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利什曼原虫中国分离株SSU rDNA多变区序列分析
目的分析我国荒漠、山丘疫区利什曼原虫分离株的 SSU rDNA多变区序列差异。方法 nDNA进行PCR扩增，将扩增出的SSU rDNA基因的特异片段克隆于pGEMR-T Easy Vector上，采用通用引物M13进行PCR扩增，全自动测序仪测序。结果序列分析显示本文报道的荒漠、山丘疫区的2株利什曼原虫（L.d.XJ771、L.d.SC6）的SSU rDNA序列大小均为392bp；序列差异发生在两个独特序列区（UQ-Ⅰ和UQ-Ⅱ），无移码突变；与GeneBank中的利什曼原虫比较分析，同源性在98%以上。结论我国荒漠、山丘疫区利什曼原虫分离株之间的SSU rDNA多变区的碱基序列有差异；荒漠疫区分离株L.d.XJ771与国际标准株L.d. DD8的SSU rDNA多变区的碱基序列完全相同。
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四川省犬源性黑热病流行区的防治措施评价
四川省的黑热病流行区属犬源性黑热病流行区,主要的传染源是感染利什曼原虫的病犬,传播媒介是野生野栖习性的中华白蛉.通常情况下,黑热病为低度流行状态,呈散在、点状发病.当疫区的养犬数量增加并伴随家犬的感染率上升时,则会改变这种状态,引发局部的或大范围的黑热病暴发流行.在多年的黑热病防治工作中,为遏制疫情的迅速上升和蔓延,各县结合当地的实际情况采用过一些防治措施,现将这些措施介绍如下,并分析评价其作用和效果.
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Ⅰ型干扰素在原虫感染中的作用
疟原虫、刚地弓形虫、利什曼原虫和锥虫均是严重威胁人类健康的原虫.目前已有较多研究显示,Ⅱ型干扰素(IFN-Ⅱ)在宿主抗寄生虫感染中发挥着重要的作用,但Ⅰ型干扰素(IFN-Ⅰ)在宿主抗寄生虫感染中的作用还知之甚少.原虫诱导的IFN-Ⅰ应答可因所感染的寄生虫虫种/虫株、虫荷、虫体的发育阶段或宿主的遗传背景等不同而异.IFN-Ⅰ与IFN-Ⅱ在原虫感染过程中存在相互作用.本文综述了原虫感染过程中IFN-Ⅰ的作用及其调节机制的研究进展.
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利什曼原虫核酸疫苗的研究现状
核酸疫苗(Nucleic Acid Vaccines)包括DNA疫苗和RNA疫苗，但目前研究多的是DNA疫苗(DNA vaccine)。DNA疫苗是指将编码某种抗原蛋白的外源基因克隆到真核质粒表达载体上，然后将重组的质粒DNA直接注射到动物体内，从而通过宿主细胞的转录系统合成抗原蛋白，诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答。核酸疫苗又称为基因疫苗或裸DNA疫苗，这种免疫称为核酸免疫、基因免疫、DNA介导的免疫及遗传免疫等。1 核酸疫苗的作用机理 核酸疫苗的免疫学机理尚不完全清楚，目前初步研究认为编码目的基因的质粒DNA被抗原提呈细胞(APC)摄入后，可在APC内表达抗原物质。该内源性抗原在被分解成抗原短肽后进入内质网，与I类MHC(组织相容性复合物)分子结合后被传送到细胞表面，提呈给CD8+的细胞毒T淋巴细胞(CTL)，激活细胞免疫反应；并且分泌型的抗原或者是抗原在细胞死亡后释放到细胞间质，被专一的抗原提呈细胞(pAPC)内吞，与MHCⅡ型分子形成一个成熟的MHCⅡ型抗原复合物，被CD4+T淋巴细胞识别并使其激活，激活的CD4+T淋巴细胞可以辅助激活B淋巴细胞，使其产生大量的专一性抗体或者激活T杀伤细胞或者通过分泌有关的细胞因子使机体产生免疫反应[1]。
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利什曼原虫DNA压电晶体传感器的初步研究
目的研制利什曼原虫DNA压电晶体传感器.方法对压电石英晶体表面进行处理并结合上探针DNA制成DNA传感器,在不同的杂交时间和杂交浓度条件下测定其频率响应.结果在5 h内随着杂交时间的增加,压电晶体振荡频率的改变值△f也呈线性增加,在相同的杂交时间内,低浓度范围△f随被测DNA浓度的增加而增加.结论在一定条件下,利什曼原虫DNA压电晶体传感器有望用于检测利什曼原虫.
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杜氏利什曼原虫无鞭毛体蛋白基因原核表达重组质粒的构建
目的:构建杜氏利什曼原虫无鞭毛体蛋白(amastin)编码基因的原核表达重组质粒pET-amastin.方法:提取杜氏利什曼原虫基因组DNA进行PCR扩增,将扩增出的无鞭毛体蛋白基因片段导入质粒载体pET-32a(+),构建原核表达重组质粒pET-amastin.结果:扩增出大小约550 bp的无鞭毛体蛋白基因,重组质粒pETamastin经鉴定正确.结论:成功构建杜氏利什曼原虫无鞭毛体蛋白基因原核表达重组质粒pET-amastin.
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载体介导的利什曼原虫疫苗的研制进展
利什曼原虫引起的利什曼病是一种严重危害人类健康的寄生虫病,采用疫苗防治该病是当前研究的热点领域之一.利什曼原虫GP63、LACK、KM P11和CPA/CPB等抗原是几种有效的疫苗候选分子,本文综述了卡介苗、乳酸乳球菌、鼠伤寒沙门氏菌、单增李斯特菌、牛痘病毒、疱疹性口炎病毒、腺病毒血清型5、A型流感病毒、犬瘟热病毒、刚地弓形虫和蜥蜴利什曼原虫等载体介导的利什曼原虫GP63、LACK、KM P11和CPA/CPB等疫苗的研制现状.
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利什曼原虫相关性噬血细胞综合征1例
患者,男,24岁.因反复高热,寒战半年,于2001-04-12入院.体检:浅表淋巴结未触及,皮肤及粘膜未见黄染及出血点,心肺正常,腹部膨隆.肝肋缘下2 cm,剑突下3.5 cm,质软.脾肋下6 cm,贫血貌,面色黑,消瘦.
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82例发热待查患者布鲁氏菌病和黑热病诊断分析
目的查清发热的致病原因,以便采取治疗措施.方法 2004年和2005年新疆疾病预防控制中心附属医院就诊的发热待查患者和综合性医院经多项检查,由于查不清原因而介绍来的发热患者共计82例,均做布鲁氏菌病皮试、血清学检测和黑热病抗体检测,黑热病抗体阳性者再做骨穿和涂片,查利杜体.结果查出27例布鲁氏菌病患者和11例黑热病患者,经对症治疗,临床治愈.结论对发热待查的患者,应对症考虑相关检查,并做黑热病与结核病、伤寒、疟疾、布鲁氏菌病、白血症、恶性组织细胞病、何杰金病、慢性血吸虫病及其它病因所致肝硬化、亚急性细菌性心骨膜炎等疾患的鉴别诊断,以便及时发现病人、减少误诊、漏诊.
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利什曼原虫培养方法的改进
利什曼原虫的培养,对于利什曼病的诊断、虫种鉴定以及抗原制备和开展免疫学等方面的研究是一项不可缺少的技术.国内的实验室常用的培养基有NNN培养基(NOVY-MC Neal-Nicollemedium三恩氏培养基)和199培养基(medium199)两种.经多年的实践证明,将国内的几种利什曼原虫的前鞭毛体转种入NNN培养基内并放置22℃～24℃内培养,需要放置10～12d左右才有显著的增长,故难以在短期内收集大量的前鞭毛体.199培养基虽有成品购买,随时可供配置使用,但当前鞭毛体直接转种入该培养基内后,原虫繁殖不佳,1w后虫体变圆,呈衰残型,因此,仅可供短期保存虫种之用.
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2005年自新疆巴楚县婴儿黑热病患者中分离出1株利什曼原虫
新疆巴楚县是荒漠型黑热病流行的重病地区,发病率一直维持在较高水平,病人以2岁以下的婴幼儿为主,倍受国内外同行的关注.1965～1969年中国预防医学科学院寄生虫现研究所科研人员曾在新疆阿克苏塔里木河南岸分离出利什曼原虫,由于条件所限未能传代保存.1977年柴君杰等在巴楚夏河地区从吴氏白蛉分离出一株利什曼原虫(IPHL/CN/77/771),分子鉴定为婴儿利什曼原虫[1,2].
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三种利什曼原虫对实验动物致病力的初步观察
寻找利什曼原虫的易感动物是在实验室内保存虫种以及在动物体内鉴定利什曼病治疗药物效果的重要环节.本文报道杜氏利什曼原虫(Leishmania donovani, LD)、婴儿利什曼原虫(L.infantum,LI)和亚马逊利什曼原虫(L.amazonensis,LA)对3种实验动物致病力的观察结果.
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不同剂量婴儿利什曼原虫实验感染草原兔尾鼠的观察
按常规方法,通过培养阳性动物(金仓鼠)脏器获取婴儿利什曼原虫901株(MHON/CH/90/SS-1)前鞭毛体,按(5×106)个/0.5mL;(2×107)个/0.5mL;(4×107)个/0.5mL三组不同剂量经腹腔接种草原兔尾鼠(Lagurus lagurus,为新疆地方病防治研究所动物昆虫研究室驯化繁殖的封闭群实验动物,按体重、性别随机分成3组)23只.
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首次从新疆民丰县吴氏白蛉中分离出利什曼原虫
目的 从新发现的新疆民丰县黑热病疫区分离利什曼原虫. 方法 用镜检法调查白蛉自然感染利什曼原虫状况,以接种敏感动物和培养基方法分离利什曼原虫. 结果 捕捉白蛉282只,检查173只吴氏白蛉(♀),查出感染前鞭毛体白蛉9只,分别培养接种9只灰仓鼠,其中2只接种第二天死亡;分离出2株利什曼原虫,灰仓鼠出现典型的内脏利什曼病症状. 结论 分离自吴氏白蛉的利什曼原虫致使灰仓鼠表现出典型的内脏利什曼病症状,分离到的利什曼原虫对研究塔里木盆地的利什曼原虫进化具有重要的意义.
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新疆不同地区杜氏利什曼原虫抗原制备及应用研究
目的用从新疆不同地区分离得到的利什曼原虫前鞭毛体提取抗原,观察ELISA法检测黑热病病人和疫区健康人血清抗体时的敏感性和特异性,为制备ELISA诊断试剂盒和进一步提高这种检测方法的敏感性和特异性,提高黑热病现场流行病学调查结果的准确性和可靠性提供实验依据.方法 (1)抗原提取:收集新疆不同地区分离得到的利什曼原虫前鞭毛体,常规方法提取抗原,滴定出抗原工作浓度.(2)检测:用提取的3株抗原,测定黑热病病人和疫区健康人血清抗体. 结果 3株抗原检测24份肺结核病人血清,均为阴性;3株抗原分别检测60份非疫区健康人血清801株和951株的检测结果均为阴性,901株检测出1份阳性(临界值);3株抗原分别检测131份黑热病病人血清,阳性率分别为:901株(80.9%)、801株(92.3%)、951株(89.9%).801株明显高于901株.3株抗原分别检测334份疫区健康人血清, 901株(10.5%)明显高于801株(6.0%)和951株(5.1%),有显著差异.按不同地区人群阳性率比较,3株抗原检测巴楚县人群阳性率有显著差异,901株(18.8%)与951株(8.5%)有显著差异,乌什县人群阳性率无显著差异;按不同年龄组的人群阳性率比较,3株抗原在每个年龄组的阳性率无显著差异.结论利什曼原虫前鞭毛体抗原有较好的稳定性,耐热性极好;901株、801株抗原的敏感性、特异性较好,可做为新疆血清流行病学调查所用的抗原株;801株的特异性更好,可用于黑热病的特异性抗体的检测及研究.
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婴儿利什曼原虫前鞭毛体细胞表面脂磷酸聚糖的提取及初步鉴定
本文主要介绍了两种不同来源脂磷酸聚糖(lipophosphoglycan,LPG)的提取方法,测定蛋白含量分别为50μg/mL和252μg/mL,并对其免疫源性及抗原性做了初步鉴定,ELISA法测出LPG可与抗-LPG免疫兔血清Ig和前鞭毛体免疫兔血清及黑热病病人血清反应,终点滴度有差别.
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成人与儿童内脏利什曼病临床特点的对比分析
目的 总结并分析成人及儿童内脏利什曼病的临床特点及实验室指标变化特征.方法 对首都医科大学附属北京友谊医院2013年5月至2018年7月收治的20例内脏利什曼病患者的临床特点进行总结,并用描述性统计方法分析比较成人与儿童患者的实验室指标的差异.结果 20例患者临床均表现为发热、肝大、脾大及淋巴结肿大.14例成人患者病程较长为0.6～24个月,6例儿童为0.6～1个月.20例患者均有外周血常规两系或三系降低,其中成年患者白细胞降低明显.成人患者的血清白蛋白降低显著,而儿童的B细胞升高明显.20例患者均出现外周血免疫球蛋白(IgG)含量增高,利什曼原虫IgG抗体为阳性,骨髓涂片中均找到利杜体.所有患者均给予葡萄糖酸锑钠治疗,除1例患儿及4例成人死亡,其余均治愈.结论 内脏利什曼病成人患者的病程较长,白细胞及白蛋白降低明显,儿童的B细胞升高显著,其他临床表现及实验室检查结果差别无显著性.
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电感耦合等离子体-质谱法测定寄生虫细胞内痕量锑
为了研究利什曼原虫(Leishmania)对于含五价锑药物的抗药性机理而建立了一种测定细胞内痕量金属锑的方法.本文尝试使用浓硝酸冷消化法处理细胞样品,简化了实验步骤,降低了被测物质损失和污染的可能性.电感耦合等离子体-质谱(ICP-MS)作为检测手段令本方法测定金属锑的低检出浓度达到0.036μg?1-1,线性范围达到1.0-80ng?ml-1,加标回收率为98.0-110.0%,日间精密度≤1.63%.本方法较为简单,结果准确可靠,已经应用于寄生虫的金属抗药性研究,所获结果完全符合预期的实验模型.
