的异同.方法:以Rhodamine B为荧光剂,用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)分别观察干燥或湿润粘结时形成的牙本质粘结界面的异同.结果:湿粘结时5 种粘结系统在牙本质粘结界面都有良好的渗透.以丙酮为溶剂的粘结系统干燥粘结时形成的混合层的厚度有明显的降低,牙本质小管中树脂突较细,中断现象增多,长度缩短.结论:干燥粘结时5 种粘结剂在牙本质表面的渗透性减弱.
关键词： 激光扫描共聚焦显微镜 湿粘结 粘结界面 混合层 胶原纤维 -
静态拉伸应变对人牙周膜成纤维细胞的影响
目的:研究人牙周膜成纤维细胞(PDLF)在机械拉伸应变作用下,细胞和细胞核投影面积及其细胞骨架的改变情况,探讨PDLF的形态、功能和应变之间的关系.方法:采用自制的细胞体外静态机械加载装置用不同的拉伸应变量加力于细胞上,通过激光扫描共聚焦显微镜观察细胞骨架的形态及其改变情况,并进行统计分析.结果:在8%、12%、16%力值组,细胞和细胞核投影面积随着加力时间和力值的增加而每天递增,肌动蛋白纤维也随之逐渐增粗,排列更有规律;而在20%力值组,其结果则反之.结论:静态拉伸应变可影响牙周膜成纤维细胞的骨架.
关键词： 细胞骨架 激光扫描共聚焦显微镜 应力应变 牙周膜 成纤维细胞 -
TGF-β1对人牙髓细胞内钙影响的激光共聚焦显微镜动态观察
目的:探讨TGF-β1信号转导过程与人牙髓细胞内钙[(Ca2 + )i]的关系.方法:体外培养人牙髓细胞经钙荧光指示剂Fluo-3负载后,用激光扫描共聚焦显微镜测定TGF-β1影响前后的人牙髓细胞内钙随时间变化情况.结果:TGF-β1(0.1 ng/L)使人牙髓细胞内钙先升高后降低,后维持在比加药前稍高的静息钙水平上.结论:通过TGF-β可引起牙髓细胞内Ca2+水平的显著变化,证明Ca2+参与了人牙髓细胞TGF-β1信号转导过程并参与将信号转入核内.
关键词： 转化生长因子β 牙髓细胞 激光扫描共聚焦显微镜 -
羟基磷灰石对人牙髓细胞内游离钙的影响
目的:检测羟基磷灰石(hydroxyapatite,HA)对体外培养的人牙髓细胞内游离Ca2+的作用.方法:DMEM培养液体外培养的人牙髓细胞随机分为3组,2个实验组培养液中分别加入Ca(OH) 2、HA共孵育24 h.钙荧光指示剂Fluo-3/AM负载后,3组均加入HA干预,在激光扫描共聚焦显微镜下观测细胞内Ca2+的变化.结果:瞬时加入HA后,3组细胞的钙离子荧光强度在30 s内均升高;空白对照组(A组)升高较为迅速,30 s后即开始缓慢下降;Ca(OH) 2组(B组)的升高幅度小于A组,60 s时达到高(230.63±5.24);HA组(C组)升高变化较小,30 s时达到高(161.25±3.81),随后小幅度下降.结论:HA可引起体外培养人牙髓细胞内[Ca2+]i的变化.
关键词： 激光扫描共聚焦显微镜 人牙髓细胞 钙离子 羟基磷灰石 -
2种类型牙本质对粘接界面影响的激光扫描共聚焦显微镜研究
目的:应用激光共聚焦显微镜(LSCM)研究正常和龋病影响牙本质粘接界面的超微结构和粘接机制.方法:选择临床常见2 种牙本质:正常牙本质(ND) 、龋病影响牙本质(CAD),以Rhodamine B 为荧光剂,用激光扫描共聚焦显微镜分别观察正常和龋病影响牙本质粘接后形成的牙本质粘接界面微观形态的异同.结果:龋病影响牙本质的混合层厚度为正常牙本质的2 倍,两者有明显差异.对正常牙本质2 种粘接系统之间没有差异,但对龋病影响牙本质,牙本质小管中树脂突较细,数量减少,且有中断现象,尤其Xeno组更为明显.结论:2 种牙本质粘接系统在正常牙本质表面较龋病影响牙本质渗透更加的充分.
关键词： 全酸蚀 自酸蚀 粘接界面 激光扫描共聚焦显微镜 混合层 -
激光共聚焦显微镜观察不同光照模式对复合树脂充填体微渗漏的影响
目的:激光共聚焦显微镜下观察比较不同光固化模式下复合树脂固化后微渗漏的差别.方法:选取30个离体牙在颊面备4mm×4mm×2mm窝洞,光固化树脂(3MZ350)分层固化充填,并随机分为A、B、C3组,分别用弱光引导(A组)、间歇光照(B组)和高强度光照(C组)3种不同光照固化模式进行固化.标本充填完成后在37℃水浴条件下分别置于1 g/L罗丹明B荧光染料浸染,24 h后激光扫描共聚焦显微镜测量染液渗入深度,定量评价微渗漏程度,并对检测结果进行统计学分析.结果:A、B、C3组微渗漏差异无统计学意义(P＞0.05).结论:弱光引导和间歇光照技术对复合树脂的边缘封闭性无明显影响.
关键词： 光固化模式 微渗漏 激光扫描共聚焦显微镜 复合树脂 -
激光扫描共聚焦显微镜观察碱性环境对粪肠球菌生物膜的影响
目的:比较不同碱性条件对生物膜状态粪肠球菌的影响.方法:制备粪肠球菌生物膜,分别用pH值为7、9和11的TSB培养液作用2h后,用激光扫描共聚焦显微镜观察粪肠球菌生物膜的变化.结果:pH值由7升到9时,生物膜内、中、外各层活菌比例虽有所减少,但差异无统计学意义(P＞0.05)；当pH值11时,各层活菌比例虽然均较pH值为7和9时明显减少(P＜0.05),但仍有大量活菌存在.结论:粪肠球菌对碱性环境具有强的耐受性,pH值为7～9时,对生物膜状态粪肠球菌无明显影响.
关键词： 粪肠球菌 生物膜 pH值 激光扫描共聚焦显微镜 -
盐酸米诺环素软膏局部应用对龈下菌群的影响
目的:研究20g/L盐酸米诺环素软膏局部应用后,牙周袋内龈下菌丛的变化.方法:重度慢性牙周炎患者洁治后,在牙周袋内置入20g/L盐酸米诺环素软膏0.05 mL,于置药前及置药后2、6、120 h分别取龈沟液,用高效液相色谱法(HPLC)检测其中米诺环素浓度,并取龈下菌斑用细菌活力试剂盒染色,激光扫描共聚焦显微镜(LCSM)观察龈下菌群死活菌的比例及球菌、活动杆菌、螺旋体的比例变化.结果:龈沟液中盐酸米诺环素浓度在置药后120 h仍＞1μg/mL,置药后龈下菌斑中死菌比例明显较置药前增高,置药后的龈下菌斑中球菌比例明显上升,活动杆菌及螺旋体比例显著下降.结论:20g/L盐酸米诺环素软膏是一种缓释制剂;在一定浓度下既有抑菌作用又有杀菌作用;龈下菌斑的死活菌染色结合LCSM镜下检查可作为牙周健康状况及预后的评价方法.
关键词： 牙周炎 局部药物治疗 米诺环素 牙菌斑 激光扫描共聚焦显微镜 -
1,25(OH)2D3激动髁突软骨细胞内Ca2+释放及其机制的研究
目的:探讨1,25(OH)2D3激动体外培养的兔髁突软骨细胞内Ca2+的释放及其通道.方法:消化法培养2周新西兰白兔的髁突软骨细胞,分别进行20g/L肝素、1 g/L普鲁卡因细胞内Ca2+通道阻断处理,经钙荧光指示剂Fluo-3负载后,用激光扫描共聚焦显微镜测定1,25(OH)2D3刺激前后髁突软骨细胞内Ca2+随时间变化情况.结果:10-8mol/L 1,25(OH)2D3100 μL刺激后对照组细胞内荧光强度随时间明显升高;普鲁卡因处理组变化与其相似,而肝素处理组在刺激前后细胞内荧光强度无明显的变化.结论:1,25(OH)2D3能激动髁突软骨细胞内三磷酸肌醇受体(IP3R)Ca2+释放通道开放,使细胞内Ca2+水平显著升高.
关键词： 1 25(OH)2D3 髁突软骨细胞 细胞内Ca2+ 激光扫描共聚焦显微镜 -
siRNA沉默P2X4表达对永生化小鼠小胶质细胞活化的抑制效应
目的:探讨特异性P2X4siRNA对永生化小鼠小胶质细胞活化的抑制效果.方法:体外培养永生化小鼠小胶质细胞,随机分为空白对照组、阴性对照组、转染siRNA-F1组.空白对照组未进行任何干预;阴性对照组转染N control siRNA;转染siRNA-F1组转染先前筛选出来的1条特异性siRNA.3组细胞分别用50 μmol/L ATP刺激,采用激光扫描共聚焦显微镜检测胞内钙离子浓度([Ca2+];);P2X4R/OX42免疫荧光双标染色观察细胞形态.结果:转染siRNA-F1组ATP活化小胶质细胞后,胞内钙离子释放较阴性对照组和空白对照组减少;P2X4R/OX42免疫荧光双标染色显示转染siRNA-F1组细胞存在活化态小胶质细胞和静息态小胶质细胞,而空白对照组和阴性对照组只存在活化态小胶质细胞.结论:siRNA-F1能部分抑制永生化小鼠小胶质细胞的活化.
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高血黏度对小鼠脑细胞内游离钙浓度及脑组织丙二醛含量的影响
目的:探讨慢性脑供血不足对脑细胞内[Ca2+]i, 脑组织丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量的影响. 方法:采用高分子右旋糖酐法建立小鼠高血黏度动物模型,以Fluo-3/AM为细胞内游离钙离子的荧光指示剂,用激光扫描共聚焦显微镜测定脑细胞内[Ca2+]i的变化;用硫代巴比妥酸法及黄嘌呤氧化酶发光法分别测定脑组织匀浆MDA,SOD含量. 结果:高血黏度小鼠脑细胞内[Ca2+]i明显升高(P<0.01),脑组织匀浆中MDA含量明显升高(P<0.05),SOD含量明显降低(P<0.05). 相关分析显示小鼠全血高、低切黏度与脑细胞内[Ca2+]i均呈显著正相关关系(Spearman等级相关系数分别为0.769,0.821,P＜0.01);全血低切黏度与脑组织MDA含量也呈显著正相关关系(Pearson相关系数为0.720,P＜0.01). 结论:高血黏度可导致脑细胞内钙超载及脑组织中自由基反应增强.
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大鼠肺内降钙素基因相关肽和5-羟色胺免疫反应细胞的加龄变化
目的: 探讨大鼠肺内降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptiole, CGRP)和5-羟色胺(5-hydroxytryptamine, 5-HT)免疫反应细胞的个体发生及分布,揭示肺神经内分泌细胞的功能及其内分泌机制的形态学基础. 方法: 应用免疫组织化学方法、激光扫描共聚焦技术及计算机图像分析. 结果: CGRP和5-HT阳性细胞早见于胚16 d肺组织中,随胎龄增大其数量增多且分布广泛,胚20 d达高峰,生后阳性细胞数量减少[神经内分泌(NE)/1×103上皮细胞(BE):382±13 vs 94±17; 387±47 vs 88±18; P<0.01,以出生后1 mo为例]. 共聚焦显微镜结果也证实随胎龄增加,CGRP和5-HT阳性细胞数量增加且细胞荧光强度增强,而生后强度减弱(P<0.01). 相邻切片法观察可见多数表达CGRP的阳性细胞也含有5-HT免疫反应物. 结论: 肺内CGRP和5-HT阳性细胞的随龄变化显示其在肺的发育、分化、成熟的变化过程中具有重要作用,出生前后其数量变化明显的现象,可能与此阶段肺功能的急剧改变有关. CGRP和5-HT的共存表明两者在功能上具有相关性.
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乳鼠心成纤维细胞波形蛋白和线粒体表达的激光扫描共聚焦显微镜观察
目的用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察培养的乳鼠心成纤维细胞中细胞骨架波形蛋白(vimentun, Vim)、线粒体(mitochondrial, Mi)以及相互关系. 方法分离纯化乳鼠心成纤维细胞,免疫荧光双标记技术进行了Vim和Mi的标记,激光扫描共聚焦显微镜观察. 结果培养的乳鼠心成纤维细胞中Vim位于细胞的胞质中,呈粗细不等的绿色线条状或丝状分布,标记明显,许多细丝交织形成网状结构. Mi标记为红色颗粒状,遍布于细胞质中,Mi的颗粒大小不等,形态不一,可聚集成团,并有明显的沿着Vim分布的趋势. 结论 LSCM观察培养的心成纤维细胞中Vim呈细丝交织形成立体的网状结构,Mi有沿着细胞骨架Vim分布的趋势.
关键词： 成纤维细胞 细胞骨架 线粒体 激光扫描共聚焦显微镜 大鼠 -
内皮素-1对体外培养的牛眼小梁细胞内钙离子浓度的影响
目的了解内皮素-1(ET-1)对小梁细胞收缩状态调节的作用方式,以求探索新的有效而不良反应小的抗青光眼药物.方法通过组织块培养的方法获得三代牛眼小梁细胞,Fulo-3/AM负载后于激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)下动态扫描不同浓度ET-1作用后胞内荧光强度变化,得出[Ca2+]i值.结果10-9、10-8、10-7mol/L ET-1可使小梁细胞[Ca2+]i呈剂量依赖性升高,其中10-8mol/L的ET-1可使小梁细胞[Ca2+]i由327.5±24.57升高至373.60±40.18(n=8,P＜0.01).结论一定浓度的ET-1可通过收缩小梁网而致眼内压升高;其受体阻滞剂或转换酶抑制剂可能为原发性开角型青光眼的治疗开辟新途径.
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早期自然流产患者绒毛组织中核转录因子-kappa B的表达
目的 探讨核转录因子-κB(NF-κB)在绒毛组织中的表达及活化与早期自然流产的关系.方法 采用免疫组化方法检测早期自然流产患者和同期妊娠的健康妇女绒毛组织中NF-κB p65的表达;激光共聚焦显微镜(CLSM)检测NF-κB p65的核区与胞浆区比值(FN/FC)以观察其活化情况.结果 早期自然流产患者绒毛合体滋养层细胞NF-κB表达强度低于正常早期妊娠妇女,其差异具有统计学意义(P<0.001);早期自然流产患者绒毛间质细胞NF-κB表达的FN/FC(0.7602)明显高于正常早期妊娠妇女(0.6977)(t=3.511,P<0.001).结论 NF-κB在早期自然流产患者绒毛组织合体滋养细胞中的低表达以及其在间质细胞中的过度活化可能与早期自然流产的发生有关.
关键词： 早期自然流产 核转录因子-κB 免疫组织化学 激光扫描共聚焦显微镜 滋养层 -
脑脊液中脑膜癌细胞CEA表达的研究
目的 联合应用免疫荧光细胞化学技术和激光扫描共聚焦显微镜技术(LSCM)检测脑脊液中脑膜癌细胞CEA的表达部位并定量测定其荧光含量,探讨该技术在脑膜癌病诊断中的价值. 方法应用免疫荧光细胞化学法以CEA标记脑膜癌细胞及对照组脑脊液细胞,采用LSCM技术获得脑膜癌细胞扫描图像并定量测定CEA荧光强度值.结果 脑脊液中脑膜癌细胞的CEA表达为阳性,且部位在细胞浆中;CEA平均荧光值(36.80±17.17),与对照组(4.87±1.86)相比差异有统计学意义(P＜0.01).结论 联合应用免疫荧光细胞化学法和LSCM检测脑脊液细胞中CEA的表达可为脑膜癌病的诊断提供可靠依据.
关键词： 脑膜癌病 脑脊液 CEA 激光扫描共聚焦显微镜 免疫荧光 -
茶多酚对膀胱移行上皮肿瘤EJ细胞内Ca2+的影响
目的:研究茶多酚对膀胱移行上皮肿瘤EJ细胞内钙离子(Ca2+)的影响,以探讨茶多酚信号转导过程与EJ细胞内Ca2+浓度的关系.方法:体外培养膀胱肿瘤EJ细胞,采用噻唑蓝还原(MTT)法和激光扫描共聚焦显微镜测定不同浓度(10、20、40、80、160 μg/ml)茶多酚作用前后的膀胱肿瘤EJ细胞生长抑制及Ca2+浓度随时间变化的情况.结果:不同浓度茶多酚对膀胱肿瘤EJ细胞株均有明显的抑制作用(P<0.05～0.01),并与时间、剂量存在依赖关系. 随着茶多酚浓度的增加,细胞内的Ca2+浓度逐渐上升,高增加到原水平的10倍以上.结论: 茶多酚可引起膀胱肿瘤EJ细胞内Ca2+浓度的显著变化, 证实Ca2+参与了膀胱肿瘤EJ细胞茶多酚信号转导过程.茶多酚具有诱导膀胱肿瘤细胞凋亡和影响肿瘤细胞膜Ca2+的通透性,使Ca2+在细胞非核部分聚积的双重功效.高Ca2+浓度可能是诱发肿瘤细胞凋亡的重要原因.
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激光扫描共聚焦显微镜中荧光强度的测定条件研究
目的对应用激光扫描共聚焦显微镜进行荧光强度的测定条件做了详细的分析.方法选择和设置激光扫描共聚焦显微镜的各参数,对用间接免疫荧光法检测改性后的材料表面对人牙龈成纤维细胞分泌细胞外基质纤粘连蛋白FN和Ⅰ型胶原的影响进行荧光强度的定量.结果细胞在材料表面接种后FN的荧光染色强度在四组材料之间没有显著差异,说明材料表面化学成分的改变对FN的形成没有明显影响.但四组材料对Ⅰ型胶原分泌的影响有差异.结论选择和设置适合的激光扫描共聚焦显微镜中荧光强度的测定条件,可以真实有效的反映实验的结果.
关键词： 激光扫描共聚焦显微镜 荧光强度 -
激光共聚焦检测双酚A致精母细胞损伤后线粒体膜电位的变化
目的：运用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)技术检测双酚A(BPA)致精母细胞损伤后线粒体膜电位的变化，探讨其作用机制。方法：将培养的GC-2小鼠精母细胞分为对照组、低剂量组和高剂量组，分别加入0、10μmol/L、100μmol/L的BPA，一同培养3 h后使用荧光探针JC-1对3个组样本分别进行标记，采用LSCM检测胞内线粒体内JC-1荧光强度的变化。利用LSCM专用软件分析荧光强度，通过荧光颜色的转变检测线粒体膜电位的变化，用红绿荧光的相对比例衡量线粒体去极化的比例。结果：对照组、低剂量组和高剂量组之间红绿荧光的比值有着显著差异。BPA低剂量组和高剂量组的胞内线粒体膜电位明显低于对照组，而高剂量组的胞内线粒体膜电位较低剂量组低。结论：BPA对精母细胞有损伤，且随着剂量加大，损伤越严重。LSCM技术方法灵敏度高，能够实时监测细胞内线粒体膜电位的变化。
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彗星电泳法检测H2O2对人淋巴细胞DNA损伤及其激光扫描共聚焦显微境下的观察和三维重建
目的:应用彗星电泳法于荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜下观察人淋巴细胞经H2O2作用后的DNA损伤情况.方法:人淋巴细胞经不同浓度H2O2(0、10、20、40、80μmol/L)作用20 min,或20μmol/L H2O2作用不同时间(0、10、20、30 min)后,采用彗星电泳法,荧光显微镜下观察、照相,对尾长、总彗星长度、尾距进行测量和分析.同时采用激光共聚焦显微镜(LSCM)进行观察和三维重建;比较了不同染料(H、AO、EB、Hochest33258)的染色效果.结果:H202作用浓度为0、10、20、40、80μmol/L时,尾距(-x±s)分别为0.001±0.002、0.31±0.35、1.23±0.96、2.82±1.38、3.52±0.96(P＜0.01);作用时间为0、10、20、30min时,尾距(-x±s)分别为0.05±0.09、0.22±0.30、1.62±0.93、1.89±1.09(P＜0.01).尾长、总彗星长度也有显著性增加,经统计学检验,P＜0.01.与荧光显微镜相比,LSCM下的″彗星″轮廓十分清晰;PI和EB染色效果较好.结论:H2O2能剂量依赖性和时间依赖性地导致人外周血淋巴细胞DNA的明显断裂损伤.利用LSCM构建″彗星″的三维图像将更有利于DNA损伤的准确测量.鉴于染色效果的差异,PI和EB是比较适合的彗星电泳染料.
关键词： 彗星电泳 淋巴细胞 DNA损伤 激光扫描共聚焦显微镜
