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组合单克隆抗体多表位检测日本血吸虫循环抗原的研究
目的 探讨抗肠相关抗原单克隆抗体(单抗)JPG5和抗虫卵可溶性抗原单抗JPS6、JPG5+JPG1组合和JPS6+JPG1组合对血吸虫循环抗原(CAg)的诊断效能.方法 采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)对慢性血吸虫病、急性血吸虫病、晚期血吸虫病、卫氏并殖吸虫病、华支睾吸虫病、乙型肝炎患者血清,以及治疗前、治疗后半年、治疗后1年的慢性血吸虫病疗效考核血清进行CAg单位点和多位点检测.结果 JPG5检测慢性血吸虫病患者的敏感性和特异性分别为74.3%和96.8%,JPS6分别为78.7%和95.3%;两株单抗与卫氏并殖吸虫病、华支睾吸虫病及乙型肝炎患者血清的交叉反应率分别为15.2%、15.6%、3.2%和21.5%、15.6%、16.0%.JPG5检测治疗后1年的慢性血吸虫病患者血清CAg阴转率高于JPS6.JPG5+JPG1组合检测慢性血吸虫病患者的敏感性和特异性分别为80.1%和93.7%,JPS6+JPG1组合分别为73.5%和96.1%;两种组合与卫氏并殖吸虫病、华支睾吸虫病及乙型肝炎患者血清交叉反应率分别为21.5%、15.6%、18.0%和22.8%、15.6%、16.0%.两种组合多位点检测治疗后1年的慢性血吸虫病患者血清CAg阴转率分别为66.7%和45.5%.结论 JPG5、JPS6可用作CAg检测的备选探针.JPG5+JPG1组合与JPS6+JPG1组合对CAg的诊断效能相近;较之单位点检测,多位点检测敏感性无明显提高.
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卵黄抗体IgY检测血吸虫病人循环抗原的初步研究
目的 探讨抗可溶性虫卵抗原(SEA)卵黄抗体(IgY)检测血吸虫循环抗原的应用价值.方法 以纯化的鸡IgY作为捕捉抗体,以酶标抗SEA单克隆抗体NP28-5B为检测抗体的双抗体夹心酶联免疫吸附试验法(S-ELISA)检测急、慢性血吸虫病人和健康人血清,并与常规检测抗体的酶联免疫吸附试验法(SEA-ELISA)作比较.结果 S-ELISA测得SEA浓度(y)与吸光度(A450)值(x)呈明显的正相关(y=459.22x-108.14, r=0.948 1).急性血吸虫病人循环抗原的阳性率为100.00%(9/9),慢性血吸虫病人循环抗原的阳性率为84.44%(38/45),健康人的特异性为96.00%(48/50).两种方法对血吸虫病的检出率差异无统计学意义(P>0.05).结论 S-ELISA具有较好的敏感性和特异性,可用于血吸虫病免疫诊断.
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McAb-Dot-ELISA检测牛日本血吸虫病血清循环抗原
目的应用McAb-Dot-ELISA检测牛日本血吸虫病血清循环抗原并观察其与现场粪孵结果的符合情况.方法用辣根过氧化物酶标记日本血吸虫单抗SSJ14;应用McAb-Dot-ELISA检测现场和实验室感染牛日本血吸虫血清循环抗原.结果检验酶标单抗的特异性和敏感性显示该株单抗有较高的特异性和敏感性,用实验室感染血吸虫病的阳性牛血清及阴性血清检测有100%的符合率,检测现场采集血清的循环抗原的结果和粪孵结果对比,总符合率达到82.91%.结论 SSJ14单抗和由此研制的McAb-Dot-ELISA方法能应用于牛日本血吸虫病血清循环抗原的检测.
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双抗体夹心斑点金免疫渗滤法检测血吸虫循环抗原的现场应用
目的探讨双抗体夹心斑点金免疫渗滤法(S-DIGFA)在现场的应用价值.方法在原已建立的以抗26 kDa GST基因重组蛋白多克隆抗体为捕获抗体兼测示抗体的S-DIGFA的基础上,应用该法检测血吸虫病中度流行区和传播阻断地区人群的血清共1 388份,并以双抗体夹心ELISA(S-ELISA)作对照.结果用S-DIGFA和S-ELISA平行检测血吸虫病中度流行区人群血清300份,阳性检出率分别为15.7%和17.3%;两法检测血吸虫病传播阻断地区人群血清1 088份,阳性检出率分别为3.9%和3.7%.结论 S-DIGFA检测循环抗原可在现场扩大应用和作血清流行病学调查.
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抗rSjCTPI单克隆抗体检测血吸虫循环抗原疗效考核价值研究
目的进一步探讨抗重组血吸虫磷酸丙糖异构酶(rSjCTPI)的单克隆抗体检测血吸虫循环抗原对血吸虫病疗效考核的价值.方法建立以纯化的抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的多克隆抗体(IgG)为捕捉系统,以酶标抗rSjCTPI为检测系统的酶联免疫吸附试验(P-M-ELISA)法,分别对同批治疗前及治疗后2、4、6、12个月的血吸虫病人进行检测,并与常规检测抗体的SEA-ELISA法比较.结果P-M-ELISA法对治疗前血吸虫病人检测阳性率为96.6%,而检测抗体的SEA-ELISA为98.3%.P-M-ELISA法对治愈后2、4、6、12个月血清循环抗原检测阴转率分别为1 5.3%、37.3%、52.0%、83.3%,而检测抗体的SEA-ELISA法分别为3.4%、6.8%、1 2.0%、1 6.7%.结论表明该法既有较好的诊断价值,又有较好的疗效考核价值.
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抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原IgY的制备及初步应用
目的 制备抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(Soluble egg antigen,SEA)鸡卵黄免疫球蛋白(Egg yolk immunoglobu-lin,IgY),探讨其应用于血吸虫病流行区查病的可行性.方法 在血吸虫病流行区采集间接红细胞凝集试验(IHA)阳性者尿液,在非流行区采集健康人尿液.以SEA经皮下注射免疫莱杭母鸡获得anti-SEA IgY,以十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定其相对分子量;并以anti-SEA IgY作为捕捉抗体,采用双抗体夹心法ELISA检测IHA阳性者和健康人尿液中的血吸虫循环可溶性虫卵抗原(Circulating soluble egg antigen,CSEA).结果 成功制备并纯化anti-SEA IgY.共检测IHA阳性者尿液48份,在尿液中检出CSEA阳性26例,检出率为54.17％;检测健康人尿液10份,均为阴性.结论 基于IgY的免疫诊断技术可有效检出人尿液中CSEA,其作为一种便捷、无创伤的新方法可应用于血吸虫病查病工作中.
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血吸虫病与其他寄生虫病网络精选Ⅵ(2004.09.01～2004.12.31)
1血吸虫病1.1试纸条测试阴极循环抗原诊断血吸虫病本研究评价了一种新的试纸条测试感染者尿液中的血吸虫抗原以诊断血吸虫病.试验的原理是在硝化纤维条上吸附胶状的针对血吸虫阴极循环抗原(CCA)的抗体,检测时将尿样与之反应.在坦桑尼亚Mwanza用该试纸条诊断一组高感染度的学校儿童,结果表明具有很高的敏感性,并且其结果与用测定虫卵数确定的感染度有关,也与用ELISA检测的阳极循环抗原与阴极循环抗原的结果相符.在血吸虫病非流行区学童中进行的研究表明该试纸条的特异性为90%.该试纸条诊断血吸虫病方法简便,不需要专门设备或特别的培训,且性能稳定,如果不受潮在常温下可保质3个月,为密封包装,便于运往需要应用的血吸虫病疫区.此外,该试验也易于规范化[1].
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沈阳市男性不育患者弓形虫感染情况的研究
目的:探讨男性不育患者弓形虫(TOX)感染的状况及感染后对男性生殖功能的影响.方法:用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测男性不育患者血中弓形虫循环抗原(CAg)、IgG及IgM抗体.结果:100例男性不育患者血清中CAg阳性者13例(13%),TOX-IgM阳性者16例(16%);而100例生殖功能正常的男性血清中CAg阳性者仅为1例(1%),TOX-IgM阳性者3例(3%);两者间差异非常显著(P＜0.01).两者TOX-IgG阳性者均为7例(7%).结论:TOX急性(早期)感染可能会影响男性生育能力,并导致男性不育.因此,男性也应注意避免感染弓形虫,防止导致不育的情况发生.
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弓形虫病基因诊断的动物实验研究
目的:建立敏感、特异、稳定的PCR法,用于弓形虫病诊断.方法:选择与合成引物并确立佳扩增条件,用PCR法检测实验感染鼠血液中弓形虫DNA,并与ELISA法检测循环抗原(CAg)作比较.结果:该PCR检测弓形虫DNA法特异性强,对其他7种寄生虫DNA均不扩增;敏感性高,可检测到0.2pgDNA;检测急性感染弓形虫小鼠血液早于感染后第2天出现阳性,与ELISA法查CAg比较,PCR检测弓形虫DNA法阳性出现时间早、检出率高.结论:该PCR法可应用于弓形虫感染的早期诊断.
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金标免疫渗滤法检测卫氏并殖吸虫循环抗原的研究
目的:建立一种快速、简便、检测卫氏并殖吸虫病患者血清循环抗原(CAg)的新方法.方法:双抗体夹心金标免疫渗滤法(DAS-DIGFA)以抗卫氏并殖吸虫成虫多克隆抗体为包被抗体,加待检血清后再加免疫金标记的抗卫氏并殖吸虫成虫单克隆抗体,阳性者出现红色斑点.结果:用DAS-DIGFA检测59例卫氏并殖吸虫病患者血清,其阳性率为96.6%(57/59);检测正常人血清20例、肺结核病患者血清20例、丝虫病患者血清27例、囊虫病患者血清20例和血吸虫病患者血清26例,除1例血吸虫病患者血清阳性外,余均为阴性,特异性为99.1%(112/113).结论:DAS-DIGFA是一种快速、简便、敏感和特异的检测卫氏并殖吸虫病患者血清中循环抗原的新方法.
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抗肝吸虫成虫单抗的制备及其在感染豚鼠血、尿循环抗原检测中的初步应用
目的:制备抗肝吸虫成虫单抗,用于检测肝吸虫宿主血、尿中肝吸虫循环抗原(CAg).方法:采用杂交瘤技术,制备抗肝吸虫成虫单抗 ,经鉴定、筛选后,以特异性、敏感性均高的单抗做双抗体夹心ELISA,检测肝吸虫动物宿主--感染豚鼠血、尿中的肝吸虫CAg.结果:获得4株稳定分泌抗肝吸虫成虫单抗的杂交瘤细胞株D2G8、D2E11、E11H8和H3B 4,其Ig类型鉴定结果均为IgG1,κ(kappa)型;其腹水单抗效价分别为1∶64 000、1∶ 128 000、1∶32 000及1∶2 000;其中D2G8、D2E11和E11H 8的免疫组化显示均定位于肝吸虫成虫的皮层.其中,D2G8、D2E11 和E11H8与血吸虫、肺吸虫、姜片虫、牛丝虫成虫抗原和棘球蚴囊液、囊虫抗原均无交叉反应,H3B4则仅与血吸虫成虫抗原有弱阳性交叉反应.以混合D2E 11、E11H8株单抗作包被抗体,以D2G8株单抗作酶标抗体,建立 ELISA夹心法进行检测.感染豚鼠血、尿中肝吸虫CAg检出率分别为95.4%和90.9%,CAg平均检出量分别为0.337 μg/ml和0.134 μg/ml.血、尿CAg联合检测检出率则可达100%.[ HTH 结论:抗肝吸虫单抗D2E11、E11H8及酶标D2G 8联合ELISA检测肝吸虫宿主血、尿中肝吸虫CAg具有高度的敏感性和特异性,对肝吸虫病活动性感染的诊断可能具有重要价值.
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基于IgY的ELISA用于囊尾蚴循环抗原的检测
目的 建立基于IgY的双抗体夹心ELISA用于囊尾蚴病的诊断.方法 制备并纯化抗囊尾蚴循环抗原(CA)卵黄抗体(IgY),建立以抗CA的IgY为捕获抗体,酶标记抗CA的单克隆抗体1A5为检测抗体的双抗体夹心ELISA法,共检测样品450份,并与捕获抗体和检测抗体均为单克隆抗体的ELISA法比较,验证方法的敏感性、特异性与实用性.结果 成功制备并鉴定了特异性IgY抗体,建立了基于Igy的双抗体夹心ELISA检测体系.IgY-ELISA和双单抗-ELISA检测囊尾蚴CA的灵敏度分别为8.3 μg/L和13.9 μg/L.IgY-ELISA检测囊尾蚴病患者血清与脑脊液的CA阳性率分别为100％ (139/139)与89.5％ (17/19),囊尾蚴病猪血清的阳性率100％ (222/222),健康人与健康猪血清的阴性率为100％.结论 建立的基于lgY的双抗体夹心ELISA检测囊尾蚴CA用于囊尾蚴病诊断,具有较高的特异性和敏感性,可用于囊尾蚴病的辅助诊断.
关键词： 囊尾蚴病 IgY 循环抗原 双抗体夹心酶联免疫吸附实验 -
囊虫病循环抗原检测结果用于疗效考核的研究
目的查明囊虫死亡后患病机体内循环抗原(CA)的变化规律,以此为依据判定CA检测作为疗效考核标准的可行性.方法用囊虫循环抗原检测试剂盒,对15头囊虫病猪和15例囊虫病患者治疗前后血清CA的变化情况作了观察.结果用吡喹酮治疗囊虫病猪15头,经剖检证实治愈者13头.其中10头在治疗后15天血清中CA的衰减幅度大于2,治疗30天后13头猪的血清CA衰减幅度大于2,其中3头猪的CA已转阴;治疗后60天CA转阴的猪达10头.未治愈的两头病猪的CA一直变化不大.对囊虫病患者15例,用丙硫咪唑治疗,其中9例经1疗程治愈,治疗后30天的CA衰减幅度大于2,治疗60天后CA全部转阴;3例经2疗程治愈,60天后CA的衰减幅度大于2,1例转阴;2例经3疗程治愈,治疗后90天的CA衰减幅度大于2;另1例严重感染患者经6疗程治疗未治愈,其血清CA的衰减幅度小于2.结论血清的CA吸光度(absorbance)A值变化能准确反应囊虫在患者体内的生存状态,以治疗前后的CA衰减幅度大于2或消失可作为囊虫病治愈的考核依据.
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人源和猪源血清中囊虫循环抗原的免疫与理化性质比较
囊虫病是一种人畜共患病,在我国部分地区流行严重[1-2],也是我国"十一五"规划纲要中需重点控制的寄生虫病之一.本课题组已研制并生产了囊虫病循环抗原(CA)酶联免疫检测试剂盒,获得了国家卫生部颁发的新药证书和生产批号,首次为我国囊虫病患者的诊断和流行病学调查提供了标准化的试剂[3].
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常山县食品从业人员弓形体感染血清学调查
弓形体病(koxoplasmosis)是一种由弓形体引起的寄生虫病.孕妇感染弓形体后,可经胎盘使胎儿发病或死亡,造成先天性畸形、智力不全或流产等,影响优生优育.该病发生与职业有关,肉类加工工人等人群易感染[1].为此,我们于2001年对394名食品从业人员进行了弓形虫特异性抗体(IgG、IgM)及循环抗原(CAg)检测现将结果报告如下.
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联合检测血清广州管圆线虫循环抗原及循环抗体的临床价值
目的:探讨血清中广州管圆线虫循环抗原(CAg)和循环抗体检测对广州管圆线虫病的诊断价值.方法:用单克隆抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫病患者血清中循环抗原,间接ELISA法检测血清中特异性循环抗体.结果:25例广州管圆线虫病人血清中循环抗原的阳性率为80%,循环抗体的阳性率为88%;56例其他寄生虫病人血清循环抗原检测均为阴性,循环抗体检测与1例旋毛虫病人血清有交叉反应;25例健康人广州管圆线虫循环抗体阳性率为16%,循环抗原检测全部为阴性.结论:联合检测血清中广州管圆线虫循环抗原和循环抗体有助于提高广州管圆线虫病的诊断率.
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弓形虫抗血清IgG的制备及其检测效果研究
目的比较弓形虫不同免疫原所制备抗血清IgG的检测效果,优选高效价的抗体诊断试剂.方法制备弓形虫的细胞质抗原(C)、代谢抗原(S).用抗原C、C+S、S及活虫(P)各免疫2只家兔,收集抗血清经纯化而获得IgG抗体(多抗)并制备酶标记抗体;用上述4种多抗与对应的多抗-HRP组合成4种双抗体夹心型ELISA,检测人血清CAg和C、S抗原,评价试剂的敏感性;抗血清与疟原虫、隐孢子虫等抗原进行交叉反应性试验,评价试剂的特异性;采用捕获法检测人血清IgM抗体,比较4种多抗-HRP的检测效果.结果各种ELISA夹心法同步检测CAg阳性标本7例,阴性样本8例,均未出现假阴性和假阳性反应,其OD均值的P/N比值依次为C+C组33.5、S+S组27.8、CS+CS组21.2、P+P组13.2;C和S抗原的低检出量均为0.5μg/ml;与其它寄生虫未出现交叉反应.4种多抗-HRP同步检测IgM抗体阳性标本3例,阴性样本7例,均未出现假阴性和假阳性反应,其OD均值的P/N值高的是抗C-HRP.结论4种抗体用于检测人血清IgM抗体、CAg、C和S抗原以及其它抗原的结果表明,各种抗体试剂均具有良好的敏感性和特异性,其中以抗C抗体试剂为满意.(2)4种组合形式的夹心ELISA,检测弓形虫抗原的差异无统计学意义,表明弓形虫C和S抗原间存在着共同抗原成分.
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平行检测血清和尿液中循环抗原诊断日本血吸虫病的研究
应用McAb-Dot-ELISA平行检测了人宿主的血清和尿样(浓缩20倍)中日本血吸虫肠相关趋阴极循环抗原(CCA).81例急性血吸虫病患者的血清和尿样的阳性率分别为96.30%和66.67%,而血清和尿样组合检测的阳性检出率提高至100%.109例慢性血吸虫病患者的血清和尿样的阳性检出率分别为77.06%和10.09%,组合检测的阳性检出率没有提高.100份健康人的血清和尿样的假阳性率均为0%.53例华枝睾吸虫病患者的血清和尿样的交叉反应率分别为9.43%和0%.48例钩虫病患者的血清和尿样的交叉反应率均为0%.
关键词： 平行检测 循环抗原 日本血吸虫病 McAb-Dot-ELISA -
3种CAg检测方法评价吡喹酮治疗日本血吸虫病疗效的比较
目的:探讨3种不同的循环抗原(CAg)检测方法在日本血吸虫病人经吡喹酮治疗后疗效考核的应用价值.方法:采用单克隆抗体(MAb)JPG3,分别建立了Dot-ELISA、Sandwich-ELISA和R-IHA 3种CAg检测方法,用吡喹酮(50 mg*kg-1,顿服)治疗日本血吸虫病人,进行治疗后不同时期的同步血清学检测,并评估检测结果.结果:吡喹酮治疗后半年,上述3种检测方法的CAg阴转率分别为 75.8%、72.6%和 43.5%(P＜0.01), 治疗后1年分别为 83.9%、88.7%和 71.0%(P＜0.05);治疗后2年分别为 87.1%、95.2%和 93.5%(P>0.05); CAg阳性病例的平均抗原滴度倒数(GMRT)随治疗后时间的延长逐步下降,治疗后2年三种方法均达到各自的低阳性稀释度.结论:考核吡喹酮治疗日本血吸虫病人近期(半年或1年)疗效,Dot-ELISA和Sandwich-ELISA均较好,但后者在结果判读上较前者更为客观;考核远期(2年)疗效,3种方法的检测结果无显著性差别;反映CAg水平的GMRT在一定程度上亦能评估吡喹酮之疗效.
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抗Sj14-3-3特异性IgY的制备及其诊断日本血吸虫病循环抗原的价值
目的 制备抗重组日本血吸虫信号转导蛋白14-3-3(Sj14-3-3)的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY),建立双抗体夹心ELISA诊断体系(IgY-ELISA),探讨用于日本血吸虫病的诊断价值.方法 利用Sj14-3-3制备并纯化卵黄抗体IgY和兔多克隆IgG抗体;以IgG为捕获抗体,IgY为检测抗体建立双抗体夹心ELISA诊断方法,检测72例急性血吸虫病患者、128例慢性血吸虫病患者、132例正常人、42例肺吸虫患者、60例华支睾吸虫患者和46例钩虫感染者血清.探讨基于IgY的循环抗原检测的应用价值.结果 成功制备并鉴定了抗Sj14-3-3特异性IgY和IgG抗体,建立了双抗体夹心ELISA检测体系;检测急性血吸虫病患者和慢性血吸虫病患者血清的阳性率分别为73.6 %和48.4 %,正常人血清的阴性率为94.7 %;与肺吸虫患者、华支睾吸虫患者、钩虫感染者血清的交叉反应分别为7.1%、6.7%、6.5%.结论 建立了基于IgY的双抗体夹心ELISA检测体系,用于日本血吸虫病患者血清的检测具有较高的敏感性和特异性,可用于日本血吸虫病的辅助诊断.
