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非甾体类抗炎药对恶性肿瘤患者术后转移复发的影响
近年来，全球恶性肿瘤患者的新发病例和死亡病例呈逐年上升趋势。临床上对恶性肿瘤患者的治疗仍多以根治性手术为主。然而，尽管经历手术，仍有一部分患者术后存在肿瘤的转移和复发。非甾体类抗炎药的镇痛作用较强，近年来关于其在围术期是否具有免疫保护和抑制肿瘤转移复发的作用备受关注，现就国内外对该类药物免疫保护和抑制肿瘤转移复发作用的基础和临床研究作简要综述。
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右美托咪定对急性心理应激的免疫保护作用
[目的]探索右美托咪定在局麻手术中对急性心理应激的免疫保护作用.[方法]择期局麻下行乳腺包块切除术的病人80例,随机平分为两组.实验组在局麻的同时复合静脉泵注右美托咪定;对照组只行局麻.两组病人均于术前及术毕时抽血检测CD4、CD8,行VAS疼痛评分、SCL - 90心理评估,随访术后并发症.[结果]右美托咪定组术后SCL - 90评分(110.15±11.87)及VAS评分(0.33±0.32)低于对照组的(163.17±20.17)和(3.65±0.24),术后CD8 (28.11±1.34)低于对照组的(31.25±1.70),CD4/CD8(1.53±0.17)高于对照组的(1.43±0.15),差异有显著性意义(P＜0.05).[结论]右美托咪定对局麻手术中的急性心理应激有免疫保护作用.
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幽门螺杆菌感染的治疗策略分析
研究发现幽门螺杆菌(Hp)与胃黏膜炎症,胃、十二指肠溃疡,胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤及胃癌等关系密切.然而,Hp感染的治疗应根据细菌本身的致病能力及肠黏膜免疫保护能力确定,对于有致病毒力的Hp感染应及时有效地根除,而部分情况下胃黏膜内Hp感染参与了黏膜免疫防御作用.
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2015年桂林市儿童乙肝疫苗免疫效果分析
目的：了解桂林市儿童接种乙肝疫苗后的免疫效果，为乙肝疫苗预防接种及加强免疫工作提供科学依据。方法：从桂林市各县有乙肝免疫接种记录的儿童中，采分层随机抽样的方法，抽取2－9岁的儿童约30名作为观察对象，检测抗－HBs来评价乙肝免疫效果。结果：检测的381名儿童中，乙肝抗－HBs呈阳性的儿童267名，阳性率为70．08％，儿童乙肝表面抗体阳性率在性别、民族、监护人、经济发展水平、疫苗接种间隔时间之间的差异没有统计学意义。不同年龄组的儿童乙肝表面抗体阳性率存在明显差异（P＜0．05），随着年龄的增长乙肝抗－HBs的阳性率呈下降趋势。结论：随着儿童年龄的增长乙肝疫苗的免疫效果将逐年减弱，应加强儿童基础免疫，在6岁时给儿童加强接种一次乙肝疫苗。
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DC对系统性白假丝酵母菌感染保护性研究
目的:观察致敏的树突状细胞(DC)免疫接种小鼠对系统性白假丝酵母菌感染保护效果.方法:将白假丝酵母菌孢子、菌丝悬液致敏小鼠DC经小鼠行尾静脉接种3次,后造系统性白念珠感染模型观察小鼠生存期、肾病理切片、眼球取血检测CD4+、CD8+T淋巴细胞.结果:DC能有效延长小鼠生存期、保护小鼠肾脏、增强小鼠的免疫力.结论:DC能很好地抵抗系统性白假丝酵母菌感染,这为研究DC作为佐剂对抗系统性白假丝酵母菌感染的新型联合疫苗奠定基础.
关键词： DC 系统性白假丝酵母菌感染 免疫保护 -
疫苗严重不良反应及其发生机制研究进展
随着我国公共卫生事业的发展,接种疫苗已成为预防控制相应传染病经济、科学、有效的手段,通过预防接种部分传染病被有效控制甚至消灭,极大地保护了人民的身体健康.但是由于生物制品本身的特性、接种过程、个体差异等因素的影响,一些接种对象在获得免疫保护的同时,也会发生一些免疫反应以外的不利于机体的反应.
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女性生殖道局部黏膜免疫微环境
1 女性生殖道黏膜免疫系统黏膜免疫系统(Mucosal immune system, MIS)是指分布于呼吸道、胃肠道、泌尿生殖道黏膜及一些外分泌腺体的淋巴组织,是执行局部特异性免疫功能的主要场所.黏膜免疫系统在结构和功能上均不同于系统免疫系统,是机体免疫系统的重要组成部分.女性生殖道黏膜因受性激素影响及缺乏典型的集合淋巴结,是一个独特的免疫位点.黏膜表面同时存在固有和适应性免疫保护;固有免疫成分包括黏液层,上皮间紧密连接,抗微生物肽,固有免疫细胞以及各种分泌因子等[1,2].适应性免疫应答主要由T、B淋巴细胞完成.触发的固有免疫可作为桥梁,将适应性免疫联系起来,产生病原体特异的体液/细胞免疫应答.
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Chitosan-DNA基因免疫诱导粘膜特异性免疫应答及其抗CVB3感染作用
目的:构建新型粘膜基因疫苗,诱生CVB3 VP1特异性粘膜免疫应答,探讨粘膜免疫抗CVB3感染的作用,为病毒性心肌炎的特异性防治奠定基础.方法:抽提CVB3 RNA,以RT-PCR扩增得VP1基因,插入真核表达载体pcDNA3中,构建质粒pcDNA3-VP1,以Chitosan多糖包裹形成Chitosan-DNA基因疫苗.将该质粒转染Hela细胞,观察其体外表达情况.以50 μg DNA剂量的Chitosan-DNA疫苗滴鼻免疫BALB/C小鼠3次,检测CVB3特异性体液和细胞免疫应答;隔4周以5LD50活CVB3致死攻击小鼠,观察攻击后存活情况.结果:制备了直径为80～100 nm的Chitosan-DNA复合物颗粒,体外转染证实Chitosan-DNA复合物中VP1的表达高于pcDNA3-VP1质粒-Lipofectamine的表达水平.该疫苗滴鼻3次免疫后,不仅诱生了高水平的IgG,而且诱生了高水平的粘膜IgA抗体,第6周抗体P/N值分别达3.5和3.2.特异性细胞免疫应答研究发现,该疫苗诱生了较强的VP1特异性CTL杀伤作用,并显著高于pcDNA3-VP1和pcDNA3组.CVB3攻击后,可保护33.3%小鼠长期存活,而pcDNA3和pcDNA3-VP1质粒滴鼻免疫对照组的平均存活天数分别为8.5和10.8天.病理学研究显示:Chitosan-DNA免疫小鼠心肌组织基本正常,而对照小鼠死亡前心肌显示大量的灶性坏死和炎性浸润.结论:Chitosan-DNA基因疫苗滴鼻免疫可诱生CVB3特异性粘膜IgA应答及CTL反应,具有一定的抗CVB感染的免疫保护力.
关键词： CVB3 VP1 Chitosan-DNA疫苗 滴鼻 免疫保护 -
结核菌H37Ra在小鼠体内诱导的免疫应答及其保护力
目的:研究结核菌H37Ra免疫小鼠后产生的特异性免疫应答以及保护效果.方法:BALB/c小鼠随机分为H37Ra组、BCG组和生理盐水(NS)组,免疫8周后处死部分小鼠,取脾淋巴细胞经体外培养、PPD刺激后,MTT法检测淋巴细胞的刺激指数,ELISA法检测培养上清液中IFN-γ和IL-4水平.另一部分免疫小鼠经腹腔感染结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)毒株H37Rv,4周后处死,测定小鼠脏器重量指数.取稀释的小鼠脾脏和肺脏匀浆接种于改良罗氏培养基,培养21天后计数脏器荷菌量.结果:H37Ra和BCG免疫小鼠脾淋巴细胞刺激指数、IFN-γ和IL-4水平均显著高于NS对照组.感染4周后H37Ra和BCG组小鼠脏器重量指数较NS对照组均显著降低.H37Ra组小鼠脾脏和肺脏荷菌量与NS对照组比较分别下降了1.228log10CFU和0.954log10CFU,差异有显著性(P<0.05),与BCG组之间差异均无显著性.结论:H37Ra免疫小鼠后可以诱导产生Th1型免疫应答,能够抵抗毒株H37Rv的攻击,且免疫效果与BCG相当.
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肠出血性大肠杆菌O157:H7溶血素保护性片段(HlyAN436)克隆、表达、初步纯化与生物学活性研究
目的 获取重组表达肠出血性大肠杆菌O157的溶血素(Ehx)保护性片段,并研究其基本的生物学及免疫学特性.方法 PCR法从EHEC O157-SMR2菌株克隆O157:H7的HlyA亚单位的N端片段(436个氨基酸),T-A克隆后构建表达载体pET-28a(+)-HlyAN436,测序鉴定后转化到E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,初步纯化后免疫动物.结果 HlyAN436成功地在大肠杆菌表达系统表达,动物实验证实其具有良好的免疫原性和反应性以及一定的免疫保护性.结论 HlyAN436蛋白有可能用于肠出血性大肠杆菌O157基因工程疫苗的研究.
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重组白假丝酵母菌Sap2的免疫保护性研究
目的:构建白假丝酵母菌天冬氨酸蛋白酶2(Sap2)的原核表达载休并诱导表达目的蛋白,进行小鼠试验观察免疫保护效果.方法:PCR克隆白假丝酵母菌Sap2,与pMD19-T-Sap2载体转化至DH5α,对阳性pMD19-T-Sap2质粒和pET32a载体进行双酶切,构建pET32a-Sap2表达载体,转化至BL21 (DE3),诱导目的蛋白表达、收集纯化.小鼠行3次免疫接种重组蛋白后,制造系统性白假丝酵母菌感染模型观察小鼠生存期、肾脏病理切片.结果:成功构建pET32a-Sap2原核表达载体,目的蛋白被表达.重组蛋白对小鼠系统性白假丝酵母菌有一定的保护性.结论:接种原核表达的重组白假丝酵母菌Sap2蛋白,能在一定程度上抵抗系统性白假丝酵母菌感染,这为研究Sap2的疫苗奠定基础.
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口服灭活幽门螺杆菌对新生BALB／c小鼠胃黏膜的免疫保护作用研究
目的：探索BALB／c小鼠新生期口服灭活幽门螺杆菌（ H.pylori）后对胃黏膜是否具有免疫保护作用。方法：将32只BALB／c小鼠分为四组进行实验。第Ⅰ组为PBS对照组，第II组为灭活H.pylori组，第Ⅲ组为灭活H.pylori加大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位（ LTB）组，第IV组为正常对照组。用相应抗原成分对Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组出生24 h以内的新生BALB／c小鼠进行灌胃免疫，末次免疫两周后，将小鼠用108 CFU的幽门螺杆菌SS1株进行活菌灌胃攻击，连续攻击两天，每天两次。在攻击后的第28天，将各组小鼠处死，取胃组织进行活菌计数及组织病理学炎性评分。结果：Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组慢性炎症评分分别为2.25±0.46、2.12±0.35、1.5±0.53、0.25±0.46，炎症活动度评分为2.12±0.35、2.12±0.35、1.37±0.52、0.25±0.46；除Ⅰ、Ⅱ组间无统计学意义外，其余组间差异均有统计学意义（P＜0.05）。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组细菌定植量分别为1.33±0.21、1.18±0.27、1.05±0.37×105 CFU／1个胃，Ⅳ组细菌定植量＜4×102 CFU／1个胃，低于检测值，Ⅲ组的细菌计数低于Ⅰ、Ⅱ组，差异有统计学意义（ P＜0.05）。结论：BLAB／c小鼠新生期给予灭活幽门螺杆菌加LTB灌胃免疫与活菌攻击后炎症的减轻和细菌定植量的减少可能相关，具有一定的免疫保护作用。
关键词： 灭活幽门螺杆菌 LTB 新生BALB/c小鼠 免疫保护 -
B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NMB0315核酸疫苗的免疫活性和免疫保护作用初步研究
目的:构建B群脑膜炎奈瑟菌pcDNA3.1 (+)/NMB0315 真核表达重组质粒,检测其诱导小鼠产生的特异性体液免疫和细胞免疫应答水平、免疫血清体外杀菌效果及免疫保护作用,初步探讨NMB0315核酸疫苗的免疫活性和免疫保护效果,为研制一种新的预防B群流脑的核酸疫苗提供实验依据. 方法:以B群脑膜炎奈瑟菌标准株MC58基因组DNA为模板设计引物,PCR扩增NMB0315基因,克隆至pcDNA3.1 (+)真核表达载体中,经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切及测序鉴定重组质粒.构建成功的pcDNA3.1(+)/NMB0315重组质粒转染COS-7细胞和RAW264.7细胞,免疫细胞化学染色法和Western blot法检测重组蛋白在真核细胞中的表达. 大量提取重组质粒,肌注免疫BALB/c小鼠,检测小鼠体内抗NMB0315的特异性体液免疫和细胞免疫水平;测定免疫血清体外杀菌滴度,观察核酸疫苗对实验小鼠的免疫保护效果. 结果:构建的核酸疫苗pcDNA3.1 (+)/NMB0315能够在真核细胞中有效转录和表达;免疫小鼠后能诱导产生特异性体液免疫应答和细胞免疫应答. 在疫苗免疫后的2、4、6周,pcDNA3.1(+)/NMB0315组和pcDNA3.1(+)/NMB0315+CpG组血清总IgG及IgG1、IgG2a、IgG2b和IgG3亚类抗体水平呈递增趋势,均明显高于PBS、pcDNA3.1(+)、CpG对照组(P<0.001);小鼠血清IgG2a/IgG1比值均小于1;生殖道灌洗液中特异性sIgA水平均明显高于PBS、pcDNA3.1(+)、CpG对照组(P<0.01). 免疫第6周,脾淋巴细胞刺激指数(SI)均明显高于对照组(P<0.01,P<0.01,P<0.05). pcDNA3.1(+)/NMB0315+CpG、pcDNA3.1(+)/NMB0315 疫苗组免疫血清补体介导的体外杀菌效价分别为1:128和1:64;在致死量B群脑膜炎奈瑟菌MC58攻击后72 h存活率分别为70%和65%,对照组[PBS,pcDNA3.1(+),CpG]72 h存活率为0. 结论:NMB0315核酸疫苗能够诱导小鼠产生较高水平的体液免疫(包括黏膜免疫)和细胞免疫应答;免疫血清补体介导的体外杀菌活性较高;NMB0315核酸疫苗对感染B群脑膜炎奈瑟菌小鼠具有较强的免疫保护作用.
关键词： B群脑膜炎奈瑟菌 B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白0315 核酸疫苗 免疫活性 免疫保护 -
猪链球菌2型溶菌酶释放蛋白功能性片段的原核表达及其免疫保护性
目的 表达猪链球菌2型(SS2)溶菌酶释放蛋白(MRP)的功能性片段(tmrp),并检测其对小鼠的免疫保护性.方法 将构建的重组克隆载体pMD-tmrp经BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切,将切下的目的基因tmrp亚克隆至原核表达载体pGEX-3X中,转化E.coliBL21(DE3),鉴定正确后,用IPTG诱导,谷胱甘肽亲和层析纯化GST-tmrp,免疫BALB/c小鼠,测定其免疫保护率.结果 阳性工程菌经IPTG诱导,表达了可溶性目的蛋白,相对分子质量约为73 000.0.8 mmol/L IPTG,37℃,pH7.2诱导4 h,表达量高,为25.36%.经亲和层析纯化,融合蛋白纯度达93.7%.免疫BALB/c小鼠后,免疫保护率可达60%.结论 已成功获得了具有免疫活性的GST-tmrp.
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金黄色葡萄球菌α-溶血素及其突变体的原核表达和免疫学活性
目的 原核表达金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)α-溶血素(α-hemolysin,Hla)及其突变体,并检测其免疫学活性.方法 采用PCR法从S.aureus中扩增hla基因,将该基因克隆至原核表达载体pET28a中,构建重组表达质粒pET28a-hla,并利用点突变试剂盒进行突变,获得重组质粒pET28a-hlaH35L.将两种重组表达质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3),IPTG诱导表达;表达的重组蛋白经Ni-NTA亲和层析和CM离子交换层析纯化后,检测其溶血活性、免疫血清的抑制溶血活性及HlaH35L蛋白的免疫保护作用.结果 重组表达质粒pET28a-hla经双酶切和测序证明构建正确;重组质粒pET28a-hlaH35L的测序结果显示,第35位氨基酸突变位点与设计相符.表达的Hla和HlaH35L蛋白相对分子质量约为36 000,均为可溶性表达,表达量约占菌体总蛋白的50％,纯化后纯度均在90％以上.Hla具有溶血活性,溶血比活为152 HU/mg; HlaH35L无溶血活性;抗Hla和抗HlaH35L血清均具有抑制Hla溶血的活性;在小鼠滴鼻攻击模型中,HlaH35L具有一定的保护作用.结论 成功在大肠埃希菌中表达了具有良好免疫学活性的Hla及其突变体HlaH35L,为筛选S.aureus候选疫苗组分奠定了实验基础.
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单剂型微粒疫苗的设计与应用
疫苗是人类治疗和预防疾病有效的手段.理想的疫苗应该具有以下特性:(一)一次接种即获得长效免疫保护;(二)在较高温度下性质稳定,便于贮存和运输;(三)接种价廉,大多数人能够接受[1].传统的疫苗一般需多次反复接种,经历时间长,疫苗需低温储存,使其辍种率较高;储运和医护开支高,占疫苗接种的总费用的80%～90%[2].发展中国家因无良好储运设施和医护配备,且儿童人口多,大部分生活在交通不便的农村,或以流动的方式生活,再加上本身的因素,造成辍种率更高.单剂型疫苗即一次接种即获长效免疫的疫苗若研究成功,能有效地解决这些问题.
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柔嫩艾美耳球虫丝氨酸蛋白酶抑制剂基因核酸疫苗的免疫保护效果
目的 观察柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella,E.tenella)丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serine protease inhibitor,Serpin)基因核酸疫苗对E.tenella感染雏鸡的免疫保护效果.方法 取14日龄雏鸡,随机分为7组:pVAX 1-Serpin高剂量组(100 μg/只)、pVAX1-Serpin中剂量组(50 μg/只)、pVAX1-Serpin低剂量组(25μg/只)、pVAX1组(50μg/只)、E.tenella卵囊组(15日龄时,口服5 000个卵囊/只,不加强免疫)、未免疫攻虫对照组(0.1 ml PBS)和未免疫未攻虫对照组(0.1 ml PBS),除E.tenella卵囊组外,均经胸肌注射免疫,21日龄时加强免疫1次,28日龄时,除未免疫未攻虫对照组外,均经口感染1×104个E.tenella孢子化卵囊.攻虫后第8天剖杀,计算各组的存活率、平均增重、相对增重率、盲肠病变减少率、卵囊减少率及抗球虫指数(Anticoccidial index,ACI).结果 未免疫攻虫对照组和pVAX1组的存活率分别为75％和70％,其余各组的存活率均为100％.pVAX1-Serpin高、中剂量组、E.tenella卵囊组和未免疫未攻虫对照组的平均增重2均较未免疫攻虫对照组显著增加(P＜0.05),其中pVAX1-Serpin高剂量组相对增重率2达95.26％;E.tenella卵囊组、pVAX1-Serpin高、中剂量组的盲肠病变记分明显低于pVAX1组和未免疫攻虫对照组(P＜0.05),前两组病变减少率较高；各免疫组卵囊产量均较未免疫攻虫对照组显著下降(P＜0.05),pVAX1-Serpin高剂量组卵囊减少率达67.04％;各免疫攻虫组ACI值均高于未免疫攻虫对照组,其中E.tenella卵囊组高(181.23),pVAX1-Serpin高剂量组次之(166.26),而pVAX1-Serpin中、低剂量组和pVAX1组均小于160.结论 高剂量pVAX1-Serpin对鸡E.tenella感染具有一定的免疫保护作用.
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猪弓形虫重组卡介苗的构建及其免疫保护性
目的 构建弓形虫Rhomboid基因和猪IL-2基因的重组卡介苗(BCG),并分析其免疫保护效果.方法 应用RT-PCR技术分别扩增弓形虫Rhomboid基因和猪IL-2基因,克隆至pMD 18-T载体中,双酶切鉴定及测序正确后,将弓形虫Rhomboid基因和猪IL-2基因串联后分别连接至穿梭表达载体pMV261和整合表达载体pMV361中,电转化BCG,制备重组BCG pMV261-IL-2-Rho和pMV361-IL-2-Rho.分别经颈部肌肉注射免疫猪,共3次,每次间隔2周,免疫剂量均为108 CFU/只,采用ELISA法检测免疫前后猪体内抗体(IgG)滴度、Th1型及Th2型细胞因子的变化情况;第3次免疫后2周通过腹腔注射的方式接种弓形虫China I株速殖子1×108个/只进行攻虫试验,观察重组BCG对猪的免疫保护效果.结果 成功构建了重组BCG pMV261-IL-2-Rho和pMV361-IL-2-Rho.重组BCG免疫猪后,随着免疫次数的增加,血清中抗体滴度也逐渐升高,且与PBS对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.01).3次免疫后,pMV261-IL-2-Rho组血清Th1型细胞因子IL-2、IFNγ和IL-12的表达水平均明显提高,与PBS对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05),而pMV361-IL-2-Rho组血清IL-2、IFNγ和IL-12的水平虽略有升高,但与PBS对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05);各组在免疫过程中Th2型细胞因子IL-4水平均未发生明显变化.攻虫后各组猪出现精神沉郁,食欲下降,体温升高等症状,耐过发病期后的猪,食欲逐渐恢复,体温渐趋正常,各种症状减轻,且各组猪在攻虫后20 d均无死亡.结论 构建的基因重组BCG pMV261-IL-2-Rho对猪弓形虫感染具有一定的免疫保护作用.
关键词： 弓形虫 Rhomboid基因 IL-2基因 重组卡介苗 免疫保护 -
乙脑/登革2型嵌合病毒的构建及其作为疫苗候选株的初步检定
目的 构建以乙脑疫苗株SA14-14-2为基因骨架的乙脑/登革2型嵌合病毒,并进行初步检定,分析其作为疫苗候选株的可行性.方法 用登革病毒(dengue virus,DENV)减毒株PDK53 prME基因替换乙脑病毒疫苗株SA14-14-2的相应区域,构建乙脑/登革2型嵌合病毒全长克隆质粒,通过体外转录、转染原代地鼠肾(PHK)细胞,拯救出乙脑/登革2型嵌合病毒,并分析该嵌合病毒的蚀斑特征、增殖特征、神经毒力和神经侵袭力、免疫原性及免疫攻击保护作用.结果 构建的嵌合病毒比乙脑疫苗株SA14-14-2具有更小的蚀斑,在PHK细胞上具有更低的增殖能力;对成鼠无神经毒力和神经侵袭力;可诱导小鼠产生较高的中和抗体效价,且免疫8周后,中和抗体滴度无明显下降(P＞0.05);能保护小鼠免受致死剂量DENV的脑内攻击.结论 本实验制备的嵌合病毒具有良好的安全性、免疫原性及免疫保护作用,有望作为登革疫苗候选株.
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肺炎链球菌DnaJ蛋白的原核表达及其免疫保护效果
目的 原核表达肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)热休克蛋白40(heat shock protein 40,HSP40,DnaJ),并探讨其免疫保护效果.方法 从2、3、6B、14、19F、R6型肺炎链球菌基因组DNA中扩增DnaJ基因,插入原核表达载体pET-32a中,构建重组表达质粒pET-32a-DnaJ,转化大肠埃西菌(E.coli) BL21(DE3),IPTG诱导表达.表达的重组DnaJ蛋白经Ni-NTA树脂纯化后,分别经腹腔和鼻黏膜免疫小鼠,采用ELISA法检测小鼠血清和唾液中特异性IgG和IgA抗体滴度；用重组蛋白刺激小鼠脾细胞,ELISA法检测细胞因子水平的变化；流式细胞术检测特异性抗DnaJ血清结合到肺炎链球菌表面的能力；检测抗DnaJ血清抑制R6型肺炎链球菌黏附A549细胞的能力.结果 6株肺炎链球菌的PCR扩增产物均可见1 119 bp的DnaJ基因片段,测序结果与GenBank中登录的序列一致；重组表达质粒经双酶切鉴定构建正确；纯化的重组DnaJ蛋白相对分子质量约为38 000,纯度达90％以上,可与DnaJ小鼠免疫血清发生特异性反应.腹腔免疫DnaJ可使小鼠血清产生高滴度的特异性抗DnaJ抗体,鼻黏膜免疫DnaJ可增加小鼠血清和黏膜中抗DnaJ IgG和IgA抗体水平(P＜0.01)；鼻黏膜免疫DnaJ可使小鼠脾细胞释放高水平的细胞因子IL-10、IFNγ和IL-17A;抗DnaJ血清对肺炎链球菌具有更强的结合能力,且可抑制肺炎链球菌黏附肺癌上皮细胞A549.结论 DnaJ可诱导小鼠产生保护性免疫应答,提示其具有作为肺炎链球菌蛋白疫苗抗原的潜力.
