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Sec3对中性粒细胞弹性蛋白酶诱导的气道上皮细胞黏蛋白分泌的影响
目的 探讨栓链因子复合物亚基Sec3对中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)诱导的气道上皮细胞黏蛋白(MUC)分泌的影响.方法 体外培养人气道上皮细胞16HBE,随机分为8组:空白对照组、表皮生长因子受体(EGFR)磷酸化抑制剂AG1487组、Sec3 siRNA组、阴性siRNA对照组、NE组、NE+AG1478、NE+ See3 siRNA组、NE+阴性siRNA组.采用Western blot法检测Sec3蛋白及pEGFR的相对含量;ELISA、RT-PCR法分析细胞培养上清液中MUC5AC的相对含量及细胞中MUC5AC mRNA水平.结果 Sec3 siRNA转染显著降低Sec3蛋白表达,提示转染成功,且加入NE对转染效果无干扰.单纯NE刺激组上清液中MUC5AC含量,细胞中MUC5AC mRNA、pEGFR水平显著高于空白对照组(P＜0.01),AG1487可明显抑制上述刺激作用;转染Sec3 siRNA可阻断MUC5AC分泌(P＜0.01),但并不影响其转录水平表达(P＞0.05).结论 在NE诱导的人气道上皮黏液高分泌过程中,栓链因子复合物亚基Sec3对黏蛋白出胞有重要的介导作用.
关键词： 黏蛋白 中性粒细胞弹性蛋白酶 栓链因子复合物 表皮生长因子受体 -
依赖Ca2+的ATP过量释放在机械牵张所致气道上皮黏蛋白5AC高分泌中的作用
目的 探讨人气道上皮细胞三磷酸腺苷(ATP)释放量的改变在机械通气所致气道黏液高分泌中的作用.方法 人气道黏膜上皮细胞(HBE16)体外培养,通过节律性倾斜细胞培养板,利用液体的表面张力、大气压及液体重力所产生的牵张力(剪应力)及压力(压应力)给予压力牵张刺激,并利用向密闭盒中注入医用氧气增加压力以模拟机械通气,各组培养细胞依施加条件不同而分为对照组、单纯倾斜组、倾斜+钙离子螯合剂BAPTA-AM、倾斜+BAPTA-AM+钙离子螯合剂EGTA、加压+倾斜、加压+倾斜+嘌呤P2Y受体阻断剂reactive blue-2(RB-2)、加压+倾斜+ BAPTA-AM、加压+倾斜+ BAPTA-AM +EGTA,共8组,分别采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)测定细胞活性、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组黏蛋白(MUC)5AC mRNA表达水平、ELISA法检测细胞培养上清液中MUC5AC含量、高效液相色谱法(HPLC)检测培养液中ATP释放量.结果 加压+倾斜组细胞MUC5AC mRNA相对含量、培养上清液中ATP释放量和MUC5AC蛋白分泌量分别为:(11.80±0.01)、(7.41±0.45)μmol/g、(0.77±0.26),显著高于单纯倾斜组的(6.60±0.01)、(2.76±0.47)μmol/g、(0.25±0.01)及对照组的(3.40±0.01)、(0.00±0.01)μmol/g、(0.02±0.01)(均P＜0.05).RB-2、EGTA + BAPTA-AM处理后的加压+倾斜组细胞的MUC5AC mRNA相对含量分别为:(10.5±0.03)、(11.9±0.11),与加压+倾斜组相比抑制作用不显著(P＞0.05);培养上清液中ATP释放量分别为:(0.05±0.02)μmol/g、(0.08±0.02)μmol/g,较加压+倾斜组显著降低(均P＜0.05).结论机械通气可以显著提高气道黏膜上皮MUC5AC的分泌,其机制与气道上皮细胞依赖Ca2+的ATP的过量释放密切相关.
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布地奈德对变应性鼻炎鼻黏膜黏蛋白MUC5AC和MUC5B表达的影响
目的 研究皮质类固醇激素(布地奈德混悬液)对体外培养的变应性鼻炎鼻黏膜组织黏蛋白MUC5AC和MUC5B基因和蛋白表达的影响.方法 采用体外鼻黏膜组织培养方法,分空白对照组、组胺刺激组和组胺刺激加布地奈德干预组进行研究,培养后组织分别用RT-PCR和免疫组织化学2种方法检测黏蛋白MUC5AC和MUC5B基因和蛋白表达.结果 与其他两组相比,组胺刺激组黏蛋白MUC5AC和MUC5B基因及蛋白的表达均显著增强(均P＜0.05),而布地奈德干预组中黏蛋白MUC5AC和MUC5B基因及蛋白的表达与对照组相比差异无显著性意义(均P＞0.05).结论 皮质类固醇激素--布地奈德混悬液能下调黏蛋白MUC5AC和MUC5B基因和蛋白的表达,从而减少变应性鼻炎鼻黏膜黏液的过度分泌.
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清肺化痰汤抗COPD大鼠模型黏蛋白作用研究
目的:探讨COPD大鼠模型黏蛋白的表达及清肺化痰汤的干预作用.方法:建立COPD大鼠模型,将30只大鼠随机分为对照组、COPD模型组和清肺化痰汤组各10只.HE染色观察各组大鼠肺组织病理学改变、Real-time RT-PCR法检测MUC的表达、免疫组织化学法检测MUC5AC蛋白表达,ELISA检测肺泡灌洗液中MUC5AC的表达.结果:COPD组大鼠气道上皮脱落,气道内有黏液分泌,肺泡结构呈实变,有大量炎症细胞渗出,清肺化痰汤组大鼠变化明显减轻;模型组大鼠肺组织中MUC5AC mRNA明显升高(P＜0.05),MUC2和MUC5B mRNA无明显差异(P＞0.05);免疫组化检测结果显示,COPD模型组可见MUC5AC表达明显,清肺化痰汤治疗后MUC5AC的表达明显下降;ELISA结果显示,模型组大鼠肺泡灌洗液中MUC5AC蛋白量明显高于正常对照组(P＜0.05);清肺化痰汤治疗后,肺泡灌洗液中MUC5AC蛋白量明显低于模型组(P＜0.05).结论:COPD模型中MUC5AC呈高表达,清肺化疾汤可抑制其表达水平.
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高血糖宜吃三种食物
山药:山药中的黏滑成分是由黏蛋白形成的.黏蛋白能包裹肠内的其他食物,使糖分被缓慢地吸收.这一作用能抑制饭后血糖急剧上升,同时也可以避免胰岛素分泌过剩,使血糖得到较好调控.另外,山药还含有胰岛素分泌必不可少的镁和锌等有效成分,以及维生素B1、维生素B2.这些成分促进了血液中葡萄糖的代谢.此外,山药还含有淀粉酶,这是消化糖类的酶,可使血液中不再积存糖分.如果生吃山药,更有助于摄取黏滑成分,可以切成细丝或者弄成山药泥吃.黏滑成分越多的山药,其药效成分也越多.
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MUC13的研究进展
黏蛋白13(mucin13,MUC13)编码一种高分子质量跨膜糖蛋白,主要表达于胃肠道和呼吸道上皮细胞,对黏膜上皮起保护和润滑的作用.MUC13通过多条信号通路促进细胞增殖和迁移,抑制细胞凋亡,降低黏附,不仅参与炎症的调节,而且在肿瘤的发生、发展中发挥重要作用.MUC13在肿瘤中的作用受到越来越多的关注,有望成为肿瘤早期诊断和治疗的靶点.
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肠道杯状细胞结构和功能的研究进展
据估计成人肠道内约有1013～1014个共生菌,其数量远远超过人体细胞数.正常情况下人体通过一系列抵抗机制包括适应性免疫、固有免疫,与共生菌达到宿主-共生菌之间的动态平衡.由肠道杯状细胞分泌的黏蛋白是肠道固有免疫第一防线黏液层的主要组成部分.黏蛋白类对维持肠黏膜动态平衡、调控微生物-宿主免疫反应起着重要作用.
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MARCKS及其对气道黏蛋白胞吐作用的调节
黏液高分泌是慢性气道炎症性疾病的重要病理特征.豆蔻酰化富丙氨酸C激酶底物蛋白(myristoylated alanine-rich C kinase substrate, MARCKS)是黏液分泌过程中的关键蛋白.蛋白激酶C或其他激酶、细胞内钙离子浓度、钙调蛋白、纤维型-肌动蛋白、磷脂酰肌醇4,5二磷酸、热休克蛋白70等均可通过MARCKS的桥梁作用,介导气道分泌颗粒的胞内运动和黏蛋白的出胞释放.
关键词： 黏蛋白 豆蔻酰化富丙氨酸C激酶底物蛋白 信号转导 气道炎症 -
呼吸道合胞病毒感染对气道上皮细胞表皮生长因子受体、紧密连接相关蛋白及黏蛋白表达的影响
目的 探讨呼吸道合胞病毒(RSV)感染气道上皮细胞后对表皮生长因子受体(EGFR)、紧密连接相关蛋白occludin及E-cadherin、黏蛋白MUC5AC表达的影响,并探讨可能的机制.方法 体外实验分两组,以人气道黏液上皮细胞NCI-H292细胞为研究对象,紫外线下灭活的RSV加入NCI-H292细胞培养基中作为对照组,迅速解冻的RSV感染NCI-H292细胞为RSV感染组.48h后通过Westemblot法检测occludin、E-cadherin、磷酸化EGFR(p-EGFR)及EGFR的蛋白表达水平;采用细胞免疫荧光技术观察两组细胞occludin、E-cadherin的分布及表达;采用RT-PCR法检测两组MUC5AC mRNA的表达.结果 RSV感染组occludin、E-cadherin的蛋白表达水平较对照组下降(P＜0.05).RSV感染组p-EGFR及EGFR蛋白的表达水平较对照组升高(P＜0.05).RSV感染组MUC5AC mRNA表达水平较对照组增加(P＜0.05).结论 RSV可破坏气道上皮细胞间的紧密连接,促进黏蛋白的分泌,影响气道的屏障功能.EGFR的磷酸化在上述过程中起重要作用.
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环氧合酶-2对细菌脂多糖诱导的鼻黏膜组织中MUC2基因表达的影响
目的 探讨细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的离体鼻黏膜组织中环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)及前列腺素E 2(prostaglandin E2,PGE 2)对黏液素2(mucin 2,MUC 2)表达的影响,以阐明慢性鼻-鼻窦炎中黏液过度分泌的病理学机制.方法 应用荧光实时定量PCR技术检测不同浓度的LPS,PGE 2和COX-2特异性抑制剂NS-398干预前后,体外培养的鼻黏膜组织中COX-2和MUC 2的基因表达变化,并以酶标免疫测定检测干预前后的PGE2释放水平.结果 COX-2,MUC2和PGE 2在体外培养的健康鼻黏组织中呈微弱的表达.LPS呈浓度依赖性诱导鼻黏膜组织中COX-2和MUC2基因表达及PGE 2释放增加;以不同浓度的NS-398阻断COX-2后,观察到NS-398呈浓度依赖性减弱LPS对MUC2的基因表达及PGE2释放的诱导.外源性的PGE2呈浓度依赖性增加MUC2的基因表达,对COX-2表达无明显影响.结论 LPS通过诱导COX-2进而增加PGE 2合成来调节MUC2的表达增高,可能是慢性鼻一鼻窦炎中黏液过度分泌的部分机制.
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节律性压力波对家犬气道黏蛋白分泌平衡的影响及其机制
目的：观察不同压力对家犬气道黏液层黏蛋白(MUC)分泌的影响，并初步探讨其参与机制。方法：24只健康家犬行双腔支气管导管插管，并随机分为4组(n=6)。A组家犬正常呼吸的频率及压力双侧通气(A1，A2)；B组一侧不通气(B1)，另一侧予以过量通气(B2)；C组预先张力敏感性阳离子通道4(TRPV4)阻断剂钉红(RR)后按A组通气模式通气(C1，C2)；D组预先TRPV4阻断剂RR处理后按B组通气模式通气(D1，D2)。通气12 h后，ELISA检测3组支气管灌洗液(BALF)中MUC(2，5AC和5B)蛋白含量；RT-PCR检测支气管肺组织匀浆中MUC(2，5AC和5B) mRNA转录水平。结果：与正常通气的A2组比较，过量通气的B2组家犬BALF中3种MUC蛋白含量显著升高，且以MUC5AC为主(P<0.05)；与A1组比较，未通气的B1组则明显下降(P<0.05)。与A1，A2组比较，给予RR处理后的C1，C2组蛋白含量均明显降低(P<0.05)。与过量通气的B2组比较，给予TRPV4特异性阻断剂处理后再过量通气的D2组3种MUC蛋白含量亦明显下降(P<0.05)。与A2组比较过量通气的B2组肺组织MUC(2，5AC和5B) mRNA表达均明显上调(P<0.05)；与A1，A2比较，给予RR处理后C1，C2组肺组织3种MUC mRNA转录水平显著下降(P<0.05)；给予RR预处理后与B2组相比，D2组内MUC mRNA转录水平显著下调(P<0.05)。结论：节律性压力波参与维持家犬气道上皮黏液层黏蛋白分泌平衡调控，其机制主要通过TRPV4通道实现。
关键词： 节律性压力波 张力敏感性阳离子通道 黏蛋白 -
金水六君煎及其拆方含药血清对A549细胞中黏蛋白MUC5AC及水通道蛋白AQP5表达的影响
目的 观察金水六君煎及其拆方含药血清对肺腺癌细胞A549黏液高分泌模型黏蛋白5AC(MUC5AC)及水通道蛋白5 (AQP5)表达的影响,探讨金水六君煎治疗气道黏液高分泌的作用机制.方法 将A549细胞分为空白组、模型组、金水六君煎组、养阴组、化痰组.采用人中性粒弹性蛋白酶(HNE)25 nmmol/L诱导A549细胞黏液高分泌,20%金水六君煎及其拆方含药血清干预24 h.RT-PCR、Western blot法检测细胞MUC5AC、AQP5基因与蛋白表达.ELISA法检测细胞上清液MUC5AC、AQP5蛋白表达.结果 与空白组比较,模型组细胞MUC5AC mRNA与蛋白表达明显增多(P＜0.05),AQP5 mRNA与蛋白表达明显降低(P＜0.05).与模型组比较,金水六君煎组及养阴组细胞MUC5AC mRNA表达明显降低(P＜0.05),AQP5 mRNA表达明显增多(P＜0.05);化痰组A549细胞MUC5AC蛋白表达显著降低(P＜0.01),AQP5蛋白表达明显升高(P＜0.05).模型组细胞上清液MUC5AC、AQP5蛋白表达较空白组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 金水六君煎可明显抑制A549细胞MUC5AC产生,促进AQP5表达,纠正黏蛋白/水盐比例失衡可能是其治疗气道黏液高分泌的可能机制.
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金黄色葡萄球菌肠毒素B激活TACE诱导人鼻黏膜上皮细胞分泌黏蛋白
目的：观察金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)对人鼻黏膜上皮细胞活性氧(ROS)和肿瘤坏死因子转化酶( TACE)活性的影响,并探讨其在介导黏蛋白MUC5AC分泌中的作用。方法体外培养人鼻黏膜上皮细胞,用不同浓度的SEB孵育细胞0~24 h,采用荧光共振能量转移法检测TACE的酶活性,荧光探针H2DCFDA检测鼻黏膜上皮细胞中活性氧( ROS)的含量,ELISA检测培养上清中MUC5AC的分泌水平。同时采用TACE siRNA干扰或ROS抑制剂NAC处理细胞,观察其在介导MUC5AC分泌中的作用。结果100 ng/mL SEB作用鼻黏膜上皮细胞15 min后即可上调TACE的酶活性,30~60 min后达到峰值,并持续至2 h；SEB也能增加鼻黏膜上皮细胞内ROS的含量；采用NAPDH氧化酶抑制剂DPI处理后,ROS水平明显减少；ROS抑制剂NAC处理鼻黏膜上皮细胞后,可明显降低TACE的酶活性；30~100 ng/mL SEB能显著诱导鼻黏膜上皮细胞分泌MUC5AC,采用TACE siRNA干扰其表达或抑制剂处理后,可抑制MUC5AC分泌。结论 SEB激活TACE诱导人鼻黏膜上皮细胞分泌MUC5AC。
关键词： 金黄色葡萄球菌肠毒素B 肿瘤坏死因子α转化酶 活性氧 黏蛋白 -
黏蛋白与肝内胆管癌的研究进展
肝内胆管癌是原发于胆管上皮细胞的恶性肿瘤,其恶性程度高,预后不佳.而黏蛋白基因的异常表达与胆管癌的发生,进展和预后有着密切的关系.
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胃癌组织中MUC4和VEGF的表达及其意义
目的 探讨MUC4和VEGF在胃癌组织中的表达及其与生物学之间的关系.方法 采用免疫组化S-P法检测86倒胃癌组织中MUC4和VEGF的表达.结果 VEGF在正常胃黏膜中没有表达;MUC4在胃癌中的表达率为94.2%(81/86);VEGF在胃癌中的表达率为84.9%(73/86).MUC4和VEGF与胃癌组织分化、肿瘤浸润深度、淋巴结转移密切相关(P<0.05).且MUC4与vEGF的表达呈正相关(P<0.01);但二者的表达与患者年龄、性别差异无显著性(P>0.05).结论 MUC4和VEGF是胃癌发生发展中的重要因子,在胃癌的侵袭转移中起重要作用,MUC4和VEGF的联合表达与胃癌的浸润转移密切相关.
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克拉霉素经NF-κB途径抑制肺炎支原体抗原诱导气道上皮细胞产生MUC5AC
目的 气道黏液过度分泌是多种慢性呼吸道疾病的重要特征.该研究旨在探讨肺炎支衣原(Mycoplasma pneumonia,Mp)抗原能否诱导气道上皮诱导产生MUC5AC黏蛋白,并探讨克拉霉素是否能影响其分泌.方法 体外培养支气管上皮细胞,用不同浓度的Mp抗原刺激,免疫酶联吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测克拉霉素处理前后,支气管上皮细胞MUC5AC的产生情况,并采用定量逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)法检测MUC5AC mRNA的表达.提取核蛋白,ELISA检测核因子κ B(nuclear factor kappa B,NF-κB)的激活情况.结果 肺炎支原体能以剂量依赖性方式诱导支气管上皮细胞产生MUC5AC和表达其mRNA,并能激活NF-κB.当提前用克拉霉素处理细胞后,能明显抑制MUC5AC的表达和NF-κB的活化.结论 气道黏液过度分泌可能是Mp相关肺疾病的一种重要机制.克拉霉素在体外能抑制MUC5AC的产生,其机制可能与抑制NF-κB的激活有关.
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黏蛋白和转化生长因子βⅡ型受体在胃癌组织中的表达及其意义
目的 探讨黏蛋白(MUC4)和转化生长因子βⅡ型受体(TGF-βRⅡ)在胃癌组织中的表达及其与生物学行为之间的关系.方法 应用免疫组化S-P法检测87例胃癌标本中MUC4和TGF-βRⅡ的表达.结果 MUC4在胃癌组织中表达阳性率为95.4%(83/87),与组织分化、肿瘤浸润深度及淋巴结转移密切相关(P＜0.05);TGF-βRⅡ在胃癌组织中表达阳性率为16.1%(14/87),与组织分化、肿瘤浸润深度密切相关(P＜0.05);两者的表达与患者年龄、性别均无关(P＞0.05);而且MUC4与TGF-βRⅡ的表达之间呈负相关(P＜0.01).结论 MUC4与TGF-β RⅡ的表达是研究胃癌不同组织分化的较好指标,TGF-β RⅡ的低表达可能引起MUC4的高表达,促使肿瘤的浸润和转移.
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柚皮素对炎症性气道黏液高分泌的作用
目的 探讨柚皮素对炎性刺激时气道上皮细胞黏液高分泌的作用和相关的分子机制.方法 通过人中性粒细胞弹性蛋白酶(HNE)刺激人肺腺癌细胞A549,构建炎性刺激时气道黏液高分泌模型,分别以柚皮素和活性氧(Ros)清除剂DMTU进行干预,用活性氧试剂盒测定各组细胞中ROS的含量,观察黏蛋白(MUC)5AC、表皮细胞生长因子受体(EGFR)和磷酸化EGFR(P-EGFR)的表达.培养细胞经甲基偶氮唑盐法测定活性后分为对照组、FINE处理组、DMTU组、柚皮素组和柚皮素+DMTU组.逆转录PCR方法检测各组MUC5AC mRNA、EGFRmRNA的变化;western blot法检测EGFR和P-EGFR蛋白的表达;酶联免疫吸附测定法观察察MUC5AC蛋白表达的变化,并用细胞免疫激光共聚焦显微镜观察柚皮素作用前后黏蛋白的分布.结果 不同浓度的HNE处理A549后,细胞内ROS的含量逐渐增加,而柚皮素预处理组与50nmol/L的HNE刺激组相比细胞内ROS的含量明显减少(P<0.01);HNE处理组MUC5AC的mRNA和蛋白的吸光度面积积分值分别为(0.92±0.08)和(152±6)μg/mg,EGFRmRNA和蛋白的吸光度面积积分值分别为(0.91±0.05)和(0.86±0.03)μg/mg,均较对照组[(0.70±0.02),(112±4)μg/mg和(0.73±0.10),(0.39±0.03)μg/mg]明显升高(P<0.05),P-EGFR和总EGFR.蛋白表达均较对照组显著增加(P<0.01);给予柚皮素预处理后,与HNE刺激组相比,EGFR和P-EGFK表达下调;而柚皮素+DMTU组MUC5ACmRNA和MUC5AC的蛋白较单独DMTU处理组更为明显,其吸光度和面积积分值分别为(0.40±0.03)和(113±2)μg/mg(P<0.01),差异均有统计学意义.结论 HNE可刺激气道上皮细胞产生大量ROS,柚皮素可抑制ROS的产生、下调ROS诱导的EGFR表达水平、并部分阻断EGFR磷酸化,从而抑制炎性刺激时气道黏液高分泌的形成.
关键词： 黏蛋白 人中性粒细胞弹性蛋白酶 表皮细胞生长因子受体 柚皮素 活性氧清除剂 -
支气管哮喘患者血清细胞因子、NLRP3mRNA及诱导痰黏蛋白水平的变化
目的 探讨支气管哮喘患者外周血中单个核细胞Nod样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)mRNA、血清白细胞介素-2(IL-2)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、诱导痰黏蛋白水平的变化及其意义.方法 选取2013年1月-2014年12月在该院确诊的80例支气管哮喘患者作为哮喘组,同期收集健康自愿者80例作为对照组.检测两组患者外周血NLRP3 mRNA,以及血清IL-2、IL-6、TNF-α、诱导痰黏蛋白MUC5AC水平,并进行分析.结果 哮喘组患者NLRP3 mRNA,以及血清IL-6、TNF-α、MUC5AC水平高于对照组(P<0.05);哮喘组患者IL-2水平低于对照组(P<0.05);急性发作期哮喘组患者NLRP3 mRNA,以及血清IL-6、TNF-α、MUC5AC水平高于慢性持续期哮喘患者(P<0.05);急性发作期哮喘组患者IL-2水平低于慢性持续期哮喘患者(P<0.05).哮喘组患者治疗后NLRP3 mRNA,以及血清IL-6、TNF-α、MUC5AC水平较治疗前降低(P<0.05);哮喘组患者治疗后IL-2水平高于治疗前(P<0.05).结论 哮喘患者NLRP3 mRNA及血清IL-6、TNF-α、MUC5AC水平升高,IL-2水平降低,并且与患者病情变化有关.
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中耳分泌液中黏蛋白含量测定
目的 为分析分泌性中耳炎的病因,测定黏液性和浆液性中耳分泌液中黏蛋白的含量.方法 测定了60例英国出生的患有分泌性中耳炎的儿童中耳分泌液中的黏蛋白含量,对黏液性和浆液性的中耳分泌液分别进行了测定.结果 黏液性和浆液性中耳分泌液的含量分别占14.6％和6.1％.结论 慢性分泌性中耳炎患儿的中耳分泌液中,黏液性和浆液性中耳分泌液的黏蛋白含量是不相同的,在临床上治疗小耳慢性分泌性中耳炎时,应采用不同的治疗方法.
