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旋毛虫Ts21重组蛋白的免疫诊断价值及免疫保护作用的研究
目的 探讨旋毛虫Ts21重组蛋白的免疫诊断价值及免疫保护作用.方法 应用旋毛虫Ts21重组蛋白ELISA(Ts21-ELISA)与肌幼虫ES抗原ELISA(ES-ELISA)对旋毛虫病与其他寄生虫病患者血清及5种旋毛虫(T1、T2、T3、T4和T7)感染小鼠血清进行检测,并观察不同剂量旋毛虫感染小鼠后不同时间的血清抗体水平.将Ts21重组蛋白皮下注射免疫小鼠(20 ug/只,免疫3次,每次间隔10 d),末次免疫后10 d,每只小鼠用300条旋毛虫肌幼虫经口攻击感染,3.5 d和42 d后剖杀,观察肠道成虫与肌幼虫数并计算减虫率. 结果 Ts21-ELISA检测旋毛虫病、并殖吸虫病、囊尾蚴病及棘球蚴病患者血清的抗体阳性率分别为94.7%(18/19)、15.8%(3/19)、9.1%(1/11)和7.7%(1/13),与血吸虫病、华支睾吸虫病患者血清及健康人血清无交叉反应;Ts21重组蛋白与ES抗原ELISA检测旋毛虫病患者血清抗体的敏感性与特异性差异均无统计学意义(X2=0,P＞0.05;X2=0.358,P＞0.05).Ts21重组蛋白与Es抗原检测T1感染小鼠血清的敏感性差异无统计学意义(X2=0.104,P＞0.05),与T2、T3、T4、T7感染小鼠血清的交叉反应率明显低于ES抗原(X2=17.069,P＜0.05).小鼠感染300条旋毛虫后4周,应用Ts21-ELISA检测的血清抗体阳性率为100%(10/10);小鼠感染5条旋毛虫后6周,血清抗体阳性率为100%(10/10).Ts21重组蛋白免疫小鼠用旋毛虫攻击感染后3.5 d和42d,肠道成虫与肌幼虫减虫率分别为42.71%和49.8%.结论 Ts21重组蛋白可用于旋毛虫病的血清学检测,但不能忽视与并殖吸虫病、囊尾蚴病及棘球蚴病患者血清的交叉反应.
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日本血吸虫Sj23DNA疫苗的增效研究
目的 探讨缺失肿瘤转移有关基因ME491同源序列的日本血吸虫Mr23 000膜蛋白基因(Sj23DNA)突变体疫苗的免疫效果.方法 将Sj23DNA中与人黑素瘤细胞膜上的ME491同源序列进行基因缺失突变,再将突变基因转染真核细胞人胚肾HEK293细胞,通过间接荧光抗体试验(IFAT)检测其表达情况.将pcDNA3-Sj23突变体经股四头肌注射免疫小鼠(100 μg/只),免疫后4周取注射部位肌肉作冰冻切片,IFAT检测目的 基因的表达.40只BALB/c小鼠随机分成4组(每组10只),分别经股四头肌注射pcDNA3-Sj23突变体、pcDNA3-Sj23、空白质粒pcDNA3(均100 μg/只)和生理盐水(30 μl/只)免疫1次.免疫后4周用尾蚴攻击感染(40±2条/只).第42天剖杀,肠系膜静脉灌注法及挤压法计数成虫,取肝脏计算每克肝组织虫卵数(EPG).以减虫率和减卵率评价其免疫保护力.结果 pcDNA3-Sj23突变体疫苗可在真核细胞HEK293中瞬时表达.pcDNA3-Sj23突变体在小鼠注射部位骨骼肌细胞上出现较强荧光,空白对照组未见特异性荧光.pcDNA3-Sj23突变体获得40.3%减虫率和42.8%减卵率,pcDNA3-Sj23获得33.1%减虫率和28.9%减卵率.两组差异均有统计学意义(P值均＜0.05).结论 与pcDNA3-Sj23相比,缺失ME491同源序列的pcDNA3-Sj23突变体疫苗能诱导BALB/c小鼠产生更好的免疫保护效果.
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日本血吸虫SjCTPI-Hsp70 DNA疫苗与白细胞介素12对水牛的联合免疫保护作用研究
目的 探讨中国大陆株日本血吸虫磷酸丙糖异构酶-热激蛋白(SjCTPI-Hsp70)DNA疫苗联合佐剂白细胞介素-12(IL-12)质粒DNA对水牛的免疫保护作用.方法 实验采用双盲法,所用疫苗及制剂均在实验结束后解码.将购自非血吸虫病流行区45头8～10月龄健康水牛随机分为A组(SjCTPI-Hsp70+IL-12,300 μg)、B组(SjCTPI+IL-12,300 μg)和C组(空质粒pVAX+IL-12,300 μg)等3组(每组15头),每头牛分别经肩部肌肉注射免疫3次,每次间隔28 d.末次免疫后28 d,每头牛经大腿内侧皮肤感染日本血吸虫尾蚴1 000条.解剖前2 d及当天分别收集粪便1次,用定量法计数虫卵和毛蚴.攻击感染后56 d解剖,用生理盐水经胸主动脉灌冲法收集、计数成虫,检测每克肝组织虫卵数.结果 A、B组减虫率分别为51.2%和41.5%(χ2=1.89,P＞0.05),减雌虫率分别为48.9%和44.7%(χ2=0.35,P＞0.05),减粪卵率分别为52.1%和38.3%(χ2=3.84,P＜0.05),减毛蚴率为52.1%和33.2%(χ2=7.30,P＜0.01)及减肝卵率为61.5%和42.0%(χ2=7.61,P＜0.01).结论 用SjCTPI-Hsp70+IL-12免疫水牛可获得一定的免疫保护性作用.
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弓形虫ROP2核酸疫苗免疫保护作用的研究
目的 研究ROP2核酸疫苗对BALB/c小鼠的免疫保护作用.方法 42只BALB/c小鼠随机分为3组:实验组、空质粒组和PBS对照组,各组小鼠分别肌注pc-DNA3-ROP2重组质粒50μg、pc-DNA3空质粒50μg和PBS 50μl,共免疫3次,每次间隔3周,末次接种量均加倍.末次免疫后2周,各组分别取4只小鼠的血清、脾和淋巴组织,检测CD4+、CD8+及各细胞因子.其余各组每鼠腹腔攻击感染RH株弓形虫速殖子500个,观察其存活时间等.结果 ROP2核酸疫苗能诱发小鼠产生细胞免疫和体液免疫反应,小鼠血清抗体滴度高并能识别由基因重组体外诱导表达的ROP2蛋白抗原;实验组小鼠的CD4+T细胞增殖明显(69.5±3.4)%、CD4+/CD8+比值显著升高(4.69±1.32)%(P＜0.01);其脾、淋巴结细胞培养液及血清中白细胞介素-2(IL-2)、IL-4、IL-6、IL-12、γ干扰素(IFN-y)和肿瘤坏死因子(TNF)均有不同程度的升高,尤其是血清中升高为显著.弓形虫攻击感染180 h后,实验组小鼠免疫保护率为88.9%,与对照组相比,小鼠存活时间明显延长、初始死亡时间明显推迟(P＜0.01).结论 ROP2核酸疫苗具有较强的免疫原性,能产生良好的免疫保护作用.
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旋毛虫在小鼠先天性传播的初步研究
目的研究旋毛虫在小鼠的先天性传播并观察母鼠抗旋毛虫抗体对攻击感染的保护作用.方法将昆明小鼠分为受孕后感染组和感染后受孕组,子鼠出生后1 d内剖杀,检查旋毛虫幼虫;将正常母鼠所产子鼠由感染旋毛虫的母鼠喂养,21 d后宰杀,检查旋毛虫幼虫.用间接ELISA检测感染母鼠所产子鼠出生后不同时间的血清抗旋毛虫抗体,观察母鼠抗旋毛虫抗体对攻击感染的免疫保护.结果受孕后7 d感染旋毛虫的母鼠所产的6只子鼠中有2只感染旋毛虫;感染旋毛虫后8 d和22 d受孕雌鼠所产子鼠的感染率分别为20%(2/10)和25%(2/8),从子鼠检获的旋毛虫均是未成囊的幼虫.交叉哺乳实验表明正常母鼠所产的30只子鼠未见旋毛虫感染.感染母鼠所产27只子鼠出生后1、7、24及40 d的血清抗体阳性率分别为100%、100%、77.8%及14.8%,子鼠出生后40 d攻击感染的减虫率为62.0%;感染母鼠所产子鼠血清被动转移小鼠的减虫率55.7%,与对照组比较差异有显著性(P＜0.01).结论旋毛虫在小鼠可经胎盘传播,母鼠的抗旋毛虫抗体对子鼠抗攻击感染可能具有部分保护作用.
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日本血吸虫Mr 23 000抗原与白细胞介素-12多价DNA疫苗诱导小鼠保护性免疫的研究
目的研究能共同表达日本血吸虫Mr 23000膜抗原(Sj23)与白细胞介素-12(IL-12)的多价DNA疫苗PV-IL12-Sj23诱导BALB/c小鼠免疫保护作用.方法在多价DNA疫苗PV-IL12-Sj23和PV-IL12的基础上,构建空白质粒PV和仅表达Sj23的质粒PV-Sj23.50只BALB/c小鼠分为5组,每组10只,分别注射多价DNA疫苗PV-IL12-Sj23、表达Sj23的质粒PV-Sj23、表达IL-12质粒PV-IL12、空白质粒PV和生理盐水,100μg/只,免疫1次.4周后每只鼠攻击感染40±2条尾蚴,42 d后剖杀,计数成虫及肝内虫卵数.结果成功地构建了空白质粒PV和只表达Sj23的质粒PV-Sj23及多价DNA疫苗PV-IL12-Sj23.PV-IL12-Sj23组和PV-Sj23组分别获得了45.5%27.2%的减虫率,两组比较差异有显著性(P＜0.05),减卵率分别为58.4%和33.9%.结论多价DNA疫苗PV-IL12-Sj23可诱导BALB/c小鼠产生较显著的抗血吸虫免疫保护作用,且保护性效果比单价DNA疫苗PV-Sj23好.
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日本血吸虫极低密度脂蛋白结合蛋白重组抗原的免疫保护性研究
目的探讨日本血吸虫极低密度脂蛋白结合蛋白(SVLBP)重组抗原的免疫保护性及其作为候选疫苗的潜在价值.方法用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导克隆菌大量表达SVLBP重组抗原,以镍-次氮基三乙酸琼脂糖树脂(Ni-NTA)亲和层析法纯化制备SVLBP重组抗原;将纯化的重组抗原加福氏佐剂经皮下免疫C57BL/6小鼠,每隔2周免疫1次,在第3次免疫后10 d,经腹部皮肤攻击感染日本血吸虫尾蚴35±1条,感染后45 d剖杀,计数检获虫数和每克肝虫卵数(LEPG).小鼠在免疫前和攻击感染后分别采眶窦血,用ELISA测定特异性IgG及其亚群抗体水平.结果相对于佐剂对照组,免疫组小鼠的减虫率为33.4%,减卵率为47.6%;免疫后小鼠产生高水平的特异性IgG(＞1:6 400);抗体亚类检测结果显示,免疫组小鼠IgG2a、IgG2b、IgG1明显高于免疫前和佐剂对照组.结论日本血吸虫皮层蛋白SVLBP重组抗原能诱导小鼠产生一定的保护性免疫,是潜在的疫苗候选抗原分子.
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重组白细胞介素-4增强日本血吸虫组织蛋白酶B核酸疫苗诱导小鼠的保护力
目的探讨重组白细胞介素-4(IL-4)真核表达质粒增强日本血吸虫组织蛋白酶B DNA疫苗对小鼠的免疫保护效果.方法将小鼠IL-4基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1以构建小鼠重组IL-4表达质粒,并联合日本血吸虫组织蛋白酶B的表达质粒DNA(VR1012-Sj31)肌注免疫小鼠,设重组IL-4表达质粒、组织蛋白酶B表达质粒和2种空载体质粒对照组.免疫组化检测IL-4和组织蛋白酶B在小鼠肌细胞内的表达,末次免疫3周后攻击感染,用减虫率及减卵率表示保护力.结果重组IL-4和组织蛋白酶B DNA均在小鼠肌细胞表达,重组IL-4和组织蛋白酶B DNA联合免疫小鼠,产生43.2%的减虫率和76.6%的减卵率,与组织蛋白酶B DNA单独免疫相比差异有显著性(P＜0.01,P＜0.05).结论重组IL-4能提高日本血吸虫组织蛋白酶B核酸疫苗的抗血吸虫保护力作用,具有佐剂的免疫效应.
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不同地理株杂交培育的柔嫩艾美球虫及其免疫保护率
目的培育3个不同地理株柔嫩艾美球虫(Eimeriatenella)的杂交株,以探讨研制球虫疫苗的可能性.方法通过免疫试验,从5个不同地理株中选择3株作为杂交亲本株,对此3株分别进行两次杂交,获得的后代混合卵囊经单卵囊分离、扩增,分别提取卵囊DNA,利用随机扩增多态性DNA(RAPD)进行分析(30条引物),分离、培育出两代杂交株.再进行免疫试验,比较杂交株与亲本株的免疫保护性.结果选择了免疫原性较好、免疫保护率较高的广州株、保定株、长春株作为杂交亲本,分别进行保定株×长春株、广州株×F1株两次杂交,获得的后代卵囊,提取卵囊DNA,RAPD分析后,得到了保定株×长春株的杂交株F1(F1Z7)和广州株×F1株的杂交株F2(F2Z3).免疫试验结果,杂交株F1与F2的免疫保护率分别为80%和84%;亲本株广州株为77%,保定株为69%,长春株为63%.结论分离、培育出了F1、F2两代杂交虫株.其免疫保护率均高于各亲本株,提示杂交株获得了亲本株的部分保护性,其免疫的雏鸡对各虫株的攻击均有好的保护力.尤其是F2株,免疫保护率平均达到84%.
关键词： 柔嫩艾美球虫 杂交 随机扩增多态DNA技术 免疫保护 -
日本血吸虫CAI基因的亚克隆表达与免疫保护效果研究
目的克隆和表达日本血吸虫(Schistosomajaponicum,Sj)CAI基因,并对表达产物进行免疫保护效果测定,评价其作为血吸虫疫苗候选分子的潜能.方法将SjCAI基因亚克隆至pGEX-5X-3载体,转化入感受态大肠杆菌ER 2566,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下进行表达,用表达产物免疫小鼠,并设分别注射等体积的弗氏完全佐剂和PBS的两组对照组,观察免疫保护效果.结果在IPTG诱导下,表达载体中的SjGST基因与重组的SjCAI基因在大肠杆菌中获得了高效融合表达,将其免疫小鼠,诱导产生了29.87%的减虫率和63.71%的减卵率.结论 Sj-CAI基因亚克隆至pGEX-5X-3载体后可在大肠杆菌中高效表达,表达产物能诱导产生一定水平的抗Sj保护性免疫力.
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日本血吸虫体表蛋白Tetraspanin 2-A核酸疫苗的构建及其对小鼠的免疫试验
采用PCR法扩增日本血吸虫体表四跨膜家族蛋白2-A(SjTsp2-A)基因,构建重组质粒PcDNA3.1(+)/SjT-sp2-A,将其转至大肠埃希菌DH5α制备DNA疫苗pcDNA3.1(+)/SjTsp2-A.24只BALB/c小鼠均分3组,每鼠于左股四头肌注射0.5 mg/ml盐酸布比卡因50 μl.次日,A组同法注射DNA疫苗pcDNA3.1(+)/SjTsp2-A,B组注射重组质粒pcDNA3.1(+)/SjGST,C组注射空质粒PcDNA3.1(+).注射剂量均为100 μg/只.每隔2周注射1次,共3次,末次免疫后2周各组均经腹部皮下感染日本血吸虫尾蚴40±2条/鼠,45 d后剖杀,计数减虫率和减卵率.ELISA检测抗体效价,A组化分析股四头肌局部组织蛋白表达情况.结果 A组的平均检虫数和每克肝组织虫卵数均显著低于B组和C组(P值均<0.05),A组的减虫率和减卵率分别为44.4%和28.4%.A组血清抗体效价高达1:25 600.A、B两组局部组织均有特异性蛋白表达.DNA候选疫苗pcDNA3.1(+)/SjTsp2-A能诱导小鼠产生一定的免疫保护作用.
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多头绦虫膜蛋白(45M)对羊脑多头蚴病的免疫保护效果
目的 观察多头绦虫膜蛋白(45M)对羊脑多头蚴病的免疫保护效果. 方法 12只新疆哈萨克羊随机均分为免疫组和对照组,免疫组用重组多头绦虫膜蛋白(45M)与佐剂乳化后颈部皮下2点免疫,抗原免疫剂量为50μg/只,注射体积为1 ml,共免疫4次,每次间隔3周.对照组以谷胱甘肽硫转移酶(GST)表达物代替免疫抗原同法免疫.定时采集羊血,分离血清.ELISA法检测血清中IgG和IgM的抗体水平.于末次免疫后105 d,免疫组和对照组每羊经口攻击感染5 000个多头绦虫虫卵,感染2周后剖检羊脑多头蚴囊数,计算减囊率.将经孵化激活的六钩蚴分别置于含10%两组免疫攻击感染羊血清的RPMI 1640培养液中培养,观察两组羊血清对多头绦虫六钩蚴的杀伤情况. 结果 免疫组有3只羊感染多头蚴包囊,平均囊荷数为1.5个,囊平均直径为2.2 mm,免疫组减囊率为68.9%.六钩蚴与免疫组羊血清共培养72 h后,90%死亡,被杀伤的六钩蚴出现萎缩,或膨胀致使内部结构模糊.ELISA检测结果 显示,在第4次免疫后(第9周),免疫组IgG抗体水平达到高(2.32±0.76),与对照组(0.70±0.42)间的差异有统计学意义(t=4.47,P<0.01).经口感染六钩蚴后(第24周),免疫组lgG和IgM抗体水平(1.53±0.81,0.90±0.26)仍显著高于对照组(0.64±0.43,0.43±0.15)(P<0.01).结论 重组蛋白45M可引起机体较强的体液免疫反应.
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日本血吸虫重组线粒体相关蛋白免疫学活性鉴定
目的对重组的日本血吸虫(中国大陆株)线粒体相关蛋白(rSj338)进行免疫活性鉴定,预测其作为血吸虫病疫苗候选分子的潜能. 方法阳性克隆进行表达,获得rSj338/日本血吸虫谷胱甘肽转移酶(26GST)融合蛋白,并对其进行纯化.再将粗提包涵体蛋白、复性蛋白及经过分子筛进一步纯化并复性的融合蛋白分别免疫家兔,获得特异性抗体,并用斑点酶联免疫吸附试验(dot-ELISA)方法检测血清中抗体滴度,Western blot 反应确定其抗原性.再将粗提包涵体蛋白及经过分子筛进一步纯化并复性的融合蛋白分别免疫Balb/c小鼠后进行攻击感染实验.结果粗提包涵体蛋白、复性蛋白及经过分子筛进一步纯化并复性的融合蛋白均能刺激家兔产生特异性抗体,粗提包涵体蛋白免疫家兔,血清抗体滴度为1∶25 600,复性蛋白及经分子筛纯化的蛋白免疫的家兔血清抗体滴度均为1∶51 200,Western blot结果显示,粗提包涵体蛋白、复性蛋白及经过分子筛进一步纯化并复性的蛋白均能被重感染兔血清和rSj338/26GST特异性免疫兔血清所识别.攻击实验中,粗提包涵体蛋白和经分子筛纯化的蛋白分别可诱导小鼠产生27.8%(P<0.01)和30.4%(P<0.01)的减虫率, 40.4%(P<0.01)和43.5%(P<0.01)肝总减卵率.粗提包涵体蛋白中rSj338和经分子筛纯化的蛋白中rSj338分别可诱导小鼠产生13.9%(P<0.05)和20.0%(P<0.05)的减虫率, 30.0%(P<0.01)和41.7%(P<0.01)肝总减卵率.结论获得的日本血吸虫线粒体相关的重组融合蛋白(rSj338/26GST)具有良好的免疫学活性,重组融合蛋白(rSj338/26GST)及rSj338均可诱导宿主抗血吸虫感染的部分保护力.
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猪囊尾蚴抗原DNA疫苗诱导的免疫保护效应
目的:观察猪囊尾蚴保护性抗原cC1 DNA疫苗诱导的小鼠免疫应答,及对仔猪的免疫保护作用. 方法:将全长cC1 cDNA插入真核表达质粒载体pcDNA3,构建了重组质粒p3-cC1,肌注小鼠,ELISA检测小鼠血清抗cC1抗体IgG及IgG2a水平,并进行仔猪的免疫保护实验. 结果:免疫小鼠第3周出现特异性IgG应答,第8周IgG水平达到高;小鼠血清的IgG2a检测显示,第2周IgG2a 应答即为阳性,且长时间保持较高应答水平.用该疫苗免疫仔猪使其获得了73%的保护率. 结论:猪囊尾蚴保护性抗原cC1 DNA疫苗能有效诱导仔猪的免疫保护效应.
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46所中小学入学新生HBV感染调查
南宁市是我国在80年代末首批对新生儿实施国产乙型肝炎疫苗接种作为基础免疫的城市之一.目前,国内多项研究表明,乙肝疫苗产生的抗-HBs阳性率随着免疫后时间的延长而逐步降低,但免疫后的免疫保护持久性至少达10～15年,疫苗对免疫人群有稳定的保护效果[1～3].
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日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶免疫功能的研究
目的 研究日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(Thioredoxin Glutathione Reductase of Schistosoma japonicum,SjTGR)的免疫原性及抗日本血吸虫感染的免疫保护性作用.方法 75只小鼠随机分为5组:空白组、PBS组、CpG2免疫组、TGR免疫组和TGR+ CpG2联合免疫组,免疫3次.首次免疫前及第3次免疫后2周经尾静脉采血,采用酶联免疫法分别检测血清中抗SjTGR蛋白IgG、IgG1和IgG2a的抗体水平.第3次免疫后2周,每只小鼠经腹部感染日本血吸虫尾蚴40±2条,42 d后剖杀,收集成虫和虫卵,计算减虫率和减卵率;制备各组小鼠单个脾淋巴细胞,采用流式细胞术检测脾细胞表面标志物CD44high、CD4+CD44high或CD8+CD44high水平;用SjTGR刺激免疫小鼠脾细胞72 h,采用酶联免疫法检测脾细胞的IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的水平.结果 第3次免疫后2周TGR与CpG2+ TGR免疫组小鼠血清抗SjTGR抗体的IgG滴度均达1:200000以上,IgG2a与IgG1的比值(IgG2a/IgG1)随时间的延长缓慢增高.TGR免疫组和TGR+CpG2联合免疫组细胞上清中的IFN-γ和IL-2水平与空白组、PBS组、CpG2免疫组相比明显增高(P＜0.05).TGR免疫组与TGR+ CpG2免疫组小鼠脾细胞的CD44high、CD8+CD44high及CD4+CD44high与空白组和PBS组相比细胞比值增加(P＜o.05).TGR免疫组和CpG2+ TGR免疫组的减虫率分别为9.4％,10.5％,减卵率分别为9.2％和32.8％.结论 SjTGR具有较强的免疫原性,可诱导小鼠免疫反应向Th1型极化,但不足以产生抗日本血吸虫感染的保护效应.CpG20DN可能是一种有效的Th1型免疫佐剂.
关键词： 日本血吸虫 硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶 免疫原性 免疫保护 -
日本血吸虫SjIM基因克隆表达及动物免疫保护评估
目的 克隆并表达日本血吸虫肌醇单磷酸酶(SjIM)编码基因cDNA,评估该重组抗原抗血吸虫感染的免疫保护效果.方法 以日本血吸虫42d虫体cDNA为模板,经PCR扩增编码SjIM蛋白的开放阅读框(ORF)基因片段.采用荧光实时定量PCR分析该基因在童虫和成虫的表达情况.以pET28a(+)为载体构建重组表达质粒,经异丙基- β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导,制备重组SjIM蛋白.Western blotting检测重组蛋白的抗原性与免疫原性,利用重组SjIM抗原免疫小鼠评估其免疫保护效果.结果 获得了编码SjIM基因ORF的cDNA片段,ORF长度为834 bp,编码278个氨基酸.荧光实时定量PCR显示该基因在35 d虫体中表达量高.获得了SjIM重组蛋白,其具有良好的免疫原性.免疫组小鼠获得48.76％的减虫率和41.29％的肝脏减卵率.结论 获得了日本血吸虫SjIM基因ORF的cDNA序列,并制备了重组SjIM蛋白,该重组抗原在小鼠体内能诱导产生部分抗血吸虫感染的免疫保护效果.
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蛔虫抗原基因ALAg表达载体的构建及其重组蛋白诱导小鼠的免疫保护研究
目的 确定蛔虫基因工程疫苗候选基因.方法 连接经BamH Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切的pMD18-T-ALAg和pET-28a(+)质粒的纯化回收产物,将连接产物pET-28a(+)-ALAg表达载体转化表达菌株BL21(DE3)进行诱导表达,并纯化重组蛋白(rALAg).30只小鼠分成免疫组、佐剂组和对照组,每组10只,各组分别接种重组蛋白与弗氏完全佐剂(FCA)混合物、FCA以及磷酸盐缓冲液(PBS)后,采用蛔虫感染性虫卵进行攻击(3 600个/只),观察各组小鼠体内虫体数,并采用间接ELISA法检测小鼠血清中抗体IgG.结果 rALAg能被兔抗蛔虫阳性血清所识别.免疫组小鼠的肝脏和肺脏中的蛔虫幼虫数量(25.30±4.55)比对照组(57.60±5.76)减少了69.26％,与对照组和佐剂组比较差异有统计学意义(P＜0.01)；免疫组IgG抗体水平检测血清吸光度值A450(0.858±0.003)与对照组(0.149±0.004)、佐剂组比较(0.134±0.004)差异有统计学意义(P＜0.01).结论 ALAg基因可作为蛔虫基因工程疫苗的候选基因.
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不同免疫方案对日本血吸虫22.6 kDa重组蛋白保护性免疫力的影响
目的比较福氏完全佐剂(FCA)、福氏不完全佐剂(FIA)与氢氧化铝(Al(OH)3)的免疫增强作用,探讨不同免疫方案对日本血吸虫22.6 kDa蛋白保护性免疫力的影响.方法通过基因工程技术获得rSj22.6/26GST重组抗原的大量表达,用亲和层析法制备rSj22.6/26GST融合蛋白并以凝血酶酶切获得纯化重组日本血吸虫22.6 kDa抗原(rSj22.6).将纯化rSj22.6抗原分别与FCA、FIA和Al(OH)3混合后,按照不同的免疫程序分别免疫BALB/c小鼠后进行日本血吸虫尾蚴攻击感染试验.用减虫率及减卵率表示免疫保护效果.结果Western blot结果证实纯化的酶切产物是日本血吸虫22.6 kDa抗原.rSj22.6抗原与不同佐剂的免疫保护性实验结果提示:与PBS对照组相比,rSj22.6与FCA、FIA的协同作用均能诱导较高的成虫减虫率和总体减卵率(P均＜0.01);rSj22.6与Al(OH)3的协同作用虽能诱导产生一定的总体减卵率(P＜0.01),但未见有统计学意义的成虫减虫率(P＞0.05).各佐剂干预组所诱导的小鼠抗日本血吸虫感染的保护作用差异均无显著性(P均＞0.05).rSj22.6抗原诱导的保护作用在福氏佐剂的辅助下强于在Al(OH)3作用下的保护作用.结论福氏佐剂和Al(OH)3均可在一定程度上增强rSj22.6免疫小鼠的抗感染保护性免疫力,但福氏佐剂的增效作用强于Al(OH)3.
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日本血吸虫pcDNA3.1(+)/MLP核酸疫苗对家兔的保护性免疫作用
目的观察日本血吸虫pcDNA3.1(+)/MLP(SJP)核酸疫苗对家兔的保护性免疫作用.方法将24只新西兰家兔随机分为2组,每组12只;实验组每只家兔SJP的免疫剂量为500 μg/次,后腿肌肉注射,对照组注射空质粒pcDNA3.1(+);隔周免疫1次,共4次,后1次免疫后2周进行日本血吸虫尾蚴攻击感染.尾蚴攻击感染60 d后处死,观察肝脏病变,计算减虫率及减卵率,并做血清抗体及细胞因子分析.结果 SJP免疫家兔可明显抑制肝脏虫卵肉芽肿的大小,肉芽肿数量减少,肝组织减卵率为28.10%,并可诱导IgA、IgG1变化,诱生INF-γ应答.结论 SJP免疫家兔对日本血吸虫尾蚴攻击感染可产生一定的保护作用.
