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慢性铝染毒对大鼠海马细胞内[Ca2+]i和CaMKⅡ蛋白表达的影响
目的 通过进一步研究慢性铝暴露引起大鼠海马细胞内[Ca2+]i和钙调蛋白激酶激酶Ⅱ(CaM Ⅱ)蛋白表达的变化,来探讨铝损害学习记忆的作用机制.方法 选择断乳后Wistar大鼠,以含有不同浓度AlCl3的水进行饲养.3个月后,取海马测定细胞内[Ca2+]i,用Western blotting方法检测CaMK Ⅱ的蛋白表达.结果 (1)各染铝组的[Ca2+]i与对照组比较明显降低,差异有统计学意义(P<0.01),但各染铝组间差异无统计学意义;(2)各染铝组CaMKⅡ蛋白表达与对照组比较也显著降低,并成剂量关系,差异有统计学意义(P<0.01).结论 铝能够降低大鼠海马细胞内的[Ca2+]i浓度并造成CaMKⅡ]的蛋白表达降低,从而损伤学习记忆功能.
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四君子汤对脾气虚证大鼠脑肠CaM/CaMK Ⅱ干预效应研究
目的:观察脾气虚证大鼠脑肠中CaM信号通路关键基因的时相性动态表达及四君子汤干预作用.方法:Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组、模型组(14,21,28 d)、四君子汤组(14,21,28 d),除对照组外,其余各组均以苦寒破气法(大黄枳实厚朴制剂液7.5 g·kg-1 ·d-1)、游泳力竭法双因素法复制脾气虚证模型,各四君子汤组造模7d后,继续造模的同时,以四君子汤20g·kg-1·d-1灌胃进行干预治疗,采用免疫组织化学方法、蛋白免疫印迹技术分别检测大鼠海马、小肠在不同时间阶段CaM信号转导通路关键基因CaM/CaMKⅡ表达水平,同时检测以益气健脾法为指导的四君子汤对脾气虚证大鼠的干预效应,并分析其作用机制.结果:脾气虚证大鼠相对于正常大鼠,小肠组织中CaM/CaMKⅡ表达升高,海马组织中CaM/CaMKⅡ表达降低(P＜0.05,P＜0.01).四君子汤治疗后大鼠相对于脾气虚证大鼠,小肠组织中CaM/CaMKⅡ表达明显降低,海马组织中CaM/CaMKⅡ表达明显升高(P ＜0.05,P＜0.01).结论:脾气虚证证候的形成有可能与CaM/CaMKⅡ在小肠组织中的高表达、海马组织中的低表达有关,四君子汤对脾气虚证的治疗作用有可能是通过降低小肠组织并升高海马组织中CaM/CaMKⅡ的表达来实现的.
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吗啡条件性位置偏爱大鼠脑伏核中CaMK Ⅱ及NOS阳性神经元变化
目的:研究吗啡条件性位置偏爱(CPP)大鼠伏核中CaMK Ⅱ及NOS的阳性神经元变化.方法:采用免疫组织化学实验方法观察CaMK Ⅱ及NOS阳性神经元的形态及数目的变化.结果:与正常对照组比较,吗啡模型组CaMK Ⅱ及NOS的阳性神经元数均明显升高(P<0.01).结论:吗啡CPP大鼠伏核中显示CaMK Ⅱ及NOS的阳性神经元增多,参与了吗啡精神依赖的形成.
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CaN和CaMK Ⅱ在单核细胞活化信号传导中的作用
目的观察CaN和CaMK Ⅱ在LPS诱导人单核细胞活化的细胞内信号传导过程中的作用.方法以CaN抑制剂CsA或CaMK Ⅱ抑制剂KN93预处理已经分化的人单核细胞系U 937后,再用LPS刺激,采用Western印迹法检测细胞内 I κ B-α水平及胞核内NF-κ B水平的变化,并用MTT法测定上清液中TNF-α水平变化.结果 CsA和KN 93均可明显抑制LPS刺激U 937细胞后胞核内NF-κ B水平及上清液中TNF-α水平的升高.结论 CaN和CaMK Ⅱ在LPS诱导人单核细胞活化的信号传导过程中均起重要作用.
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高脂血症小鼠海马CA3区神经元CaMK Ⅱ蛋白表达
目的 探究高脂血症小鼠海马CA3区神经元形态、尼氏体含量以及CaMKⅡ蛋白表达的情况.方法 20只ApoE-/-鼠随机分为对照组(n=10)和高脂血症组(n=10),分别饲养普通饲料和高脂饲料.分别采用HE染色和尼氏染色观察海马CA3区形态学变化,免疫组织化学方法观察各组小鼠海马神经元内CaMKⅡ蛋白表达情况.结果 HE染色结果显示,高脂组和对照组海马神经元形态无明显差异;尼氏染色结果显示,高脂组尼氏体含量较正常组减少;免疫组化结果表明,高脂组海马CA3区细胞数目减少,染色较深,CaMKⅡ阳性蛋白的表达较正常组明显减少.结论 高脂血症可导致小鼠海马CA3区神经元CaMKⅡ蛋白表达降低.
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骨髓间充质干细胞治疗血管性痴呆大鼠行为学及海马CaM、CaMKⅡ表达水平的影响
目的 探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stromal cells,BMSCs)侧脑室移植治疗血管性痴呆(vascular dementia,VaD)模型对大鼠行为学及海马钙调蛋白(calmodulin,CaM)、钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)表达的影响.方法 以全骨髓贴壁法培养大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stromal cells,BMSCs);流式细胞仪对所培养BMSCs进行表面抗原鉴定;成纤维生长因子(basic fibroblast growth factorbfic,bFGF)和丁羟基茴香醚(beta hydroxy acid,BHA)诱导BMSCs分化为神经元细胞,并对诱导后的细胞,进行神经元特异性的免疫组化鉴定;采用改良四血管法制备VaD模型,设立对照组,造模4 w后将VaD大鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、BMSCs治疗组.观察4 w后实验大鼠的行为学表现及应用Real-time PCR检测海马CaM、CaMKⅡ表达水平.结果 BMSCs治疗组行为学表现有明显改善.其海马CaM、CaMKⅡmRNA表达比模型组降低(P＜0.05).结论 侧脑室移植BMSCs显著改善VaD大鼠行为学表现,并使其海马CaM、CaMKⅡ表达降低.
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疏肝和胃方对内脏高敏感大鼠CaMK Ⅱ表达的影响
目的 观察疏肝和胃方对内脏高敏感钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMK Ⅱ)表达的影响.方法 健康雄性SD大鼠32只,随机分为模型组、疏肝和胃方组、雷贝拉唑组及空白对照组4组,每组8只.采用鸡卵清蛋白联合食管酸灌注建立内脏高敏感模型.免疫组化法观察各组大鼠脊髓CaMK Ⅱ含量的表达及阳性神经元个数.结果 与空白对照组比较,模型组CaMK Ⅱ含量的表达、阳性神经元个数明显升高(P＜0.05);与模型组比较,中药组、西药组CaMK Ⅱ含量的表达、阳性神经元个数明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01);在阳性神经元个数方面,中药组低于西药组(P＜0.05);在CaMK Ⅱ表达方面,中药组与西药组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 疏肝和胃方可能通过抑制CaMK Ⅱ表达降低内脏高敏感.
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氧化苦参碱对坐骨神经结扎小鼠的镇痛作用及其对 CaMK Ⅱ受体表达的影响
目的：研究氧化苦参碱（OMT）对神经病理性疼痛小鼠的镇痛作用及其机制。方法采用坐骨神经结扎模型（CCI）机械缩足反射法观察 OMT 的镇痛作用，并分析其镇痛作用与 CaMKII 受体的关系。结果①给小鼠腹腔注射160、80 mg·kg －1 OMT 可明显延长小鼠的机械缩足反射期（P ＜0.05）。②给小鼠腹腔注射160、80、40 mg·kg －1 OMT可明显降低小鼠的冷缩足反射次数（P ＜0.05）。③ OMT 能够跟 CaMK Ⅱ拮抗剂 KN-93和 AIP 发挥协同作用。④模型组小鼠的 pCaMK Ⅱ蛋白表达较假手术组明显升高（P ＜0.01）；与模型组比较，OMT（160 mg·kg －1）组可明显降低pCaMK Ⅱ蛋白的表达（P ＜0.01）。结论OMT 对神经病理性疼痛具有镇痛作用，其镇痛作用可能与 CaMK Ⅱ有关。
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尼可地尔对TGF-β1诱导人气道平滑肌细胞肥大的实验研究
目的 研究ATP敏感性钾通道(KATP)开放剂对人气道平滑肌细胞(HASMCs)肥大的影响及其可能的作用机制.方法 用TGF-β1诱导HASMCs肥大,ATP敏感性钾通道开放剂尼可地尔(Nico)进行干预,将实验分成Control组、TGF-β1组、TGF-β1+Nico组、Nico组.显微镜下及免疫荧光法观察细胞形态变化及α-SMA表达情况;Western Blot法测定细胞α-SMA蛋白表达和CaMK Ⅱ、CREB磷酸化情况.结果 免疫荧光实验表明TGF-β1能浓度依赖性地促进细胞肥大和α-SMA表达,Nico能下调α-SMA的表达,减轻细胞肥大;Western blot实验表明TGF-β1能升高α-SMA表达和CaMK Ⅱ、CREB磷酸化水平,Nico能抑制α-SMA的表达,降低CaMK Ⅱ、CREB磷酸化水平.结论 Nico能减轻TGF-β1诱导的HASMCs肥大,可能与抑制CaMK Ⅱ/CREB信号通路传导有关.
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氯丙嗪对肺腺癌A549细胞恶性生物学行为的抑制作用
目的 探讨氯丙嗪对肺腺癌A549细胞的恶性生物学行为是否具有抑制作用及其机制.方法 不同浓度氯丙嗪与肺腺癌A549细胞共孵育后,观察该细胞生长能力、克隆形成能力、迁移和侵袭能力的变化,Westernblot检测CaMK Ⅱ、c-Fos的表达情况.结果 与对照组比较,MTT结果显示氯丙嗪能显著抑制肺腺癌A549细胞的增殖生长能力,平板克隆形成实验显示氯丙嗪明显抑制肺腺癌A549细胞的克隆形成,Traswell小室迁移、侵袭实验显示氯丙嗪抑制肺腺癌A549细胞的迁移及侵袭,Western blot显示氯丙嗪明显下调肺癌A549细胞的CaMKⅡ、c-Fos蛋白表达(P均＜0.05);上述抑制作用均呈剂量依赖性.结论 氯丙嗪对肺腺癌A549细胞的增殖、迁移与侵袭等恶性生物学行为有抑制作用,其机制可能与CaMKⅡ/c-Fos通路下调有关.
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PI3K阻断剂LY294002对TNF-α诱导心肌肥大的Ca2+-CaMK Ⅱ和CaN通路的影响
目的 研究PI3K是否通过Ca2+-CaMKⅡ和CaN信号途径参与肿瘤坏死因子-α诱导的心肌肥大.方法 应用激光共聚焦显微镜检测单个心肌细胞内Ca2+浓度变化.Lowry法测心肌细胞蛋白含量.计算机图象分析测心肌细胞体积.应用Western blot法测定心肌细胞CaMK ⅡδB和CaN蛋白表达.结果 ①PI3K阻断剂LY294002(50 μmol/L)明显抑制TNF-α(100 μg/L)诱导的心肌细胞内钙离子浓度增高(P＜0.01),对正常心肌细胞内Ca2+浓度无明显影响.其抑制程度与LY294002+ 2-APB(30 μmol/L)组相近(P＞0.05),小于LY294002+ ry-anodine(50 μmol/L)组(P＜0.05).②LY294002明显抑制TNF-α诱导的心肌细胞蛋白含量的增加及细胞体积的增大;其程度与LY294002+ 2-APB无统计学差异,但大于单用2-APB组,小于LY294002+ ryanodine组(P＜0.05).PI3K阻断剂LY294002明显抑制TNF-α诱导的心肌细胞CaMK ⅡδB和CaN表达增加(P＜0.01),其抑制程度与LY294002+ 2-APB组相近(P＞0.05).结论 PI3K通过作用IP3R使心肌细胞内Ca2+浓度增加,进而调节心肌细胞内CaMKⅡδB和CaN的表达,从而参与TNF-α诱导的心肌肥大.
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鞘内注射右美托咪定对背根结慢性压迫痛大鼠脊髓CaMK Ⅱ表达的影响
目的 观察鞘内注射右美托咪定对背根节慢性受压痛大鼠(CCD)脊髓CaMKⅡ表达的影响,探讨右美托咪定-CaMKⅡ通路在大鼠背根节慢性受压痛中的作用.方法 鞘内置管成功的雄性SD大鼠48只,随机分为6组,每组48只.分别是正常对照组(C组);模型组(CCD组);生理盐水组(NS组);右美托咪定2μg/kg组(Dex2);右美托咪定4 μg/kg组(Dex4);右美托咪定8 μg/kg组(Dex8).分别于鞘内置管前(T1),制备CCD模型前(T2)、CCD模型制备后5d鞘内给药前(T3)、鞘内给药后30 min(T4)、60 min(T5)、120 min(T6)、240 min (T7)检测大鼠机械缩腿阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL).并于鞘内给药后240 min,各组取4只大鼠处死,取脊髓腰膨大,采用免疫印迹法检测CaMKⅡ的表达.结果 与C组比较,CCD组大鼠在T3～T7各时点MWT及TWL均显著降低,CCD组大鼠表现为明显的机械痛敏感和热痛敏感.NS组大鼠鞘内注射NS后对大鼠MWT及TWL无影响,鞘内注射不同剂量的右美托咪定则可显著提高CCD大鼠MWT和TWL.与C组(0.24±0.04)比较,CCD组(0.59±0.09)、NS组(0.61±0.08)大鼠CaMKⅡ蛋白表达均显著增加;鞘内注射不同剂量的右美托咪定后,大鼠脊髓CaMKⅡ蛋白表达(0.45±0.06、0.39±0.05、0.36±0.06)增加幅度显著降低.结论 鞘内注射右美托咪定可减轻CCD大鼠机械痛敏感和热痛敏感,抑制CCD大鼠脊髓CaMKⅡ蛋白表达.
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黄芪甲苷通过CaMK Ⅱ信号通路对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大的保护作用
目的:从钙调素蛋白依赖激酶Ⅱ(CaMK Ⅱ)信号通路的角度探讨黄芪甲苷(AsⅣ)对异丙肾上腺素(Iso)诱导乳鼠心肌细胞肥大的保护作用及其可能机制.方法:原代培养新生乳鼠心肌细胞,10 mol/L异丙肾上腺素诱导心肌细胞肥大,观察KN93(CaMK Ⅱ抑制剂)、黄芪甲苷3,10,30 mol/L剂量组对肥大细胞的影响.采用消化分离法及计算机图像分析系统检测心肌细胞体积;考马斯亮蓝试剂盒检测心肌细胞中总蛋白含量;罗丹明-鬼笔环肽染色观察细胞骨架;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测心房利钠肽(ANP) mRNA表达;Wertern blot检测心肌细胞CaMKⅡ表达.结果:与正常对照组细胞比较,异丙肾上腺素模型组细胞体积、总蛋白含量、ANPmRNA和CaMK Ⅱ表达分别增加98.14％、52.63％、87.37％和55.22％.黄芪甲苷可有效抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大,黄芪甲苷30 mol/L组可抑制异丙肾上腺素诱导的心肌肥大,使模型组细胞体积减小49.67％、总蛋白含量降低33.87％、ANPmRNA表达降低40.00％,CaMK Ⅱ的表达降低31.73％.结论:黄芪甲苷可抑制异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大,其机制可能与抑制CaMK Ⅱ信号通路有关.
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CaMK Ⅱ介导20-HETE诱导的乳鼠心肌细胞凋亡及肥大作用研究
目的 探究CaMK Ⅱ在20-HETE诱导的乳鼠心肌细胞凋亡和肥大中的作用.方法 原代培养乳鼠心肌细胞,随机分为正常对照组(Con组),20-HETE组,20-HETE+ KN-93组以及KN-93组;采用CCK-8法检测细胞活性、TUNEL法检测凋亡、HE染色后检测心肌细胞表面积、BAC法检测细胞内蛋白浓度;RT-qPCR检测心肌肥大特征性基因心钠肽(ANP)的表达;Western Blot检测CaMK Ⅱ及其磷酸化蛋白表达.结果 与对照组相比,20-HETE组心肌细胞活性显著下降,细胞凋亡率显著升高(P＜0.05);同时,20-HETE明显促进心肌细胞表面积增加、蛋白浓度升高以及肥大基因ANP的表达上调(P＜0.05);使用CaMK Ⅱ抑制剂KN-93共孵育后,阻断了20-HETE诱导的细胞凋亡和肥大的作用(P＜0.05);20-HETE促进心肌细胞CaMK Ⅱ蛋白以及磷酸化CaMK Ⅱ蛋白表达(P＜0.05),具有激活CaMK Ⅱ作用.结论 20-HETE激活CaMK Ⅱ信号通路诱导心肌细胞肥大和凋亡.
关键词： 20-羟二十烷四烯酸 CaMK Ⅱ 细胞肥大 细胞凋亡
