局部微波联合小剂量氯喹口服治疗口腔扁平苔藓疗效观察

口腔扁平苔藓(oral liclhen planus,OLP)是一种常见的口腔黏膜病,好发于女性,尤以30～60岁中年女性为常见.目前对OLP的治疗尚无特效方法.本研究采用局部微波热凝技术联合小剂量氯喹口服治疗OLP,经过临床观察、随访,取得比较满意疗效.报道如下.

氯喹对正常胃上皮细胞GES-1和胃癌细胞HGC-27凋亡的不同影响

目的:比较氯喹对正常胃上皮细胞GES-1和胃癌细胞HGC-27凋亡的不同影响.方法:使用倒置显微镜观察CQ处理后这两种细胞形态学变化;采用DAPI核染色检测CQ对HGC-27 细胞凋亡的作用;运用氯喹和雷帕霉素作用这两种细胞72 h后,用CCK-8检测这两种药物对两种细胞的增殖活性;JC-1检测氯喹处理后细胞线粒体膜电位的变化;用免疫印迹法检测凋亡效应酶Caspase-3和底物PARP的改变.结果:10 μmol/L的CQ作用于GES-1细胞和HGC-27细胞72 h后,在镜下可见,氯喹对GES-1细胞的形态无明显影响,却能使HGC-27细胞间隙增宽,悬浮细胞数目逐渐增多,细胞密度明显减少,细胞逐渐萎缩变圆,胞质减少,失去正常细胞形态;通过DAPI核染色发现,氯喹作用两种细胞72 h后,GES-1细胞核浅染、核大小形态均未发生变化,HGC-27细胞核呈浓缩致密的固缩形态或颗粒状荧光;CQ和RAP作用于正常胃上皮细胞和胃癌细胞HGC-27 72 h后,CCK-8结果显示相对于正常胃上皮GES-1细胞而言,氯喹能抑制胃癌HGC-27细胞的增殖活性;JC-1结果显示氯喹作用于HGC-27细胞后发生了红色荧光向绿色荧光的转变;Western blot显示胃癌细胞HGC-27的凋亡蛋白Caspase-3和PARP表达显著减少.结论:相比正常胃上皮细胞GES-1,CQ可以明显抑制人胃癌细胞HGC-27细胞活力并诱导凋亡.

云南省盈江县中缅边境恶性疟原虫对氯喹、哌喹体外敏感性研究

目的 监测云南省盈江县中缅边境恶性疟原虫对氯喹、哌喹的体外敏感性,了解两种抗疟药有无交叉耐药.方法 选取2007～2009年当地病人体内的恶性疟原虫,体外培养成活共28株,在体外进行对氯喹、哌喹的半效抑虫浓度(IC50)值测定;并对疟原虫的Pfcrt基因片段扩增,测序,比对.结果 28株恶性疟原虫株体外氯喹的IC50值为(463.9±256.0) nm;哌喹的IC50值为(9.0±6.7nm)和野生株3D7相比,均有显著性差异(P＜0.05).28株(100％)恶性疟原虫对氯喹均耐药株;5/28(16.1％)的疟原虫对哌喹耐药;7/28(21.4％)的疟原虫对哌喹敏感.28株(100％)疟原虫的Pfcrt基因发现均有和氯喹耐药相关的76T变异.应用Pearson线性相关分析发现CQ和PPQ间存在叉抗药性(P＜0.001).结论 云南省盈江县中缅边境的恶性疟原虫对氯喹、哌喹耐药的情况严峻,尤其是氯喹.

载顺铂联合氯喹聚乳酸静电纺丝膜对口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞增殖的抑制作用

目的：观察载药聚乳酸（PLA）静电纺丝膜对口腔鳞状细胞癌 CAL-27细胞的作用，探讨预防口腔癌术后复发的方法。方法：利用静电纺丝技术制备载顺铂（DDP）PLA 静电纺丝膜（DDP／PLA 膜）、载氯喹（CQ）／顺铂／氯喹 PLA 静电纺丝膜（CQ／DDP／CQ／PLA 膜，复合膜）和载氯喹／顺铂 PLA 静电纺丝膜（CQ／DDP／PLA 膜，共混膜）。通过扫描电镜（SEM）观察3种载药 PLA 静电纺丝膜的表面形态；紫外分光光度分析法测定 PLA 静电纺丝膜的降解速率；激光共聚焦显微镜观察自噬特异性蛋白 LC3-Ⅱ在 CAL-27细胞中的表达情况；MTT 法检测 CAL-27细胞生存率。结果：SEM 观察，DDP／PLA 膜、复合膜和共混膜纳米纤维连续，表面光滑，直径较均匀；载药 PLA 静电纺丝膜在21 d 左右降解；第1天 DDP／PLA 膜、复合膜和共混膜对CAL-27细胞杀伤作用不明显，第3天以后，DDP／PLA 膜组、复合膜组及共混膜组 CAL-27细胞的生存率明显降低（P ＜0.05）；复合膜组和共混膜组 LC3-Ⅱ荧光亮度均低于 DDP／PLA 膜组。结论：具有缓释效果的 CQ／DDP／PLA 纳米静电纺丝膜提高了 CAL-27细胞对 DDP 的敏感性，增强了 DDP 对口腔癌 CAL-27细胞的杀伤作用。

氯喹抑制的自噬对地西他滨促进髓性白血病细胞凋亡的影响

目的:研究氯喹与地西他滨联合应用对白血病K562和KG-1a1Aor1a细胞凋亡的影响,探讨自噬对地西他滨诱导白血病细胞凋亡的作用,阐明其作用机制.方法:体外培养髓性白血病K562和KG-1a1Aor1a细胞,分为空白对照组、地西他滨(10 μmol·L-1)单用组和氯喹(50 μmol·L-1)联用地西他滨组(联用组).联用组细胞使用氯喹孵育6h后再与其他组细胞同时开始实验.孵育24及48 h后,CCK-8法检测细胞数量并计算增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率和线粒体膜电位.Q-PCR法检测Atg7及Atg12基因表达水平,Western blotting法检测LC3蛋白表达.结果:孵育24及48 h后,与空白对照组比较,地西他滨和联用组K562和KG-1a1Aor1a细胞数量数量明显减少(P＜0.05或P＜0.01);凋亡率明显升高(P＜0.05或P＜0.01),线粒体膜电势明显增加(P＜0.05或P＜0.01);与地西他滨组比较,联用组K562和KG-1a1Aor1a细胞明显减少,细胞数量凋亡率明显升高(P＜0.05).孵育24 h后,与空白对照组比较,地西他滨组K562和KG-1a1Aor1a细胞Atg7、Atg12和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ相对表达水平明显升高(P＜0.05或P＜0.01);与地西他滨组比较,联用组K562和KG-1a1Aor1a细胞Atg7、Atg12和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ相对表达水平明显降低(P＜0.05或P＜0.01).结论:地西他滨具有促进白血病细胞凋亡的作用,而联用氯喹可以抑制自噬从而增强地西他滨诱导细胞凋亡的作用.

自噬对口腔鳞状细胞癌 CAL-27和 KB 细胞放疗敏感性的影响及其机制

目的：利用自噬抑制剂联合放射疗法作用于口腔鳞状细胞癌 CAL-27和 KB 细胞，探讨自噬对口腔癌放射治疗敏感性的影响及其作用机制。方法：选择人口腔鳞状细胞癌 CAL-27和 KB 细胞，分为对照组、氯喹（CQ）组、3-甲基腺嘌呤（3-MA）组、放射组（IR 组）及联合放射组（CQ＋ IR 组和3-MA＋ IR 组）。应用MTT 法检测细胞生存率，采用免疫荧光法激光共聚焦显微镜观察 CAL-27细胞自噬水平（即 LC3Ⅱ免疫荧光强度），Western blotting 法检测自噬相关蛋白 LC3和 beclin-1表达水平，AnnexinV／PI 双染色流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果：与 IR 组比较，联合放射组细胞生存率明显降低（P ＜0.05）。IR 组细胞自噬水平明显高于对照组、CQ 组、3-MA 组和联合放射组（P ＜0.05）。IR 组 LC3和 beclin-1蛋白表达水平明显高于对照组和联合放射组（P ＜0.05）。与对照组比较，IR 组和联合放射组细胞凋亡率明显升高（P ＜0.05）；与 IR 组比较，联合放射组细胞凋亡率也明显升高（P ＜0.05）。结论：放射疗法可以诱导口腔鳞状细胞癌细胞自噬水平升高。自噬抑制剂可以通过对口腔鳞状细胞癌细胞的增殖抑制及促凋亡作用，提高其对放射治疗的敏感性。

氯喹对体外培养人肝癌细胞增殖及细胞周期的影响

目的:探讨氯喹对体外培养人肝癌细胞HepG2增殖和细胞周期的影响,为氯喹作为肝癌治疗药物的研究提供依据.方法:对数生长期人肝癌HepG2细胞分为对照组、氯喹(8.00、16.00、32.00、64.00和128.00 mmol·L-1)处理组,用MTT法检测不同培养时间(24、48和72 h)细胞增殖活性,用流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率.结果:与对照组比较,32.oo～128.00 mmol·L-1氯喹处理HepG2细胞24 h和8.00～128.00 mmol·L-1氯喹处理HepG2细胞48 h～72 h,细胞增殖活性随着剂量和时间增加而逐渐下降(P<0.01),以72 h、128.00 mmol·L-1氯喹抑制作用强(P<0.01);与对照组比较,氯喹处理组(32.00～128.00 mmol·L-1)G2/M期细胞比率及细胞凋亡率随着剂量增加而上升(P<0.01),以128.00 mmol·L-1组为明显.结论:氯喹具有抑制人肝癌HepG2细胞增殖作用,可诱导人肝癌HepG2细胞的凋亡,并可使人肝癌HepG2细胞周期阻滞在G2/M期而抑制细胞活性,可能作为肝细胞癌的治疗药物.

河南省邓州市疟疾突发疫情的处理效果评价

目的:评价综合性干预措施控制疟疾突发疫情的效果,探讨控制疟疾突发疫情的有效办法.方法:收集河南省邓州市裴营乡2007 年疟疾报告、个案调查、发热患者血检、暴发点调查、综合性干预措施等资料,对邓州市裴营乡寇营村一起突发疫情的综合性干预措施效果进行评价.结果:邓州市裴营乡寇营村一月内当地感染疟疾病例11 例,达到卫生部<疟疾突发疫情应急处理预案>中疟疾突发疫情Ⅳ级标准,2007 年9 月28 日及时启动应急处理预案,经调查共发病34 例,发病率1.24%,其中汤庄和张坡两个自然村发病24 例,占全村发病数的70.59%,采取全民服药、室内滞留喷洒灭蚊药、健康教育等综合性防治措施,该村无新发疟疾疫情,达到解除Ⅳ级疟疾突发疫情预案的标准,于10 月29 日终止应急处理工作.结论:以全民服药为主的综合性干预措施控制疟疾突发疫情效果明确.

1,4苯醌对K562细胞自噬的影响及机制

[目的]研究1,4苯醌(1,4-BQ)对人慢性髓系白血病K562细胞自噬的影响及其机制.[方法]选择人慢性髓系白血病K562细胞,采用1,4-BQ、自噬早期抑制剂LY294002和自噬晚期抑制剂氯喹(CQ)进行染毒处理,分为对照组、1,4-BQ染毒组(5、10、20μmol/L)、LY294002组(10μmol/L)、CQ组(10 μmol/L)、1,4-BQ(20 μmol/L)+LY294002(10 μmol/L)组和1,4-BQ(20 μmol/L)+CQ(10μmol/L)组.应用MTT法检测细胞增殖率;采用CYTO-ID荧光探针并运用荧光染色法和流式细胞术法对细胞自噬水平进行定性、定量检测;采用、丫啶橙染色法检测细胞溶酶体pH值;运用实时定量PCR法和Western blot法检测LC3-Ⅱ和P62自噬相关基因和蛋白的表达水平.[结果] 10、20 μtrnol/L的1,4-BQ分别作用K562细胞24、48、72h后,细胞相对增殖率明显降低(P＜0.05).CYTO-ID自噬荧光染料特异性聚集在K562细胞胞质内,随着染毒浓度增加荧光强度明显增强.流式细胞术结果显示,与对照组相比,5、10、20 μtmol/L 1,4-BQ组自噬水平均明显增加,差异具有统计学意义(P＜0.05).、丫啶橙染色结果显示,不同浓度1,4-BQ组红色荧光强度均高于对照组,即1,4-BQ组溶酶体pH明显降低.Western blot结果显示,当1,4-BQ浓度为10、20 μmol/L时,LC3-Ⅱ和P62蛋白表达量明显高于对照组(P＜0.05),且在染毒24h时增幅大.干预自噬后,与1,4-BQ组相比,1,4-BQ+LY294002组的自噬水平和LC3-Ⅱ蛋白表达量均降低(P＜0.05).与1,4-BQ组相比,1,4-BQ+CQ组自噬水平增加(P＜0.05),而与CQ组的差异无统计学意义.此外,与对照组相比,CQ组LC3-Ⅱ蛋白表达明显增加(P＜0.05).与1,4-BQ组相比,1,4-BQ+CQ组LC3-Ⅱ蛋白表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).[结论]1,4-BQ可引起K562细胞LC3-Ⅱ、P62蛋白表达增加,可能是通过增加自噬体的合成和减少自噬体的降解从而增加细胞自噬.

针刺对瘙痒模型小鼠延髓β-EP表达的影响

目的 探讨针刺对瘙痒模型小鼠的瘙痒行为及延髓β-EP表达的影响.方法 50只C57B/6J小鼠随机分为组胺组(包括组胺针刺组和组胺非针刺组共20只)、氯喹组(包括氯喹针刺组和氯喹非针刺组共20只)及空白对照组(10只).组胺组予颈背部皮下注射磷酸组胺,氯喹组予颈背部皮下注射氯喹,组胺及氯喹针刺组针刺双侧血海、曲池及合谷穴,每日1次,组胺及氯喹非针刺组造模后不做处理;空白对照组不做处理.连续观察并记录各组搔抓次数,采用免疫荧光及Western blot方法检测模型动物延髓β-内啡肽(β-EP)的表达.结果 组胺组及氯喹组小鼠搔抓次数均明显高于空白对照组(P<0.01),氯喹针刺组搔抓次数低于氯喹非针刺组(P<0.05),组胺针刺组搔抓次数明显低于组胺非针刺组(P<0.01);免疫荧光结果显示,空白对照组及组胺非针刺组延髓β-EP能神经元表达均不明显;组胺针刺组及氯喹组延髓β-EP能神经元表达数量均有不同程度增加;Western blot结果显示,氯喹针刺组、氯喹非针刺组及组胺针刺组延髓β-EP表达均明显高于空白对照组(P<0.01),组胺针刺组延髓β-EP表达明显高于组胺非针刺组(P<0.01),氯喹针刺组与氯喹非针刺组延髓β-EP表达比较无统计学意义(P>0.05).结论 针刺对氯喹及组胺致痒模型动物的搔抓行为均具有抑制作用,对组胺致痒模型动物延髓β-EP的表达具有上调作用.

姜黄素对人胃癌AGS细胞自噬流的作用

目的 探讨姜黄素对人胃癌AGS细胞自噬流的作用.方法 5、10、20 μmol/L浓度的姜黄素处理AGS细胞24h,采用MTT法观察姜黄素对AGS胃癌细胞增殖的抑制作用,Western blot检测姜黄素对微管相关蛋白LC3和泛素相关蛋白SQSTM1/p62蛋白表达的影响.Western blot检测自噬抑制剂氯喹与姜黄素联合使用对LC3和SQSTM1/p62蛋白表达的影响.结果 MTT结果显示,姜黄素可以明显抑制AGS胃癌细胞的增殖,并且呈剂量依赖性(P ＜0.05,P＜0.01).Western blot结果显示,随着姜黄素浓度的增加,LC3-Ⅱ和SQSTM1/p62蛋白的表达均呈剂量依赖地上调(P ＜0.05,P＜0.01),提示姜黄素可以引起自噬体的堆积.自噬抑制剂氯喹与姜黄素联合使用可以增强LC3-Ⅱ和SQSTM1/p62蛋白表达的上调,进一步验证了姜黄素对自噬流的抑制作用.结论 姜黄素可能通过阻滞人AGS胃癌细胞自噬体降解,抑制AGS胃癌细胞的自噬流,促进AGS胃癌细胞的死亡.

氯喹可加重Con A诱导的自身免疫性肝损伤

氯喹(chloroquine,CQ)可抑制免疫反应,偶用于类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病的治疗,但氯喹对自身免疫性肝炎的影响目前尚不明确.本研究拟探讨CQ对小鼠自身免疫性肝损伤的影响及可能机制.小鼠尾静脉注射Con A建立小鼠肝损伤模型,1h后,腹腔注射CQ或等体积PBS.观察小鼠生存状况,在不同时间点收集血清和肝组织,采用赖氏法检测血清谷丙转氨酶(GPT)水平;ELISA方法检测血清细胞因子IFN γ及TNF-α含量;HE染色观察肝脏病理损伤情况;免疫印迹检测小鼠肝脏自噬水平指标LC3-Ⅱ和P62.结果显示,Con A+CQ组小鼠血清中GPT水平显著高于Con A组,且病理切片染色显示Con A+CQ组肝脏损伤较Con A组更严重;Con A+CQ注射组小鼠的存活率明显低于仅注射Con A组(P＜0.0001);Con A+CQ组小鼠血清中炎性细胞因子IFN-γ和TNF-α的分泌高于Con A组;CQ可抑制Con A刺激诱导的小鼠肝脏自噬水平升高.氯喹可加重Con A诱导的自身免疫性肝损伤,其机制可能是通过抑制肝脏自噬水平从而加剧小鼠肝脏损伤.

氯喹在诱导肝癌细胞死亡中的作用机制研究

目的：研究自噬抑制药物氯喹（chloroquine ，CQ）诱导肝癌细胞死亡的作用机制，探索自噬相关药物可能的临床应用价值。方法：选取3种肝癌细胞系，给予不同浓度CQ干预24 h ，采用M T T法检测细胞的增殖情况，采用碘化丙啶（PI）染色法检测细胞死亡，采用 Hochest33342染色、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）染色、Western blotting （caspase‐9）法检测凋亡。采用GFP‐LC3转染、Western blotting （LC3）及细胞电镜技术检测细胞自噬功能。结果：M T T检测显示，CQ作用24 h能够显著抑制肝癌细胞增殖。CQ （≥20μmol／L ）干预后，PI染色阳性细胞明显增多，Hochest33342核染色显示核浓聚、核碎裂，TUNEL染色阳性细胞明显增多，caspase‐9活化；而CQ（5、10μmol／L）干预后PI染色阳性细胞数目无明显变化。CQ处理细胞后，GFP‐LC3阳性细胞明显增多，LC3‐Ⅱ蛋白表达明显增高。同时用caspase抑制剂Z‐VAD‐FMK和3‐MA或沉默Atg5的表达预处理，可显著抑制40μmol／L CQ诱导的MHCC97‐L细胞的死亡。结论：CQ可以抑制肝癌细胞自噬降解，导致自噬小泡及自噬标志性蛋白积聚。大剂量CQ直接诱导肝癌细胞死亡，其死亡形式既具有凋亡的特征又具有自噬样死亡的特征。

氯喹、阿苯哒唑、替硝唑治疗儿童贾第虫病的疗效观察

印度加尔各答和奥里萨地区的间日疟原虫氯喹敏感性调查

氯喹治疗老挝急性无并发症恶性疟的疗效

氯喹和盐酸阿莫地喹分别与乙胺嘧啶-磺胺多辛联合治疗儿童急性无并发症恶性疟的随机比较

082在加纳北部用氯喹治疗无并发症恶性疟

恶性疟原虫:在旅游者中用氯喹加氯胍预防恶性疟原虫无效与pfcrt和二氢叶酸还原酶(DHFR)突变有关

印度尼西亚和苏门答腊岛南部的抗氯喹三日疟原虫