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武当山区不同采收期宽叶重楼根中重楼皂苷动态变化研究
目的:以武当山区人工种植基地宽叶重楼为样本,研究重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的动态变化规律,探讨本地区宽叶重楼的佳采收期.方法:采用高效液相色谱法,以Waters Atlantis(R)T3色谱柱、乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,流速0.8 mL/min,检测波长为203 nm.结果:不同采收期宽叶重楼中的重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ含量具有明显的差异,春季4月下旬和秋季8月下旬有两个高峰,而在植株生长旺盛的夏季和进入休眠期的冬季皂苷含量明显下降.结论:初步确定了武当山区宽叶重楼的佳采收期,为重楼药材的采收及生产提供了一定的科学依据.
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不同生长年限滇重楼中4种重楼皂苷的含量比较
目的:研究滇重楼中4种重楼皂苷的含量与其生长年限的关系.方法:采用高效液相色谱法测定不同生长年限滇重楼中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的含量.色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18( 150 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为1.0 mL· min-1,检测波长为203 nm,柱温为35℃.结果:不同生长年限滇重楼中重楼皂苷的含量差异较明显,3年生药材重楼皂苷的含量比较低,4、5年生药材含量明显升高,5年以上药材含量有下降趋势.结论:重楼皂苷含量的变化规律可为确定滇重楼采收年限提供参考依据.
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毛重楼药材的质量标准研究
目的:建立毛重楼药材的质量标准.方法:从原植物形态、性状特征、显微特征(横切面、粉末)对毛重楼药材进行定性鉴别;采用高效液相色谱法测定药材中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的含量:色谱柱为Agilent C18,流动相为乙腈-水(梯度洗脱),流速为0.9 mL/min,检测波长为203 nm,柱温为25℃,进样量为5μL;采用紫外分光光度法测定药材中重楼总皂苷的含量.结果:毛重楼根状茎呈结节状扁圆柱形,略弯曲.横切面木质部导管较大,韧皮部细胞小,粉末有大量淀粉粒,多为单粒.重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ和重楼总皂苷检测进样量线性范围分别为0.64~12.8、0.46~9.2、0.26~5.2、0.23~4.6、20.5~143.5μg(r分别为0.9999、0.9999、0.9999、0.9999、0.9997);精密度、稳定性、重复性试验的RSD<3.0%;加样回收率分别为96.38%~105.24%(RSD=3.01%,n=6)、97.24%~102.57%(RSD=2.50%,n=6)、97.19%~101.74%(RSD=1.52%,n=6)、93.72%~104.00%(RSD=3.53%,n=6)、98.11%~104.50%(RSD=2.57%,n=6).结论:该研究所建标准可用于毛重楼药材的质量控制.
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滇重楼药材中无机元素与有效成分的相关性研究
目的：研究滇重楼药材中无机元素与有效成分的相关性。方法：采用高效液相色谱法（HPLC）测定药材中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的含量：色谱柱为Phenomenex C18，流动相为乙腈-水（梯度洗脱），流速为1.0 ml/min，检测波长为203 nm，柱温为30℃。采用电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）测定药材中钠（Na）、镁（Mg）、钾（K）、钙（Ca）、铬（Cr）、锰（Mn）、铁（Fe）、镍（Ni）、锌（Zn）、硒（Se）、锶（Sr）、钼（Mo）、铅（Pb）、镉（Cd）、汞（Hg）、铜（Cu）、砷（As）的含量：射频功率为1.55 kW，采样深度为10 mm，等离子气体流量为15.0 ml/min，载气流速为0.86 L/min，雾化室温度为2℃，碰撞模式为He，载气流量为4.5 ml/min，测量点数/峰为6，数据采样模式为跳峰采集（重复采集3次）。所得数据采用SPSS 21.0软件进行逐步回归分析，以评价上述两者的相关性。结果：重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ检测进样量线性范围分别为0.939～4.697μg（r＝0.9999）、1.124～5.620μg（r＝0.9996）、0.784～3.918μg（r＝0.9998）、0.976～4.880μg（r＝0.9999）；精密度、稳定性、重复性试验的RSD＜2％；加样回收率分别为96.53％～100.71％（RSD＝1.69％，n＝6）、98.19％～99.55％（RSD＝0.58％，n＝6）、95.45％～100.83％（RSD＝1.87％，n＝6）、96.11％～102.01％（RSD＝2.07％，n＝6）。17种无机元素检测含量线性范围为0～195.9843 mg/kg（r≥0.9993）；检测限≤65.201 ng/kg。重楼皂苷Ⅰ含量与Mg呈正相关，与Pb呈负相关；重楼皂苷Ⅱ含量与Cu呈正相关，与As呈负相关；重楼皂苷Ⅵ含量与Sr、Hg呈正相关，与Mn呈负相关；重楼皂苷Ⅶ含量与Na、Ni呈正相关，与As呈负相关；4种重楼皂苷总含量与Ni、Sr呈正相关，与Fe呈负相关。结论：滇重楼药材中无机元素含量与有效成分存在一定相关性。
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重楼皂苷对新生大鼠成骨细胞增殖、分化及Smurf1、Cthrc1、BMP-2表达的影响
目的:探究重楼皂苷对新生大鼠成骨细胞增殖、分化及Smurf1、Cthrc1、BMP-2表达的影响.方法:获取新生大鼠颅骨成骨细胞,经原代培养后传代培养,应用倒置显微镜观察并通过茜素红染色鉴定.将第三代成骨细胞接种至含不同浓度重楼皂苷(0μg/ml、3μg/ml、10μg/ml、30μg/ml)的培养基中培养.应用MTT实验检测重楼皂苷对成骨细胞增殖能力的影响.应用碱性磷酸酶(ALP)活性检测和钙结节染色评估重楼皂苷对成骨细胞分化能力的影响.应用荧光实时定量PCT (qRT-PCR)评估重楼皂苷对成骨细胞分化过程中Smurf1、Cthrc1、BMP-2基因表达的影响.结果:与空白对照组相比,重楼皂苷浓度3μg/ml、10μg/m1、30μg/ml组的细胞增殖能力、ALP活性、钙化结节数量均显著增加.重楼皂苷各浓度组的BMP-2、Cthrc1 mRNA和蛋白表达水平均显著增加,而Smuff1mRNA和蛋白表达水平均显著降低.结论:重楼皂苷能够通过抑制Smurf1表达、增强Cthm1表达参与调控BMP-2相关信号通路,从而促进新生大鼠颅骨成骨细胞增殖分化过程.
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贵州产滇重楼的资源调查及品质评价
目的 考察贵州省产滇重楼的资源分布情况,并评价滇重楼的药材品质.方法 通过野外实地考查,了解滇重楼的资源情况,并收集样品;采用HPLC法测定样品中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的含量.结果 贵州省的滇重楼资源以安顺地区西经黔西南州至水城这一条带为分布中心;绝大多数药材样品中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的含量可满足《中国药典》的要求,2、5、7号样品的品质好,4种皂苷的总含量均＞2％.结论 贵州省产滇重楼的品质良好、稳定,其药材对比其他产地具明显的优势.
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HPLC测定球药隔重楼中的5种重楼皂苷
目的 测定不同产地球药隔重楼中重楼皂苷Ⅶ、H、Ⅵ、Ⅱ、Ⅰ的含量,并评价其质量.方法 采用HPLC法.采用Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),测定波长210 nm,柱温35℃,流动相为乙腈-水,梯度洗脱,流速1.0 mL· min-1.结果 5种皂苷在线性范围内的线性关系良好(r2＞ 0.9989),球药隔重楼中重楼皂苷H占所测5种皂苷总量的约50％.结论 所用方法准确、简便,可用于球药隔重楼的质量评价.
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HPLC测定黑籽重楼中的皂苷含量并评价其药材质量
目的 研究不同产地黑籽重楼中10种重楼皂苷的含量.方法 采用HPLC-ELSD法,Kromasil RP-C18 (250 mm×4.6mm,5μm)柱,流动相为乙腈-水梯度洗脱,流速1.0 mL· min-1,柱温30℃.氮气流速1.6 L·min-1,检测器漂移管温度45℃.结果 测定了黑籽重楼药材中10种皂苷的含量,在线性范围内线性关系良好(r2＞ 0.9998).结论 所用方法测定重楼皂苷准确,重复性好,可作为黑籽重楼药材质量控制的方法.
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HPLC测定不同产地滇重楼中的4种重楼皂苷
目的 分析测定不同产地、不同部位滇重楼中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的含量.方法 采用HPLC法,色谱柱为ZorbaxSB-C18(250 mm×4.6 him,5 μm),流动相为乙腈-水(40:60),体积流量1.0 ml·min-1,柱温30℃,检测波长203 nm.结果 4种不同产地滇重楼皂苷的含量差异较大.栽培滇重楼中,4种重楼皂苷的总含鼍高于野生滇重楼,滇重楼不同部位的4种重楼皂苷的总含量为根茎>叶>果实>须根>茎.结论 应积极配合GAP的实施,尽快实现滇重楼人工栽培产业化,保证其质量具有可控性.
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重楼皂苷的两种分离工艺及其联用效果的比较
目的 比较重楼皂苷的泡沫分离工艺与优化后的大孔树脂分离工艺.方法 以重楼皂苷的纯度、回收率、纯度比、工时、能耗、操作难易等为评价指标,综合比较泡沫、大孔树脂的分离工艺,并结合两者优势进行工艺的联用.结果 从成本、环保、操作难易分析,泡沫分离工艺优于大孑L树脂;从分离效果看,前者亦高于后者,但回收率低于后者.将两种工艺联用,可显著提高回收率.结论 泡沫分离工艺可作为一种操作单元分离纯化重楼皂苷,具有较好的富集、分离效果,工艺简单、环保、成本也低.
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HPLC法测定60℃烘烤前后滇重楼药材四种皂苷的含量变化
目的 分析测定经过60℃烘烤前后滇重楼中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的含量变化.方法 采用HPLC法,色谱柱为WatersSunFire-C18(4.6mm×150mm,5μm),流动相为乙腈-水为流动相,梯度洗脱;进样量10 μL,柱温30℃,检测波长203 nm.结果 8个不同产地的滇重楼药材,经过60℃烘烤前后滇重楼中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的总量变化有差异,其中四种皂苷总量及重楼皂苷Ⅰ含量明显降低.结论 经过60℃烘烤后对滇重楼的品质有影响.
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树脂技术用于重楼总皂苷纯化工艺的研究
目的:探讨重楼总皂苷的纯化工艺 .方法:通过静态吸附初步选定LSA-20型树脂,以吸附量为指标,从体系PH值、生药浓度、吸附流速等条件考察了LSA-20型树脂动态吸附,同时考察了重楼总皂苷的洗脱条件.结果:LSA-20型吸附树脂树脂比吸附量大,机械强度好,65%乙醇即可脱吸附95%的总皂苷.结论:LSA-20型吸附树脂对是重楼皂苷的选择性吸附树脂.
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重楼皂苷药理作用及其作用机制研究进展
重楼皂苷作为一种重要的天然皂苷,具有抗肿瘤、抗感染、止血、抗血管生成、抗骨质疏松、抗氧化等多种药理作用.本文综述了近10年来有关重楼皂苷药理作用及其机制的研究进展,为进一步开发和利用该药物提供了理论依据.
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重楼皂苷Ⅰ对人肝癌细胞MHCC97-H增殖、周期、凋亡的影响
目的 观察重楼皂苷Ⅰ对人肝癌细胞MHCC97-H增殖、 周期及凋亡的影响.方法 1.将对数生长期的人肝癌细胞MHCC97-H,加入不同浓度的重楼皂苷Ⅰ和索拉菲尼,24h后CCK8法检测药物对细胞增殖的影响.2.根据CCK8实验结果,选取相应浓度的重楼皂苷Ⅰ和索拉菲尼,作用于细胞24h,观察细胞周期及凋亡情况.结果 重楼皂苷Ⅰ及索拉非尼作用于人肝癌细胞MHCC97-H的IC50的浓度分别是5.7μg/mL、10μmol/mL.重楼皂苷Ⅰ及索拉菲尼均能抑制S期,将细胞阻滞于G0/G1期,能明显促进细胞凋亡,与空白对照组比较具有显著差异(P<0.01).结论 重楼皂苷Ⅰ对人肝癌细胞MHCC97-H具有明显的抑制增殖及促进凋亡的作用.
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重楼总皂苷及不同皂苷成分对痤疮相关病原菌抑菌效果的评价
目的 研究重楼总皂苷及不同重楼皂苷成分Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅴ,Ⅵ,Ⅶ,H对痤疮相关病原菌(痤疮丙酸杆菌、表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌)的抑菌效果.方法 通过液体微量稀释法检测重楼总皂苷及不同皂苷成分对痤疮相关病原菌的小抑菌浓度(MIC).结果 重楼总皂苷对痤疮丙酸杆菌NCTC737,ATCC6919,表皮葡萄球菌ATCC12228,金葡菌ATCC6538的MIC分别为2.5,5.0,5.0,1.25mg/mL;重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅴ,Ⅵ,Ⅶ,H对痤疮丙酸杆菌NCTC737的MIC分别为0.6,1.2,2.5,5.0,2.5,2.5,10.0mg/mL;对表皮葡萄球菌ATCC12228的MIC分别为1.2,1.2,5.0,5.0,2.5,2.5,10.0mg/mL;对金葡菌ATCC6538的MIC分别为0.6,0.6,2.5,5.0,2.5,2.5,10.0mg/mL.结论 重楼总皂苷具有较好抑制痤疮相关病原菌的作用;重楼皂苷Ⅰ,Ⅱ,Ⅵ,Ⅶ在体外对痤疮发病相关菌具有明确的抑制作用,其中重楼皂苷Ⅰ的抑菌作用强.
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HPLC法测定不同来源重楼药材中7种甾体皂苷的含量
目的 分析不同来源重楼属植物的主要活性成分,比较7种甾体皂苷的含量,为重楼药材的鉴别和品质评价提供参考依据.方法 采用HPLC法测定不同来源重楼属15批药材中重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷H、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅱ、薯蓣皂苷、重楼皂苷Ⅰ和重楼皂苷Ⅴ的含量.色谱条件为InertsilODS-3C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-水(50:50);检测波长为203nm;流速为1.0mL·min-1;柱温为35℃;进样量为20.0μL.结果 15批样品中,重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅱ和重楼皂苷Ⅰ4种皂苷含量之和均在1.849~20.222mg·g-1之间;样品中7种皂苷含量之和在2.351~37.366mg·g-1之间.精密度、稳定性和重复性实验的RSD值均≤3.0%,7种皂苷的平均加样回收率均在95.92%~103.20%之间(RSD≤3.0%,n=5).结论 因产地或种类不同,重楼皂苷的含量存在一定差异.基于15批重楼样品的HPLC图谱,构建了重楼药材的HPLC指纹图谱,实验结果 可用于重楼的真伪鉴别和质量评价.
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高效液相色谱法测定白驳丸中4种重楼皂苷含量
目的：建立高效液相色谱法测定白驳丸中4种重楼皂苷的含量。方法采用 Agilent Zorbax SB C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)；柱温35℃；流动相 A 为乙腈,流动相 B 为水,进行梯度洗脱；流速1.0 mL·min-1,检测波长203 nm。结果4种重楼皂苷质量浓度在18.12~465.9μg·mL-1范围内呈良好线性关系(r =0.9999)；平均回收率在95.11%~99.74%之间；RSD值均小于3.0%。结论该方法灵敏度高、准确性好、具有较好的重复性和稳定性,可用于白驳丸的质量控制。
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HPLC法测定贵州地产重楼中六种重楼皂苷的含量
目的：通过对贵州地产重楼中6种重楼皂苷的含量，为贵州地产重楼的质量控制提供依据，促进重楼的进一步开发和利用。方法Agilent TC-Cl8(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱；流动相：0→30min，乙腈(33→65)：水(67→35)；30→35min，乙腈(65→33)：水(35→67)；流速1.0mL/min，测波长为203nm。结果贵州地重楼中6种重楼皂苷的标准曲线线性良好(r>0.9999)，回收率均在99.73%~100.08%，RSD<1.0%。结论该方法准确、可靠，可用于贵州地产重楼中6种重楼皂苷的含量分析。
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重楼药材中4种重楼皂苷含量测定的对照品替代方法研究
目的:建立用替代对照品法测定重楼药材中重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ4种重楼皂苷的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法,以柴胡皂苷d为替代对照品,使用Waters SymmetryShield RP18(4.6 mm × 250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长203 nm,柱温27℃,同时测定重楼药材中4种重楼皂苷的含量.结果:以柴胡皂苷d与4种重楼皂苷的峰面积比值和柴胡皂昔d与4种重楼皂苷的浓度比值得到的标准曲线具有良好的线性关系,加样回收率在101.6%～104.2%之间.结论:柴胡皂苷d作为替代对照品可同时测定重楼药材中重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ4种重楼皂苷的含量.
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UPLC法同时测定云南重楼栽培品中11种皂苷的含量
目的:建立超高效液相色谱法同时测定云南重楼栽培品中伪原薯蓣皂苷、伪原纤细薯蓣皂苷、重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷D、重楼皂苷H、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅱ、薯蓣皂苷、纤细薯蓣皂苷、重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅴ共11种甾体皂苷的含量.方法:采用CORTECS UPLC C18(2.1 mm×100 mm,1.6 μm)色谱柱,以乙腈(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱(0～18 min,30％A→50％A;18～28 min,50％A),流速0.3 mL· min-1,检测波长203 nm,柱温30C,进样量1μL.结果:伪原薯蓣皂苷、伪原纤细薯蓣皂苷、重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷D、重楼皂苷H、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅱ、薯蓣皂苷、纤细薯蓣皂苷、重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅴ线性范围分别为2.006～401.2、2.024～404.8、1.972～394.4、1.912～382.4、1.896～379.2、1.772～354.4、2.056～411.2、2.016～403.2、1.970～394.0、1.736～347.2、1.756～351.2 μg·mL-1;平均回收率(n=6)分别为98.73％、100.30％、101.90％、99.52％、98.33％、100.25％、98.57％、97.70％、101.63％、100.16％和98.80％,RSD分别为2.09％、2.41％、1.77％、2.74％、1.50％、2.35％、2.06％、1.76％、2.82％、2.05％和1.86％.云南重楼栽培品中上述1 1种甾体皂苷的含量分别为0～0.874、0～0.764、1.066～5.144、0～0.327、1.192～1.952、0～0.455、2.442～6.182、0.394～0.954、0～0.681、2.182～10.105、0～0.674 mg· g-1.结论:该方法可用于同时测定云南重楼栽培品中11种甾体皂苷的含量,为云南重楼药材的质量评价提供参考.
