中药秦艽和习用品中5种环烯醚萜类成分的HPLC含量测定

环烯醚萜类成分是中药秦艽的主要活性成分,其中马钱苷酸、6 '-O-β-D-葡萄糖基龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷在秦艽药材中的含量相对较高且具有良好的药理活性.实验中建立了中药秦艽中5种环烯醚萜的含量测定方法:Shiseido SPOLAR C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相为0.04％甲酸水(A)-乙腈(B)梯度洗脱;体积流量0.8 mL·min-1;检测波长240nm;柱温30℃;进样量5μL.该方法分离度良好,标准曲线在线性范围内相关性良好,加样回收率均值在97.35％～ 106.2％.对8种39份秦艽药材进行含量测定,结果显示5种环烯醚萜类成分在8种秦艽类药材中均有分布.种内含量差异较大表明含量除了与物种有关外,与种质资源、环境和生长年限都密切相关.小秦艽中各组分的含量明显低于其他3种正品秦艽.

采用加速试验法考察挥发油经β-CD包合前后的稳定性

麻葛感冒胶囊是由麻黄、葛根、薄荷、羌活、秦艽、防风、陈皮药味组成,属新药.方中多含挥发性成分,为了控制药品质量,以薄荷脑为指标考察挥发油经β-CD包合前后的稳定性.

药用植物秦艽的传粉特性研究

秦艽Gentiana macrophylla为龙胆科多年生草本植物,具有散风祛湿、和血舒筋的功能,可治疗关节炎、黄疸等病症,常用于中药方剂中[1].近年来,由于乱采滥挖和其特殊的生长习性,致使秦艽野生资源日趋减少,而药用量又日益增加,供求矛盾日趋加剧.为了满足需要,众多学者在秦艽人工种植技术及秦艽生物学特性、植物化学、药理学等方面做了相关研究[2-6],但有关秦艽生殖生态学方面目前还未见报道.

秦艽人工驯化技术研究

秦艽Gentiana macrophylla系龙胆科龙胆属植物,是国家重点保护野生药材之一[1],主要分布于西藏、甘肃、四川以及东北、华北等地.一般生长在海拔2 000～3 000 m的亚高山草甸及灌丛;特别适宜生存在气候冷凉、雨水较多、日照充足、土层深厚、土壤肥沃、富含腐殖质的山坡丛中.近年来,由于药用量日益增加,导致过度采挖,致使秦艽野生资源日趋减少.而秦艽育种、栽培等资源保护方面的研究则几乎空白[2].为了保护中药种质资源,近3年来作者开展了秦艽的人工种植技术试验研究,现将人工种植试验结果总结如下.

甘肃野生秦艽rDNA ITS区序列分析

目的:比较研究甘肃不同地区4种野生秦艽rDNA ITS碱基序列的差异及其规律,寻找秦艽组药材之间的分子鉴别方法.方法:对rDNA ITS区进行了PCR扩增、测序,运用Clustal X,MEGA3等软件对ITS区序列进行分析.结果:不同地区秦艽、麻花秦艽、小秦艽及黄管秦艽的ITS长度为800 bp,ITS1,5.8S和ITS2序列长度分别为290,170,340 bp.根据两者序列以邻接法建立分子系统发生树.结论:ITS序列可以作为野生秦艽分子鉴定的依据.

中药材秦艽主要吸收成分群研究

该研究通过制备大鼠外翻肠囊模型,并对其转运活性进行了确认,以秦艽中的马钱苷酸、当药苦苷、龙胆苦苷、以及当药苷为检测指标,用HPLC对经肠囊主动转运吸收后被吸收进入浆膜层的秦艽提取物中的主要成分群进行了分析,探讨了中药材主要吸收成分群的研究方法.结果表明所采用的大鼠外翻肠囊模型,在实验45 min内,组织结构完整,转运活性良好;HPLC的专属性和线性关系良好,精密度的RSD ＜5.5％;样品的萃取回收率均在90％以上;在室温条件下,样品的稳定性良好.秦艽提取物经肠囊主动转运后,在浆膜液样品中,检测到了8种主要成分;提取物的浓度对主要成分的吸收具有极其显著影响,而不同肠段对主要成分吸收的影响没有显著差异.由此可见,大鼠外翻肠囊技术可用于某些中药材的吸收成分群的研究,是一种探讨中药材活性成分的有效方法.

秦艽药材的品质区划研究

通过文献查阅,明确中药秦艽分布信息,实地采集秦艽药材79份.基于采样信息,利用秦艽药材指标成分和环境因子之间的回归模型,结合MaxEnt对生态适宜区的预测结果和指标成分的主成分分析结果,应用ArcGIS的空间分析功能对秦艽药材的品质进行空间分布估算.结果显示,陕西南部、甘肃南部、四川中部及西藏东南部秦艽药材综合品质较高.研究结果与秦艽药材的产区一致,可以为秦艽资源保护、开发和利用提供参考依据.

中药秦艽生态适宜性区划研究

为了预测中药秦艽在我国的生态适宜区分布,寻找影响适宜性分布的主要生态因子,该研究通过实地调查及网络共享平台数据获取313份秦艽、186份麻花艽、343份小秦艽和131份粗茎秦艽的分布信息,利用MaxEnt模型和ArcGIS技术,综合55项环境因子,分析影响中药秦艽生态适宜性的主要环境因子.分别分析影响4个种的主要环境因子后认为,降水量和海拔对4个种生态适宜性分布均产生主要影响.秦艽生态适宜区主要集中甘肃南部、山西全省、陕西中部和青海东部;麻花艽生态适宜区主要集中在甘肃西南部、青海东部、四川北部及西北部和西藏东部;小秦艽生态适宜区主要集中在甘肃西南及南部、青海东部、山西全省和陕西北部;粗茎秦艽生态适宜区主要集中在四川和云南北部,西藏东部、甘肃南部和青海东部也有分布.秦艽药材的生态适宜性区划结果与每种来源的秦艽实际分布相一致.该研究可以为中药秦艽野生资源的收集、保护和栽培区域的选择提供参考依据.

基于多指标成分分析野生与栽培秦艽药材商品规格等级

利用超高效液相色谱法测定秦艽药材所含7种主要化学成分的含量,通过典型对应分析和Fisher判别分析等现代统计学方法对药材化学指标进行聚类,划分质量等级,再结合相关性分析筛选药材品质指标,对野生和栽培秦艽药材不同商品规格和同一商品规格不同等级的药材质量进行综合定量化等级划分,为秦艽药材商品规格等级的合理划分提供依据.终明确了以龙胆苦苷、马钱苷酸、獐牙菜苦苷等为主要指标成分的质量评价范围,并引入了中药材质量等级判别指数(herbal quality index,简称HQI),通过Fisher判别分析建立了基于药材品质的等级判别函数.经过分析,无论野生、栽培,萝卜艽质优、麻花艽质良、小秦艽质差.同一规格不同等级间,栽培萝卜艽一等质差、二等质良、三等质优;野生萝卜艽一等质良、二等质优;麻花艽一等质优、二等质良;小秦艽一等质良、二等质优,但均不显著.该研究对秦艽药材品质的定量化评价提供了思路和方法.

秦艽五藤饮治疗类风湿性关节炎的临床观察

类风湿性关节炎(RA)是一个累及周围关节为主的多系统性炎症性的自身免疫性疾病,其特征性症状为对称性,周围性多个关节慢性炎症性病变,临床表现为受累关节疼痛、肿胀、功能下降,病变呈持续反复发作过程,属中医学"痹证"范畴,其证虽有寒、热、虚、实之别,然总以筋膜骨节脉络之气血不通或津液痹阻不通为共同病变特点.自2000年1月-2002年3月,笔者以舒筋活络为治疗原则,配以补益气血之品,应用秦艽五藤饮治疗42例RA患者取得满意疗效,并与消炎痛和雷公藤多甙片联合治疗28例患者进行对照,现报告如下.

秦艽不同配伍对风湿痹证模型大鼠血清炎症因子水平的影响

目的 观察秦艽不同配伍药对对风寒湿痹和风湿热痹模型大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1(IL-1β)水平的影响,并探讨其治疗痹证的作用机制. 方法 将128只Wistar大鼠随机分为风寒湿痹和风湿热痹两大组,每组再分为空白组、模型组、雷公藤组、单味秦艽组、秦艽桑寄生组、秦艽防己组、秦艽威灵仙组、秦艽羌活组,每组8只.采用佐剂诱导加外界施以“风寒湿”和“风湿热”致病因素制备风寒湿痹与风湿热痹大鼠模型,并自造模第1天起各给药组给予制备的相应药液10 ml/kg灌胃,空白组和模型组给予等量生理盐水,每日1次,连续25天.测定各组大鼠血清TNF-α和IL-1β水平.结果 风寒湿痹和风湿热痹模型组大鼠TNF-α、IL-1β水平均高于空白组(P＜0.01).风寒湿痹和风湿热痹中各给药组大鼠血清TNF-α、IL-1β较模型组均有不同程度降低(P＜0.05或P＜0.01).风寒湿痹模型中,秦艽羌活组、秦艽威灵仙组、秦艽桑寄生组大鼠的TNF-α、IL-1β水平下降更明显(P＜0.01)；秦艽羌活组、秦艽威灵仙组、秦艽桑寄生组大鼠的TNF-α水平低于秦艽防己组(P＜0.05或P＜0.01).风湿热痹模型中,秦艽防己组、秦艽桑寄生组、秦艽羌活组大鼠的TNF-α、IL-1β水平下降更明显(P＜0.01)；秦艽防己组大鼠的IL-1β水平低于秦艽威灵仙组(P＜0.05). 结论 秦艽配伍羌活、威灵仙、桑寄生降低风寒湿痹模型大鼠TNF-α、IL-1β水平效果明显,秦艽配伍防己降低风湿热痹模型大鼠TNF-α、IL-1β水平效果明显.

怎样辨治老年性关节炎?

答:关节炎常见的有风湿性关节炎、类风湿性关节炎和骨关节炎等,由于风湿性关节炎与中医的风寒湿病因概念不同,故临床多从<素问·痹论>"风寒湿三气杂至,合而为痹"的痹证诊治,通常用三痹汤(独活、杜仲、续断、黄芪、牛膝、细辛、秦艽、茯苓、肉桂、防风、川芎、人参、当归、芍药、地黄、甘草、生姜)之类.然而老年性关节炎则非常规诊治所能对症,因而有时疗效不甚满意.

莶草、威灵仙、秦艽、独活同为祛风湿药，临床上如何运用?

复方茜草秦艽颗粒质量标准的研究

目的 建立复方茜草秦艽颗粒质量标准,使该药品质量可控.方法 采用HPLC法对制剂中的茜草进行定性鉴别,色谱柱:Kromasil 100-5C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇-水(80∶20);检测波长:250 nm;流速:1.0ml ·min-1.用TLC法对制剂中的秦艽、甘草进行定性鉴别,HPLC法测定制剂中龙胆苦苷的含量.色谱柱:Kromasil 100-5C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇-水(20:80);检测波长:273 nm;流速:1.0 ml ·min-1.结果 龙胆苦苷的加样回收率平均为99.30％,RSD为0.95％(n=6).TLC、HPLC鉴别阴性无干扰.结论 试验结果表明,该方法重复性良好,方便控制该制剂的质量.

秦艽不同配伍对风湿热痹模型大鼠足跖及血清类风湿因子C-反应蛋白的影响

目的 观察秦艽不同配伍药对风湿热痹类风湿关节炎模型大鼠足跖肿胀度、关节炎症及血清类风湿因子、C-反应蛋白含量的影响.方法 将80只SD大鼠随机分为空白组、Ⅱ型胶原组、病证模型组、阳性药组、单味秦艽组、秦艽威灵仙组、秦艽桑寄生组和秦艽防己组共8组,每组10只.采用Ⅱ型胶原诱导加风湿热环境因素刺激制备风湿热痹类风湿关节炎大鼠模型,连续18 d.造模结束后各给药组给予制备的对应药液灌胃,空白组、Ⅱ型胶原组、病证模型组给予等量0.9％氯化钠溶液,连续21 d.实验中每3d测一次足跖厚度,并计算足跖肿胀度;实验第38天进行关节炎指数评分,酶联免疫法测定各组大鼠血清类风湿因子、C-反应蛋白含量.结果 与空白组比较,Ⅱ型胶原组和病证模型组的足跖肿胀度和关节炎指数明显升高(P＜0.01);与病证模型组比较,各给药组足跖肿胀度和关节炎指数均有不同程度的降低,其中秦防组降低为显著(P＜0.01).血清学检测结果显示,与空白组比较,Ⅱ型胶原组及病证模型组大鼠血清类风湿因子、C-反应蛋白含量明显增加;与病证模型组比较,各给药组大鼠血清类风湿因子、C-反应蛋白均有不同程度降低,其中,秦防组类风湿因子、C-反应蛋白含量下降尤为明显(P＜0.01).结论 风湿热痹型类风湿关节炎,平寒相配效果优于平温、平平相配,实验结果基本符合中医临床“疗热以寒药”的治疗原则.

UPLC-Q-TOFMS法分析中药龙胆和秦艽的化学成分

目的 采用UPLC-Q-TOFMS技术,建立中药龙胆和秦艽化学成分分析方法,并对2种药材进行鉴别.方法 以药材甲醇提取物作为供试品,色谱柱:Agilent Zorbax Eclipse plus C18(2.1 mm×150 mm,1.8μm),0.1％甲酸水溶液和乙腈(含0.1％甲酸)梯度洗脱,柱温:40℃,流速为0.4 ml·min-1,进样量:10μl;质谱采用ESI源负离子扫描模式,化合物鉴定通过对高分辨一级质谱数据以及二级碎片离子信息与文献数据库进行匹配.采用偏小二乘法判别分析对2种药材进行鉴别.结果 共鉴定23个化合物,包括14个环烯醚萜苷类成分、5个黄酮类、3个三萜类成分和豆甾醇.PLSDA前两个主成分累积贡献率为81.4％,可鉴别龙胆和秦艽,变量重要性因子(VIP)表明龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、2'-(2,3-二羟基苯甲酰)-龙胆苦苷、异牧荆素对区分两种药材贡献较大.结论 UPLC Q-TOFMS能快速鉴定龙胆和秦艽中的化学成分,结合偏小二乘法判别分析,为两者临床使用提供理论依据.

追风透骨丸致胃肠道反应

追风透骨丸为国家中药保护品种,主要成份为乳香、没药、当归、赤芍、防风、桂枝、麻黄、制川乌、制草乌、白术、秦艽、制天南星、甘草等,具有祛风除湿,散寒止痛,通经活络功效,因其服用方便,作用迅速,疗效确切,副作用小,为临床常用.我院用该药多年来,罕见1例出现严重消化道反应,现报道如下.

微针条件下秦艽复杂成分体系的透皮给药研究

本文探讨了秦艽复杂成分体系在微针条件下透过不同部位皮肤的给药特点.采用双室扩散池,分别以离体小鼠不同部位皮肤和微针预处理离体小鼠不同部位的皮肤作为透皮屏障,用高效液相色谱(HPLC)相似度评价接收池中秦艽复杂成分体系的透皮特点及小鼠不同部位皮肤的龙胆苦苷的透过速率和透过量.被动给药和微针条件下给药24 h,接受池中秦艽复杂成分体系与原液相似度基本在83.0%～98.9%之间；微针预处理小鼠不同部位皮肤后,通过腹部皮肤给药接收液中秦艽复杂成分体系与原液相似度达到90%的时间为4h;而背部皮肤和颈部皮肤给药时,则接收液中秦艽复杂成分体系与原液相似度达到90%的时间分别为18h和12h.微针能较理想的用于中药复杂成分的透皮给药,极大地缩短透皮吸收的时滞,提高其生物利用度;相对颈部和背部皮肤,微针通过腹部皮肤更能显著提高中药多成分透皮给药的速率及与原液的相似度.

秦艽对风湿热痹类风湿关节炎大鼠的保护作用

目的 研究秦艽对风湿热痹类风湿关节炎(RA)大鼠踝关节核因子κB(NF-κB)的表达及作用机制.方法 按照随机数字表法将SD大鼠分为8组,每组10只:正常组、疾病模型组(Ⅱ型胶原)、病证模型组(Ⅱ型胶原+风湿热)、阳性药组、秦艽组、秦艽+威灵仙组、秦艽+桑寄生组、秦艽+防己组.第1天,在大鼠的背部2点和尾根部1点的皮内注射Ⅱ型胶原(CⅡ)乳剂各0.1 mL,致炎;第2天(除正常组和疾病模型组外),用人工气候箱进行风湿热病证模型造模,连续11d;第12天,在大鼠左后肢足跖皮内注射CⅡ乳剂0.1 mL进行2次免疫作为激发注射,再放入人工气候箱进行风湿热病证模型造模,连续7d.造模结束后,各给药组按15 mL·kg-1给予对应的药液灌胃,正常组、2种模型组给予等量0.9％ NaCl,每天1次,连续21 d.第39天,踝关节取材,用苏木精-伊红(HE)染色技术观察踝关节组织的破坏程度,用免疫组织化学法测定核因子κB(NF-κB)的蛋白表达水平,用免疫印迹法对NF-κB的表达进行半定量分析.结果 与NF-κB在正常组的表达量105.08±7.97相比,疾病模型组和病证模型组的NF-κB蛋白表达量分别为170.57±8.93,180.02±6.93,差异均有统计学意义(均P ＜0.05),且病症模型组高于疾病模型组.各给药组之间比较,秦艽防己组的NF-κB蛋白表达量为112.37 ±7.34,差异有统计学意义(P＜0.05).NF-κB蛋白相对表达量:与正常组的0.41 ±0.16比较,疾病模型组和病证模型组的分别为0.78 ±0.12,1.08 ±0.11,差异均有统计学意义(均P＜0.05);与病证模型组比较,秦艽防己组的NF-κB蛋白相对表达量为0.53±0.04,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 各秦艽寒热不同配伍可能通过下调NF-κB,对RA起到保护作用,其中平寒相配效果佳.

六盘山人工栽培秦艽质量研究

通过对六盘山野生秦艽和人工栽培品的原植物特性、药材的性状特征、显微鉴别以及含量测定进行比较,研究结果表明:六盘山人工栽培秦艽没有大的变异,其各项质量指标与野生品基本一致,可大面积推广应用人工栽培技术,从而拓展秦艽药用资源以满足市场需求.