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HDAC1-11 mRNA在出生后大鼠坐骨神经发育过程中的表达变化
目的:研究组蛋白去乙酰化酶HDAC1-11 mRNA在大鼠出生后坐骨神经发育过程的变化.方法:RT-PCR法分析坐骨神经发育成熟过程是HDAC1-11mRNA的表达水平.结果:HDAC1-11 mRNA持续表达于大鼠坐骨神经发育成熟的过程中,在大鼠60d时表达水平显著的低于初生时的表达水平.结论:HDAC1-11 mRNA参与大鼠坐骨神经发育成熟的过程,且其表达水平随着大鼠年龄的增加呈现由高到低的动态变化,提示其与坐骨神经髓鞘的发育成熟以及维持神经的正常功能密切相关.
关键词： HDAC1-11 mRNA 坐骨神经 发育 大鼠 -
外源性bFGF对坐骨神经钳夹损伤后脊髓DRG感觉神经元CGRP变化的影响
目的:观察外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对坐骨神经损伤后大鼠背根神经节(DRG)和脊髓后角内降钙素基因相关肽(CGRP)变化的影响.方法:成年雄性Wistar大鼠随机分成正常组、阳性对照组和bFGF组.阳性对照组动物右侧坐骨神经钳夹损伤,bFGF组动物右侧坐骨神经损伤后给予bFGF,在不同时间点运用免疫荧光技术结合图像分析检测相应背根节和脊髓后角CGRP的变化.结果:bFGF处理组术侧DRG内中小型神经元和脊髓后角内的CGRP表达明显高于阳性对照组,积分光密度值相比(P＜0.05)；但DRG内大型神经元内CGRP表达没有明显变化.结论:结果提示外源性bFGF能明显促进损伤后同侧DRG中小型神经元和脊髓后角CGRP的合成,对DRG内大型神经元中CGRP的表达没有明显影响.
关键词： 碱性成纤维细胞生长因子 降钙素基因相关肽 背根节 坐骨神经 -
坐骨神经选择性损伤痛模型小鼠脊髓背角线粒体解偶连蛋白UCP4的表达变化
目的:观察线粒体保护蛋白解偶联蛋白4(uncouplingprotein4,ucP4)在坐骨神经选择性损伤(sparednerveinjury,SNI)模型小鼠脊髓背角中的表达变化.方法:健康c57BL/6小鼠分为假手术对照组(n=21)和坐骨神经分支选择性损伤SNI组(n=21),实验组损伤后饲养3,7,14d.行为学采用测定小鼠热痛阈和VonFrey机械性痛阈；用免疫荧光组织化学染色法检测对比小鼠脊髓L3-6节段背角内UCP4免疫阳性细胞的数量.结果:SNI术后3d,小鼠手术侧热痛阈和机械性痛阈明显低于假手术组,术后14d达低值.UCP4分布于正常小鼠脊髓背角,SNI后3d损伤组小鼠脊髓背角中的UCP4表达降低,图像分析表明UCP4的光密度与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05)；脊髓背角中UCP4的表达在14d时其降低程度明显,图像分析表明光密度与对照组、3d和7d比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:SNI后脊髓背角线粒体保护蛋白UCP4表达降低可能参与神经病理性疼痛的中枢敏化过程.
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老化大鼠坐骨神经Fas与FasL的表达及纤维结构变化
为了观察老化对神经纤维组成和结构的影响以及对凋亡相关凶子Fas及其配体FasL表达的影响,随机取3月龄(成年组)和24月龄(老年组)止常SD大鼠各16只进行以下实验:采用透射电镜(TEM)观察坐骨神经的超微结构变化;苏木精-伊红(HE)染色计数轴突数与Schwann细胞数的比例;免疫组织化学染色榆测大鼠坐骨神经老化时Fas和FasL的表达变化.结果显示:透射电镜下可见老年大鼠坐骨神经轴突直径增加,轴突周围间隙扩大,多数髓鞘分离,部分板层结构排列紊乱、破坏甚至呈气球样变.老年组的轴突数与Schwann细胞数的比例较成年组变大(P<0.01).两组动物坐骨神经的髓鞘与轴突均町见Fag和FasL免疫组化阳性染色.但老年组大鼠的Fas和Fagl表达量明显增多(P<0.05).以上结果提示老化大鼠坐骨神经神经纤维的形态结构发生很大的变化,可能与凋亡相关基因产物Fas及其配体FasL的表达增加有关.
关键词： 老化 坐骨神经 凋亡相关因子Fas 凋亡相关因子FasL -
大鼠坐骨神经超微结构的老年性变化
为了研究老年大鼠坐骨神经超微结构特点,随机取3月龄(成年组)和24月(老年组)龄正常SD大鼠各10只,用电镜观察两组间坐骨神经超微结构的差异.结果显示:老年组大鼠坐骨神经内有髓纤维的百分比、轴突间胶原纤维密度以及Sehwann细胞胞质中脂褐质沉积密度均多于成年组(P＜0.05);但无髓纤维之百分比少于成年组(P＜0.05).上述结果提示坐骨神经内的有髓纤维与无髓纤维百分比、轴突问胶原纤维密度以及Schwann细胞胞质中脂褐质沉积密度是衡量大鼠坐骨神经老化的形态标志之一.
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坐骨神经切断对猫脊髓前角蛋白组表达的影响
用蛋白组学方法探讨猫双侧坐骨神经切断后脊髓前角蛋白组表达变化,找出差异蛋白.用二维凝胶电泳法获得脊髓前角蛋白组的考马斯亮监染色图谱,PDQuest软件对蛋白点进行定量分析.结果显示:在凝胶图谱中平均检测到382个蛋白点.损伤组与正常组比较后榆测到11个明显差异蛋白.经基质辅助激光解析电离飞行时间质谱和串联质谱技术鉴定差异蛋白.其名称分别为:蛋白二硫键异构酶,磷酸苷油酸变位酶1、热休克蛋白70、A11P合成酶α链、丙酮酸脱氧酶13亚基,载脂蛋白A前体、肌球蛋白调节轻链异构体b/2、三磷酸苷油醛脱氢酶等.本实验鉴定了外周神经损伤后与脊髓前角变化相关的蛋白分子,为了解运动神经元轴突损伤所致的胞体蛋白组变化奠定了基础.
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大鼠坐骨神经损伤后诱导型一氧化氮合酶表达的变化
为了探讨大鼠坐骨神经损伤后再生过程中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的变化及意义,本研究采用大鼠坐骨神经切断缝合模型,分别于术后1、3、7、14、21及28 d取吻合口远端的神经,采用免疫组织化学和实时荧光定量聚合酶链反应(RTPcR)方法检测损伤神经远端iNOS mRNA及其蛋白的表达水平.结果显示:假手术对照组坐骨神经中未见明显的iNOS阳性产物,iNOS mRNA表达极低.实验组神经损伤后iNOS mRNA及其蛋白的表达水平均明显增高(P＜0.01),iNOS 阳性产物的吸光度(A)值在术后7d达高峰.iNOS mRNA表达在术后1、3、7 d维持较高水平,此后则明显下降.上述结果说明大鼠坐骨神经损伤后神经纤维中iNOS的表达增加,iNOS可能在周围神经损伤后的再生过程中起着一定的作用.
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大鼠坐骨神经缺损半个月后人工组织神经移植物修复的实验研究
为了观察人工组织神经移植物对大鼠坐骨神经非新鲜损伤的修复作用.我们在成年SD大鼠左侧股中部切除部分坐骨神经制造神经缺损模型.15 d后,实验组(9只)用人工组织神经移植物修复神经缺损,自体神经修复作为阳性对照(6只),保持神经缺损为阴性对照(6只).第二次手术后3个月,电生理学、形态学结果显示实验组的再生神经虽略差于自体对照组,但明显优于缺损对照组,腓肠肌的萎缩形态学指标变化则较接近自体对照组.实验结果表明人工组织神经移植物对已缺损15 d的大鼠周围神经具有较好修复作用.
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CDK11P58和Cyclin D3在损伤后大鼠坐骨神经中的表达变化
为了探讨大鼠坐骨神经损伤对CDK11P58和Cyclin D3表达的影响,本实验将成年SD大鼠随机分为假手术组和夹伤组,运用Western blot结合免疫荧光组织化学双标技术,观察了坐骨神经损伤后坐骨神经夹伤段、脊髓腰膨大前角和伤侧腓肠肌内CDK11P58和Cyclin D3的表达变化.结果显示:(1)坐骨神经夹伤后,坐骨神经夹伤段及脊髓腰膨大前角、伤侧腓肠肌中的CDK11P58蛋白的表达先逐渐下降,后又逐渐上升;而Cyclin D3的表达无明显变化;(2)在假手术组的坐骨神经、脊髓腰膨大前角和腓肠肌内都可观察到CDK11P58和Cyclin D3的表达;而坐骨神经夹伤后,在上述部位可检测到CDK11P58的表达强度明显减弱,但Cyclin D3无明显变化;(3)免疫荧光双标结果显示CDK11P58和Cyclin D3在假手术组的坐骨神经、脊髓腰膨大前角和伤侧腓肠肌内都有共存;而在坐骨神经损伤后这种共存强度明显降低.以上结果提示,坐骨神经损伤可影响坐骨神经及脊髓腰膨大、伤侧腓肠肌内CDK11P58的表达,但对Cyclin D3无明显影响,表明CDK11P58可能在周围神经损伤和修复中发挥重要作用.
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突触后密度蛋白-95在大鼠坐骨神经损伤后的表达
为了探讨突触后密度蛋白-95(PSD-95)在周围神经损伤过程中的表达变化,本实验建立大鼠坐骨神经夹伤模型,采用荧光定量PCR(real-time PCR)和Western blotting对PSD-95 mRNA及其蛋白水平进行定量检测,应用免疫荧光双标技术观察PSD-95与神经型一氧化氮合酶(nNOS)的共定位情况.结果显示,PSD-95 mRNA及其蛋白在正常坐骨神经中度表达,损伤后迅速下降;PSD-95 mRNA从损伤后2 d开始表达上调;而其蛋白水平于损伤后1周明显升高.免疫荧光双标染色证实在坐骨神经损伤后1周PSD-95与nNOS共定位于Schwann细胞上,而与神经丝蛋白NF-200共定位不明显.本研究结果提示PSD-95通过nNOS参与了周围神经损伤修复过程.
关键词： 突触后密度蛋白-95 坐骨神经 神经型一氧化氮合酶 NMDA受体 大鼠 -
p27kip1和Skp2在损伤后大鼠坐骨神经中的表达变化
为了探讨损伤后周围神经p27 kipl和S期激酶相关蛋白2(Skp2)的定位表达和变化,本实验将成年SD大鼠随机分为正常对照组、夹伤组和切断组,运用Western blot结合免疫组织化学及免疫荧光双标,在大鼠坐骨神经损伤时,对p27kip1和Skp2表达的影响进行了研究.结果表明:(1)坐骨神经夹伤后,p27 kipl蛋白表达先逐渐下降,后又逐渐上升;坐骨神经切断后,远侧段p27kip1蛋白表达持续下降,而近侧段p27kip1蛋白表达在切断后6 h明显下降,后又逐渐升高至正常水平,而Skp2表达变化与之相反;(2)免疫组织化学染色结果显示,坐骨神经切断后1 w,远侧段从断端到末端,p27 kipl阳性信号逐渐增加,而Skp2阳性信号逐渐减弱;(3)免疫荧光双标显示,正常和损伤坐骨神经的雪旺氏细胞中都有p27 kipl和Skp2表达.以上结果提示:周围神经损伤后影响雪旺氏细胞中p27kip1和Skp2的表达变化,为进一步研究它们在周围神经损伤和修复中的作用机制奠定基础.
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局麻药长时间阻滞外周神经对神经源性疼痛发生过程中背根神经节内GAP-43表达的影响
用免疫组织化学方法观察了局麻药长时间阻滞外周神经对神经源性疼痛发生过程中生长相关蛋白(GAP-43)在背根神经节内表达的影响.实验选用SD大鼠35只,随机分成正常对照组、单纯坐骨神经横切组、坐骨神经横切前阻滞组、坐骨神经横切后阻滞组4大组,后三大组再按术后取材时间分为3、7 d两个时间组.暴露大鼠右侧坐骨神经,于坐骨结节远端约1 cm处横断坐骨神经.根据分组,阻滞组分别从横切前1 h和横切后4 h开始对神经横切的近心端进行长效局麻药阻滞,持续整个观察期.术后不同时间取与伤侧坐骨神经相连的背根神经节(DRG),应用免疫组织化学和图像分析的方法研究背根神经节中GAP43的表达并进行定量分析.结果表明:术后3、7 d,单纯坐骨神经横切组背根神经节内的GAP-43表达增高,而阻滞组内的GAP43表达与正常组无差别.本研究结果提示坐骨神经横切前1 h或之后4 h开始局麻药阻滞神经均能抑制神经源性疼痛发生过程中 GAP-43的高表达.
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单侧坐骨神经完全结扎对大鼠腰段背根神经节内VGluT1阳性神经元的影响
本实验将大鼠分为两组(正常对照组和单侧坐骨神经完全结扎组),采用免疫细胞化学和中性红复染的方法分别观察了正常大鼠和单侧坐骨神经完全结扎后存活不同时间组大鼠腰4(L4)节段的背根神经节(DRG)内Ⅰ型囊泡膜谷氨酸转运体(VGluT1)样阳性神经元的分布及其数量的变化.结果如下:(1)正常大鼠L4节段的DRG内可观察到VGluT1样阳性产物呈点状或斑状分布于胞浆内,有大约71.5%的DRG细胞表达VGluT1样免疫阳性,其中以大型(＞40 μm)和中等大小(20～40 μm)的神经元为主(分别占整个VGluT1样阳性细胞总数的30.7%和65.9%);(2)坐骨神经结扎后第1、2 d,在结扎同侧L4节段的DRG内未检测到VGluT1样阳性神经元数量的明显变化;但自术后第4 d开始,VGluT1样阳性神经元的数量随术后存活时间的延长逐渐减少.结扎1～4周大鼠DRG内VGluT1样阳性神经元数量在同一个动物的手术侧与对照侧相比有明显减少(P＜0.01);而结扎1～4周大鼠的手术侧DRG内VGluT1样阳性神经元的数量也明显低于结扎1～3 d大鼠的手术侧(P＜0.05或P＜0.01).以上结果表明,DRG内合成VGluT1样阳性物质的神经元主要是大、中型细胞,DRG细胞可通过轴浆流将VGLluT1向周围突运输,故外周神经的损伤很易影响到DRG神经元内VGluT1的合成.
关键词： Ⅰ型囊泡膜谷氨酸转运体 免疫细胞化学 背根神经节 坐骨神经 大鼠 -
β-1,4半乳糖基转移酶-Ⅰ在钳夹伤后大鼠坐骨神经中表达的变化
为了观察β-1,4-半乳糖基转移酶-Ⅰ(β-1,4-galactosyltransferase-Ⅰ,β-1,4-GalT-Ⅰ)在正常和钳夹伤后大鼠坐骨神经中表达的变化,本研究采用RT-PCR方法,从小鼠坐骨神经中特异性地扩增β-1,4-GalT-Ⅰ cDNA片段并将其克隆到pGEM-T载体.采用体外转录的方法合成地高辛标记的正、反义β-1,4-GalT-Ⅰ RNA探针.通过原位杂交和图像分析的方法,观察β-1,4-GalT-Ⅰ mRNA在正常和夹伤大鼠坐骨神经中的表达及其变化.结果表明:β-1,4-GalT-Ⅰ mRNA在大鼠坐骨神经的髓鞘中表达,在夹伤坐骨神经后1～2 d,β-1,4-GalT-Ⅰ mRNA在坐骨神经的表达高,于夹伤后1周开始下降,在夹伤后1个月恢复至正常水平.上述结果提示坐骨神经夹伤后β-1,4-GalT-Ⅰ mRNA的表达发生变化,并且主要表达在坐骨神经的Schwann细胞.本研究结果为进一步分析β-1,4-GalT-Ⅰ在周围神经再生中的调控机制奠定了基础.
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陈旧性坐骨神经损伤后相关结构的组织学变化
为了观察大鼠陈旧性神经损伤后相关结构的组织学变化,了解陈旧性神经损伤后多长时间仍有修复神经损伤的组织学基础,本实验采用切断成年大鼠右侧坐骨神经,形成10 mm缺损.术后1～12月不同时间段取材后,在光镜和电镜下观察相应组织的形态变化.结果显示:(1)坐骨神经损伤后1月,同侧脊髓前角神经元的数目明显减少,但随后未见进一步减少;(2)损伤远侧神经干中,伤后1月时椭圆形核细胞增生,形成Büngner带;2月时Büngner带断裂,梭形核细胞明显增生;6～12月时梭形核细胞明显减少,胶原纤维呈致密平行排列.神经损伤1～12月时,电镜下神经内膜管内出现指样突起的细胞,内膜管下及内膜管之间有大量胶原纤维增生;(3)损伤侧腓肠肌纤维萎缩随损伤时间的延长而加重,伤后4个月肌纤维间结缔组织增生明显.本研究结果提示大鼠坐骨神经损伤后3～4月时,仍有神经修复的组织学基础.
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建立新生鼠脊髓细胞凋亡的动物模型
本研究目的在于制作新生鼠脊髓细胞(神经细胞和神经胶质细胞)凋亡模型,为筛选神经组织的保护物质提供新手段.为此,将新生大鼠一侧坐骨神经切断后,用无菌止血海绵包裹断离的神经近侧断端,海绵内加入无菌生理盐水或NGF,术后3、6、12 h用TUNEL法检测脊髓细胞凋亡状况.结果表明,TUNEL显示生理盐水组在三个时间段均出现大量脊髓细胞凋亡,而NGF组的凋亡细胞数量很少.提示,切断新生大鼠一侧坐骨神经后可建立脊髓细胞凋亡的动物模型.
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生长相关蛋白及其mRNA在大鼠损伤坐骨神经中的表达
为了研究大鼠周围神经损伤后远侧端组织中生长相关蛋白(GAP-43)及其mRNA的表达,采用正常SD大鼠坐骨神经横断损伤的模型,于术后不同时间取坐骨神经远侧端组织,以Western Blot和RT-PCR法检测GAP-43及其mRNA的表达.RT-PCR法检测结果显示,正常大鼠坐骨神经组织中GAP-43 mRNA表达量较低,而损伤坐骨神经的远侧段GAP-43 mRNA的表达量明显增加,于损伤第2周时达高峰.用抗GAP-43抗体进行WesternBlot检测,结果表明,正常坐骨神经43 kDa处出现弱阳性反应的蛋白区带,而损伤后坐骨神经远侧段43 kDa处阳性反应条带着色明显加深,损伤后第3周时阳性反应着色强.本研究结果提示,GAP-43及其mRNA在大鼠损伤坐骨神经远侧段组织中表达增强,其mRNA表达上调高峰在神经损伤后的第2周:而其蛋白合成增加为明显的时间是在神经损伤后的第3周.
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神经源性痛大鼠模型腰髓后角Aβ纤维生芽的变化
已有研究表明,外周神经损伤后Aβ神经元的初级传入末梢在脊髓的病理性生芽与损伤后痛觉超敏的形成有关.为了证实外周神经损伤后形成的这种生芽是否具有可逆性,本研究以大鼠坐骨神经压迫造成神经源性痛模型,采用跨神经节的霍乱毒素B亚单位结合辣根过氧化物酶(CB-HRP)作为示踪剂,四甲基联苯胺(TMB)反应呈色追踪Aβ初级传入末梢.结果证实:对坐骨神经的压迫也能够导致痛觉过敏和Aβ纤维末梢生芽侵入脊髓后角Ⅱ层,并且这种生芽不伴随对神经压迫的解除而逆转.中枢神经系统的这种结构重组及其不可逆性可能是神经源性痛的产生和维持的重要原因.
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HA-550型超激光疼痛治疗仪联合阿昔洛韦治疗带状疱疹44例临床观察
1临床资料全部病例均来自门诊,均符合带状疱疹诊断标准.治疗组男20例,女24例,年龄18～78岁,平均52.8岁,病程2～20天,平均6天.累及肋间神经25例,三叉神经2例,坐骨神经9例,臂丛神经8例.对照组男19例,女22例,年龄17～71岁,平均52.3岁,病程3～15天,平均5.6天.累及肋间神经22例,三叉神经3例,坐骨神经7例,臂丛神经9例.除外孕妇、哺乳期妇女、儿童及有肝肾功能损害者.两组病例在年龄、病程及病情严重程度等方面具有可比性.
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带状疱疹误诊为腰椎间盘突出症继发坐骨神经痛1例
患者男,67岁.因右下肢背侧放射痛5天就诊.发病前无上呼吸道感染史,既往健康.体检:右股外侧、胫内侧浅感觉过敏,该侧直腿抬高试验阳性,坐骨神经臀点、腘点压痛阳性.血液生化常规均正常.CT见腰椎2、3和3、4椎间盘中央型膨出,脊髓硬膜囊轻度受压.
