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gp96肽复合物免疫脾巨噬细胞对细胞内钙离子动态变化及形态学观察
目的:通过研究gp96-肽复合物免疫小鼠脾巨噬细胞细胞内Ca2+的变化及其形态学的改变,进一步探讨肿瘤细胞中提纯的热休克蛋白gp96-肽复合物的抗肿瘤免疫作用和机制.方法:以gp96-肽复合物免疫的小鼠脾巨噬细胞作为研究对象,用Fluo-3/AM负载细胞,激光扫描共聚焦显微镜检测其细胞内的Ca2+浓度及观察Con A刺激对细胞内Ca2+影响;扫描电镜观察细胞的形态学变化.结果:与对照组相比,经gp96-肽复合物致敏的小鼠脾巨噬细胞内的Ca2+浓度显著增加;其细胞内的Ca2+变化对Con A刺激更加敏感;免疫后的小鼠脾巨噬细胞呈典型的激活状态.结论:gp96-肽复合物可在体内激活脾巨噬细胞; 活化的脾巨噬细胞在Con A刺激时Ca2+浓度的变化敏感.gp96-肽复合物的抗肿瘤免疫过程中促进小鼠脾巨噬细胞活化起着重要的作用.
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谷胱甘肽抗谷氨酸诱导海马神经元损伤钙超载机制研究
目的观察还原型谷胱甘肽(GSH)及氧化型谷胱甘肽(GSSG)对谷氨酸(Glu)诱导海马神经元死亡影响及其作用机制.方法选用新生Wistar大鼠原代培养海马神经元Glu细胞毒性损伤模型,采用台盼蓝活细胞拒染、培养液乳酸脱氢酶(LDH)测定及TUNEL细胞凋亡原位检测等方法比较GSH及GSSG预处理3d对Glu细胞毒性损伤的影响,同时利用激光扫描共聚焦显微镜观测细胞内Ca2+浓度的变化,并与MK-801比较.结果 GSH及GSSG均可减少Glu诱导神经元死亡,轻度抑制Glu诱导的神经元Ca2+内流,但不及MK-801.结论谷胱甘肽对Glu细胞毒性神经损伤有保护作用,除与通常公认抗氧化作用有关外,抑制Glu诱导的神经元Ca2+内流亦为其保护机制之一.
关键词： 兴奋毒性 神经保护 海马神经元 谷胱甘肽 激光扫描共聚焦显微镜 -
乳腺癌Ki-67及PCNA表达的比较研究
目的研究Ki-67与PCNA两种增殖抗原在乳腺癌组织中的原位表达特点以及二者的差异性问题.方法采用间接免疫荧光双标法对30例乳腺癌组织切片进行Ki-67及PCNA染色,运用激光扫描共聚焦显微镜观察,分析细胞核的荧光阳性面积,并对二者进行相关性分析.结果 PCNA的核阳性面积明显大于Ki-67,二者的阳性面积呈正相关.结论在乳腺癌组织中,PCNA抗原表达较强,几乎涵盖了所有Ki-67的增殖信息.二者对增殖情况的反映各具特点.
关键词： 乳腺肿瘤 Ki-67 PCNA 间接免疫荧光双标法 激光扫描共聚焦显微镜 -
布比卡因对大鼠心室肌细胞内钙的影响
目的:运用激光扫描共聚焦显微镜观察不同浓度的布比卡因对KCl诱导的大鼠心室肌细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响,进而探讨布比卡因心肌抑制作用的可能机制.方法:培养新生SD大鼠心室肌细胞,将培养的心室肌细胞随机分为4组,分别为对照组(C组)、10 μmol/L 布比卡因组(B1组)、50 μmol/L 布比卡因组(B2组)、100 μmol/L 布比卡因组(B3组).各组细胞均用钙荧光指示剂Fluo-3/AM染色,运用激光扫描共聚焦显微镜动态观察单个心室肌细胞内钙荧光强度(fluorescent intensity, FI)的变化.结果:与对照组比较 10 μmol/L 的布比卡因对KCl诱导的大鼠心室肌细胞内钙FI变化无明显影响(P＞0.05),50 μmol/L 和 100 μmol/L 的布比卡因则明显抑制KCl诱导的钙离子跨膜内流(P＜0.05);抑制程度B3组》B2组(P＜0.05).结论:低浓度的布比卡因对KCl诱导的大鼠心室肌细胞内[Ca2+]i的变化无明显影响,高浓度则明显抑制钙离子跨膜内流.布比卡因呈浓度依赖性抑制兴奋收缩耦联时心室肌细胞内游离钙离子内流,可能是其心肌抑制作用的原因之一.
关键词： 布比卡因 心室肌细胞 激光扫描共聚焦显微镜 细胞内钙离子 Fluo-3 -
碘化N-正丁基氟哌啶醇对大鼠心肌细胞内钙离子的影响
目的:研究碘化N-正丁基氟哌啶醇(F2)对大鼠心肌细胞内钙离子([Ca2+]i)的影响.方法:采用钙荧光染料Fluo-3-AM负载心肌细胞,在激光扫描共聚焦显微镜上测定细胞内钙离子的变化.结果:在含钙(1.8 mmol·L-1)台式液中,60 mmol·L-1KCl使细胞内钙荧光强度由 1.0 增高至 1.84±0.35 (P＜0.01,n=50), 分别用 0.1、1、10 μmol·L-1F2预先孵育心肌细胞,F2可以浓度依赖地抑制钙荧光强度的增高,IC50 为 1.61 μmol·L-1.0.1、1、10 μmol·L-1 F2使得KCl诱导增高的钙荧光强度从 1.92±0.42 分别降至 1.88±0.39、1.31±0.36 和 1.09±0.05(P分别>0.05、<0.01和<0.01,n=50),IC50为 1.78 μmol·L-1.F2不影响静息状态下的细胞内钙的浓度.对咖啡因和三磷酸肌醇介导的细胞内钙的释放均无作用.结论:F2通过阻断心肌细胞膜电压依赖性钙通道降低心肌细胞内钙浓度,这可能是保护心肌缺血/再灌注损伤的机制.
关键词： 氟哌啶醇 心肌细胞 钙 激光扫描共聚焦显微镜 -
刺五加叶皂苷对心肌ATP敏感性钾通道的作用
目的:研究刺五加叶皂苷(ASS)对心肌线粒体ATP敏感性钾通道(mito KATP)和细胞膜ATP敏感性钾通道(sarcol KATP)的作用,探讨ASS对缺血心肌保护作用的机制.方法:用酶解法获取兔心室肌细胞,激光扫描共聚焦显微镜观察ASS对mito KATP的作用,全细胞膜片钳技术观察ASS对sarcol KATP的作用.结果:对照组观察 10min 线粒体荧光强度无明显变化.ASS 30、100和 300 mg·L-1 组均可见用药后线粒体荧光强度明显增加,分别增加(14.8±3.6)%、(30.4±4.3)%和(38.4±5.7)%.3 μmol·L-1格列本脲不影响线粒体荧光强度,但可以阻断ASS对线粒体荧光强度的作用.而对照组、ASS 10、100和 300μmol·L-1 组的IK-ATP峰值无明显差异.结论:ASS对mito KATP有开放作用,而对sarcol KATP没有作用.ASS通过开放mito KATP产生心肌保护作用.
关键词： 刺五加叶皂苷 心肌细胞 ATP敏感性钾通道 膜片钳 激光扫描共聚焦显微镜 -
细胞内钙在脑心综合征心律失常中作用研究
目的 通过研究脑心综合征心肌细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的变化及其来源,以探讨其与脑心综合征心律失常的关系.方法 线栓法建立脑心综合征模型,监测心电图,酶法分离心肌细胞,激光共聚焦扫描显微镜观察心室肌[Ca2+]i的变化及其途径.结果 模型组QT间期较正常组和假手术组明显延长(P<0.01);在正常台氏液中,KCl诱发模型组心肌[Ca2+]i升高幅度高于假手术组(P<0.01),用1 μmol·L-1和10 μmol·L-1维拉帕米预孵育模型组后,10 μmol·L-1维拉帕米明显降低KCl诱发的心肌[Ca2+]i升高幅度(P<0.01);在无钙台氏液中,caffeine诱发模型组心肌[Ca2+]i升高幅度高于假手术组(P<0.01).结论 通过心肌细胞L-型钙通道和肌浆网雷诺定受体介导的内钙异常升高可能是脑心综合征心律失常的原因之一.
关键词： 脑心综合征 激光扫描共聚焦显微镜 心律失常 钙 -
15-HETE对肺动脉平滑肌细胞钙离子浓度的影响
目的通过阻断细胞外钙离子(Ca2+)内流,观察15-羟化二十烷四烯酸(15-HETE)对兔肺动脉环收缩张力和肺动脉平滑肌细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的影响,探讨缺氧时15-HETE引起细胞钙动员的机制.方法采用组织浴槽血管环方法观察L-型钙通道阻断剂硝苯地平和无钙液对15-HETE诱导的兔肺动脉环收缩力的影响;酶法分离培养兔肺动脉平滑肌细胞,激光扫描共聚焦显微镜测定15-HETE对细胞内[Ca2+]i的作用.结果在正常组和缺氧组,10 μmol·L-1硝苯地平和无钙液对1 μmol·L-1 15-HETE引起的肺动脉环收缩均没有影响;培养的15-HETE组细胞(正常培养的细胞暴露于1 μmol·L-1 15-HETE下继续孵育8 min)与正常对照组相比,细胞内[Ca2+]i明显增加 (P<0.05).结论 15-HETE可引起肺动脉平滑肌细胞[Ca2+]i增加,且此钙来源于细胞内贮钙库的释放.
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动态观察不同的药理性阻断剂对膜磷脂PtdIns(4,5)P2的代谢过程的影响特征
目的时空观察PtdIns(4,5)P2在细胞内水解及再合成的动态变化过程,并比较渥曼青霉素(wortmannin)、氯化锂(LiCl)、U73122和新霉素四种阻断剂对PtdIns(4,5)P2代谢过程的影响.方法利用绿色荧光蛋白(GFP)与磷脂酶Cδ1 (PLCδ1)PH区(PLCδ1PH)的融合体(PLCδ1PH-GFP)作为标记PtdIns(4,5)P2的特异性荧光探针,使用激光扫描共聚焦显微镜技术动态观察及测量PtdIns(4,5)P2位置的变化.结果在CHO细胞,用ATP刺激内源性表达的P2Y受体,可引起PLCδ1PH-GFP荧光转位可恢复性的变化;渥曼青霉素和LiCl不影响PLC激活所介导的PLCδ1PH-GFP荧光由胞膜到胞浆的转位变化,但可阻断此转位的恢复;U73122可以阻断PLC激活所介导的PLCδ1PH-GFP荧光由胞膜到胞浆的转位变化; 新霉素对PLCδ1PH-GFP的转位无影响,但可抑制未表达PLCδ1PH-GFP的细胞中PLC激活后水解PtdIns(4,5)P2的作用.结论 PLCδ1PH-GFP可作为一种有价值的荧光探针来标记PtdIns(4,5)P2的动态变化;渥曼青霉素、LiCl、U73122和新霉素四种阻断剂对PtdIns(4,5)P2代谢过程有不同的影响;PLCδ1PH-GFP可阻断新霉素发挥其抑制PLC水解PtdIns(4,5)P2的作用.
关键词： 磷脂酰肌醇4 5二磷酸 绿色荧光蛋白 磷脂酶C PH区结构域 新霉素 受体 激光扫描共聚焦显微镜 -
灵芝多糖对小鼠T细胞胞浆游离Ca2+浓度和胞内pH的影响
目的通过考察灵芝多糖(GLP)对免疫细胞信号转导过程的影响，探讨GLP免疫调节作用机制。方法采用激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)技术，动态监测GLP均一体组分GLB7对小鼠T细胞胞浆游离Ca2+浓度 (［Ca2+］i) 和胞内pH (［pH］i) 的影响。结果 GLB7(20 mg*L-1)引起小鼠T细胞中［Ca2+］i和［pH］i明显升高，1 min即分别升高至334.70%±16.4% (n=3)、171.6%±10.4% (n=3)，之后一直分别维持在该平台期，至10 min仍维持高峰水平。加入EGTA和verapamil处理后，10 min GLB7引起T细胞［Ca2+］i和［pH］i分别升高为202.4%±13.6% (n=3)、140.2%±7.8% (n=3)，与正常对照组比较差异有显著性(P<0.01)。以EGTA和verapamil处理后，再分别以heparin和procaine处理细胞10 min，之后以GLB7刺激T细胞，10 min ［Ca2 +］i值分别为151.5%±9.4% (n=3)、143.2%±8.1% (n=3)，与EGTA和vera pamil处理组相比差异有显著性(P<0.01)。同时以EGTA、verapamil、heparin、procai ne处理细胞后，10 min时［Ca2+］i为117.2%±6.6%(n=3)，与heparin和pro caine分别处理组相比差异有显著性(P<0.01)。加入amloride处理后，10 min GLB7 引起［pH］i升高至133.4%±9.1%(n=3)，与正常对照组比较差异有显著性(P<0 .01 )。GLB7引起由Con A活化的T细胞中［Ca2+］i和［pH］i变化与静息水平相比，差异无显著性(P>0.05)。结论 GLB7通过外钙内流及IP3敏感和IP3非敏感钙池释放Ca2+ 引起T细胞中［Ca2+］i升高、通过Na+/H+ 交换系统及其它调节途径引起T细胞［pH］i升高，从而激活T细胞。
关键词： 灵芝 多糖 T细胞 游离胞浆Ca2+浓度 pH值 激光扫描共聚焦显微镜 -
氟哌啶醇季铵盐衍生物对血管平滑肌细胞钙离子的影响
目的研究氟哌啶醇季铵盐衍生物(F2)对大鼠胸主动脉平滑肌细胞内钙离子荧光强度的影响。方法用Ca2+荧光染料Fluo-3-AM 负载细胞，在激光扫描共聚焦显微镜上测定细胞内游离钙的变化。结果在含氯化钙（1.26 mmol*L-1）的细胞外液中，30 mmol*L-1 KCl使细胞内钙荧光强度迅速增强，4种浓度F2（0.1、1、10、100 μmol*L-1）作用3 min时，使KCl诱导细胞内钙荧光强度分别降至64%±9%，(n=16, P<0.05)、16%±5%，(n=20,P<0.01)、0.6%±0.8%，(n=20,P<0.01)、0.1%±0.3%，(n=15,P<0.01)，呈量效依赖关系。结论 F2通过阻断细胞膜电压依赖性钙通道降低平滑肌细胞内钙浓度。
关键词： 氟哌啶醇季铵盐 血管平滑肌细胞 激光扫描共聚焦显微镜 Fluo-3-AM 钙 -
功能性多神经元钙成像技术及其在神经药理学中的应用前景
功能性多神经元钙成像(functional multineuron calcium imaging,fMCI)是一种通过记录神经元内Ca~(2+)信号变化,从空间时间模式上监测大量神经元动作电位的光学记录技术.该文综述了fMCI技术及其在神经药理学研究中的应用前景,fMCI为解析脑的各种功能活动和基于神经网络的某些中枢神经系统药物机理研究提供了强有力的工具.
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石萆汤对弱精子症患者精子线粒体膜蛋白 PHB及超微结构的影响
目的:探讨石萆汤对肾虚夹湿型弱精子症患者精子线粒体膜蛋白PHB及超微结构的影响.方法:选取福建中医药大学附属人民医院男科门诊就诊的肾虚夹湿型弱精子症患者(60例)和生殖体检者(60例)为研究对象.将生殖体检正常者纳入正常精液组(N组,n=30),检测为弱精子者纳入弱精子组(A组,n=30);确诊为肾虚夹湿型弱精子症的60例患者纳为石萆汤治疗组(T组,n=60).A组暂未接受相关治疗措施,T组连续口服石萆汤16周.三组受试者均禁欲7 d后经手淫方式采集精液,用计算机辅助精液质量分析仪(CASA)分析精液质量;采用荧光探针MitoTracker,激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察精子细胞的荧光强度,分析精子细胞线粒体膜蛋白PHB阳性细胞的比例;用透射电镜观察精子细胞线粒体超微结构的变化.结果:三组受试者除精液量比较无统计学意义(P>0.05)外,N组受试者部分精子质量指标[精子(a+b)级活动力及精子成活率]、精子线粒体膜蛋白PHB水平均明显高于A、T两组,且T组上述指标检测结果明显高于A组,差异均具有统计学意义(P<0.05).MitoTracker荧光探针检测,LSCM观察显示N组可见精子中段结构,类似棒状;T组可见精子中段结构,但较短或弯曲状;A组的精子结构变形;荧光强度A、T组精子弱于N组,但T组优于A组(P<0.05).透射电镜观察显示N组精子线粒体鞘完整;A组精子出现水肿、呈现空腔,线粒体肿胀;A组精子线粒体鞘较完整、线粒体肿胀明显减轻、结构较完整、整齐.结论:石萆汤能够改善肾虚夹湿型弱精子症患者精子质量,可通过上调精子线粒体膜蛋白PHB表达阻滞精细胞凋亡,保护精子线粒体超微结构的完整性,来达到治疗弱精子症的目的.
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应用于激光扫描共聚焦显微镜的活细胞标本制作方法
目的介绍急性神经元贴壁的简易方法和应用激光扫描共聚焦显微镜观察药物作用后神经元内核酸代谢的方法.方法以双重荧光染料吖啶橙(Acridine orange,AO)进行染色.在36°C孵育箱内孵育15分钟.激光扫描共聚焦显微镜对染色后的细胞进行光束扫描,以观测细胞内核酸代谢变化的规律. 结果皮层神经元RNA有显著改变.结论本方法的建立可以成功地应用于激光扫描共聚焦显微镜对胞内核酸代谢变化的研究.
关键词： 激光扫描共聚焦显微镜 急性分离神经元 吖啶橙 RNA DNA -
大鼠气道平滑肌细胞中微丝纤维形态特征的定量分析
针对大鼠气道平滑肌细胞激光扫描共聚焦显微图像，从细胞切面角度提出一种细胞内部微丝纤维形态与分布特征的定量分析方法。利用形态学与阈值分割法对细胞中微丝纤维主干进行提取，并对提取后的微丝纤维进行了数量、长度、宽度等形态特征计算，同时利用灰度共生矩阵分析微丝的分布特征。实验结果表明，所给出的定量特征提取方法能够表达大鼠气道平滑肌细胞切面内微丝纤维的几何特征和分布状态。并通过模拟微丝纤维变化，发现能量、熵能够较好地描述微丝的响应情况。
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激光扫描共聚焦显微镜在乳腺癌研究中的应用
激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)是当今世界上先进的分子细胞生物学分析仪器.本文就LSCM在乳腺癌细胞生物学、分子生物学、细胞膜受体、细胞内抗肿瘤药物的定位及其耐药机制研究、图像分析等方面的应用进行综述,并对其临床应用进行展望.
关键词： 激光扫描共聚焦显微镜 乳腺癌 -
激光共聚焦显微技术检测川芎嗪对缺氧/再复氧心肌细胞内游离钙的影响
目的:进一步探讨川芎嗪对缺氧/再复氧心肌细胞内游离钙的作用.方法:培养新生大鼠心肌细胞缺氧/再复氧模型,以荧光探针Fluo-3/AM负载,通过激光扫描共聚焦显微镜观察损伤和川芎嗪组心肌细胞内荧光强度.结果:损伤组细胞内钙荧光强度明显增强,川芎嗪各组细胞内钙荧光强度均有不同程度的减弱,尤以低、中剂量组明显,与损伤组比较有显著性差异(P＜0.01).结论:心肌缺氧/再复氧细胞内游离钙显著增加,而一定剂量的川芎嗪可降低细胞内游离钙,对心肌细胞具有保护作用.
关键词： 心肌细胞缺氧/再复氧 激光扫描共聚焦显微镜 钙 川芎嗪 大鼠 -
激光扫描共聚焦显微镜观察烧伤创面组织神经纤维的变化
目的 探讨激光扫描共聚焦显微镜观察烧伤后创面组织中神经纤维的形态结构及其分布特点的可行性.方法 取烧伤后1、2、3、4周创面组织,以神经丝蛋白(NF)为标记物,利用荧光免疫技术显示组织中的神经纤维,利用激光扫描共聚焦显微镜进行分层扫描,观察不同层面神经纤维的形态;并进行三维重建,观察神经纤维的立体形态.结果 伤后3周内神经纤维数目低于正常,3周后神经数目开始高于正常,并逐渐变长,随着时间延长出现扭曲缠绕或交错排列,分布呈现区域性集中.分层扫描和三维重建可见伤后2周神经稀疏、短小,3周后神经纤维有不规则肿胀和扭曲变形,内部结构不完整并伴有局部断裂、破损甚至崩解,可见明显的皱褶和出芽,并呈现较正常神经纤维更强的荧光信号,在不同层次以及不同角度的切片上观察到的病理改变程度不同.结论 激光扫描共聚焦显微镜能观察到烧伤后伤区神经纤维三维结构,发现组织修复过程中神经存在再生和重塑现象.
关键词： 激光扫描共聚焦显微镜 烧伤 神经构筑 -
化疗药物诱导后乳腺肿瘤细胞离子浓度变化的检测
细胞内游离钙离子浓度的变化是导致细胞生理功能变化的重要物质基础,也是多种受体激动后信息传递过程的中心环节.
关键词： 激光扫描共聚焦显微镜 乳腺肿瘤 钙离子 -
主要细胞周期蛋白在人类正常胃肠道黏膜组织中的表达规律
目的 研究人类主要细胞周期蛋白(Cyclin D1、E、A、B1)在正常胃肠道黏膜组织中的表达规律.方法 收集手术切除正常胃肠道黏膜组织标本共33例,应用间接免疫荧光双标法在激光扫描共聚焦显微镜下检测Cyclins蛋白的表达及其差异;24例正常大小肠黏膜组织应用免疫组织化学研究人类主要细胞周期蛋白(Cyclin D1、E、A、B1)在正常胃肠黏膜组织中的表达规律.结果 ①在正常胃肠道黏膜组织中的Cyclins表达以Cyclin A、B1为主,Cyclin D1,Cyclin E低表达或无表达,除了Cyclin D1和Cyclin E组间无统计学意义外,其余各组方差分析均有统计学意义,P<0.01;免疫组织化学染色结果和免疫荧光染色结果相符合;② 胃和肠黏膜间4种Cyclins的表达,Cyclin B1有显著性差异(P<0.01),其它Cyclins(A、D1、E)的表达率无显著性差异(P>0.05).结论 在人类正常胃肠道黏膜组织中的Cyclins表达以Cyclin A、B1为主,胃肠道黏膜组织中Cyclin B1表达有差异,大肠黏膜中Cyclin B1的表达显著高于胃组织中Cyclin B1的表达.
关键词： 细胞周期蛋白 免疫组化 激光扫描共聚焦显微镜
