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高原环境下REM睡眠剥夺大鼠皮质GRP78的表达及药物干预
目的:探讨高原环境下大鼠不同时间快速动眼睡眠(REM)期睡眠剥夺(SD)后皮层内质网应激(ERS)标志性分子葡萄糖调控蛋白78(GRP78)的动态变化,神经元凋亡影响及人参皂甙Rd(GS Rd)可能的神经保护作用.方法:采用小平台水环境法制作大鼠SD模型,应用免疫组织化学染色检测相关时间点GRP78的动态变化;TUNEL试剂盒检测凋亡细胞.结果:在平原(兰州)组,SD后1d皮层区GRP78蛋白表达开始增高,3d时达高峰,5d时与正常睡眠组相比无明显差别.GS Rd,组SD后1d、3d、5d GRP78的表达较生理盐水对照组增高.在对应时间点高原(可可西里)组GRP78的表达均高于平原组.结论:高原SD组大鼠GRP78的表达较平原组增高;GS Rd能够提高SD组大鼠GRP78表达;GS Rd可能会通过升高GRP78的表达保护内质网功能,以减轻脑损伤.
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雷公藤、人参与芳维甲酸乙酯对培养光老化真皮成纤维细胞的影响
背景:基质金属蛋白酶在衰老皮肤真皮成纤维细胞的表达增强,雷公藤红素及人参皂甙具有免疫抑制、抗抗衰老等作用.维甲酸对光老化皮肤有治疗作用,但还存在较多的毒副作用.目的:对比观察人参皂甙Rd、雷公藤红素与芳维甲酸乙酯对体外培养的人类成纤维细胞基质金属蛋白酶1和基质金属蛋白酶3表达的调节作用.方法:标本取之于四川省泸州医学院附属医院普外科健康新生儿包皮环切术后真皮,家属知情同意.分离及体外培养人体皮肤成纤维细胞.实验分为①正常对照组:不作任何处理.②阳性对照组:给予紫外线照射(80 kJ/m~2)、8-甲氧补骨脂素(100 mg/L).⑨芳维甲酸乙酯实验组:紫外线照射+8-甲氧补骨脂素+芳维甲酸乙酯.④雷公藤红素组:紫外线照射+8-甲氧补骨脂素+雷公藤红素.⑤人参皂甙Rd组:紫外线照射+8-甲氧补骨脂素+人参皂甙Rd.雷公藤红素组;按雷公藤红素剂量分为10,20,40 mg/L3组;人参皂甙Rd组:按人参皂甙Rd剂量分为20,50,100 mg/L 3组.观察各组成纤维细胞基质金属蛋白酶1和基质金属蛋白酶3免疫组织化学染色结果.结果与结论:阳性对照组基质金属蛋白酶1和基质金属蛋白酶3表达明显增强,与对照组之间差异有显著性(P<0.05);芳维甲酸乙酯实验组、雷公藤红素组各组、人参皂甙Rd组各组,与阳性对照组比较,表达明显减弱(P<0.05);芳维甲酸乙酯实验组、雷公藤红素组各组、人参皂甙Rd组各组之间比较,差异无显著性(P>0.05).结果表明,①人参皂甙Rd、雷公藤红素可以达到芳维甲酸乙酯一样治疗和预防皮肤光老化的作用.②人参、雷公藤等中药的毒副作用小的可能原因是其对机体作用的有效浓度范围较大.⑨人参皂甙Rd、雷公藤红素和芳维甲酸乙酯治疗和预防皮肤光老化的机制主要是通过调节基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶3的表达.
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人参皂甙Rd抑制LPS刺激的RAW264.7细胞中iNOS及COX-2表达的研究
目的:为了观察人参皂甙Rd在LPS刺激的RAW264.7细胞中对诱导型NO合酶(iNOS)及环加氧酶2(COX-2)等表达的抑制作用.方法:采用Griess试剂和ELISA对RAW264.7细胞培养上清的NO及前列腺素E2(PGE2)进行检测;并通过Western blot法对iNOS,COX-2及NF-κB的表达进行分析.结果:人参皂甙Rd能显著抑制由LPS刺激的RAW264.7细胞中NO及PGE2的产生,且NO及PGE2的减少与iNOS、COX-2及NF-κB活性的下调相关.结论:人参皂甙Rd的抗炎作用是通过下调NF-κB活性及后续的iNOS、COX-2的表达来发挥作用.
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人参皂甙Rd预处理可减轻谷氨酸所致的PC12细胞损伤
目的:研究人参皂甙Rd(Ginsenoside Rd)预处理对谷氨酸所致PC12细胞损伤的影响.方法:将体外培养的PC12细胞分为3组,分别为对照组(Control)、谷氨酸损伤组(Glu)和人参皂甙Rd预处理组(Rd).Control组细胞正常培养;Glu组细胞暴露于含10mM谷氨酸的DMEM培养基中损伤24 h;Rd组细胞经50 μM的人参皂甙Rd预处理30 min后,在谷氨酸浓度为10mM的DMEM培养基中损伤24 h.采用MTT检测细胞活力和乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒检测LDH释放量;流式细胞仪检测胞内活性氧(ROS)水平;Western blot检测还原型谷胱甘肽蛋白(GSH)表达;专用试剂盒检测细胞内过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)含量,相差显微镜观测细胞形态.结果:50 μM的人参皂甙Rd预处理30 min,可明显提高谷氨酸诱导的PC12细胞的活力,降低其LDH释放量、胞内ROS含量,并提高胞内GSH蛋白表达,增加CAT、SOD含量并改善细胞形态.结论:人参皂甙Rd预处理可减轻谷氨酸引起的PC12细胞损伤.
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人参皂甙Rd抑制大鼠局灶性脑缺血后趋化因子CXCL1和γ-干扰素的蛋白表达
目的:研究人参皂甙Rd(Cinsenoside-Rd,GS-Rd)在大鼠局灶性脑缺血后对炎症趋化因子CXCL1和Y-干扰素(Interferon-γ,IFN-γ)的影响.方法:将SD大鼠随机分为5组:正常组(n=5),假手术组(n＝5),GS-Rd对照组(n＝5),大脑中动脉栓塞模型(MCAO)组(n=20),MCAO+GS-Rd组(n=20).正常组不做任何处理;假手术组进行大脑中动脉栓塞手术,但不插入栓线;GS-Rd对照组给予腹腔注射10mg/KgGS-Rd,不进行手术;MCAO组(n＝20)和MCAO+GS-Rd组(N=20)进行大脑中动脉栓塞手术,术后2小时拔出栓线,MCAO+GS-Rd组在术前15分钟腹腔注射10mg/KgGS-Rd.在12小时、1天、3天、7天四个时间点分别提取脑组织蛋白,通过液相芯片技术检测CXCLI,IFN-γ含量.结果:正常组,假手术组和GS-Rd对照组组间CXCL1,IFN-γ 含量无统计学差异;与三个对照组相比,MCAO组和MCAO+GS-Rd组中CXCLI,IFN-γ蛋白含量均有明显增加(P＜0.05);而与MCAO组相比,MCAO+GS-Rd组CXCL1,IFN-γ的生成明显减少(P＜0.05).结论:10 mg/KgGS-Rd预处理可有效抑制大鼠短暂性脑缺血后CXCLI,mN-γ的生成;通过抑制炎症反应,GS-Rd可能在神经保护中发挥重要的作用.
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人参皂甙Rd通过调节SNI大鼠背根神经节钠、钾电流抑制痛敏
目的:观察人参皂甙Rd(ginsenoside Rd)对大鼠坐骨神经分支选择性损伤(spared sciatic nerve injury,SNI)引起的痛敏的影响及其作用机制.方法:坐骨神经分支选择性损伤术后7天,观察腹腔注射不同浓度人参皂甙Rd后大鼠后足的机械性缩足反应阈值(paw withdrawl mechanical threshold,PWMT)的变化;在术后7天,急性分离并取出大鼠腰4和腰5段背根节,对整节DRG上的中小型神经元运用全细胞膜片钳技术进行记录.结果:坐骨神经分支选择性损伤术后7天,大鼠出现明显的机械性痛敏,腹腔注射5 mg/ml和10 mg/ml的人参皂甙Rd能剂量依赖性的翻转大鼠机械性痛敏;坐骨神经分支选择性损伤能明显地增大SNI大鼠DRG中小型神经元上的钠电流以及减小电压依赖性钾电流,而100 μM人参皂甙Rd能有效翻转该钠、钾电流的变化.结论:人参皂甙Rd能有效地改善坐骨神经分支选择性损伤引起的机械性痛敏,其机制可能与人参皂甙Rd明显地调节SNI大鼠DRG中小型神经元上的电压依赖性钠、钾电流有关.
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人参皂甙Rd对氯胺酮诱导幼年大鼠海马神经元凋亡的影响
目的 探讨人参皂甙Rd(GSRd)对于氯胺酮诱导幼年Sprague-Dawley(SD)大鼠海马神经元凋亡的影响.方法 35只幼年(出生后第7天)SD雄性大鼠随机分入对照组(10只)、氯胺酮组(10只)、氯胺酮+GSRd预处理高剂量组(5只)、氯胺酮+GSRd预处理低剂量组(5只)、GSRd组(5只).氯胺酮组、氯胺酮+GSRd预处理高剂量组、氯胺酮+GSRd预处理低剂量组大鼠均予单次腹腔注射氯胺酮80 mg/kg行麻醉处理,对照组、GSRd组则给予腹腔注射相同体积的0.9％氯化钠溶液.在氯胺酮注射前48、24和0.2h时,氯胺酮+GSRd预处理高剂量组、氯胺酮+GSRd预处理低剂量组和GSRd组大鼠均连续3次腹腔注射GSRd,3组的剂量分别为100、5～40和100 mg/kg.麻醉10 min后,检测大鼠动脉血pH值、动脉血氧分压(paO2)、动脉二氧化碳分压(paCO2).大鼠苏醒后即刻,采用Western印迹法检测大鼠海马神经元活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase 3)和抗凋亡因子(Bax)的相对分子质量,记录不同剂量的GSRd对氯胺酮诱导后大鼠海马神经元凋亡的影响.结果 麻醉10 min后,氯胺酮组与对照组间动脉血pH值、paO2、paCO2的差异均无统计学意义(P值均＞0.05).氯胺酮组的活化型Caspase 3、Bax相对分子质量均显著高于对照组和GSRd组(P值均＜0.05),氯胺酮+GSRd预处理高剂量组显著高于氯胺酮组和氯胺酮+GSRd预处理低剂量组(P值均＜0.05),氯胺酮组与氯胺酮+ GSRd预处理低剂量组间、对照组与GSRd组间的差异均无统计学意义(P值均＞0.05).结论 低剂量GSRd对氯胺酮诱导的幼年大鼠的海马神经元凋亡无影响,而高剂量GSRd增加了海马神经元的凋亡.GSRd对于氯胺酮诱导的幼年大鼠的海马神经元凋亡无保护作用.
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人参皂甙Rd对高黏血症大鼠血液流变性的影响
目的 观察人参皂甙Rd(GSRd)对高分子右旋糖酐(HMD)所致高黏血症大鼠血液流变性的影响.方法 选择雄性Wistar大鼠,随机分为正常组、溶媒组、HMD组、GSRd+HMD组(GSRd组).分别腹主动脉取血检测各组大鼠的全血黏度、血浆黏度、血沉(ESR)、红细胞压积(HCT).结果 GSRd可以明显降低高黏血症大鼠的全血黏度(200s-1、30s-1、5s-1、1s-1 ),同时降低血浆黏度(100s-1)和ESR,升高HCT.结论 GSRd可以明显降低HMD所致高黏血症大鼠的血液黏度,改善高黏血症大鼠的血液流变学性质.
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人参皂甙RD对大鼠蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛防治作用
目的 探讨人参皂甙RD对大鼠蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后脑血管痉挛(cerebral vasospasm,CVS)的防治作用及作用机制.方法 48只SD大鼠随机分为穿刺组、模型组、人参皂苷RD组和丙二醇组,每组12只;模型组、人参皂苷RD组和丙二醇组采用枕大池二次注血法建立大鼠SAH模型,穿刺组仅行枕大池穿刺而不注血,模型组造模后无干预措施,人参皂苷RD组和丙二醇组造模后分别腹腔注射人参皂甙RD稀释液和丙二醇,1次/d;造模5d后行神经行为学评分,采用HE染色和透射电镜观察基底动脉形态和超微结构改变.结果 人参皂苷RD组神经行为学评分(3.75±0.62)明显高于模型组(3.17±0.72)和丙二醇组(3.25±0.45),低于穿刺组(4.92±0.29)(P＜0.05);人参皂苷RD组基底动脉管壁厚度((20.03±0.44)μm)明显小于模型组((25.12±0.37)μm)和丙二醇组((25.06±0.38)μm),大于穿刺组((16.89±0.41)μm)(P＜0.05),管腔面积((36.39±1.41)×103 μm2)明显大于模型组((21.20±0.86)×103 μm2)和丙二醇组((21.41±1.03)×103 μm2),小于穿刺组((55.09±1.20)×103 μm2)(P＜0.05);人参皂苷RD组基底动脉超微结构病理性改变减轻.结论 非电压依赖性钙通道拮抗剂人参皂甙RD可在一定程度上缓解CVS.
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人参皂甙Rd对高原大鼠运动疲劳后学习记忆及海马CA1区超微结构的影响
目的:观察人参皂甙Rd对高原运动疲劳后大鼠学习记忆能力及海马CA1区超微结构改变的影响.方法:健康成年Wistar大鼠24只,由兰州用汽车直接引入青海省可可西里高原,随机分为对照(A)组、生理盐水重度疲劳(B)组及人参皂甙重度疲劳(C)组各8只;A组正常饲养,不运动;采用跑台运动方式建立重度疲劳模型,B、C组分别腹腔给予生理盐水(2 mg/kg)或人参皂甙Rd(2 mg/kg);Morris水迷宫测试大鼠学习记忆能力,HE染色观察大鼠海马组织形态学改变,透射电子显微镜观察海马CA1区神经元超微结构的改变.结果:与A组相比,B组大鼠逃避潜伏期显著延长(P<0.01),海马CA1区超微结构发生病理性改变,C组大鼠逃避潜伏期较B组缩短(P<0.05),海马CA1区超微结构病理性改变减轻.结论:人参皂甙Rd可缓解高原环境重度疲劳导致的大鼠学习记忆能力减退及海马神经元损伤.
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人参皂甙RD预处理对谷氨酸所致PC12细胞损伤的保护作用
目的：探讨人参皂甙RD预处理对谷氨酸所致PC12细胞损伤的影响。方法将PC12细胞分为对照组、谷氨酸损伤组和人参皂甙RD预处理组。对照组细胞正常培养；谷氨酸损伤组细胞置于含10 mmon/L谷氨酸的DMEM培养基中培养24 h；人参皂甙RD预处理组细胞经50μmol/L人参皂甙RD预处理30 min后，再加谷氨酸继续培养24 h。采用噻唑蓝比色法检测细胞活力；按试剂盒检测培养液乳酸脱氢酶（LDH）释放量；流式细胞仪检测胞内活性氧（ROS）水平；按试剂盒检测细胞内超氧化物歧化酶（SOD）含量。结果人参皂甙RD预处理佳浓度为50μmol/L。与谷氨酸损伤组相比，人参皂甙RD预处理PC12细胞活力明显增高（P<0.05），培养液LDH释放量明显降低（P<0.05），胞内ROS含量明显降低（P<0.05），胞内SOD含量明显增高（P<0.05）。结论人参皂甙RD预处理可减轻谷氨酸引起的PC12细胞损伤。
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人参皂甙Rd对颞叶癫(癎)间大鼠学习记忆能力及海马5-HT表达的影响
目的 研究人参皂甙Rd对氯化锂-匹罗卡品点燃颞叶癫(癎)间(temporal lobe epilepsy,TLE)大鼠学习记忆能力及海马5-HT表达的干预作用.方法 建立氯化锂-匹罗卡品点燃颞叶癫(癎)间大鼠模型,将30只造模成功的颞叶癫(癎)间大鼠随机分为TLE组(生理盐水10ml/kg腹腔注射,15只)及GSRd干预组(人参皂甙Rd 2mg/kg腹腔注射,15只),另选15只大鼠作为正常对照组;采用Morris水迷宫及免疫组化染色分别检测各组大鼠学习记忆能力及海马5-HT表达水平.结果 与正常对照组比较, TLE组大鼠学习记忆能力下降,海马5-HT表达明显减少(P<0.05);与TLE组比较,GSRd干预组可显著提高大鼠学习记忆能力及海马5-HT的表达水平(P<0.05).结论 人参皂甙Rd可能通过增加海马5-HT的表达来提高颞叶癫(癎)间大鼠学习记忆能力.
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人参皂甙Rd联合远程预处理对脑缺血大鼠的脑保护效应
目的 比较单独或联合应用人参皂甙Rd及远程预处理的脑保护效应,探寻安全有效的脑保护方法.方法 40只雄性SD大鼠随机均分为4组(n=10/组):①对照组(C组),腹腔注射生理盐水1 h后制备大脑中动脉栓塞-再灌注(middle cerebral artery occlusion-reperfusion,MCAO)模型;②人参皂甙Rd组(Rd组),腹腔注射人参皂甙Rd30 mg/kg 1 h后行MCAO;③远程预处理(remote preconditioning,RPC)组,远程预处理1 h后行MCAO;④人参皂甙Rd联合远程预处理组(Rd+RPC组),远程预处理前1 h腹腔注射人参皂甙Rd 30 mg/kg,远程预处理1 h后行MCAO.分别在再灌注24 h、72 h行神经功能评分(neurological behavior scores,NBS),72 h评分后取大脑行2,3,5-氯化三苯四唑(triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色测量梗死容积百分比.结果 再灌注后24 h和72 h,各处理组的NBS明显高于对照组(P<0.01),RPC组的NBS明显高于Rd组,而Rd+RPC组NBS又明显高于Rd组和RPC组(P<0.05).各处理组脑梗死容积百分比明显小于对照组(P<0.01),RPC组也明显小于Rd组(P<0.01),而Rd+RPC组又明显小于Rd组和RPC组(P<0.05).结论 人参皂甙Rd及远程缺血预处理均具有明显的脑保护效应,且联合两种方法表现出更强的脑保护协同效应.
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急性低氧条件下复氧后大鼠脑HIF-1α蛋白的表达与人参皂甙Rd干预研究
目的 观察大鼠脑缺氧状态下缺氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白的表达及低氧状态下人参皂甙Rd干预对其影响.方法 将成年Wistar大鼠90只随机分为急性低氧对照组、低氧预处理干预组、人参皂甙Rd预处理干预组,每组按缺氧后不同时间点(复氧后0 h、4 h、9 h)再分为3亚组,每组10只大鼠.采用免疫组化法检测HIF-1α蛋白的表达.结果 在缺氧后复氧即刻,HIF-1α蛋白少量表达,主要存在于海马细胞;随着时间的推移,在复氧后4 h,HIF-1α表达逐渐达高峰,至9 h时HIF-1α表达又明显减少.低氧预处理干预组及人参皂甙Rd干预组的实验结果 发现HIF-1α表达较急性低氧对照组减少,与急性低氧对照组各时间点相比,差异均有显著性(P<0.05).两个干预组之间比较无统计学差异.结论 急性低氧可以促使HIF-1α在大鼠海马神经细胞的表达,具有时间依赖性,低氧预处理干预及人参皂甙Rd干预均可促使大鼠脑组织HIF-1α表达减少.
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人参皂甙Rd减轻H2O2介导的小胶质细胞氧化应激损伤
目的 探讨人参皂甙Rd能否对抗H2O2刺激小胶质细胞引起的氧化应激损伤及对小胶质细胞生物功能的影响. 方法 实验分为空白对照组、人参皂甙Rd组、H2O2组、人参皂甙Rd10 μmol/L+H2O2组、人参皂甙Rd 20μmol/L+H2O2组.空白对照组为小鼠小胶质细胞系N9细胞在CO2孵箱孵育24 h;人参皂甙Rd组应用20 μmol/L人参皂甙Rd处理N9细胞24 h;H2O2组应用700 μmol/L H2O2处理N9细胞24 h;人参皂甙Rd 10 μmol/L+H2O2组、人参皂甙Rd 20 μmol/L+H2O2组分别应用10 μmol/L、20 μmol/L人参皂甙Rd预处理N9细胞24 h,然后加入700 μmol/L H2O2作用24 h.处理结束后,应用MTT法检测各组细胞活力,应用2',7'-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)检测细胞内活性氧(ROS)水平,应用四甲基罗丹明乙酯(TMRE)检测线粒体膜电位(MMP),应用Western blotting检测脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达水平. 结果 与空白对照组、人参皂甙Rd组相比,H2O2组细胞存活率明显下降,ROS水平明显升高,MMP水平明显降低,差异均有统计学意义(P＜0 05);与空白对照组相比,人参皂甙Rd组BDNF蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与H2O2组相比,人参皂甙Rd 10μmol/L+ H2O2组、人参皂甙Rd 20μmol/L+ H2O2组细胞存活率明显升高,ROS水平明显下降,MMP水平明显增高,BDNF蛋白表达水平增高,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 人参皂甙Rd能够对抗H2O2介导的小胶质细胞氧化应激损伤,且能促进小胶质细胞分泌BDNF,对小胶质细胞有显著的保护作用.
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人参皂甙Rd对慢性颞叶癫(癎)大鼠空间学习记忆能力的影响
目的:研究人参皂甙Rd(GSRd)对氯化锂-匹罗卡品点燃慢性自发性颞叶癫(癎)(TLE)大鼠空间学习记忆能力及海马苔藓纤维发芽(MFS)的干预作用.方法:建立氯化锂-匹罗卡品点燃TLE大鼠模型,将24只造模成功的TLE大鼠随机分为单纯TLE组(生理盐水10 ml/kg腹腔注射)12只及加用GSRd干预组12只(GSRd 2 mg/kg腹腔注射),另选6只正常大鼠作为正常对照组.采用Morris水迷宫进行行为观察以了解各组大鼠空间学习记忆能力,取脑进行Timms染色作病理学观察以了解海马MFS情况.结果:与正常对照组相比,TLE组大鼠空间学习记忆功能下降,海马齿状回MFS明显增多(P<0.05);与TLE组相比,GSRd干预组可显著提高大鼠空间学习记忆能力及减少MFS(P<0.05).结论:GSRd可能通过抑制MFS减轻TLE大鼠的认知功能损害,有助于阻断慢性自发性TLE的形成和发展.
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人参皂甙Rd对大鼠脑缺血后丘脑远隔损害的保护作用研究
目的:探讨人参皂甙Rd(GS-Rd)对大鼠脑缺血后对丘脑远隔损害的保护作用.方法:成年SD雄性大鼠,线栓法制备大脑中动脉堵塞脑缺血模型(MCAO),随机分为假手术组,MCAO脑缺血组(1、3、5d),GS-Rd治疗组(5 mg/kg、10 mg/kg),每组五只.GS-Rd治疗组的大鼠在MCAO手术前30 min,腹腔注射5 mg/kg或10mg/kg GS-Rd,之后每天腹腔注射相应剂量.观察并记录每组大鼠的体重变化;收集大鼠丘脑组织,采用Miliplex试剂盒法检测炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-16的含量变化.结果:MCAO脑缺血组大鼠的体重较假手术组减轻(P＜0.05),而炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-16的含量增多(P＜0.05);与MCAO脑缺血组相比,给予10 mg/kg剂量GS-Rd治疗组的大鼠体重增加(P＜0.05),而且炎症因子TNF-α、IL-1p、IL-16的含量减少(P＜0.05);但5mg/kg剂量组较MCAO组体重无显著变化(P＞0.05).结论:GS-Rd(10 mg/kg)可能通过减少炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-16的含量,减轻大鼠脑缺血后对丘脑等远隔脑区的损害.
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人参皂甙Rd通过PI3K/AKT/mTOR/Hif-1α通路促进成年大鼠缺血性脑卒中后的血管发生
目的:探索人参皂甙Rd(Ginsenoside Rd,GSRd)对成年大鼠缺血性脑卒中血管发生的作用及可能机制.方法:80只成年雄性Sprague-Dawley大鼠,体重280 ～ 300 g,用线栓法建立局灶性短暂性大脑中动脉阻塞模型(focal transient middle cerebral artery occlusion,MCAO),Sham为手术但不阻塞.随机分为四组,每组20只:Sham+生理盐水(SA)、Sham+ GSRd、MCAO+ SA、MCAO+ GSRd.术后3d,通过RECA-1免疫荧光组织化学染色标记血管内皮细胞、并计算梗死灶周围微血管的密度和分支点.通过Western Blot检测梗死侧皮层血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),低氧诱导因子(hypoxia-inducibal factor 1 alpha,Hif-1α),磷酸化的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mammalian target of rapamycin,p-mTOR),磷酸化的蛋白激酶B(p-protein kinase B,p-AKT)的蛋白表达水平.结果:(1)免疫荧光组织化学染色结果显示:与MCAO+ SA对照组相比,MCAO+ GSRd治疗组的血管数(518.75±34.88/mm2 vs 391.40±17.66/mm2,P ＜0.001)和分支点(255.47±36.05 /mm2 vs 203.13±12.05/mm2,P＜0.01)显著增多.Sham+ SA和Sham+ GSRd的血管数(503.12 ±45.32/mm2vs 492.18 ±61.93/mm2)和分支点(270.31±35.94/mm2 vs 258.59 ±42.25/mm2)则无显著差异;(2) Western Blot结果显示:与对照组相比,GSRd显著增加VEGF,Hif-1 α,p-mTOR,p-AKT的蛋白表达水平(P＜0.05).(3)mTOR特异性阻断剂雷帕霉素抑制了GSRd对Hif-1 α(P ＜0.01)、VEGF(P＜0.05)的作用.结论:人参皂甙Rd可促进成年大鼠脑卒中后的血管发生,其对血管发生的作用可能是通过PI3 K/AKT/mTOR/Hif-1a通路所介导.
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人参皂甙Rd对成年大鼠脑梗死后新生血管生长的影响
目的:研究人参皂甙Rd (Ginsenoside Rd,GSRd)对成年大鼠脑梗死后新生血管生长的影响并探讨其可能机制.方法:96只成年雄性Sprague-Dawley大鼠,体质量280～ 300 g,采用线栓法阻断右侧大脑中动脉制作局灶性短暂性大脑中动脉栓塞模型(focal transient middle cerebral artery occlusion,MCAO).随机分为4组:sham、sham+ GSRd、MCAO对照组、MCAO+ GSRd治疗组,每组24只,术后7d和14 d使用RECA-1单克隆抗体免疫组化法标记血管内皮细胞,计算缺血梗死区周围微血管密度和分支点,Western Blot方法测定脑缺血皮层血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1 alpha,HIF-1 α)的蛋白表达水平.结果:(1)免疫组化结果显示:MCAO损伤7、14 d时,GSRd治疗组梗死区周围微血管密度分别为755.3±65.5/mm2和790.8±53.9/mm2,较单纯手术组(589.7±28.9/mm2和636.7±22.6/mm2)比较,均显著增多(P＜0.001);而GSRd治疗组周围微血管分支点在7、14 d时分别为341.7±40.4/mm2和363.5±39.7/mm2,亦比单纯手术组(197.2±26.6/mm2和276.0±42.9/mm2)显著增多(P＜0.001);(2)Western Blot结果显示:GSRd治疗组的VEGF及HIF-1α表达量显著高于单纯手术组和假手术组(P＜0.05).结论:人参皂甙Rd显著促进大鼠脑梗死区血管生长,其机制可能与增强脑梗死后VEGF、HIF-1α的表达相关.
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人参皂甙Rd在脑缺血亚急性期的脑保护效应
目的:探讨人参皂甙Rd(Ginsenoside Rd,GSRd)在脑缺血亚急性期的脑保护效应.方法:84只雄性SD大鼠随机分为四组,其中假手术+丙二醇(propylene glycol,PG)组和假手术+GSRd组各18只,脑缺血+PG组和脑缺血+ GSRd组各24只.线栓法建立局灶性短暂性大脑中动脉栓塞模型(focal transient middle cerebral artery occlusion,MCAO),栓塞后1d经腹腔注射GSRd和PG.在用药前、用药后3d和7d分别进行神经功能评分(neurological behavior scores,NBS),每次评分后取脑进行2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色,用ImageJ图像分析软件计算出梗死体积百分比,并且对缺血区或半暗带进行Iba 1染色,观察小胶质细胞的变化情况以确定GSRd对脑缺血后炎性反应的影响作用.结果:脑缺血后ld开始给予GSRd能改善MCAO模型大鼠的神经功能评分,减少脑梗死体积减弱小胶质细胞的活化,与PG组相比具有统计学差异(P＜0.05).结论:在脑缺血亚急性期给予GSRd能够起到脑保护作用.
