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人nm23-H1基因重组腺病毒载体的构建与鉴定
目的:构建表达入nm23-H1基因的重组腺病毒载体,并在人胚肾293细胞中进行鉴定.方法:以重组质粒pcDNA3.1-nm23-H1中提取的nm23-H1基因为模板,采用PCR法扩增基因片段.将扩增的基因片段插入穿梭质粒pShuttle-CMV,并转化大肠肝菌DH5α.筛选重组质粒pShuttle-C MV-nm23-H1,电转化已转化了pAdEasy-1的BJ5183细胞.筛选重组腺病毒质粒pAdEasy-nm23-H1,用Lipofectamine转染293细胞,制备携带人全长nm23-H1基因的重组复制缺陷型腺病毒Ad-nm23-H1.大量扩增Ad-nm23-H1病毒颗粒,并测定病毒滴度.采用RT-PCR法检测nm23-H1基因在293细胞中的转录.结果:经PCR、酶切鉴定及DNA测序结果证实pShuttleCMV-nm23-H1及pAdEasy-nm23-H1质粒正确构建,纯化后的Ad-nm23-H1病毒颗粒感染性滴度为109.5(3.4×109)CCIDs/ml,经RT-PCR扩增出的基因片段,与目的片段大小一致.结论:已成功构建了表达nm23-H1重组腺病毒载体,为肿瘤的基因治疗提供了依据.
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X射线对人外周全血细胞nm23-H1基因表达的影响
目的 应用实时荧光定量反转录PCR的方法,分析不同剂量X射线对人外周全血细胞nm23-H1基因表达的影响,探讨运用nm23-H1基因表达变化作为电离辐射生物剂量计的可行性.方法 采用X射线照射人外周全血细胞,于不同剂量(0-5 Gy)照射后不同时间点(0、6、12和24 h)收集细胞提取总RNA,并反转录为cDNA,利用实时定量PCR检测不同剂量照射后nm23-H1基因表达变化,分析其剂量-效应关系及时间-效应变化.结果 照后O h,各剂量组之间nm23-H1基因表达变化差异无统计学意义(F=0.478,P>0.05),照后6 h,在1-3 Gy照射剂量范围内,nm23-H1基因表达水平随剂量增加有增高的趋势(F=15.064,P<0.05),照后12 h,在1-5 Gy照射剂量范围内,nm23-H1基因表达水平随剂量增加而增高(F=3.435,P<0.05);照后24 h,各剂量组之间差异无统计学意义(F=0.444,P>0.05).0、4和5 Gy照射后,nm23-H1基因表达水平随时间的推移降低(F=8.636、4.112、5.411,P<0.05);1 Gy照射后,不同时间点nm23-H1基因表达水平差异无统计学意义,仅12 h的nm23-H1基因表达水平与O h的表达水平差异有统计学意义(t=-2.527,P<0.05);2和3 Gy剂量照射后,nm23-H1基因表达水平均于24 h时降至低点(F=12.517、6.622,P<0.05).结论 电离辐射可诱导人外周血nm23-H1基因的表达改变,该基因的表达变化具有作为电离辐射生物剂量计应用于核辐射事故早期生物剂量估算的潜能.
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乳腺肿瘤中nm23-H1、MTA1蛋白表达与癌浸润转移的关系
目的 探讨nm23-H1、MTA1蛋白在乳腺肿瘤中的表达情况,研究其在乳腺癌发生、发展中的生物学意义并观察其与乳腺癌浸润及转移的内在关系.方法 采用免疫组化SP法检测50例乳腺肿瘤组织中nm23-H1和MTA1蛋白的表达情况.结果 乳腺浸润性导管癌组织nm23-H1蛋白阳性表达率明显低于乳腺纤维腺瘤(P＜0.05);乳腺浸润性导管癌组织MTA1蛋白阳性表达率明显高于乳腺纤维腺瘤(P＜0.05);乳腺肿瘤中nm23-H1和MTA1蛋白表达呈负相关(P＜0.05).结论 MTA1蛋白高表达及nm23-H1蛋白低表达与乳腺癌发生浸润转移有关,二者在乳腺癌发生浸润转移过程中可能起着正负调控作用.联合检测此指标的表达状况将有助于乳腺癌的早期诊断和预后判断.
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宫颈癌组织中caspase-3与nm23-H1 基因的表达及其意义
目的探讨宫颈癌组织中caspase-3与nm23-H1基因表达的特征及相关性.方法应用免疫组织化学方法(SP法)分别检测caspase-3和nm23-H4基因在41例宫颈癌组织、17例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)和10例正常宫颈组织中的表达,分析其与临床病理特征的相关性.结果caspase-3在宫颈癌组织和CIN中的阳性表达率均明显低于正常宫颈组织中的阳性表达率(P＜0.05);caspase-3的表达与宫颈癌的组织类型、病理分级和临床分期无相关性(P＞0.05).nm23-H4基因在宫颈癌组织中的阳性表达率与CIN及正常宫颈组织相比均具有显著性差异(P＜0.05);nm23-H1的阳性表达与宫颈癌的临床分期、组织类型、病理分级无相关性(P＞0.05).caspase-3基因的表达与nm23-H1基因的表达无相关性(P＞0.05).结论caspase-3和/或nm23-H1基因的表达降低与宫颈癌的发生密切相关.
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nm23-H1蛋白和mRNA表达与胃癌的关系
目的 探讨nm23-H1蛋白和mRNA表达与胃癌生物学行为的关系.方法 采用免疫组化SP法和原位杂交技术检测57例胃癌组织中nm23-H1蛋白和mRNA的表达情况.结果 nm23-H1蛋白和mRNA表达均与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期及组织分化明显相关,而与肿瘤大小和Lauren分型不相关.结论 nm23-H1基因与胃癌的发生、发展、浸润和转移密切相关.
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银杏外种皮提取物对C57BL/6J小鼠Lewis肺癌转移的抑制作用及其机制
目的 研究银杏外种皮提取物(GBEE)对小鼠Lewis肺癌转移的抑制作用及其作用机制.方法 制备C57 BL/6J小鼠Lewis肺癌转移模型,随机分为正常对照、模型对照、替加氟80 mg· kg-1(阳性对照)和GBEE 50,100和200 mg· kg-1治疗组.正常和模型对照组ig给予等体积生理盐水,给药组分别ig给予相应药物,每天1次,连续15d.给药结束后第2天剥瘤称取瘤质量,计算抑瘤率;摘取肺组织,Bouin's液固定后于解剖显微镜下计数肺表面转移灶,计算肺癌转移率和抗转移率;放射免疫法测定血清Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)和透明质酸(HA)的含量;免疫组织化学法检测移植瘤细胞CD44和nm23-H1蛋白的表达.结果 GBEE 50,100和200 mg· kg-1对C57BL/6J小鼠Lewis肺癌移植瘤生长具有明显的抑制作用(P＜0.05,P＜0.01),移植瘤瘤质量分别为2.6±0.4,2.3±0.4和(2.3±0.6)g,抑瘤率分别为21.3％,32.2％和29.6％.模型对照组小鼠Lewis肺癌转移率为70％,GBEE 50,100和200 mg·kg-1治疗组肺癌转移率分别为50％,30％和40％.与模型对照组比较,GBEE 100 mg·kg-1治疗组小鼠肺癌转移灶明显减少(P＜0.01),抗转移率为87.5％;50和200 mg· kg-1无明显影响.与模型对照组比较,GBEE 50,1 00和200 mg·kg-1可明显降低小鼠血清中Coi Ⅳ和HA含量(P＜0.01),抑制小鼠Lewis肺癌移植瘤细胞CD44蛋白表达,并促进nm23-H1蛋白表达(P＜0.05,P＜0.01).结论 GBEE对Lewis肺癌转移模型小鼠具有抗肿瘤转移作用,其机制可能与增加肿瘤转移抑制基因nm23-H1表达、抑制肿瘤细胞黏附分子CD44表达并降低血清Col Ⅳ和HA含量有关.
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Galectin-3、ret、nm23-H1蛋白与喉癌浸润转移的关系
目的研究Galectin-3、ret、nm23-H1蛋白与喉鳞状细胞癌（LSCC）的肿瘤浸润、转移的关系。方法应用免疫组织化学SP法，检测30例LSCC标本癌组织中Galectin-3、ret及nm23-H1蛋白的表达情况。结果 Galectin-3、ret在LSCC不同病理分化组间的表达差异均有统计学意义（P＜0.05），nm23-H1的表达差异无统计学意义；此三种蛋白在不同的临床分期及有无淋巴结转移组间比较差异均有统计学意（P＜0.05）；nm23-H1的表达与Galectin-3、ret的表达呈负相关，Galectin-3与ret的表达无明显相关（P＞0.05）。结论 Galectin-3、ret、nm23-H1与LSCC的浸润、转移密切相关。
关键词： 喉鳞状细胞癌 Galectin-3 RET nm23-H1 -
喉癌中ret、Galectin-3、nm23-H1蛋白的表达及意义
目的 探讨ret、Galectin 3及nm23 Hi蛋白在喉癌中的表达及其生物意义.方法 采用免疫组织化学SP法,分别对喉癌组织、喉癌旁组织及正常喉部黏膜组织各30例标本中nm23-Hl、ret和Galectin 3的表达进行检测.结果 ①ret、Galectin-3及nm23-H1蛋白阳性表达主要定位于细胞质,ret、Galectin 3在三组中的表达阳性率呈依次降低趋势,在喉癌组织组中两者阳性率明显高于正常喉部黏膜组、喉癌旁组织组,差异具有统计学意义(P＜0.05),而nm23-H1表达则与以上两者表达状况相反.②喉癌中nm23-H1与ret、Galectin-3表达呈负相关(P＜0.05);ret与Galectin-3表达无明显相关(P＞0.05).结论 喉癌组织中ret、Galectin-3阳性表达率升高或nm23-H1阳性表达率下降,提示喉肿瘤的浸润和转移能力增强,联合检测三种指标的表达将有助于喉癌的早期诊断和预后判断.
关键词： 喉癌 RET Galectin 3 nm23-H1 -
nm23-H1与胃癌的分化、浸润转移的关系
目的分析nm23-H1在胃癌分化、浸润转移中的作用及其表达的临床意义.方法应用ABC免疫组化方法,研究46例原发性胃癌组织及其转移淋巴结nm23-H1的表达.结果 45.6%(21/46)的胃癌nm23-H1表达下降.nm23-H1的高表达与Borrmann分型、组织学分型无关(P>0.05),而与肿瘤大小、胃癌浸润深度、临床病理分期、淋巴结转移密切相关(P<0.05).另外54.4%的分化型胃癌nm23-H1的表达高于其淋巴结转移癌,而在低分化型胃癌中有53.8%.结论 nm23-H1可能对胃癌的浸润、淋巴结转移有抑制作用,但与胃癌的分化无关.
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鼻咽癌nm23-H1基因外显子的检测
目的 检测肿瘤转移抑制基因nm23-H1在鼻咽癌中的变化情况,探讨nm23-H1与NPC发生发展的关系.方法 提取鼻咽癌患者及慢性鼻咽炎患者组织中基因组DNA,采用不对称PCR-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术,分别对鼻咽癌患者及慢性鼻咽炎患者组织中nm23-H1基因第1、2、3、4和第5外显子进行研究.结果 在30例鼻咽癌患者组织中发现1例患者的nm23-H1第1外显子出现突变条带,慢性鼻咽炎患者的鼻咽组织无nm23-H1各外显子突变.结论 nm23-H1基因突变在NPC组织中为小概率事件,NPC病理类型、有无转移与nm23-H1基因突变无明显相关性.
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P21、nm23-H1与食管癌浸润和转移的关系分析
目的 探讨p21、nm23-H1与食管癌浸润和转移的关系.方法 应用免疫组织化学法,检测食管癌P21和nm23-H1的表达.结果 P21和nm23-H1在食管癌中的阳性率分别为55.0%和63.3%.p21与浸润深度相关,nm23-H1与淋巴结转移相关.结论 P21和nm23-H1可作为判断食管癌浸润和转移的指标之一.
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组织蛋白D和E-钙黏附蛋白与乳腺癌患者预后的关系
目的 探讨E-Ca、Ca-D 在乳腺癌预后中的作用及相互关系.方法 对106 例浸润性乳腺癌患者的肿瘤组织石蜡切片采用免疫组织化学染色技术标记E-Ca、Ca-D.结果 肿瘤间质内Ca-D 表达强度与复发呈正相关.E-Ca 表达在导管癌内表达强于小叶癌.乳腺癌组织中nm23-H1 蛋白表达明显降低,与生存期呈正相关,与复发期呈负相关(P ＜ 0.05).MVD 在复发组高于对照组.结论 ① Ca-D、MVD、nm23-H1 在乳腺癌组织内共同参与癌组织的浸润和转移,可作为预后的判断指标.② E-Ca 作为预后判断不理想,但可以作为差分化小叶癌和导管癌的鉴别诊断依据.
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nm23-H1基因与非小细胞肺癌转移的关系
目的 探讨nm23-H1 基因表达与非小细胞肺癌转移的关系.方法 选择笔者所在医院2006 年2 月～ 2011 年10 月收治的肺癌手术患者46 例,应用免疫组织化学SABC 方法对46 例NSCLC 组织标本进行nm23-H1 表达的检测.结果 46 例NSCLC 中nm23-H1 过度表达为50 %(23/46),其中鳞癌nm23-H1 过度表达为47.62 %(10/21),腺癌为58.33%(7/12),两者比较差异有统计学意义(P ＜ 0.05);nm23-H1 的阳性表达与淋巴结转移呈负相关(P ＜ 0.01).结论 nm23-H1 可作为预测NSCLC 淋巴结转移及预后的指标.
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肺腺癌组织中nm23-H1基因表达与预后的关系
目的 研究nm23-H1基因在肺腺癌组织中的表达与预后的关系.方法 SP法检测48例石蜡包埋肺腺癌组织中nm23-H1基因的表达;应用Kaplan-Meier及多变量比例风险模型分析基因表达与预后的关系.结果 ①48例肺腺癌组织中nm23-H1基因表达率为68.8%,淋巴结转移阳性组其表达率(52.0%)明显低于淋巴结转移阴性组(87.0%).P＜0.05;生存时间＜3年组其表达率(41.2%)明显低于生存时间≥3年组(83.9%),P＜0.05;②多因素Cox回归分析显示TNM分期和nm23-H1基因表达反映肺腺癌预后情况,风险度分别为2.015和0.313.结论 nm23-H1基因表达与淋巴结转移呈负相关,与生存时间呈正相关.检测nm23-H1基因表达可能有助于筛选出具有高转移危险的患者.
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Ki-67、FHIT、c-myc、nm23-H1与肿瘤的研究进展
肿瘤的发生是一个多基因、多因素参与的过程,原癌基因的异常和结构改变以及抑癌基因的失活与突变,可导致细胞癌变.肿瘤增殖抗原Ki-67可反映肿瘤细胞的增殖活性,从而判断肿瘤的恶性程度.c-myc是作为促进细胞分裂的基因和决定细胞从G0/G1期进入S期的"开关",其编码的蛋白介导细胞外的生物信号向细胞核内传递,与细胞增殖分化及癌变有密切关系.
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转移抑制基因nm23-H1及在母胎界面的表达
母胎界面的滋养细胞具有类似恶性肿瘤细胞的侵袭能力,但滋养细胞的侵袭受到严格控制.转移抑制基因nm23-H1广泛表达于多种肿瘤细胞,可有效抑制肿瘤细胞的侵袭与转移.nm23-H1亦在母胎界面表达,并可能对滋养细胞的增殖、侵袭、分化以及凋亡等生物学功能发挥重要的调节作用.进一步研究nm23-H1在母胎界面的生物学作用将有助于更加全面认识胚泡植人及滋养细胞侵袭调控,并且具有潜在的临床应用价值.
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转移抑制基因nm23-H1在结肠癌患者组织中的表达及其临床意义
目的 探究转移抑制基因nm23-H1在结肠癌患者组织中的表达及其临床意义.方法 回顾性分析154例结肠黏膜病变患者临床资料,根据其病理检查结果分为观察组(结肠癌,n=68)与对照组(结肠息肉,n=86).采集两组患者病灶组织标本后进行免疫组织化学法(IHC)检测,分析两组nm23-H1蛋白表达差异及其与肿瘤淋巴转移、远处器官转移、Duke's大肠癌分期的相关性.结果 观察组病灶标本nm23-H1蛋白表达阳性率明显低于对照组(P<0.05),且其中有淋巴结转移亚组<无淋巴结转移亚组<对照组,有远处器官转移亚组<无远处器官转移亚组<对照组,组间差异均有统计学意义(P<0.05).经Spearman相关性分析,可知结肠癌淋巴结转移、远处器官转移与其组织nm23-H1蛋白表达呈显著负相关(P<0.05).结论 结肠癌组织中nm23-H1蛋白表达阳性率较低,且与其转移潜力相关性良好,可为患者预后评估提供可靠依据.
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nm23-H 1 mRNA在舌癌中的表达及其与肿瘤侵袭和转移的关系
目的 分析nm23-H 1 mRNA在舌癌中的表达及其与肿瘤侵袭和转移的关系.方法 以2014年2月-2016年1月病理确诊的舌癌患者70例为研究对象,将病理确诊的石蜡标本为观察组,取其癌旁正常组织(距离癌组织0.5～1 cm)为对照组,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定两组组织中nm23-H 1 mRNA表达水平,并分析其与肿瘤侵袭、转移、预后等的关系.结果 观察组nm23-H 1 mRNA表达水平低于对照组(P<0.05);不同性别、年龄舌癌患者nm23-H 1 mRNA表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05),肿瘤分化程度中、低者nm23-H 1 mRNA表达水平低于分化程度高者,临床分期T3～T4期nm23-H 1 mRNA表达水平低于T1～T2期,淋巴结转移N+期nm23-H 1 mRNA表达水平低于N0期,生存时间≤3年者nm23-H 1 mRNA表达水平低于生存时间>3年者(P<0.05);相关性分析表明,舌癌患者nm23-H 1 mRNA表达水平与其临床分期、淋巴结转移呈负相关(r=-0.389、-0.431,P<0.05),与其生存时间呈正相关(r=0.365,P<0.05).结论 nm23-H 1 mRNA在舌癌中低表达,且其表达水平与肿瘤侵袭、转移呈负相关,而与生存时间呈正相关,监测其表达水平对术后辅助治疗有重要意义.
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K562细胞nm23-H1基因沉默对其向巨核细胞分化的影响
目的 探讨nm23-H1沉默对K562细胞向巨核细胞分化的影响.方法 采用Lipofectamine2000将靶向nm23-H1基因的RNA干扰质粒pSileneerTM 4.1-CMV-sinm23及空质粒转染K562细胞,经G418筛选建立该基因稳定下调的K562细胞(K562-sinm23细胞)及空质粒转染K562细胞(K562-siNC细胞),实时定量PCR、免疫组织化学、蛋白印迹反应等方法证实了nm23基因沉默细胞构建成功.NBT还原比色试验检测细胞分化能力.流式细胞术检测在诱导剂佛波酯作用下K562-sinm23细胞表面巨核细胞分化抗原GP Ⅱ b-Ⅲa(CD41)的表达.蛋白印迹法检测细胞在佛波酯诱导后ERK1/2磷酸化活性.结果 与K562细胞和K562-siNC细胞比较,pSilencerTM 4.1-CMV-sinm23能够沉默内源性nm23-H1 mRNA的表达,基因水平和蛋白水平的沉默效率分别达到75%和70%.经佛波酯诱导,与K562-siNC细胞比较K562-sinm细胞的分化能力明显增强(NBT还原能力A值分别为0.23±0.05和0.31±0.07).nm23-H1基冈调控K562细胞向巨核细胞分化与ERK1/2磷酸化活性增强有关.结论 成功构建了nm23-H1基因稳定下调表达的K562细胞株,并且证明nm23-H1参与了K562细胞向巨核细胞系的分化.
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胆管癌细胞中nm23-H1蛋白的表达及临床意义
目的:探讨人胆管癌细胞中nm23-H1的表达水平与胆管癌转移的关系.方法:应用S-P免疫组化法对52例人胆管癌细胞中nm23-H1的表达水平进行研究.结果:nm23-H1低表达者淋巴结转移率(60.0%)高于正常表达者(19.0%,P＜ 0.05),并且nm23-H1基因的表达水平和胆管癌组织学类型、分化程度存在明显相关(P＜ 0.05).结论:nm23-H1的低表达在胆管癌的淋巴转移中起重要作用.
