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邻苯二甲酸二异丁酯对小鼠海马cAMP/PKA-CREB信号转导通路的影响
目的 观察邻苯二甲酸二异丁酯(DiBP)对小鼠海马cAMP/PKA-CREB信号通路的影响.方法 30只雄性昆明小鼠适应性喂养3天后,按体重随机分为一个对照组和4个实验组(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ).对照组小鼠灌胃给予玉米油溶剂；实验组小鼠灌胃给予含DiBP的玉米油溶液,剂量分别为:50、250、500、1000mg/kg BW.实验周期8周,普通饲料喂饲,自由饮水.实验结束后冰浴条件下取海马,采用酶联免疫法测定环磷酸腺苷(cAMP)含量；蛋白印迹法测定磷酸化蛋白激酶A(P-PKA C)、磷酸化环磷腺苷反应元件结合蛋白(P-CREB)表达水平；实时荧光定量PCR法测定CREB、脑源性神经营养因子(BDNF)、c-fos和c-jun的mRNA表达水平.结果 第Ⅳ组海马组织中cAMP含量和P-PKA C蛋白表达水平明显低于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05)；各剂量组P-CREB蛋白表达量均低于对照组,其中第Ⅱ组与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05),同时CREB、BDNF、c-fos和c-jun的mRNA表达水平与对照组相比都呈不同程度的下调.结论 小鼠海马cAMP/PKA-CREB信号通路中多种信号分子的表达异常,可能是DiBP导致小鼠认知损伤的重要机制之一.
关键词： 邻苯二甲酸二异丁酯 海马 环磷腺苷反应元件结合蛋白 -
抑郁症模型大鼠海马区磷酸化环磷腺苷反应元件结合蛋白1表达水平及神经元和突触超微结构的研究
目的 探讨抑郁症模型大鼠海马区磷酸化环磷腺苷反应元件结合蛋白1(phospho cAMP response element-binding protein 1,p-CREB1)的表达变化对相应神经元、突触超微结构的影响及文拉法辛对p-CREB1表达及神经元、突触超微结构的作用.方法 采用随机数字表法将54只大鼠随机分为正常组(n=12)、抑郁症模型对照组(简称对照组,n=14)、抑郁症模型+生理盐水组(简称生理盐水组,n =14)和抑郁症模型+文拉法辛药物干预组(简称药物干预组,n=14).通过蔗糖水消耗实验、旷场实验检测动物的行为学表现,Morris水迷宫检测学习记忆能力.免疫组织化学检测海马区p-CREB1蛋白表达水平,RT-PCR检测CREB1 mRNA表达水平,透射电子显微镜观察海马区神经元、突触超微结构.p-CREB1阳性细胞数目与Morris水迷宫、突触形态学参数进行相关分析.结果 (1)行为学结果:对照组和生理盐水组蔗糖水消耗分别为(7.4±1.0)、(7.5±1.0) ml/100 g,低于正常组[(9.6±0.3) ml/100g]及药物干预组[(9.4±0.8)ml/100 g;F=17.851,P＜0.01)];Morris水迷宫定位航行实验逃避潜伏期分别为(61.1±10.5)、(59.0±10.6)s,大于正常组[(29.8±10.1)s]及药物干预组[(35.0±8.5)s;F =30.559,P＜0.01].(2)免疫组织化学结果:对照组和生理盐水组大鼠海马p-CREB1阳性细胞数分别为21.07±5.99和24.57±6.97,低于正常组(29.70 ±6.21)及药物干预组(41.50±11.95,F=16.497,P＜0.01).(3)RT-PCR结果:对照组和生理盐水组大鼠海马CREB1 mRNA吸光度比值分别为0.58±0.47和0.45±0.24,低于正常组(1.03±0.89)及药物干预组(1.10±0.45;F=6.669,P＜0.01).(4)电镜结果:抑郁症模型大鼠海马神经元和突触超微结构存在病理性改变,药物干预可使其改善.(5) p-CREB1阳性细胞数目与Morris水迷宫、突触形态学参数相关.结论 p-CREB1表达与神经元、突触可塑性有关,文拉法辛可能是通过影响p-CREB1表达和神经元、突触可塑性来发挥治疗作用.
关键词： 抑郁症 环磷腺苷反应元件结合蛋白 神经元可塑性 海马 -
曲古抑菌素A对抑郁模型大鼠行为及脑源性神经营养因子表达的作用研究
目的 探讨曲古抑菌素A对慢性不可预见性应激(CUMS)模型大鼠抑郁样行为及脑源性神经营养因子(BDNF)表达的调节作用.方法 将40只成年雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、氟西汀组和曲古抑菌素A组.采用不同应激因子交替刺激加孤养复制CUMS模型;采用体重增长率、糖水偏嗜试验和旷场试验评估大鼠的行为学变化;采用Western blot测定大鼠海马组织中BDNF和磷酸化环磷腺苷反应元件结合蛋白(p-CREB)的表达水平.结果 造模21 d后,模型组大鼠体重增长率、糖水偏嗜度、水平和垂直运动评分较正常对照组显著降低(P＜0.05);氟西汀组和曲古抑菌素A组大鼠体重增长率、糖水偏嗜度、垂直和水平运动评分均较模型组显著增加(P＜0.05).Western blot结果显示,模型组大鼠海马区BDNF和p-CREB表达水平显著低于正常对照组(P＜0.05),而氟西汀组和曲古抑菌素A组大鼠海马区BDNF和p-CREB表达水平显著高于模型组(P＜0.05).结论 曲古抑菌素A可有效改善抑郁模型大鼠的抑郁样行为,其抗抑郁作用可能与调节CREB-BDNF通路促进BDNF表达有关.
关键词： 抑郁症 曲古抑菌素A 氟西汀 脑源性神经营养因子 环磷腺苷反应元件结合蛋白 -
羧甲基壳聚糖对体外培养许旺细胞环磷腺苷/蛋白激酶A信号通路的影响
背景：已有研究证实羧甲基壳聚糖对许旺细胞增殖、分泌具有促进作用，但其对许旺细胞内环磷腺苷介导蛋白激酶A信号通路的影响仍需要进一步研究。目的：观察羧甲基壳聚糖对大鼠许旺细胞内环磷腺苷/蛋白激酶A信号通路的影响。方法：取第2代新生大鼠许旺细胞，以1×109 L-1的细胞浓度接种于6孔板，分4组培养，空白对照组加入PBS，实验组分别加入50，100，200 mg/L的羧甲基壳聚糖溶液培养。培养24 h后，检测许旺细胞内环磷腺苷浓度、蛋白激酶A活性及环磷腺苷反应元件结合蛋白mRNA的表达。结果与结论：与空白对照组比较，羧甲基壳聚糖呈剂量依赖性提高许旺细胞内环磷腺苷浓度(P<0.05)，呈剂量依赖性增强许旺细胞内蛋白激酶A活性(P<0.05)，呈剂量依赖性提高许旺细胞内环磷腺苷反应元件结合蛋白mRNA的表达(P<0.05)。表明羧甲基壳聚糖可增加许旺细胞内环磷腺苷浓度、促进蛋白激酶A活性，从而激活环磷腺苷/蛋白激酶A信号通路。
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吗啡耐受大鼠海马结构M1受体、c-fos和CREB表达改变
目的 观察大鼠海马结构在吗啡耐受中的作用.方法 SD大鼠20只随机分为两组:①对照组:背部皮下注射与耐受组等量的生理盐水;②耐受组:背部皮下一日三次逐日递增的注射盐酸吗啡,连续6天后,停止注射,处死全部大鼠,用免疫组化染色方法观察各组海马结构内的M1受体、环磷腺苷反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)和c-fos蛋白表达.结果 ①在光镜下,HE染色显示吗啡耐受组与对照组相比未发现海马结构形态学有异常改变.②耐受组与对照组相比,组织化学染色发现M1受体表达减少,而c-fos和p-CREB的蛋白表达增加.结论 海马结构可能参与了吗啡耐受,这可能与海马结构的M1受体表达减少有关,也与转录因子c-fos和p-CREB激活表达有关.
关键词： 环磷腺苷反应元件结合蛋白 海马结构 吗啡耐受 免疫组化 -
CREB在抑郁症发病和治疗作用中的研究进展
很多研究中显示,转录因子环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)与抑郁症的发病机制和治疗相关.CREB是多种抗抑郁药作用过程的交汇点.长期服用抗抑郁药可以提升脑内海马CREB水平及活性,在动物模型中海马部位CREB水平和活性升高可产生抗抑郁药的效应.而在其他某些脑区内提升CREB水平则会导致类抑郁行为.该文就CREB与抑郁症发病机制和抗抑郁药起效机制的相关研究进行综述.
关键词： 环磷腺苷反应元件结合蛋白 抑郁症 抗抑郁药 -
异丙酚促进成年神经干细胞增殖并上调环磷腺苷反应元件结合蛋白的磷酸化水平
目的 观察异丙酚对体外培养的大鼠成年神经干细胞是否具有生长调控作用及可能的分子机制.方法 大鼠海马成年神经干细胞接种贴壁后,模拟临床应用浓度加入异丙酚至终浓度10、25、50、100 mg/L,溶剂(脂肪乳)为对照,培养24 h.用DAPI染核,检测细胞数目变化.用免疫印记法检测细胞环磷腺苷反应元件结合蛋白(cAMP response element bindingprotein,CREB)磷酸化水平变化.结果 异丙酚(＞10mg/L)处理组比对照组细胞数显著升高,且呈剂量依赖性.异丙酚处理前后,细胞均表达CREB和磷酸化CREB,但处理组比对照组的CREB磷酸化水平显著升高.结论 异丙酚可能是通过上调细胞中CREB的磷酸化水平从而促进大鼠海马成年神经干细胞的增殖能力.
关键词： 异丙酚 成年神经干细胞 增殖 环磷腺苷反应元件结合蛋白 磷酸化 -
电磁辐射对大鼠海马神经元钙调蛋白激酶Ⅱ和环磷腺苷反应元件结合蛋白表达的影响
目的 探讨2000 μW/cm2电磁辐射后钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)和环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)在元代培养海马神经元中表达的变化和意义.方法 体外培养新生大鼠大脑海马神经元,实验分为空白对照组,假辐射组和1 h/d、2 h/d、3 h/d辐射组.辐射组接受功率密度为2000 μW/cm2的近场辐射,连续辐射5d.采用Western-Blot法检测海马神经元CaMKⅡ和CREB蛋白的表达,RT-PCR法检测CaMKⅡ和CREB mRNA表达的变化.结果 电磁辐射后,1h/d、2h/d、3h/d辐射组大鼠海马神经元CaMKⅡ蛋白[分别为(0.59 ±0.05)、(0.44±0.08)、(0.18±0.04)]及其mRNA[分别为(0.41±0.08)、(0.34±0.04)、(0.24 ±0.02)]表达水平较空白对照组[(0.78±0.07)、(0.62±0.12)]明显降低(P＜0.05)；CREB蛋白[分别为(0.49±0.05)、(0.40±0.04)、(0.17 ±0.03)]及其mRNA[分别为(0.68±0.11)、(0.53±0.08)、(0.30 ±0.03)]表达水平较空白对照组[(0.69±0.10)、(0.80 ±0.12)]明显降低(P＜0.05).结论 海马神经元CaMKⅡ和CREB的表达变化可能参与了电磁辐射致大鼠学习记忆功能改变的病理生理过程.
关键词： 电磁辐射 海马神经元 钙调蛋白激酶Ⅱ 环磷腺苷反应元件结合蛋白 -
大鼠面神经缺血后面神经核磷酸化CREB水平的变化
目的 探讨大鼠面神经缺血损伤后面神经元内环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)磷酸化水平的变化及其与氧化应激的关系.方法 55只成年雄性SD大鼠随机分为正常组(5只)、假手术组(25只)和面神经缺血组(25只),后两组又根据时间分为术后1、3、7、14、21d5个亚组,每亚组5只大鼠.显微手术阻断大鼠鼓室段岩动脉建立大鼠面神经缺血损伤模型.采用分光光度法测定面神经核丙二醛(MDA)含量;利用免疫印迹法测定面神经元内锰超氧化物歧化酶(MnSOD)和磷酸化CREB(p-CREB)表达水平.结果 面神经缺血后,面神经核MDA含量先增高,7d达峰值,随后降低;而面神经元MnSOD和p-CREB表达水平先降低,7d达低值,随后逐渐增高.面神经缺血组每个时间点MDA水平、MnSOD和p-CREB表达水平均与正常组和假手术组差异显著(P＜0.05),而假手术组与正常组之间无显著差异(P＞0.05).结论 面神经缺血损伤后造成面神经元氧化应激损伤,导致p-CREB水平先降低后增高,p-CREB水平的增高可降低ROS对面神经元的氧化损伤能力.
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丰富环境对缺氧缺血性脑损伤幼鼠海马区pCREB及凋亡调控基因表达的影响
目的 探讨丰富环境干预对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)幼鼠空间记忆能力及海马区磷酸化环磷腺苷反应元件结合蛋白(pCREB)、凋亡调控基因(Bcl-2、Bax)表达的影响. 方法 参考相关文献构建标准环境及丰富环境这2种饲养环境.将7d龄Wistar大鼠32只按随机数字表法分为假手术组(n=10)、标准环境组(n=11)、丰富环境组(n=11),其中标准环境组及丰富环境组采用改良Rice-Vannucci法制备HIBD模型,假手术组及标准环境组全天置于标准环境饲养,丰富环境组全天置于丰富环境饲养.干预21d后,采用Morris水迷宫定位航行实验检测各组幼鼠寻找隐藏平台的逃避潜伏期,采用Western blotting检测海马区pCREB蛋白表达,采用免疫组化染色检测海马区Bcl-2、Bax表达水平. 结果 (1)在训练第4、5天,丰富环境组大鼠逃避潜伏期较标准环境组显著缩短,差异均有统计学意义(P＜0.05).(2)与标准环境组相比,丰富环境组病灶侧海马区pCREB蛋白表达(0.435±0.121 vs 0.756±0.101)、Bcl-2表达水平(0.103±0.028vs 0.165±0.017)均显著升高,而Bax表达水平(0.402±0.028 vs 0.325±0.019)却显著降低,差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 HIBD后给予丰富环境干预可显著提高HIBD大鼠的空间记忆能力,CREB-pCREB-凋亡调控基因(Bcl-2、Bax)途径可能是丰富环境干预有效性的内在机制之一.
关键词： 缺氧缺血性脑损伤 丰富环境 环磷腺苷反应元件结合蛋白 Bcl-2 Bax -
七氟烷促进成年大鼠海马神经干细胞增殖
目的 观察七氟烷对体外培养的成年大鼠海马神经干细胞(NSCs)是否具有增殖作用及可能的分子机制. 方法 常规培养成年NSCs并应用免疫荧光染色巢蛋白进行鉴定.将培养2h的NSCs分别放入含不同浓度(1.3%、1.9%、2.7%、3.3%)七氟烷的密闭容器中,作用2 h后按常规方法 继续培养24h.应用DAPI染色检测NSCs数目的 变化.用Western blot法检测细胞环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)、磷酸化CREB(pCREB)水平的变化. 结果与空白对照组比较,1.9%、2.7%、3.3%七氟烷组细胞数升高,而且浓度越大,作用越明显,差异均有统计学意义(P<0.05);Western blot检测发现空白对照组和1.3%、1.9%七氟烷组细胞均表达CREB和pCREB,但1.9%七氟烷组细胞pCREB/CREB水平较高,与空白对照组和1.3%七氟烷组比较差异有统计学意义(P<0.05). 结论 七氟烷可促进NSCs的增殖能力,其机制可能与提高了细胞中CREB的磷酸化水平有关.
关键词： 七氟烷 神经干细胞 细胞增殖 环磷腺苷反应元件结合蛋白 磷酸化 -
大鼠脑创伤对学习记忆及海马环磷腺苷反应元件结合蛋白的影响
目的 观察脑创伤早期的脑含水量、环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)及其磷酸化水平,探讨脑创伤和磷酸化CREB(p-CREB)水平的改变对学习记忆的影响.方法 将54只成年雄性Wistar大鼠,按随机数字表法分为正常组、对照组、创伤性脑损伤(TBI)组,每组18只.采用改良的Feeney法和前期实验参数建立TBI大鼠模型,Western blot观察创伤后12h脑海马组织CREB和p-CREB表达、干湿质量法测定脑组织含水量和Morris水迷宫实验.结果 大鼠TBI后12 h脑组织含水量,与正常组和对照组相比,TBI组升高明显(P＜0.01).与正常组和对照组比较,TBI组大鼠TBI后12h海马CREB和p-CREB蛋白的表达量降低明显;潜伏期增加,2 min内寻求正确次数减少,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 TBI后脑水肿明显,CREB和p-CREB水平降低,可能是使认知和学习记忆功能受损的原因之一.
关键词： 创伤性脑损伤 Morris水迷宫 环磷腺苷反应元件结合蛋白 -
参归仁合剂对产后抑郁大鼠雌激素和额叶p-CREB及p-ERK1/2的影响
目的 探讨补虚化淤方药参归仁合剂对产后抑郁大鼠模型雌激素(E2)的水平、额叶环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)蛋白磷酸化水平表达的影响.方法 将25只SD大鼠,随机分为正常对照组、模型组、参归仁高、低剂量组(14.0、3.5 g·kg-1)、左洛复(盐酸舍曲林)对照组(4.5 mg·kg-1).采用灌胃给药方式,连续30 d.分别取血、额叶组织,采用放射免疫法检测大鼠的E2水平,采用免疫印迹法检测额叶p-CREB、p-ERK1/2的表达水平.结果 与正常组比较,模型组大鼠血清中E2、p-CREB、p-ERK1/2表达的水平明显降低;与模型组比较,参归仁高、低剂量组和左洛复组的额叶p-CREB的表达量明显升高,参归仁低剂量组和左洛复组的额叶p-ERK1/2表达量升高.结论 参归仁合剂能够明显提高PPD大鼠的E2水平,促进额叶p-CREB、p-ERK1/2的表达上调.
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CREB和NMDA受体在致痫大鼠学习记忆功能改变中的变化及意义
目的 探讨核转录因子环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)和兴奋性氨基酸NMDA受体亚型NR1在癫痫后学习记忆功能改变中的变化及意义.方法 制备戊四氮点燃大鼠癫痫持续状态(Status epilepticus,SE)和慢性癫痫(chronic epilepsy,CEP)模型,采用交替电刺激Y迷宫试验动态观察大鼠癫痫后学习记忆功能变化.RT-PCR方法检测大鼠海马组织CREB和NR1 mRNA的表达,免疫组化染色观察大鼠海马磷酸化的CREB蛋白水平表达变化.结果 SE大鼠致痫成功后24 h交替电刺激Y迷宫试验错误次数增多(P＜0.05),30 d恢复正常.CEP大鼠24 h和30 d错误次数均有所增加(P＜0.05).同时伴有海马组织NR1 mRNA和CREB mRNA表达的下调(P＜0.05)及磷酸化CREB蛋白水平表达量的下降(P＜0.05).结论 海马组织NMDA受体和CREB的表达变化可能参与了癫痫大鼠学习记忆功能改变的病理生理过程.
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“通督治郁”针法对脑卒中后抑郁模型大鼠体质量、行为学及海马部位环磷腺苷反应元件结合蛋白水平的影响
目的 观察“通督治郁”针法对脑卒中后抑郁(PSD)模型大鼠的体质量、行为学及海马部位环磷腺苷反应元件结合蛋白(CREB)水平的影响.方法 将SD大鼠随机分为正常组、模型组、治疗组,除正常组外,模型组和治疗组大鼠采用大脑中动脉线栓阻塞法联合慢性不可预知性温和应激处理方法制备PSD模型.治疗组采用“通督治郁”针法治疗.记录不同阶段大鼠体质量,通过敞箱实验观察大鼠的行为学变化,通过免疫组化法测定海马部位CREB的表达.结果 PSD大鼠模型制备成功后,模型组大鼠体质量明显减轻,敞箱实验水平运动和垂直运动明显减少,海马部位CREB表达明显降低(P＜0.01);通过“通督治郁”针法干预4周后,与模型组比较,治疗组大鼠体质量明显增加,敞箱实验水平运动和垂直运动显著增加,海马部位CREB表达明显升高(P＜0.05或P＜0.01).结论 “通督治郁”针法可促使PSD模型大鼠体质量的增加,提高大鼠行为学评分及海马部位CREB的表达水平.
