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间歇应用去铁胺降低重度珠蛋白生成障碍性贫血儿童铁负荷的研究
目的观察去铁胺(DF)对重度珠蛋白生成障碍性贫血(β地中海贫血,β地贫)患儿长期采用输血治疗后铁负荷过多的驱铁作用.方法 16例确诊为β地贫患儿,明确体内铁负荷过高时应用去铁胺治疗,共治疗124例次.每次治疗前后用放射免疫方法检测其血清铁(SI)、铁蛋白(SF)及尿SF水平,比较用药前后铁负荷变化.并观察DF治疗对肝肾功能的影响.结果重型β地贫患儿长期高量输血治疗后铁负荷明显增高,SI、SF分别为33.69±6.72 mmol/L、441.19±54.70 μg/L,尿SF为8.64±6.79 μg/L(与对照组相比t=6.173 P<0.01).124例次DF治疗后与治疗前相比,尿铁蛋白排出量明显增加,血清SI、SF明显下降,SI 16.66±3.39 mmol/L、SF 102.34±20.48 μg/L,尿SF为14.15±9.34 μg/L(t=5.598 P<0.01).肝肾功能无明显变化(t=2.132 P>0.05).结论间歇应用DF静脉滴注治疗铁负荷过多,驱铁效果肯定,安全,无明显毒副作用.
关键词： 去铁胺 铁螯合剂 珠蛋白生成障碍性贫血 -
铁剥夺对K562细胞动态铁池的改变及凋亡相关基因表达的影响
目的探讨去铁胺(DFO)对白血病细胞K562动态铁池(LIP)、凋亡和凋亡相关基因表达的影响及其分子机制.方法实验分为DFO组、DFO+三氯化铁组及空白对照组,分别采用钙黄绿素检测K562细胞LIP改变、流式细胞术观察K562细胞凋亡和RT-PCR测定K562细胞c-myc、Rb、bax mRNA表达.结果1.不同浓度的DFO作用于K562细胞后,随培养时间延长及DFO浓度增加,LIP降低,细胞生存率逐渐下降,显示一定的时间剂量依赖性.2.不同浓度的DFO作用于K562不同时间后,细胞凋亡增加,高于对照组(P＜0.05);3.RT-PCR结果显示,DFO能明显上调c-myc、Rb和bax mRNA表达(P＜0.05).结论DFO可诱导K562细胞凋亡;其诱导K562细胞凋亡作用可能与其螯合细胞内铁,降低细胞UP,上调细胞凋亡相关基因c-myc、Rb、bax mRNA表达密切相关.
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不同铁状态下HL-60细胞中IRP2 mRNA的表达
目的 本研究通过加铁和去铁干预试验,了解不同铁状态下IRP2在人白血病HL-60细胞中的表达情况.方法 将FeCl3或去铁胺(Desferrioxamine,DFO)加入含有体积分数10%胎牛血清的RPMI-1640培养液中,使HL-60细胞处于缺铁或富铁的不同状态下培养.于细胞培养后第12、24和48 h收集各组细胞,提取细胞总RNA.采用RT-PCR半定量法测定IRP2 mRNA的相对表达量.结果 各实验组之间IRP2 mRNA的表达量变化不大,组间差异无统计学意义(F=1.199,P＞0.05),但随细胞培养时间的延长,IRP2 mRNA的表达降低,组内差异有统计学意义(F=43.418,P＜0.05).结论 细胞内铁水平状态可能不影响IRP2 mRNA的表达.
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铁剥夺对K562细胞凋亡及细胞周期的影响
目的:观察铁剥夺诱导K562细胞的凋亡及对细胞周期的影响.方法:实验组以不同浓度(25 μmol/L、50 μmol/L)的去铁胺处理K562细胞,25 μmol/L去铁胺加等浓度的三氯化铁作对抗组,设空白对照组,分别收集不同时间点(16 h、24 h、32 h、48 h、72 h)的细胞,用磷脂结合蛋白V/碘化丙啶(Annexin V/PI)进行双标记,荧光显微镜观察凋亡细胞的形态变化.用流式细胞仪分析细胞凋亡率和细胞周期特征.结果:K562细胞经25 μmol/L、50 μmol/L的去铁胺处理后发生了不同程度的凋亡,随着时间延长和剂量增加,细胞凋亡率增加(P＜0.05).细胞周期检测发现25 μmol/L、50 μmol/L的去铁胺处理K562细胞48 h和72 h后,G0/G1期细胞数较对照组升高,S期细胞数和细胞增殖指数均较对照组降低(P＜0.05.结论:铁剥夺可抑制K562细胞增殖并诱导细胞凋亡,机制可能是通过剥夺细胞内铁阻止细胞进入S期.
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铁剥夺对化疗药物诱导HL-60细胞凋亡的影响
目的: 探讨铁剥夺诱导HL-60细胞及对化疗药物诱导HL-60细胞凋亡的影响.方法: HL-60细胞与不同浓度的铁螯合剂-去铁胺(DFO)、DFO加化疗药物、化疗药物、DFO加化疗药物及三氯化铁、三氯化铁共同培养6 h、12 h、24 h、48 h.通过测定细胞活力,观察细胞形态学变化,应用流式细胞仪检测和DNA凝胶电泳等方法观察细胞凋亡;通过亲和免疫组化方法检测c-myc基因表达,从而确定DFO及DFO 与化疗药物联合应用对HL-60细胞的作用.结果: DFO 单用可降低HL-60细胞活力,抑制HL-60细胞增殖,诱导HL-60凋亡,并可使c-myc基因表达增加,其作用强度随培养时间延长及DFO浓度增加而增加;DFO与化疗药物联合时,可增加化疗药物HL-60细胞凋亡的作用,该作用可被等摩尔的三氯化铁抵消.结论: 铁剥夺可影响HL-60细胞DNA的合成,诱导其凋亡,并提高HL-60细胞对化疗药物的敏感性.因此,铁剥夺可作为临床上白血病治疗或辅助治疗的方法之一,不适当补铁或升高血红蛋白将影响化疗疗效.
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去铁胺促进δ-氨基酮戊酸诱导皮肤成纤维细胞的光动力学效应
目的 探讨去铁胺对δ-氨基酮戊酸(ALA)诱导的皮肤成纤维细胞光动力学效应的影响.方法 体外培养人皮肤成纤维细胞,分为空白对照组、ALA组、去铁胺组及ALA+去铁胺组.37℃下避光孵育3 h后,检测细胞内原卟啉Ⅸ(PpⅨ)水平、细胞增殖情况(吸光度A值)和细胞存活率.对检测出PpⅨ的细胞组予以632.8 nm波长He-Ne激光照射,流式细胞术测定细胞死亡率与凋亡率.结果 He-Ne激光照射前,各组细胞的吸光度A值和存活率比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);空白对照组与去铁胺组的细胞皆未检测出PpⅨ,而ALA组与ALA+去铁胺组的细胞内PpⅨ水平分别为(0.47±0.04)μg/L和(0.85±0.08)μg/L,2组差异有统计学意义(P＜0.05).He-Ne激光照射后,ALA组和ALA+去铁胺组的细胞凋亡率分别为14.1%和21.5%,2组差异有统计学意义(P＜0.05);细胞坏死率分别为2.7%和3.0%,2组差异有统计学意义(P＜0.05).结论 ALA和去铁胺都不影响皮肤成纤维细胞的基本生物学特征,去铁胺可促进ALA诱导的细胞内PpⅨ生成并增强光动力学效应.
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间歇静脉输注去铁胺治疗老年人继发性铁过载的临床研究
目的:观察间歇静脉输注去铁胺治疗老年人继发性铁过载的效果及安全性.方法:20例老年继发性铁过载患者应用去铁胺20～50 mg/(kg·d),大剂量用至2000 mg/d,加入0.9％氯化钠500 ml中,持续静脉滴注6h,每4～5周连续应用5～6 d.结果:治疗9个月后,血清铁蛋白从治疗前(2 977.57±506.63) μg/L下降到(2 676.57±532.26)μg/L(P＜0.01),去铁治疗的反应率为57.1％.结论:间歇静脉输注去铁胺治疗老年人继发性铁过载能显著降低血清铁蛋白,且无明显不良反应.
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去铁胺治疗骨髓增生异常综合征及再生障碍性贫血患者输血依赖性铁过载的临床观察
近年来,对于骨髓增生异常综合征(MDS)及再生障碍性贫血(AA)等患者由于长期反复输血导致输血依赖性铁过载已越来越受到国内外学者的广泛关注.体内的铁过量沉积于心脏、肝脏及内分泌系统,会引起心功能衰竭、心律失常、肝纤维化、糖尿病等并发症,从而影响患者的生存期及生存质量.
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输血中铁过载致高血糖临床分析
目的:观察输血中铁过载对血糖的影响.方法:对比21例铁过载患者的血糖情况,及接受去铁治疗后1、3、6个月的铁蛋白、血糖变化情况,并评价治疗效果.结果:21例铁过载患者中发现高血糖共11例,发生率52.4％,其中8例接受了去铁胺治疗,可评价的有7例,去铁治疗后1个月铁蛋白明显下降,治疗前后比较,差异有统计学意义(P＜0.01).去铁治疗后3个月血糖明显下降,治疗前后比较差异有统计学意义(P＜0.05).治疗后6个月除2例糖尿病仍需胰岛素治疗外,其余5例血糖均恢复正常.2例胰岛素用量较前减少30％.去铁治疗前铁蛋白与血糖高度相关,相关系数r=0.938,双侧Pearson检验P＜0.01.结论:铁过载患者高血糖发生率高(52.4％),去铁治疗能有效降低血糖水平,能反应去铁治疗后促进脏器功能恢复的作用,易于评价去铁治疗的效果.
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抗霉素诱导肾小管上皮细胞铁死亡的实验研究
目的:观察抗霉素诱导肾小管上皮细胞发生铁死亡(ferroptosis)的现象,初步探讨铁死亡参与急性肾损伤的病理生理机制.方法:以1、2.5、5、10 μmol/L抗霉素A(antimycin A)干预人近曲小管上皮细胞(HK-2)2、4、8、16、24h.MTT法检测细胞存活率,乳酸脱氢酶检测细胞活性,透射电镜检测细胞线粒体形态,Western blot检测凋亡关键蛋白(caspase3)活化,流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS).结果:HK-2细胞存活率随着抗霉素作用剂量和时间的增加而下降(P＜0.01).2.5 μmol/L抗霉素A干预HK-2细胞2h后,细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)释放明显增加(P＜0.01),电镜观察发现铁死亡特征性改变,细胞线粒体膜密度增加,线粒体嵴减少,细胞内ROS含量明显增加(P＜0.05).与抗霉素模型组相比,铁螯合剂去铁胺(deferoxamine)、铁死亡特异性拮抗剂Ferrostatin-1预处理HK-2细胞能明显减少抗霉素A损伤后LDH的释放、线粒体损伤及ROS的产生(P＜0.05),且该过程不伴有caspase3活化.结论:在缺氧诱导肾小管上皮细胞损伤过程中,铁死亡可能是肾小管上皮细胞较早出现的损伤方式;抑制细胞铁死亡的发生可以减轻缺氧对肾小管上皮细胞的损害.
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去铁胺预处理对幼龄大鼠深低温脑缺血/再灌注损伤的影响
复杂先天性心脏病外科手术中往往需要采用深低温停循环或深低温低流量,但一旦时间过长,均可能造成不同程度的神经系统后遗症.我们通过建市幼龄大鼠深低温缺血/再灌注模型,并检测脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮合酶(NOS)及一氧化氮(NO),探讨去铁胺对脑损伤的影响及可能的保护机制.
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去铁胺在大鼠自体肝移植术后余肝细胞凋亡中的作用
目的 探讨去铁胺预处理对大鼠自体肝移植余肝细胞凋亡的作用及机制.方法 建立大鼠自体肝移植模型,将96只健康雄性SD大鼠随机分为去铁胺预处理(D组)32只,注射用水对照组(C组)32只和假手术模型(S组)32只.分别于术后0.5、2、6、24 h各时间点处死大鼠,检测血清ALT和AST水平;做病理组织学检查,免疫组织化学检测缺氧诱导因子(HIF)-1α、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1及bcl-2蛋白的表达,TUNEL测定细胞凋亡.结果 在各个时间点,D组血清ALT及AST水平及IL-1、TNF-α蛋白表达量和凋亡指数明显低于C组(P<0.01),而HIF-1α和bcl-2蛋白表达量明显高于C组(P<0.01).结论 去铁胺预处理对大鼠自体肝移植余肝细胞凋亡具有保护作用,其作用机制部分可能与促进HIF-1α表达上调,从而降低炎性因子水平,促进bcl-2表达达到抑制细胞凋亡的作用.
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去铁胺对高铁环境下成骨细胞分化的影响
目的 观察去铁胺(DFO)对于高铁环境[利用枸橼酸铁铵(FAC)提供铁离子制作高铁环境]下成骨细胞分化的影响.方法 通过细胞计数试剂盒(CCK-8)法确定FAC及DFO的干预计量.实验分为3组:对照组、50 μmol/L FAC干预组、FAC+ DFO组(50 μmol/L FAC干预同时加入20 μmol/L DFO).干预后3组细胞分别行碱性磷酸酶(ALP)染色和活性定量,茜素红染色、钙结节计数,对成骨相关基因[Runt相关基因2(Runx2)、锌指转录因子SP7、骨γ羧基谷氨酸(Bglap)、骨保护素(0PC)]利用实时荧光定量核酸扩增检测系统(QPCR)检测其mRNA的表达水平.结果 CCK-8结果显示,50tμmol/L FAC干预组成活率为(95.6±0.7)％,20 μmol/L DFO干预组成活率[(97.6±0.5)％]不影响细胞活性,各组差异无统计学意义(P =0.427).与对照组比较,FAC干预组,成骨相关基因Runx2、Sp7、Bglap、OPG表达下降;而FAC+ DFO干预组与FAC干预组比较成骨相关基因表达上升,差异有统计学意义(P=0.026).ALP染色及活性定量和茜素红染色及结节计数与对照组比较,FAC组结节计数(36±3)下降,而FAC+ DFO组结节计数(120±6)比FAC组上升,差异有统计学意义(P=0.017).结论 在高铁环境中,成骨细胞分化受到抑制;DFO干预可在一定程度上恢复高铁环境下成骨细胞分化.
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甲磺酸去铁胺对抗庆大霉素耳毒性的实验研究
目的观察铁螯合剂--甲磺酸去铁胺(deferoxamine mesylate,DFO)对抗庆大霉素(gentamicin,GM)耳毒性的作用.方法将豚鼠随机分为GM组、DFO组、GM+DFO组及对照组,采用听性脑干反应(ABR)、耳蜗铺片及透射电镜技术,观察用药前后听阈及形态学改变,并检测DFO对庆大霉素血药浓度的影响.结果 GM组8 kHz ABR阈值逐渐升高40～60 dB;GM+DFO组阈移为15～25 dB,差异显著(P＜0.05).高频听阈损伤明显比低频更重(P＜0.01).形态学变化与听力变化平行.DFO对庆大霉素血药浓度没有影响.结论证实DFO能有效减轻GM的耳毒性作用,DFO可能成为预防庆大霉素耳毒性的有效药物.
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低氧条件下HIF-1促进血管生成作用的研究进展
低氧诱导因子1(hypoxia-inducible factor 1,HIF-1)广泛参与动物细胞中缺氧诱导产生的适应性反应,是细胞适应低氧的重要蛋白转录调节因子.生理条件下,低氧、CoCl2、去铁胺等均可诱导细胞产生HIF-1.低氧是HIF-1的主要诱导因素,这些因素可以上调HIF-1的表达,使其活性增高;HIF-1与靶基因结合,促进靶基因转录,引起一系列的细胞对缺氧的反应,从而促进糖降解,调节血管收缩以及促进红细胞生成,加速血管形成.
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慢性铁过载的检测与除铁治疗
临床某些慢性疾病需要长期、频繁的输血造成慢性铁过载, 常出现面色铁青、心力衰竭、心律不齐、肝硬化、生长发育障碍、糖尿病等[1-4],其中心脏病变是输血依赖性地中海贫血患者主要的死因[5].本文对慢性铁过载的检测与除铁治疗进行综述,为临床治疗提供借鉴.
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去铁胺诱导K562细胞凋亡研究
目的 探讨铁鳌合剂去铁胺(DFO)诱导白血病细胞凋亡的分子机制.方法 实验分为DFO组(终浓度分别为10、50、100μM)、DFO+FeCl3(各10μmol/L)组及空白对照组.用钙黄绿素检测K562细胞可变铁池.锥虫蓝活细胞拒染实验进行活细胞计数及细胞存活率测定;光镜形态学观察及流式细胞仪方法检测K562细胞凋亡;比色法检测caspase-3活性.结果 (1)DFO作用于K562细胞后,随培养时间延长及DFO浓度的增加,动态铁池降低,细胞生存率逐渐下降,凋亡率增加,显示一定的时间剂量依赖性;而DFO+FeCl3组细胞凋亡率与空白对照组差异无统计学意义.(2)50μmo/L、100μmol/L DFO作用于K562细胞24h时,caspase-3酶活性升高明显,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01);相关分析结果显示,K562细胞铁池的荧光改变与caspase-3活性变化呈负相关(r=-0.894,P<0.05).结论 DFO诱导白血病细胞凋亡的作用可能与鳌合细胞内铁,降低细胞可变铁池,激活caspase-3有关.
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去铁胺联合阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡作用的实验研究
目的探讨铁螯合剂联合阿糖胞苷诱导HL-60细胞凋亡的作用.方法实验分为5组:空白对照组、去铁胺组、阿糖胞苷组、去铁胺+阿糖胞苷组、去铁胺+阿糖胞苷+三氯化铁组.上述各组与HL-60细胞共同培养6,12,24,48 h.通过测定细胞活力、形态学变化、流式细胞仪检测和DNA凝胶电泳等观察细胞凋亡等方法观察诱导HL-60细胞的作用.结果去铁胺+阿糖胞苷可协同降低HL-60细胞活力、抑制HL-60细胞增殖、诱导HL-60细胞凋亡,其作用随培养时间延长及药物浓度增加而增强.结论铁螯合剂协同阿糖胞苷具有增强诱导HL-60细胞凋亡的作用.
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铁离子螯合剂对肝细胞冷缺血再灌注损伤的保护机制研究
目的 研究铁螯合剂去铁胺(DFO)对模拟冷缺血再灌注后肝细胞内铁离子浓度及细胞凋亡的影响.方法 培养肝细胞株HL-7702,随机分为对照组和DFO干预组.对照组未予DFO处理,DFO干预组按100、50和25μmol/L分为高、中、低3个浓度组,每组各8个样本,建立模拟冷缺血再灌注模型,分别检测各组细胞内Fe”离子浓度,MDA含量,细胞凋亡水平,以及各组上清液乳酸脱氢酶(LDH)水平.结果 肝细胞经冷缺血8h,DFO干预高、中、低浓度组Fe3+浓度分别为(1.36±0.14)、(1.92±0.24)和(2.09±0.28)mmol/L,均显著低于对照组(2.58±0.27)mmol/L,(P＜0.05);DFO高、中、低浓度组肝细胞凋亡率分别为(6.37±1.28)％、(14.07±2.61)％和(16.07±1.71)％,均低于对照组(20.53±1.58)％,(均P＜0.01).DFO高、中、低浓度组肝细胞内MDA含量分别为(1.83±0.63)、(2.60±0.26)和(2.74±0.32)nmol/mL,均显著低于对照组(3.57±0.45)nmol/mL(P ＜0.01).而再灌注8h时,DFO高、中、低浓度组肝细胞内MDA含量分别为(2.48±0.36)、(3.07±0.35)和(3.56±0.25)nmol/mL,均显著低于对照组(4.16±0.24)nmol/mL(P ＜0.05);在LDH水平测定中,DFO高、中、低浓度组上清液LDH水平分别为(216.67±22.22)、(263.68±7.16)和(297.57±21.06)u/L,均低于对照组(354.51±31.02)u/L(P ＜0.05).结论 铁螯合剂去铁胺可以通过降低冷保存时Fe3+浓度,从而减少肝细胞凋亡发生以达到减轻肝细胞冷缺血损害的目的.
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药物诱导SD大鼠大肠癌模型血清PpⅨ动力学实验研究
目的 探讨药物诱导SD大鼠大肠癌模型血清PpⅨ含量动力学变化规律.方法 45只成功诱导大肠癌的SD大鼠分3组:A组ALA尾静脉注射;B组DFO腹腔注射半小时后ALA尾静脉注射;C组等量生理盐水尾静脉注射.各组用药后分别在1、2、4、6和12 h经股动脉抽血,取其血清用高效液像色谱-荧光检测法测定PpⅨ含量.结果 A、B两组大鼠血清内PpⅨ含量明显高于对照(C)组,B组PpⅨ含量明显高于A组(P＜0.01);在0～2 h内血清PpⅨ的积聚率B组明显高于A组(P＜0.05),在4～6 h血清PpⅨ的清除率B组明显高于A组(P＜0.05).结论 DFO与ALA联合诱导,可使大肠癌SD大鼠体内PpⅨ迅速大量积聚并快速清除.
