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还原应激诱导心肌特异性高表达Hsp27小鼠发生心肌肥厚
目的 探讨热休克蛋白27(Hsp27)高表达引起小鼠心肌肥厚的作用机制.方法 构建心肌中特异性高表达Hsp27的转基因(TG)小鼠和对照品系野生型(WT)小鼠.采用HE染色和异硫氰酸荧光素-麦胚凝集素(FITC-WGA)染色分别检测心脏体积和心肌面积,Western blot检测谷胱甘肽氧化物酶1(GPx1)蛋白表达,试剂盒测定活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)以及还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)水平.注射GPx1抑制剂马拉松(MS)后,观察TG小鼠心功能的变化,计算心脏重/体重(HW/BW)和心脏重/胫骨长(HW/TL)比值.结果 与WT小鼠相比,TG小鼠心脏体积和心肌面积增大,ROS和MDA水平降低(P＜0.01),GSH含量和GSH/GSSG比值以及GPx1蛋白表达均增加(P＜0.01).注射MS后,TG小鼠心脏的射血分数和短轴缩短率增加,而HW/BW和HW/TL比值降低.结论 Hsp27高表达引起的还原应激可能在小鼠心肌肥大发生、发展过程中发挥着重要作用.
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羰基还原酶1和热休克蛋白27可能是肝癌早期标志物
目的:以小肝癌为研究对象筛查早期肝癌的潜在标志物.方法:从10例乙肝相关小肝癌病人的癌组织和癌旁相对正常组织中提取蛋白质,采用双向凝胶电泳将蛋白质充分分离.胶图分析后,对肝癌相关蛋白质采用MALDI-TOF/TOF质谱仪鉴定.后采用实时聚合酶链反应(Real-time PCR)和免疫印迹(Western blotting)方法来评估羰基还原酶1(CBR1)、热休克蛋白27(HSP27)在肝组织中的表达.结果:在肝癌组织中发现了15个上调和3个下调蛋白.氧化还原酶和5种代谢相关酶中的3种在癌组织中升高,2种代谢相关酶在癌组织中降低.Real-time PCR和Western blotting证实了10例小肝癌中CBR1和HSP27的高表达.结论:CBR1和HSP27可能是早期肝癌的诊断标志物.
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热休克蛋白27在垂盆草提取物改善大鼠重症急性胰腺炎相关的肺损伤中的作用
目的 研究垂盆草提取物(Sedum sarmentosum Bunge extraction,SSBE)对大鼠重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)相关的急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的改善作用及其机制.方法 42只健康成年SD大鼠随机分成3组:假手术组(C)、胰腺炎组(SAP)、垂盆草提取物治疗组(SSBE),每组14只.逆行胰胆管注射5％牛磺胆酸钠(1 mL/kg)建立SAP模型,SSBE组在SAP模型基础上给予SSBE (100 mg/kg)治疗,C组和SAP组给予等量生理盐水.建模成功后12 h、24 h检测肺组织湿干比重、肺组织髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)活性、肺组织病理评分及肺组织磷酸化的热休克蛋白27 (phospho-heat shock protein 27,p-Hsp27)蛋白的表达.结果 在12 h及24 h时间点,SSBE组肺组织病理学评分(2.10±0.012,1.92±0.215)、肺组织湿干比重(2.80±0.12,2.83±0.15)、肺组织MPO活性(69.32±9.03,72.20±5.93)均明显低于SAP组肺组织病理学评分(3.49±0.212,2.85±0.210)、肺组织湿干比重(3.45±0.10,3.48±0.12)、肺组织MPO活性(87.51±4.03,89.33±3.75),具有统计学差异(P＜ 0.05).肺组织中p-Hsp27蛋白表达SSBE组低于SAP组(P＜ 0.05),两组均高于C组(P＜ 0.05).结论 垂盆草提取物对大鼠重症急性胰腺炎相关的肺损伤的保护作用可能与减少肺组织中性粒细胞浸润有关,其机制可能与下调肺组织内p-Hsp27的表达有关.
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顺铂对表达 Hsp 27基因细胞株的细胞毒影响的实验观察
[目的 ]观察顺铂对表达 Hsp27基因的细胞株 P1 Hsp27细胞毒作用的影响。 [方法 ]利用 MTT法检测顺铂对 Hsp27基因表达组和非基因表达组细胞增殖的影响。采用 Hoechst/Propidium Iodide (PI)双重染色，动态观察两种不同剂量的顺铂处理组细胞核在荧光显微镜下的形态变化。 [结果 ]顺铂对该细胞株具有剂量相关性细胞毒作用。除 500μ mol组 12小时外， Hsp27基因表达对顺铂的细胞毒作用无明显保护作用 (P>0.05)。在大剂量顺铂 (500μ mol)处理组， 12小时、 24小时后，大约有 40％和 66％的细胞死亡，而所有死亡细胞其细胞膜完整性丢失，细胞核呈 PI染色阳性；在小剂量顺铂 (25μ mol)处理组，细胞生长在早期稍受影响，少数细胞死亡，而死亡细胞的胞核也呈 PI染色阳性。 [结论 ]顺铂能诱导恶性转化的大鼠成纤维细胞坏死。在本实验条件下，诱导的 Hsp27对顺铂的细胞毒作用无明显保护作用。
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沉默热休克蛋白27基因增强大肠癌细胞对5-FU化疗敏感性
目的：探讨不同大肠癌细胞热休克蛋白（HSP27）蛋白表达水平及其与5-氟尿嘧啶（5-FU）化疗敏感性的关系，同时通过RNA干扰抑制HSP27基因的表达，初步探讨沉默该基因对5-FU抗肿瘤作用的影响。方法：Western blot法检测各大肠癌细胞中HSP27蛋白的表达水平，CCK-8法测定不同浓度5-FU对各细胞株的抑制率，分析各组细胞HSP27蛋白表达水平与IC50的关系。设计合成3对针对不同靶点的HSP27小干扰RNA，通过脂质体转染SW480细胞，激光共聚焦显微镜观察转染效率，Real-time PCR及Western blot法检测转染后HSP27 mRNA及蛋白表达水平。CCK-8法检测HSP27-siRNA对细胞的生长抑制作用及沉默HSP27基因细胞对5-FU化疗敏感性的变化。结果：各组细胞中HSP27的表达水平与5-FU的敏感性呈负相关性。Real-time PCR及Western blot法结果显示有两对靶向HSP27-siRNA能有效抑制HSP27 mRNA及蛋白水平的表达；CCK-8法检测结果显示HSP27-siRNA转染可增强SW480细胞对5-FU的敏感性，半数抑制浓度（IC50）明显下调。HSP27在大肠癌细胞中的表达水平与5-FU化疗药IC50值呈正相关。结论：靶向HSP27的siRNA能有效抑制大肠癌SW480细胞HSP27蛋白的表达，增强5-FU化疗药物的敏感性。
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姜黄素减轻沙土鼠海马CA1区脑缺血再灌注损伤与热休克蛋白表达变化的关系
目的:探讨姜黄素对缺血再灌注沙土鼠脑海马CA1区热休克蛋白(Hsp)基因表达的影响及意义.方法:采用沙土鼠双侧颈总动脉阻断缺血再灌注损伤模型.随机分为假手术组(SH)、脑缺血再灌注组(IR)、姜黄素组(CU)、溶剂对照组(SC);每组据再灌注时间点不同又分6 h、1 d、3 d、5 d及7 d 5个亚组,每组6只动物.在预定时间点行开阔法行为学检查,以TUNEL法行海马CA1区凋亡细胞检测,免疫组化ABC法测定Hsp70、Hsp27基因表达产物Hsp70及Hsp27蛋白在海马CA1区的动态变化.结果:姜黄素可显著减少沙土鼠探索活动及海马CA1区凋亡锥体细胞数量(与IR组相比,P＜0.01),进一步诱导Hsp70蛋白表达并抑制Hsp27蛋白的表达(与IR组相比,P＜0.01).结论:姜黄素对脑缺血再灌注损伤有保护作用,调控热休克基因hsp70和hsp27的表达可能是其作用机制之一.
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姜黄素对缺血-再灌注H9c2心肌细胞的保护作用及对热休克蛋白27表达的影响
目的 探讨姜黄素对缺血-再灌注损伤的H9c2心肌细胞热休克蛋白27(Hsp27)表达的影响及意义.方法 利用缺血台氏液对体外培养的H9c2心肌细胞模拟缺血-再灌注处理,同时随机分为缺血-再灌注、缺血-再灌注+姜黄素组和对照组,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,JC-1法检测各组线粒体膜电位情况,噻唑蓝法检测各组细胞存活率,Western blot法检测各组Hsp27蛋白表达水平.结果 姜黄素组干预后的早期、晚期和总细胞凋亡率[分别为(4.9±0.6)%、(5.8±1.3)%和(10.7±1.5)%]均较缺血-再灌注组[分别为(8.6±2.1)%、(19.3±2.4)%和(27.9±3.2)%]明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05或0.01).姜黄素组低电位细胞比例数[(38.2±2.4)%]较缺血-再灌注组[(59.3±7.5%)%]明显降低,而姜黄素组细胞的后续存活率和Hsp27蛋白表达水平[分别为(81.3±1.3)%和(109.1±9.3)%]均显著高于缺血-再灌注组[分别为(30.5±2.0)%]和(78.6±6.6)%],差异均有统计学意义(均P<0.01).结论 诱导Hsp27蛋白高表达可能是姜黄素减轻心肌细胞缺血-再灌注损伤的重要机制之一.
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阿奇霉素诱导的急性肝损伤小鼠肝组织HSP27表达的动态变化
目的 研究热休克蛋白27(H SP27)在阿奇霉素诱导的小鼠急性肝损伤肝组织中的动态变化.方法 以800mg.kg-1阿奇霉素腹腔注射建立小鼠急性肝损伤模型,设3h、6h、12h、24h、30h、36h、42h、48h和54h 9个观察时间点,每个时间点取10只小鼠,检测血清ALT和AST活性,采用免疫印迹法检测小鼠肝组织HSP27的表达变化.结果 在注射阿奇霉素后,小鼠血清AST和ALT活性随着时间的延长逐渐升高,于24h达到高峰,自54h逐渐恢复到对照组水平；在注射阿奇霉素后3h肝脏HSP27表达开始升高,6h达到高峰,自12h开始下降,并于30h恢复至对照组水平.结论 在阿奇霉素诱导的小鼠急性肝损伤过程中肝组织表达HSP27出现显著的动态变化,说明它可能参与了急性肝损伤的病理生理过程.
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Hsp27在脂多糖预处理减轻肝脏缺血再灌注损伤中的作用
目的 探讨热休克蛋白27(Hsp27)在脂多糖(LPS)减轻小鼠肝脏缺血再灌注(IR)损伤中的作用及其机制.方法 实验动物为雄性C57BL/6小鼠,将小鼠分为4组:对照假手术组,IR组,LPS预处理组和Hsp27干扰后LPS预处理组.小鼠肝脏IR损伤通过血清ALT和AST水平,肝脏组织病理情况和凋亡相关蛋白Bax的表达评价.小鼠肝脏内Hsp27的干扰通过门静脉内注射包装有干扰Hsp27表达的短发夹RNA的重组腺病毒100μl来靶向抑制Hsp27的表达.结果 1、与IR组相比,LPS预处理组小鼠ALT和AST水平明显下降(P＜0.05),肝组织损伤明显减轻.2、与IR组相比,LPS预处理组小鼠Hsp27蛋白显著增加,凋亡相关蛋白bax显著降低.3、LPS预处理肝脏IR后,肝脏Hsp27干扰小鼠ALT和AST水平较Hsp27未干扰组显著升高(P＜0.05),肝组织损伤明显加重,同时凋亡相关蛋白bax显著增加.结论 Hsp27在LPS预处理可减轻肝脏缺血再灌注损伤中具有重要作用,可能与Hsp27减少细胞Bax凋亡蛋白表达相关.
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热处理对STZ诱导鼠晶状体上皮细胞HSP27表达的影响
目的 研究在高温的应激条件下,热休克蛋白27(HSP27)在链尿佐菌素(STZ)诱导的大鼠糖尿病性白内障晶状体上皮细胞(LEC)中的表达情况.方法将60只SD大鼠随机分为3组:A组为空白对照组,B组为STZ组,C组为热处理STZ组.每周用裂隙灯观察各组大鼠晶状体的变化,于试验8周后分别摘取眼球,取出晶状体,采用免疫组化技术检测HSP27在各组LEC中的表达情况.结果 A组晶状体一直保持透明,B组混浊程度高于C组,差异有统计学意义(P＜0.05).B组HSP27的表达高于A组,差异有统计学意义(P＜0.05),C组HSP27的表达高于B组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论热处理能促进晶状体上皮HSP27的表达,从而可能对晶状体上皮具有保护作用.
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大鼠HSP27基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定
目的 构建大鼠的热休克蛋白27 (heat shock protein 27, HSP27)RNA干扰慢病毒载体.方法 设计并合成3对互补针对大鼠HSP27 mRNA的oligoDNA片段.磷酸化和退火后,分别克隆入pSUPER-basic质粒载体,获重组的pSUPER-HSP27-oligoDNA.将其中表达shRNA的结构酶切插入慢病毒转移质粒pNL-IRES2-EGFP,产生pNL-HSP27-IRES2-EGFP,在293T细胞中与VSVG、pHelper包装产生慢病毒.48 h后收集上清液,离心过滤后进行病毒滴度测定.用构建正确的慢病毒质粒载体感染血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs),检测干扰效果.结果 酶切和测序两种方法结果证明3种质粒载体的插入序列完全正确,慢病毒载体构建成功并获得相应的慢病毒,病毒悬液的滴度为3.12×109 fu·L-1.重组慢病毒质粒pNL-HSP27-IRES2-EGFP-1的RNA干扰效率高,为0.771.结果 成功构建靶向大鼠HSP27基因RNAi慢病毒载体.为进一步研究HSP27功能和用慢病毒进行基因治疗奠定基础.
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扇贝多肽在中波紫外线诱导的HaCaT细胞凋亡中对p38MAPK-HSP27通路的影响
目的 从p38MAPK-HSP27通路方面研究扇贝多肽(polypeptide from Chlamys farreri,PCF)抑制中波紫外线(UVB)诱导的HaCaT细胞凋亡的作用机制.方法 复制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡模型;实验设计为6组:对照组、UVB模型组、UVB+5.69 mmol·L-1维生素C阳性对照组、UVB+5.69 mmol·L-1 PCF组、UVB+2.84 mmol·L-1 PCF组、UVB+1.42 mmol·L-1 PCF组.PCF预处理30 min,荧光染色(Hoechst 33258)结合琼脂糖凝胶电泳分析PCF在p38抑制剂(SB203580)存在和不存在两种条件下对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡的影响;蛋白质印迹法检测p38 MAPK、HSP27的表达及磷酸化水平的改变,同时分析HSP27在细胞内定位的改变.结果 PCF可明显抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡;PCF在1.42～5.69 mmol·L-1范围内,可剂量依赖性抑制p38 MAPK和HSP27的磷酸化水平,并抑制HSP27由胞质向胞核中的移位.结论 PCF通过阻断p38 MAPK-HSP27通路来抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机制与抑制p38 MAPK的活化从而阻止HSP27的磷酸化及其细胞内移位有关.
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雌激素介导的HSP27在动脉粥样硬化中作用的研究进展
热休克蛋白27(HSP27)是人体内一种在应激状态下大量表达的蛋白,其对机体一系列生理、病理过程有着重要作用。近年研究表明,雌激素通过多种途径调控HSP27的表达,对动脉起到了完美的“三重保护”作用。血管内皮损伤早期,雌激素通过PI3K/Akt信号通路诱导HSP27磷酸化,磷酸化的HSP27则通过抗氧化、调控凋亡通路、抑制细胞色素C( cyt-C)等作用,抵抗血管内皮细胞( VECs)凋亡；泡沫细胞形成期,雌激素通过刺激雌激素受体β( ERβ)诱导巨噬细胞表达和释放HSP27,后者则与巨噬细胞表面的清道夫受体A ( SR-A)结合,阻止低密度脂蛋白( LDL)的摄取和促炎因子的释放；血管平滑肌细胞( VSMCs)增殖、迁移期,雌激素诱导雌激素受体α(ERα)与蛋白磷酸酶2(PP2A)形成复合物,增强PP2A的活性,引起下游 HSP27脱磷酸,抑制 VSMCs 增殖、迁移。综上,雌激素抗动脉粥样硬化( atherosclerosis,AS)作用与HSP27密切相关,而雌激素替代疗法( MHT)防治绝经女性心血管疾病的副作用不容小觑,故借鉴雌激素的调控机制,研发药物调控HSP27对防治AS有着重要意义。
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吡格列酮对脂多糖引起的大鼠海马有丝分裂原激活蛋白激酶p38信号传导通路的影响
吡格列酮 (pioglitazone,Pio)能抑制脂多糖诱导的原代培养的星形胶质细胞炎症因子的释放[1],对抗谷氨酸诱导的神经细胞损伤[2] ,也有研究显示Pio通过抑制p38MAPK信号传导通路抑制LPS诱导的小胶质细胞炎症反应[3].但关于Pio对大鼠脑内炎症反应的抑制作用是否与p38MAPK信号传导通路有关目前尚未见报道,本研究通过大鼠脑室内注射LPS建立炎症反应动物模型,应用Western blot方法研究Pio对LPS引起的p38MAPK信号传导通路的影响.
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不同病变肝组织中热休克蛋白27的表达情况
目的探讨134例不同病变肝组织中热休克蛋白27（ HSP27）的表达情况及与HBsAg的相关性，探寻能否运用HSP27提高肝细胞癌（ HCC）的早期诊断率。方法收集昆明医科大学病理教研室和昆明医科大学第二附属医院病理科2004～2014年存档蜡块共134份，应用免疫组化SP法检测HSP27和HBsAg在不同肝组织中的表达情况。结果①120份不同病变肝组织中HSP27在HBsAg阳性表达中的数值为3.89±3.16，在HBsAg阴性表达中的数值为2.38±2.56，两者差异无统计学意义（ t＝－1.200，P＝0.241）；②HSP27的表达水平从高到低为HCC＞癌周肝硬化＞肝硬化＞慢性肝炎和正常肝组织，差异有统计学意义（ P＜0.05）。结论不同病变肝组织中HSP27的表达水平与乙肝病毒感染无相关；HSP27在HCC中高表达，可作为HCC的早期诊断标志物。
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热休克蛋白27在食管上皮癌变过程中的表达及其意义
目的 了解热休克蛋白27(HSP27)在食管鳞癌、癌旁组织和切缘正常食管黏膜中的表达,分析其表达差异,并探讨其与食管癌发生发展的关系.方法 应用免疫组化Envision二步法,观察HSP27在食管鳞癌、癌旁组织和切缘正常食管黏膜中的表达,并比较其间是否存在差异.结果 食管鳞癌、癌旁组织和切缘正常食管黏膜中HSP27的阳性表达率分别为73.3％、53.5％和25.3％；HSP27在食管鳞癌中的阳性表达率高于在癌旁组织(P＜0.05),在癌旁组织中的阳性表达率高于在切缘正常食管黏膜(P ＜0.001).随着食管鳞癌高、中、低分化程度的不同,HSP27的阳性表达率逐渐降低,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 HSP27可能与食管鳞癌的发生发展有关.
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超速起搏预适应的延迟保护与热休克蛋白27的表达
目的:观察超速心室起搏( VOP)预适应延迟保护阶段热休克蛋白27 (HSP27)的表达水平.方法:新西兰兔24只,随机分为3组,缺血再灌注(I/R)空白对照组,起搏组,起搏+放线菌素D组.制作I/R和超速起搏预适应的动物模型,检测肌酸激酶(CK)和肌酸激酶-同工酶(CK-MB)水平的变化,动态描记再灌注时心电图,以免疫组织化染色法检测HSP27抗原表达水平.结果:I/R后起搏组心肌酶的水平均明显低于I/R空白对照组和起搏+放线菌素D组(P＜0.01)；I/R空白对照组在再灌注过程中共有5只(62.5％)发生心律失常,起搏+放线菌素D组有4只(50.0％),而起搏组无心律失常发生.起搏组心律失常发生率明显低于I/R空白对照组和起搏+放线菌素D组(P＜0.05).起搏组HSP27阳性表达++者(37.5％)明显高于I/R空白对照组和起搏+放线菌素D组(0,12.5％,P＜0.05).结论:心室超速起搏预适应有心脏保护作用,其机制可能与热休克蛋白27表达增加密切相关.
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热休克蛋白27在脊髓缺血再灌注中表达的实验研究
目的 探讨热休克蛋白27在脊髓缺血再灌注机体组织中的保护性机制.方法 利用RT-PCR及免疫组化方法 检测各实验组HSP27 mRNA及HSP27蛋白表达情况.结果 缺血再灌注4 h与8 h组表达高与其余缺血再灌注组比较差异有统计学意义,两组之间无统计学意义.结论 脊髓缺血再灌注后HSP27 mRNA与HSP27蛋白表达均随再灌注的时间延长而升高,至4 h与8 h表达量达高峰,后随着再灌注时间的推移而降低.
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白血病多药耐药相关蛋白质类研究进展
多药耐药(multidrug resistance,MDR)常见的机制是凋亡耐受和过表达某些能将抗癌药物从细胞内泵出的膜蛋白.过表达ABC转运子(ATP-binding cassette transports)转运子等膜蛋白则导致泵耐药(pump resistance),细胞凋亡耐受即所谓的"不依赖泵的耐药(nonpump resistance)"[1].此外在细胞内使药物与其作用靶位保持一定距离,从而使药物不能被作用靶位利用也是耐药产生的机制[2].本文就此三方面将近5年新证明的多药耐药相关蛋白类进行分别概述.
关键词： 白血病 多药耐药相关蛋白质类 不依赖泵耐药 泵耐药 热休克蛋白27 -
热休克蛋白27在胃癌中的表达及意义
目的 研究探讨热休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27)在胃癌中的表达情况.方法 选取经活检证实的慢性非萎缩性胃炎、胃溃疡、慢性萎缩性胃炎、胃癌病例共80例,用免疫组化法检测其HSP27的表达情况,分析HSP27在胃癌中的表达及意义.结果 HSP27在胃癌中的表达强,阳性率为85%(17/20),明显高于在慢性非萎缩性胃炎、胃溃疡、慢性萎缩性胃炎中的表达,P值均<0.05,具有统计学差异;HSP27在胃癌中的表达率与肿瘤的分化程度有关.结论 HSP27的表达与胃癌的发生具有密切相关性.
