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尖吻蝮蛇舌形虫感染小鼠血清中特异性抗体和循环抗原的动态观察
目的 观察感染尖吻蝮蛇舌形虫小鼠体内特异性抗体和循环抗原动态变化.方法 从感染尖吻蝮蛇舌形虫的五步蛇体内收集成虫,分离尖吻蝮蛇舌形虫的虫卵感染小鼠,从感染后1 w、2 w、3～22 w收集小鼠血清,分别用ELISA法和dot-ELISA法观察不同时间小鼠体内尖吻蝮蛇舌形虫特异性抗体和循环抗原的动态变化.结果 感染尖吻蝮蛇舌形虫的小鼠,其体内特异性抗体从第8 w开始上升,12w达到高峰,第16w开始下降并一直维持同一水平.同时,对小鼠产生的特异性抗体进行分型,其早出现为IgM,16w以后被IgG1所替代.感染尖吻蝮蛇舌形虫的小鼠血清用dot-ELISA法检测其循环抗原出现的时间为第1 w,到第3 w时循环抗原检出稀释度在1:8～1:128之间,到第8 w,高稀释度可达到1:256,并一直维持,第11w以后逐渐下降.结论 1.小鼠感染尖吻蝮蛇舌形虫虫卵后特异性抗体(Ab)在感染第8 w开始上升,抗体高滴度维持时间为第12～15 w.2.感染尖吻蝮蛇舌形虫虫卵的小鼠其血清中产生的特异性抗体早出现为IgM,以后被IgG1所替代.3.小鼠在感染尖吻蝮蛇舌形虫虫卵后的1 w就可在其血清中检测到循环抗原(CAg),预测这段时间检测循环抗原具有早期诊断参考价值.
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尖吻蝮蛇舌形虫感染小鼠血清中特异性抗体和循环抗原的动态观察
目的 观察感染尖吻蝮蛇舌形虫小鼠体内特异性抗体和循环抗原动态变化.方法 从感染尖吻蝮蛇舌形虫的五步蛇体内收集成虫,分离尖吻蝮蛇舌形虫的虫卵感染小鼠,从感染后1 w、2 w、3～22 w收集小鼠血清,分别用ELISA法和dot-ELISA法观察不同时间小鼠体内尖吻蝮蛇舌形虫特异性抗体和循环抗原的动态变化.结果 感染尖吻蝮蛇舌形虫的小鼠,其体内特异性抗体从第8 w开始上升,12 w达到高峰,第16 w开始下降并一直维持同一水平.同时,对小鼠产生的特异性抗体进行分型,其早出现为IgM,16 w以后被IgG1所替代.感染尖吻蝮蛇舌形虫的小鼠血清用dot-ELISA法检测其循环抗原出现的时间为第1 w,到第3 w时循环抗原检出稀释度在1:8～1:128之间,到第8 w.高稀释度可达到1:256,并一直维持,第11 w以后逐渐下降.结论 1.小鼠感染尖吻蝮蛇舌形虫虫卵后特异性抗体(Ab)在感染第8 w开始上升,抗体高滴度维持时间为第12～15 w.2.感染尖吻蝮蛇舌形虫虫卵的小鼠其血清中产生的特异性抗体早出现为IgM,以后被IgG1所替代.3.小鼠在感染尖吻蝮蛇舌形虫虫卵后的1 w就可在其血清中检测到循环抗原(CAg),预测这段时间检测循环抗原具有早期诊断参考价值.
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量化检测日本血吸虫循环抗原的初步研究
目的探索量化检测日本血吸虫循环抗原的方法.方法用AWA-PcAb/MG2双抗体夹心ELISA(S-ELISA)检测SEA-TCA抗原,并根据测得的OD490值和相应抗原浓度计算回归方程式,再用该法和fSjc26GST-PcAb双抗体夹心ELISA方法检测急慢性日本血吸虫病人的血清循环抗原.并初步应用于检测流行区和传播阻断地区的人群血清循环抗原.结果 AWA-PcAb/MG2双抗体夹心ELISA测得SEA-TCA浓度(y)与OD490值(x)呈明显的正相关(r=0.981,y=128.08x-46.95);血清循环抗原的平均含量,急性血吸虫病人(206.27±36.62 ng/ml)显著高于慢性血吸虫病人(122.88±75.13 ng/ml).两组双抗体S-ELISA检测急性血吸虫病人循环抗原的阳性率均为100%(34/34),慢性血吸虫病人循环抗原的阳性率则分别为87.50%(70/80)和78.57%(63/80),特异性分别为90.74%(98/108)和92.59%(100/108).用以上两法对流行区和传播阻断地区的人群血清进行循环抗原检测,其阳性率分别为34.52%(87/252)和9.72%(49/504),具有显著性差异.结论两组双抗体S-ELISA用于检测日本血吸虫循环抗原均有较好的效果,其中AWA-PcAb/MG2双抗体夹心ELISA能量化检测日本血吸虫循环抗原.
关键词： 日本血吸虫 双抗体夹心ELISA 循环抗原 量化检测 -
双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫循环抗原的研究
目的建立双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫循环抗原(Cag).方法采用两株抗广州管圆线虫成虫可溶性抗原单克隆抗体,应用双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫CAg,并摸索该法的佳实验条件.对感染大鼠、小鼠、疑似和确诊广州管圆线虫病病例血清进行检测,评价方法的敏感性;对日本血吸虫、肺吸虫、旋毛虫、囊虫病人血清进行交叉反应试验,评价方法的特异性.结果 10μg/ml单抗包被,酶标记单抗1∶1 600稀释为佳工作浓度.利用该法检测不同血清广州管圆线虫循环抗原的敏感性为84.2%～87.2%,特异性为100%.结论建立的双抗体夹心ELISA法检测广州管圆线虫循环抗原具有敏感性高、特异性强和经济、简便易行等优点.
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抗日本血吸虫循环抗原单链抗体的抗原定位和初步应用
目的将获得的抗日本血吸虫循环抗原的单链抗体进行抗原定位和用于诊断.方法用间接荧光抗体试验(IFA)对2株可溶性单链抗体所针对的抗原进行定位;将可溶性单链抗体进行生物素标记后,用于检测急、慢性血吸虫病人血清标本.结果两个特异性单链抗体分别于日本血吸虫成虫的肠管和生殖系统呈现明显的荧光反应.检测急性血吸虫病人血样20份,慢性血吸虫病人血样30份,正常人血样20份.结果用其中1株单链抗体检测急性病人的敏感度为60%,慢性病人的敏感度为36.7%,特异度为90%;以2株单链抗体混合检测急性病人的敏感度为75%,慢性病人的敏感度为56.7%,特异度为85%.结论经抗体库技术制备的单链抗体可用作日本血吸虫病的诊断,单抗组合较单株单抗可提高免疫学检测的敏感性.
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弓形虫循环抗原诊断试剂的研究
目的比较弓形虫不同免疫原所制备抗体检测CAg的效果,优选高效价的抗体诊断试剂.方法制备弓形虫的细胞质抗原(C)、代谢抗原(S).用抗原C、C+S、S及活虫各免疫2只家兔,收集抗血清经纯化而获得IgG抗体(多抗)并制备酶标记抗体;用上述4种多抗与多抗-HRP组合成16种双抗体夹心型ELISA,检测人血清CAg和C、S抗原,评价试剂的敏感性;抗血清与疟原虫、隐孢子虫等抗原进行交叉反应性试验,评价试剂的特异性.结果各种ELISA夹心法同步检测CAg阳性样本7例,阴性样本8例,均未出现假阴性和假阳性反应,其OD均值的P/N比值依次为C+C组33.5、S+S组27.8、CS+CS组21.2、P+P组13.2;C和S抗原的低检出量均为0.5 μg/ml;与其它寄生虫未出现交叉反应.结论 (1)4种抗体用于检测人血清CAg、C和S抗原以及其它抗原的结果表明,各种抗体试剂均具有良好的敏感性和特异性,其中以抗C抗体试剂为满意.(2)16种组合形式的夹心ELISA,检测弓形虫抗原的差异无统计学意义,表明弓形虫C和S抗原间存在着共同抗原成分.
关键词： 弓形虫免疫原 抗体诊断试剂 双抗体夹心型ELISA 循环抗原 -
滴金免疫测定法用于检测囊虫病患者循环抗原的研究
目的建立一种敏感、快速、简便的囊虫病诊断方法.方法应用两株抗猪囊尾蚴囊液抗原的单克隆抗体(McAb),一株滴于硝酸纤维素膜上,另一株与胶体金结合为探针,建立了检测囊虫病患者血清中循环抗原(CA)的滴金免疫测定法,抗原、抗体通过渗滤在膜上进行反应,10min内即可用肉眼观察结果.对不同稀释度的猪囊尾蚴囊液抗原进行检测,确定本法的低抗原检出量(0.45ng/ml).将本法与ELISA作了比较.结果对78例囊虫病患者血清进行检测,循环抗原阳性率为87.18%.其中活动型脑囊虫病患者52例,循环抗原阳性率为98.08%;非活动型脑囊虫病患者20例,循环抗原阳性率为65.00%;单纯皮肌型囊虫病患者6例,循环抗原阳性率为66.67% .40份健康人血清仅有1例(2.50%)出现假阳性,与10例华支睾吸虫病患者血清、15例血吸虫病患者血清及23例非囊虫病的脑部疾病患者血清均无交叉反应.该方法检出低猪囊尾蚴囊液抗原量为0.45ng/ml.本法与ELISA的符合率为98.19% .结论 DIGFA简便、快速,结果客观,对囊虫病特别是活动型脑囊虫病敏感性高,特异性强,值得进一步推广应用.
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应用免疫-PCR检测弓形虫循环抗原的实验研究
目的控索弓形虫感染早期诊断方法。方法用链亲素将生物素化的二抗和生物素化的DNA偶联起来，通过PCR扩增标记DNA检测固定的抗原，建立了弓形虫循环抗原免疫-PCR检测技术，用该技术和ELISA法平行检测系列稀释的弓形虫的感染鼠阳性血清中的CAg以及实验感染鼠血清中CAg的动态变化，对比研究二.者之间的敏感性。结果免疫-PCR法检测弓形虫CAg吴阳性的血清高稀释度为1：1000，ELISA法检测弓形虫CAg呈阳性的血清高稀释度为1 :5，免疫一PCR早在鼠感染弓形虫后第3天测到CAg，ELISA早在鼠感染弓形虫后第5天测到CAg。结论免疫-pCR是一种特异性强、敏感性高的弓形虫CAg检测方法，敏感性较ELISA法提高了200倍，免疫-PCR检出阳性结果时间早，为弓形虫病早期诊断提供了科学依据。
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金纳米棒免疫传感器检测不同感染周期日本血吸虫循环抗原的研究
目的 利用金硫共价键成功构建固相金纳米棒免疫传感器,检测不同感染周期的日本血吸虫循环抗原,并分析宿主体内抗体的消长变化.方法 晶种生长法制备金纳米棒溶液,与表面带有巯基基团的ITO玻片以金硫共价键组装成固相金纳米棒免疫传感器.聚4苯乙烯磺酸钠(PSS)和聚丙烯胺盐酸盐(PAH)修饰固相金纳米棒免疫传感器表面,并结合日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原26-28 kDa单链抗体(SIEA26-28kDaSjscFv),检测日本血吸虫不同感染周期兔血清循环抗原.结果 固相金纳米棒免疫传感器分别与1～8周的感染血清反应,并设立阴性血清对照组;结果显示,表面等离子共振吸收峰峰值分别呈现出17 nm,52 nm,28 nm,11 nm,13 nm,23 nm,45 nm,43 nm的位移,阴性对照组未出现位移;同时,根据传感器表面等离子共振波峰对不同感染周期血清反应后的位移变化推断抗体在宿主体内呈现出先上升,后下降,再上升的变化规律.结论 通过对固相金纳米棒免疫传感器的研究,证明其能够通过表面等离子共振波峰的移动来检测日本血吸虫感染血清循环抗原;同时,对抗原抗体在宿主内的变化提供了数据支撑.固相金纳米棒免疫传感器的高特异性、灵敏度为日本血吸虫病的诊断及抗原抗体的研究提供了新的手段.
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夹心免疫-PCR检测旋毛虫循环抗原的研究
目的建立以多抗为捕获抗体和单抗为检测抗体的夹心免疫-PCR检测旋毛虫循环抗原.方法利用杂交瘤技术制备抗旋毛虫单抗;旋毛虫抗原免疫家兔,分离纯化兔血清,制备兔抗旋毛虫多抗.多抗作为捕获抗体包被酶标板,单抗为检测抗体,选择适宜多抗和单抗浓度,建立夹心ELISA方法,再利用亲和素和生物素的高结合力连接起标记了生物素的抗体和DNA片段,将抗原抗体特异反应的免疫技术同无限扩增DNA片段的基因检测技术结合,利用PCR反应对DNA片段的扩增能力,提高检测灵敏度.结果制备了兔抗旋毛虫多抗,间接ELISA法筛选出与多种寄生虫抗原无交叉反应的单抗F4C6,夹心ELISA检测旋毛虫抗原低浓度为0.05μg/ml,免疫-PCR方法检测低浓度为0.1ng/ml.结论首次建立夹心免疫-PCR检测旋毛虫抗原的方法,检测旋毛虫抗原的灵敏度高于传统ELISA方法104倍.
关键词： 旋毛虫病 循环抗原 ELISA Immuno-PCR -
压电免疫传感器检测日本血吸虫循环抗原的研究
通过葡萄球菌蛋白A(SPA)将从感染兔血清(InRS)或免疫兔血清(ImRS)中纯化的IgG抗体固定于镀金的石英晶片上,制成一种新型的液相压电免疫传感器,用于检测感染兔血清中的日本血吸虫循环抗原(SjCAg).分别比较了提纯前血清、部分纯化抗体和完全纯化抗体,以及感染和免疫兔血清纯化IgG的固定效率和检测效果.结果表明,以完全纯化抗体的效果好,免疫兔血清纯化IgG优于感染兔血清纯化IgG.同时,还研究了SPA的固定浓度、检测时间、血清适稀释度及晶体的再生性等.用该法检测了不同感染度的兔血清,发现频移值变化在一定范围内与感染度成正比.
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抗华支睾吸虫循环抗原Fab抗体克隆的筛选及序列分析
目的获得抗华支睾吸虫循环抗原Fab段抗体.方法将华支睾吸虫代谢抗原包被在固相ELISA板中,采用"吸附-洗脱-扩增"的方法,对已构建的抗华支睾吸虫噬菌体抗体库进行富集.从富集后的抗体库中筛选抗循环抗原抗体克隆,并交叉筛选鉴定其特异性.结果从206个克隆中筛选到阳性克隆23个,再分别用肺吸虫、肝片虫、姜片虫和日本血吸虫脱脂全虫粗抗原进一步交叉筛选,终获得特异性抗Cs-MAg阳性克隆3个(B05,C10和E38).对其中2株(E38和B05)序列分析表明它们的κ轻链V基因属于人VκⅠ(O2)亚群,J基因属于Jκ1;γ链V基因属于人VHⅠ-69亚群,D基因来自D3-10,J基因则来自JH3.结论用成虫代谢抗原直接包板,可以从抗体库中筛选到阳性克隆,构建的噬菌体抗体库是成功有效的.
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金标免疫渗滤法(DIGFA)快速检测血吸虫循环抗原的研究
目的建立一种简便、快速的血吸虫病诊断方法。方法在已建立的检测血吸虫抗体的DIGFA基础上，以抗血吸虫重组蛋白SVLBP多抗为捕捉抗体，金标抗SEA多抗为覆盖抗体，建立快速检测病人血清中血吸虫循环抗原的双夹心DIGFA。结果用该法检测了急性血吸病人血清30人份和慢性血吸病人血清38人份，其阳性检出率分别为100％和52.6％；120人份流行区健康人血清全为阴性；100人份非流行区健康人群血清的阴性符合率为100％，与10例华支睾病人血清无交叉反应；15例肺吸虫病人血清有1例阳性，交叉反应率为6.7％；与双夹心ELISA的符合率为97.4％，经X2检验表明两法检测效果无显著性差异。结论用DIGFA检测血吸虫循环抗原具有较高的敏感性和特异性，并且方法简便、快速、不需特殊仪器设备，有广阔的应用前景。
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单克隆抗体胶乳凝集试验检测囊虫病循环抗原
采用抗猪囊虫单克隆抗体化学交联胶乳免疫微球,分别检测了囊虫病患者脑脊液和血清中的循环抗原,阳性率分别为90%(27/30)和74.63%(50/67).同时对比检测了脑脊液和血清中的囊虫抗体,结果表明,脑脊液的抗体检出率明显低于血清,循环抗原的检出率则无显著性差异.本实验方法检测循环抗原简便易行,有较高的特异性和敏感性,既可用于早期诊断和现症病人的确定,也可用于疗效考核.
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循环抗原和特异性IgG4对脑囊尾蚴病诊断和疗效评估价值比较
目的 比较循环抗原(circulating antigen,CAg )和特异性IgG4在脑囊尾蚴病诊断和生存状态、疗效评估中的价值.方法 依据CT和MRI的影像表现将68例脑囊尾蚴病患者分为活虫期、变性死亡早期、变性死亡后期及钙化期四个病期组,检测各病期患者血清中囊虫CAg和IgG4;分别对38例活虫期患者治疗前,治疗中,治疗后血清中CAg和特异性IgG4进行检测和比较分析.结果 不同病期患者血清CAg阳性率、IgG4阳性率差异均有显著意义.38例活虫期患者血清CAg、IgG4阳性率分别为100%和98%,随疗程进展,CAg、IgG4阳性率逐渐降低,不同疗程间CAg阳性率差别有显著性意义,而IgG4阳性率差异无统计学意义.结论 CAg和特异性IgG4能较客观地反映人体内脑囊尾蚴的生存状态,可作为早期诊断指标,两者的特异性及敏感性无显著差异;对远期疗效评估可以优先选用CAg.
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循环抗体与循环抗原组合检测诊断血吸虫病的应用观察
目的 探讨血吸虫病循环抗原与循环抗体组合检测的诊断效能以及在血吸虫病疫区中的应用价值.方法 采用夹心ELISA法和间接ELISA法对不同类型人群的血清标本进行循环抗原和抗SEA IgG抗体检测,比较抗原抗体组合检测的敏感性、特异性,以及在重疫区的检测效果.结果 循环抗原与循环抗体平行检测敏感性和特异性分别为97.9%、92.2%;序列检测敏感性和特异性分别为76.0%、99.2%.对血吸虫病疫区粪检阳性人群平行检测阳性率为94.6%(35/37),序列检测阳性率为67.6%(25/37);疫区粪检阴性人群平行检测阳性率为69.8%(97/139),序列检测阳性率为39.6%(55/139).结论 组合检测方案中平行检测在重疫区对有效检出病人具有更高的应用价值.
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弓形虫感染与精神分裂症疗效副反应的研究
弓形虫可侵犯患者的多种脏器,中枢神经系统受损常见,也是受损严重的部位,而且临床表现十分复杂[1].我们通过检测精神分裂症患者血清中的弓形虫循环抗原(CAg),弓形虫抗体(IgM、IgG),对阴性与阳性者的临床近期疗效及副反应做了前瞻性的研究,并对可能机理进行了探讨.
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肺吸虫病人血清循环抗原试剂盒的研究
肺吸虫病是由一类并殖吸虫引起的寄生虫病,在我国的致病虫种有卫氏、斯氏及异盘并殖吸虫等,由于病原学诊断困难,故血清学检测应予关注.随着寄生虫免疫学的发展,近年来有不少关于检测循环抗原(CAg)诊断肺吸虫感染的报道[1,2],但尚未见成套试剂盒的研制.四川省主要的致病虫种是斯氏狸殖吸虫(Pagumogonimus skrjabini)通称斯氏肺吸虫,故本文研制的诊断试剂盒主要用于检测斯氏肺吸虫病人血清循环抗原,现报告如下.
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双胎先天性弓形虫病报告
弓形虫是先天畸形和出生缺陷的四大感染性病因之一。孕妇感染弓形虫后，虫体通过胎盘垂直传染胎儿，造成先天性弓形虫病。双胎感染弓形虫的发病情况，国内少见报道，特报告如下。 男，9个月，头胎头产、双胎阿大。体重2000g，产钳助产，APgar评分9分。因生长发育迟缓来院求治。体格检查：四肢肌张力增高、拇指内收、剪刀腿、牵拉反射阳性。头颅CT平扫：二侧大脑半球脑沟、脑池增宽：透明隔宽8mm。Gesel 发育诊断：发育商45，血清弓形虫免疫学检查：IHA法和ELISA法IgG、IgM均阳性，Cag阳性。PCR法弓形虫DNA阳性。其母血清弓形虫循环抗原(Cag)阳性，PCR法DNA阳性。其弟阿小，出生体重2000g，产时窒息，APgar评分：1min6分，5min 9分。生长发育基本正常。血清弓形虫Cag阳性、IgM阳性、IgG阴性，PCR法DNA阳性。
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65例囊虫病临床分析
据统计，目前全国囊虫病发病人数已达900多万人。发病年龄以青壮年为主，职业以农民为主，严重影响着劳动生产力，并且给个人和社会带来了沉重的负担。囊虫病的危害已受到各级卫生防疫部门和全国各地医务工作者的重视。本文分析我院自1988年至1998年收治的65例囊虫病患者，现分析如下。1 材料和方法1.1 一般资料本文65例囊虫病患者，均为有囊虫病的症状和体征，结合活检或通过血清循环抗原抗体检测阳性而确诊的病例。男34例，女31例；年龄在5～67岁之间，其中20～45岁52例占80％；职业以农民、工人多，占62％，病程长短不等，显性发病时间在数天至数年之间。
