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葡萄酒中6种甜味剂的dSPE-UFLC-MS/MS快速确证检测
目的 建立一种简便、快速的葡萄酒中安赛蜜、糖精、甜蜜素、阿斯巴甜、甜菊糖苷和纽甜的分散固相萃取-液相色谱/串联质谱(dSPE-UFLC-MS/MS)定性定量分析方法.方法 样品以新型磁性纳米材料为吸附剂进行分散固相萃取,利用UFLC-ESI-MS/MS进行分离和串联质谱测定,采用保留时间结合三离子定性原则进行确证.结果 磁性纳米材料是一种高效的分散固相萃取吸附剂,可有效去除葡萄酒中的干扰基质;电喷雾电离可获得稳定可靠的二级质谱裂解碎片离子,安赛蜜、糖精、甜蜜素、阿斯巴甜、甜菊糖苷和纽甜的定量离子对分别为m/z 162→82、m/z 182→42、m/z 178→80、m/z 293→200、m/z 803→641、m/z 377→200,6种甜味剂的精密度范围为1.1％ ～4.0％,回收率范围为83.4％ ～ 104.0％,定量检出限范围为0.1～5.0 μg/L.结论 建立的方法快速、灵敏、准确,适用于葡萄酒中安赛蜜、糖精、甜蜜素、阿斯巴甜、甜菊糖苷和纽甜的含量确证分析.
关键词： 甜味剂 超快速液相色谱-串联质谱法 分散固相萃取 葡萄酒 磁性纳米材料 -
不同磁性纳米材料对血管内皮细胞作用的对比研究
目的 研究3种不同磁性纳米颗粒对体外培养的血管内皮细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和细胞间连接的影响,探讨二者之间的关联性.方法 将原代人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)随机分为对照组和不同磁性纳米颗粒暴露组.利用动态光散射(dynamic light scattering,DLS)对纳米颗粒的粒径和电势进行表征;采用细胞计数试剂盒(cell counting Kit-8,CCK-8)法测定细胞活性;通过二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(2′,7′-dichlorofluorescin diacetate,DCFH-DA)荧光探针标记和流式细胞术检测细胞中ROS水平;利用普鲁士蓝染色和透射电镜方法观察内皮细胞对磁性纳米颗粒的摄取.对细胞表面血管内皮钙黏蛋白(vascular endothelial cadherin,VE-cadherin)进行免疫荧光标记,在激光共聚焦显微镜下观察细胞间连接,并通过Western blot检测VE-cadherin表达水平.结果 磁性纳米颗粒能诱导内皮细胞内ROS水平上升,降低VE-cadherin表达水平,细胞间缝隙增大.抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸处理可使ROS水平下降并减少细胞缝隙.由于组分、表面修饰、尺寸等因素不同,磁性纳米颗粒对内皮细胞活性、ROS水平及VE-cadherin产生不同程度的影响.结论 不同磁性纳米颗粒对内皮细胞活性氧和细胞间连接的影响不同;在实验所采用的低剂量暴露下可影响内皮细胞连接的完整性.
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磁性纳米颗粒在细胞移植中的应用
纳米技术是指在1～100 nm范围内对物质和材料进行研究处理的技术.目前,常用的磁性纳米材料如三氧化二铁(Fe2O3)、四氧化三铁(Fe3O4)等具有较好的磁响应性.磁性纳米材料经过包衣等处理后可作为超顺磁性氧化铁纳米材料用于磁共振成像,在疾病诊断上有重要用途[1].现综述磁性纳米颗粒的特点性状及其在细胞移植示踪中的应用现状.
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磁性纳米材料在脊髓损伤研究方面的应用进展
脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)是一种高致残性疾病,目前临床治疗效果不佳,患者常残留严重的神经功能障碍,给社会带来极大的负担.
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獭兔体内植入磁粒子对纳米四氧化三铁吸收的影响
纳米四氧化三铁(Fe3O4)具有磁响应性,利用这一特性Fe3O4被应用于药物载体、磁性分离和细胞的分选[1].Fe3O4做载体的药物体积小,易穿透血脑屏障,在机体磁场被固定于病变部位,释放药物,杀伤病变细胞[2],既可以避免伤害正常细胞,又可减少用药剂量,减轻药物毒副作用.因此,将纳米技术和磁性材料两者相结合的材料--磁性纳米材料已经成为目前新型生物材料的研究热点[1].
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獭兔体内植入磁粒子对纳米四氧化三铁吸收的影响
纳米四氧化三铁(Fe3O4)具有磁响应性,利用这一特性Fe3O4被应用于药物载体、磁性分离和细胞的分选[1].Fe3O4做载体的药物体积小,易穿透血脑屏障,在机体磁场被固定于病变部位,释放药物,杀伤病变细胞[2],既可以避免伤害正常细胞,又可减少用药剂量,减轻药物毒副作用.因此,将纳米技术和磁性材料两者相结合的材料--磁性纳米材料已经成为目前新型生物材料的研究热点[1].
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纳米磁性对比剂在体内巨噬细胞相关疾病MRI成像中的应用
纳米磁性对比剂已成为MRI对比剂研究的重要方向,其独特的理化性质及生物学特性展示出良好的应用前景,并在临床诊断及科研工作中发挥着日益重要的作用.纳米磁性对比剂具有特殊的理化及生物学特性,容易被体内组织中巨噬细胞所吞噬,进而引起相关病灶部位MRI信号强度的变化,利于进行疾病的定量分析,具有广阔的应用前景.因此,本文就纳米磁性对比剂在巨噬细胞相关疾病MRI成像中的应用研究进行综述.
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磁性纳米材料的研究现状及其在神经干细胞移植中的应用
目前,常用的磁性纳米材料如三氧化二铁(Fe2O3)、四氧化三铁(Fe3O4)、铁钴合金等,这些磁性纳米材料具有较好的磁响应性,采用适当的方式可以方便地得到纳米磁性材料,小的平均粒度只有纳米,粒度一般呈正态分布.
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磁性纳米材料固相微萃取-高效液相色谱法测定尿中苯巯基尿酸
目的 建立葡萄糖包裹的Fe3O4磁性纳米材料分散固相微萃取结合高效液相色谱测定尿液中苯巯基尿酸的方法.方法 本实验先采用化学共沉淀法制备Fe3O4磁核,再用水热法合成葡萄糖包裹Fe3O4磁核的复合材料.对制得Fe3O4@GLU磁性纳米材料利用红外光谱技术进行表征.对SPMA的分散固相微萃取条件进行了优化,分别考察了吸附时间、吸附剂用量、样品溶液p H值、洗脱剂和洗脱时间.取5 ml尿样,用盐酸调节pH值＜2.0,利用磁性纳米材料进行分散固相微萃取,经C18柱 (C18柱:250 mm×4.6 mm,4μm) 分离,采用紫外检测器检测,以保留时间定性,峰面积定量.结果 本法在0.050 mg/L～1.0 mg/L浓度范围内呈线性,相关系数为0.999 7,方法检出限为0.003 mg/L.样品加标回收率为96.1％～104.7％;批内精密度为2.36％～3.95％ (n=6),批间精密度为7.60％～8.42％ (n=6).结论 本法简单实用,有机试剂用量少,灵敏度高,可以满足尿样中苯巯基尿酸检测的要求.
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载基因磁性金纳米微粒的制备及在细胞中的表达
目的 制备一种聚乙二醇(PEG)修饰的磁性金纳米微粒作为基因载体用于细胞转染.方法 共沉淀法合成并修饰磁性金纳米微粒.透射电镜及纳米粒度分析仪检测磁性金纳米微粒表征.PicaGreen法测定磁性金纳米微粒质粒包封率,凝胶电泳法检测质粒的完整性与抗核酸酶解性.荧光显微镜观察载质粒磁性金纳米微粒转染人结肠癌LoVo细胞后绿色荧光蛋白(GFP)表达.结果 制备的磁性金纳米微粒呈圆形或类圆形,粒径为(96.45±3.87) nm,zeta电位为(39.05 ± 1.98) mV.磁性金纳米微粒与质粒质量比为5：1时达到大包封率为80.38％,体外释放结果显示载质粒磁性金纳米微粒在0.5h就检测到质粒释放,24 h释放率为(58.10±4.83)％,磁性金纳米微粒能够完整地包封与释放质粒,且能降低所包封质粒被酶解破坏的可能.细胞转染后24 h在荧光显微镜下观察到绿色荧光表达,在一定时间内随着时间延长荧光强度增加.结论 制备出一种有效的磁性金纳米基因载体,成功进行细胞转染且所转染基因能在细胞内顺利表达.
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阿霉素、卡介苗温敏凝胶膀胱癌灌注疗效研究
目的 探讨表阿霉素(EPI)、卡介苗(BCG)联合温敏凝胶用于膀胱癌灌注治疗的效果及可行性.方法 将大鼠依据是否给予BCG及EPI进行分组,建立大鼠膀胱癌模型,测定治疗前后大鼠体质量、膀胱重量水平以及尿液中肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体(TRAIL)的变化,并检测细胞增殖抗原标志物(Ki-67)的表达水平.结果 BCG-EPI组膀胱重量[(101.2±8.2)g]明显低于对照组[(124.7±13.3)g,P＜0.01];10周末,TRAIL浓度EPI-BCG组为(404.24±71.33) ng/L,较对照组[(242.11±77.24) ng/L]明显升高(P＜0.05);EPI-BCG组Ki-67增殖指数为(6.3±2.8)％,较对照组[(13.1±6.9)％]明显降低(P＜0.01).结论 BCG、EPI联合温敏凝胶增强了膀胱组织的免疫应答,治疗效果更加显著和持久,减少了频繁膀胱灌注,为临床上治疗膀胱癌提供了新的思路.
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穿膜肽修饰的载顺铂磁性纳米复合物的制备及其对鼻咽癌的体外效应
目的:制备具有穿膜作用的载顺铂磁性纳米复合物,并探究其对鼻咽癌的体外作用.方法:以醛基化海藻酸钠(ASA)改性的磁性纳米粒(ASA-MNPs)作为药物载体,将端氨基聚乙二醇(PEG)化的穿膜肽(TAT)与ASA通过醛胺缩合链接,组装成TAT修饰的载顺铂磁性纳米复合物,并依据配位络合的原理偶联顺铂(TAT-ASA-MNP@CDDP).通过核磁氢谱、红外光谱等对载药磁性纳米复合物进行表征,通过荧光标记观察其穿膜能力,评估其生物相容性,采用CCK-8细胞毒性实验及流式细胞术评估其对鼻咽癌CNE-2细胞的抑制作用.结果:核磁氢谱和红外光谱显示TAT-ASA-MNP@CDDP分别具有TAT、PEG、ASA特征峰,其水流动力学粒径为(145.9±1.5) nm,zeta电位为(-21.66±1.24)mV,顺铂载量为(25.03±3.05)％.荧光标记显示,CNE-2能快速摄取TAT-ASA-MNP@CDDP.TAT-ASA-MNPs载体细胞毒性实验显示,共培养72 h后(载体铁浓度10 μg/ml),293T细胞的细胞存活率大于70％,人红细胞凝聚试验阴性.体外细胞毒性实验及凋亡实验显示,在顺铂浓度相对较低时,TAT-ASA-MNP@CDDP对CNE-2细胞的抑制作用比ASA-MNP@CDDP大(P＜0.05).结论:单纯载体无明显细胞毒副作用,生物相容性良好,成功制备的TAT-ASA-MNP@CDDP对CNE-2细胞具有明显体外抑制效应.
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低毒性磁性纳米颗粒搭载喜树碱的抗肺癌作用
目的:研究磁性纳米材料搭载喜树碱(MNC-Camp)的制备、药物释放、细胞吸收及抗肺癌作用.方法:紫外分光光度法监测MNC-Camp的药物释放能力,普鲁兰染色法检测A549肺癌细胞对磁性纳米材料的吸收能力的影响,利用MTT法测定游离Camp和MNC-Camp对A549细胞株和白细胞生长的抑制能力,细胞侵袭法分析游离Camp和MNC-Camp对A549细胞转移能力的影响,酶标仪吸光度法检测细胞凋亡蛋白caspase-3的活性.结果:MNC-Camp的药物释放随着时间的增加而增加,A549肺癌细胞对磁性纳米材料具有良好的吸收能力;与MNC组比较,游离Camp和MNC-Camp能够使A549细胞生长能力降低,IC50分别为(35.14±3.21)和(7.16±2.54)mg/L,且A549细胞转移的数目下降,凋亡蛋白caspase-3活性增加,以上作用效果MNC-Camp明显强于游离Camp(P＜0.05).结论:磁性纳米材料搭载喜树碱比游离的喜树碱更能显著降低人肺癌A549细胞的生长和转移能力,提示磁性纳米材料能增强喜树碱的抗肺癌作用.
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磁性纳米材料在生物医学中的研究进展
磁性纳米材料由于其独特的结构和优异的性能被广泛地应用于医学诊断、药物缓释、生物医学等领域.本文对磁性纳米材料在生物分离与纯化、可控药物释放和磁共振成像等方面的应用进行了综述,并对磁性纳米材料的发展方向进行了展望.
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磁性纳米颗粒在骨转移瘤治疗方面的研究进展
目前肿瘤仍然是困扰骨科界的一大难题,当前的困境主要体现在:①如何早期对恶性肿瘤进行诊断;②化疗药物的全身副作用;③对于癌症晚期和不能接受手术的患者的治疗方案.近年来磁性纳米材料有了长足的发展,其具有的诸多特性正可以解决当前骨科肿瘤医疗与科研中所面临的困境,本文将基于磁性纳米材料的特点系统的对其给予介绍.
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TS-Fe3O4介导丙型肝炎病毒多表位基因疫苗的研究
目的 研发能诱导有效免疫应答的丙型肝炎病毒(HCV)基因疫苗候选者及探索磁性纳米材料作为基因载体的应用前景.方法 选择5个HCV保守性T/B细胞识别的抗原表位基因,克隆入pcDNA3.1(+),鉴定重组质粒,测定其细胞水平的表达以及在小鼠体内诱导的免疫反应.同时合成壳聚糖(CTS)修饰的Fe3O4磁性纳米微粒(CTS-Fe3O4),采用MTT法检测对人胚肾细胞株HEK-293和小鼠成纤维细胞株3T3的细胞毒性作用,研究在外加磁场作用下,磁性材料作为基因投递系统的应用.结果 成功构建了HCV多表位基因疫苗pcDNA3.1(+)-MA,RT-PCR和间接免疫荧光实验证实了重组质粒在细胞内的表达,疫苗中的B表位能被81％HCV阳性血清样本所识别,磁性材料浓度在1 mmol/L内无细胞毒性.小鼠体内免疫实验初步显示出pcDNA3.1(+)-MA能有效诱导体液和细胞免疫应答反应,并且磁性纳米材料介导的免疫实验组诱导的免疫应答反应更强(P＜0.05).结论 本研究构建的HCV多表位基因疫苗可成为有前景的HCV候选疫苗之一.壳聚糖修饰的Fe3O4纳米材料可以作为一种优良的基因靶向投递载体,并有免疫佐剂的作用.
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磁性纳米材料在生物医学领域的应用
从靶向药物载体技术,细胞分离技术,免疫分析,酶的吸附与固定作用和基因治疗几个方面简要分析磁性纳米材料在生物医学领域的应用及其发展过程中有待解决的问题.
