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裸花紫珠5-羟基-3,7,3',4'-四甲氧基黄酮抗炎作用研究
目的:研究5-羟基-3,7,3',4'-四甲氧基黄酮的抗炎作用,并从影响一氧化氮生成探讨其机制.方法:采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀法观察5-羟基-3,7,3 ',4'-四甲氧基黄酮的抗炎作用;观察5-羟基-3,7,3',4'-四甲氧基黄酮对LPS诱导的RAW264.7细胞释放NO的影响.结果:5-羟基-3,7,3',4'-四甲氧基黄酮各剂量组均能明显减轻二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀;在50μM时对LPS诱导的RAW264.7细胞释放NO有轻微的抑制作用.结论:5-羟基-3,7,3 ',4'-四甲氧基黄酮具有抗炎作用,对抑制炎性因子一氧化氮的产生有轻微的抑制作用,可知其可能是通过其他机制产生抗炎作用的.
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改良TMB比色法替代51Cr释放法检测抗体依赖细胞细胞毒效应研究
目的 建立一种无致癌性、无放射性、灵敏的3,3',5,5',--四甲基联苯胺(TMB)检测ADCC实验中靶红细胞自然释放的微量Hb含量的改进方法.方法 利用Hb类似过氧化物酶效应催化双氧水氧化3,3',5,5'--四甲墓联苯胺(TMB),使其发生显色反应,改进吸光度在600mm处的检测体系.采用Nycodenz密度渗透压介质分离单核细胞作为ADCC的效应细胞.比较2种情况的灵敏度,并与51Cr释放法进行方法学对照.在 ADCC实验中,分别用s51Cr释放法和改良TMB法测定Hb自然释放率.结果 显色反应结束后加硫酸酸终止测定大吸收波长移至450 nm,不加酸终止测定波长为600nm.不加硫酸终止的TMB法检测Hb低检出限是0.0075g/L,显色时间20min,TMB优浓度是0.62g/L,空白吸收始终稳定的维持在＜0.003的较低值.而加酸终止的TMB法低检出限仅为0.5g/L.显然不加酸终止的改良TMB法的灵敏度非常显著地高于加酸终止的TMB法.在测定ADCC靶红细胞自然释放率试验中,不加酸终止的改良TMB法仅需4h孵育时间以及2.5x106cell/ml红细胞浓度即可测定出释放Hb含量,而加酸后孵育时间要长达14h并且19要更高浓度的红细胞才能测出自然释放Hb含量.用不加硫酸终止的TMB法检测ADCC活性与51Cr释放法相关性良好(r=0.999).结论 改良TMB比色法可以代替,51Cr释放法检测ADCC的靶红细胞细胞毒效应.加酸终止、测定波长为450 nm的TMB比色法的灵敏度与51Cr释放法的灵敏度有显著差距,不适用低活性ADCC效应检测.
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HPLC测定赤胫散中的3,3'-二甲基鞣花酸和3,3',4'-三甲基鞣花酸
目的 采用HPLC测定赤胫散中的3,3'-二甲基鞣花酸和3,3',4 '-三甲基鞣花酸.方法 色谱柱为Dikma-C18柱,流动相为甲醇-乙腈-0.1％磷酸(17∶33∶50),流速1 mL· min-,检测波长248 nm,柱温30℃.结果 3,3'-二甲基鞣花酸0.198～0.990 μg(r=0.9991)、3,3 ',4'-三甲基鞣花酸0.098 ～0.491 μg(r =0.9990)与峰面积的线性关系良好,回收率分别为102.40％、98.41％,RSD分别为2.25％、1.87％(n=6).结论 所用方法简便、快捷、准确,可用于赤胫散药材的质量控制.
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HPLC筛选千斤拔中黄酮类成分的水提工艺
目的 研究千斤拔有效成分的水提取佳工艺条件.方法 采用RP - HPLC法筛选,色谱柱为Diamonsil C18(250 mm× 4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.5％磷酸水(23∶77、10 min,43∶57、11 ～ 55 min),流速1.0 mL·min-1,柱温30℃,检测波长240 nm.结果 千斤拔佳水提取工艺的料液比为1∶16,80 ℃回流提取2h,提取3次.结论 所用工艺条件为千斤拔提取和进一步开发研究提供了参考.
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敦煌消痹定痛酊对胶原诱导性大鼠关节炎模型NO、cAMP和PGE2影响的实验研究
目的:研究敦煌消痹定痛酊治疗类风湿性关节炎的作用机制,探讨其对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型关节液一氧化氮(NO)和3',5'-环腺苷酸(cAMP)及前列腺素E2(PGE2)含量的影响.方法:建立CIA大鼠模型,用双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法检测cAMP和PGE2含量,用亚硝酸盐-比色(Griess)法检测NO含量.结果:敦煌消痹定痛酊能显著降低CIA大鼠关节液中NO和PGE2的含量,升高cAMP的含量.结论:提示敦煌消痹定痛酊对CIA大鼠关节炎具有一定抑制作用,可通过抑制大鼠关节液中NO和PGE2的含量,升高cAMP的含量,从而减轻关节滑膜的炎症,这可能是其治疗类风湿性关节炎的作用机制之一.
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HPLC法同时测定陈皮饮片中5种黄酮类化合物的含量
目的:建立高效液相色谱法同时测定陈皮药材中5种黄酮类化合物柚皮芸香苷、橙皮苷、川陈皮素、3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黄酮及红橘素的含量,并对结果进行聚类分析.方法:采用Waters Synunetry 18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为0.1%甲酸水溶液-乙腈,梯度洗脱;检测波长为300 nm;流速1.0 mL·min-1.结果:柚皮芸香苷、橙皮苷、川陈皮素、3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黄酮及红橘素的线性范围分别为1.00～9.00 μg·mL-1(r=0.9998)、1.00～9.00 μg·mL-1(r=0.9999)、0.10～0.90 μg·mL-1(r=0.9997)、0.10～0.90 μg·mL-1(r=0.9999)、0.10～0.90 μg·mL-1(r=0.9994);加样回收率(n=5)分别为96.8%,99.4%,93.3%,94.4%,95.8%.结论:该方法准确、简便,具有良好的重复性和稳定性.试验结果显示,全国不同省市、不同产地陈皮饮片的含量存在差异.同时也说明多指标成分定量分析比单一指标成分定量分析能更伞面地反映陈皮饮片的内在质量.
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HPLC法体外筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂
目的:建立HPLC体外筛选黄嘌呤氧化酶抑制剂的方法.方法:采用HPLC法测定酶促反应体系中底物黄嘌呤在反应前后含量的变化,以此考察待测样品对黄嘌呤氧化酶的抑制作用.色谱条件:采用Agilent SB-C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以0.02 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(含甲醇1％)为流动相,流速1.0 mL·min-1,柱温为室温,检测波长254 nm,进样量20 μL.结果:在该色谱条件下,酶促反应体系中的黄嘌呤与其他成分分离度良好.利用该方法对14种中药进行了筛选,发现使君子、苏木、虎杖和牡丹皮四味中药的70％乙醇提取物对黄嘌呤氧化酶抑制作用较强,其IC50分别为10.04、8.02、2.06和1.36mg· mL-1.针对活性较好的苏木,对从其分离得到的24个化合物进行活性筛选,发现化合物7,3',4'-三羟基-3-苄基-2氢-苯并吡喃、3-去氧苏木酮B、苏木查尔酮和原苏木素A具有一定的活性.结论:该方法简单可行,准确性较高,可用于黄嘌呤氧化酶抑制剂的快速筛选.
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茶碱、咯利普兰和acetamide-45对GL62酵母细胞表达的人磷酸二酯酶4A的抑制作用
目的:研究G L 6 2酵母细胞中磷酸二酯酶4 A(PDE4A)的诱导表达和茶碱、咯利普兰、N-对氟苄基-3-[(N-4-吡啶)-乙酰胺]-吲哚45(acetamide-45)对GL62酵母细胞诱导提取物中PDE4A活性的抑制作用.方法:克隆了人PDE4A基因的GL62酵母细胞在CuS04 150μmol/L条件下诱导表达PDE4A并提取,用高效液相色谱法测定PDE4A的活性.结果:GL62酵母细胞在CuS04诱导下的表达产物蛋白分子在62kDa和83 kDa之间,表达产物的PDE4A的活性在3h达到大为(188±23)μim01@g-1@min-1,其米氏常数Km为(17.7±2.6)μmol@L-1.茶碱,咯利普兰和acetamide-45对诱导提取物PDE4A活性的IC50(95%可信限)分别为1642(989-2727),4.58(3.45-6.08)和275(170-444)μmol@L-1.结论:GL62酵母细胞经CuSO4诱导可表达PDE4A,茶碱、咯利普兰和acetamide-45能抑制其活性,GL62酵母细胞的诱导表达提取物可用来研究PDE4A及其抑制剂.
关键词： 3' 5'-环核苷酸磷酸二酯酶 酵母细胞 环腺苷一磷酸 环鸟苷一磷酸 茶碱 咯利普兰 acetamide-45
