眼疾患者弓形虫感染情况检测

应用ELISA及PCR方法同时检测眼疾患者血液及房水中弓形虫(Toxoplasm, Tox)特异抗体(IgG、IgM)、循环抗原(Cag)及DNA(简称Tox-四项)，了解眼疾患者中Tox感染的发生率与性别、年龄、病种的关系，并验证本检测方法的可重复性及房水检查在Tox眼疾中的意义。　　我院住院及门诊患者共203例。　　用ELISA法检测Tox特异性IgG、IgM、Cag，试剂盒为深圳市绿瀚生物技术有限公司生产。PCR方法检测Tox-DNA，试剂为上海复星高科技有限公司生产，弓形虫PCR专用。

循环抗原、抗体和MRI在脑囊虫病程演变中的变化

囊虫病系绦虫的幼虫即囊尾蚴寄生于人体所致,全世界每年约有5万人因此而死亡.它可以寄生于人的皮下、肌肉、眼睛等,其中对健康危害大的是寄生于中枢神经系统[1].

双抗体夹心免疫-PCR检测弓形虫循环抗原的实验研究

目的探索弓形虫病的病原学检测方法.方法用游离的亲合素将生物素化的二抗和生物素化的腺病毒六邻体基因重组质粒DNA偶联起来,通过PCR扩增标记的DNA检测弓形虫循环抗原,建立了免疫-PCR检测方法;用该方法和ELISA法平行检测感染鼠的血清,对比研究两者敏感性及循环抗原的检出时间.结果免疫-PCR法检测弓形虫循环抗原阳性血清的大稀释度为1:2 560,ELISA法为1:10;免疫-PCR法在感染后第2天检测到循环抗原,ELISA法在第4天检测到循环抗原.结论免疫-PCR是一种特异性高、敏感性强的弓形虫循环抗原的检测方法,可作为弓形虫病病原学的诊断方法.

1例黑热病病人的护理

黑热病是杜氏利什曼原虫(黑热病原虫)所引起的慢性地方性传染病,传染源是病人和病犬通过白蛉传播,每年5 ～8月为白蛉活动季节,白蛉吸吮患者的血液时,原虫便进入白蛉体内,发育繁殖成鞭毛体,白蛉再次叮蛟人体时,将鞭毛体注入,即可引起感染.原虫主要生活在患者的血液、肝、脾、骨髓和淋巴结中.利什曼原虫检出是确诊依据,血清免疫学循环抗原或抗体检出有辅助诊断价值[1].

山西省大同市男性不育患者弓形虫感染情况调查

目的:探讨男性不育患者弓形虫(TOX)感染的状况及感染后对男性生殖功能的影响.方法:用酶联免疫吸附试验(ELISA )法检测男性不育患者血中弓形虫循环抗原(CAg),IgG及IgM抗体.结果:100例男性不育患者血清中CAg阳性者13例(13%),TOX-IgM阳性者16例(16%);而100例生殖功能正常的男性血清中CAg阳性者仅为1例(1%), TOX-IgM阳性者3例(3%);两者间差异非常显著(P《0.01).两者TOX-IgG阳性者均为7例(7%).结论:TOX急性(早期)感染可能会影响男性生育能力,并导致男性不育.因此,男性也应注意避免感染弓形虫,防止导致不育的情况发生.

弓形虫感染小鼠尿液中弓形虫循环抗原的检测

目的:探索弓形虫感染早期诊断的快速简便方法.方法:用快速ELISA检测弓形虫轻度、中度和重度感染小鼠尿中弓形虫循环抗原(TCA).结果:在轻、中、重3个感染组鼠尿中均检出TCA.结论:快速ELISA是一种特异、敏感的弓形虫循环抗原检测方法,可用于弓形虫感染的早期诊断.

狼疮会对肾脏造成严重损害

1.红斑狼疮为什么会损害肾脏?系统性红斑狼疮是一种复杂的自身免疫性疾病,以出现多种自身抗体为特征.有3种机制参与肾炎的发生,一种是抗体与肾小球抗原结合发生免疫反应,如自身抗体与肾脏内多种组分发生免疫反应,如硫酸乙酰肝素、磷脂、Ⅳ胶原、系膜和内皮细胞抗原等;一种是循环抗原植入肾小球,再与自身抗原结合,启动免疫反应;第三是循环免疫复合物沉积于肾小球,启动免疫反应.免疫反应启动后,激活补体系统,引起一系列的免疫损伤反应,如毛细血管通透性增加,中性粒细胞单核细胞等炎症细胞的浸润,这些细胞释放大量裂解酶或蛋白酶,大量的炎性因子如IL-2、IL-6、TGF-α、TNF-β等和补体活化产物,从而导致肾组织损伤.

血吸虫病免疫学检测进展

血吸虫病免疫学检测方法的发展已有80多年的历史.Yashimoto(1910年)早应用补体结合试验诊断血吸虫病.国内甘怀杰(1936年)首先采用皮内反应诊断日本血吸虫病,随后,国内外许多学者进行了广泛的研究.经过不断地改进和探索,目前不仅有10多种检测抗体的方法,而且还发展了循环抗原和免疫复合物的检测方法,同时应用了冷冻干燥、标记以及单克隆技术,从而极大地推动了血吸虫病免疫学检测方法的深入发展.

抗华支睾吸虫循环抗原噬菌体抗体基因分析

目的对获得的抗华支睾吸虫循环抗原Fab抗体克隆进行基因分析.方法将2株阳性克隆抗体基因进行测序,并用NCBI和Ig Blast Analysis of Immunoglobulin sequences中的分析软件,对其推导的氨基酸序列进行分析,再进一步模拟它们的二级结构.结果E38、B05阳性克隆抗体基因与人免疫球蛋白k轻链和γ重链可变区基因高度同源.推导的氨基酸序列均具有典型的抗体轻、重链可变区特征.用分析软件对推测的2株克隆轻链和重链Fd氨基酸序列进行二级结构模拟,结果显示以β-折叠和转角为主的平行肽链形成片层样结构,均符合抗体二级结构构型.结论E38、B05阳性克隆外源基因均属于人免疫球蛋白k轻链和γ重链可变区基因.

大连地区新生儿弓形虫感染的免疫学检测

目的探讨大连地区新生儿弓形虫感染的情况.方法采用酶联免疫吸附试验三联诊断法对93例新生儿脐带血清标本进行弓形虫感染的血清学检测.结果新生儿弓形虫各单项检测阳性率分别为循环抗原(CAg)4.3%、IgM 2.2%、IgG 15.1%,新生儿弓形虫平均感染率为19.4%,其中近期感染率为5.4%.结论新生儿弓形虫感染的危险性很高,应开展孕妇血清学监测及时采取措施,有效地预防先天性弓形虫感染.

抗华支睾吸虫CAg噬菌体抗体表达与活性鉴定

目的对从抗华支睾吸虫噬菌体抗体库中筛选到的阳性克隆进行诱导表达和鉴定.方法对阳性克隆株B05、C10和E38用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹试验(Western blot)观察有无Fab抗体条带.然后,用卫氏并殖吸虫(Pw)、肝片吸虫(Fh)、姜片吸虫(Fb)、华支睾吸虫(Cs)、日本血吸虫(Si)脱脂全虫粗抗原和华支睾吸虫代谢抗原(Cs-MAg)进行SDS-PAGE,并分别和B05、C10和E38噬菌体抗体进行Western blot,鉴定抗体活性.结果 Western blot结果表明,3株阳性克隆的培养上清和细菌冻融上清在约50 kD和27 kD处均有特异抗体条带出现.B05噬菌体抗体与Cs-MAg和Cs-Ag在约25 kD处出现特异性反应条带,而与其它4种吸虫抗原无反应条带的出现.C10除与Cs-MAg和华支睾吸虫全虫抗原CsAg)在约38 kD处出现反应条带外,还与Sj-Ag在该处有弱阳性反应;而与其它3种吸虫抗原无反应条带出现.E38与Cs-MAg和Cs-Ag在约16 kD处出现特异性反应条带,而与其它4种吸虫抗原无反应条带出现.结论3株阳性克隆均可表达抗华支睾吸虫循环抗原(CAg)噬菌体抗体,其中B05和E38具有特异结合Cs-CAg活性.

孕妇弓形虫感染胎盘垂直传播状况调查

目的探讨孕妇弓形虫感染经胎盘垂直传播的情况.方法采用酶联免疫吸附试验三联诊断法对93例孕妇和新生儿血清标本进行弓形虫感染的血清学检测.结果孕妇弓形虫各单项检测阳性率分别为循环抗原(CAg)8.6%,IgM 10.8%,IgG 36.6%,新生儿组分别为CAg 4.3%,IgM 2.2%,IgG 15.1%;孕妇弓形虫平均感染率为45.2%,新生儿弓形虫平均感染率为19.4%;平均垂直传播率为42.9%,孕妇IgG垂直传播率为41.3%,CAg垂直传播率为50%.结论孕妇是弓形虫感染高危人群,通过胎盘垂直传播感染胎儿的危险性很高,应对孕妇开展血清学监测及时采取措施,有效地预防先天性弓形虫感染.

沈阳市孕妇弓形虫感染的临床研究

目的:探讨孕妇弓形虫(TOX)感染的状况及感染后对其胎儿的影响.方法:用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测孕妇血中弓形虫循环抗原(CAg)、IgG及IgM抗体.结果:93例病理妊娠的孕、产妇血清中CAg阳性者19例(20.43%),TOX-IgG阳性者21例(22.58%)及TOX-IgM 阳性者9例(9.68%).而93例正常产孕妇血清中CAg阳性者仅为2例(2.15%),TOX-IgG阳性者3例(3.23%)及TOX-IgM阳性者1例(1.08%).结论:TOX感染对胎儿有较大的危害,是引起胎儿流产、死产死胎和畸形的主要原因之一.因此,孕妇妊娠早期应进行弓形虫感染检测,感染者应进行治疗.

脑出血患者血清弓形虫循环抗原、抗体检测及其临床意义

目的 探讨急性脑出血与弓形虫感染的相关性.方法 采用ELISA方法,对43例急性脑出血及51例对照组血清进行CAg及弓形虫抗体IgM、IgG检测.结果 急性脑出血组CAg、抗体IgM、IgG阳性率分别为23.26%、18.6%、34.88%,对照组阳性率分别为7.84%、5.88%、15.69%,两组间差异显著(P＜0.05).中青年脑出血患者,CAg、IgM阳性率明显高于老年患者.结论 脑出血与弓形虫感染存在相关性,尤其临床无明显诱因的中青年脑出血患者,提示弓形虫急性活动期感染可能是脑出血的病因之一.

脑出血患者的脑组织及脑脊液中弓形虫循环抗原及抗体检测

弓形虫病是一种广泛流行的人兽共患性寄生虫病,全世界约有5～10亿人受其感染,2005年国内报道健康人群的感染率为7.88%.本研究通过检测自发性脑出血患者脑组织及脑脊液中的弓形虫感染情况,探讨弓形虫感染与自发性脑出血的关系.

猪弓形虫循环抗原双抗体夹心ELISA检测方法的建立及应用

目的 建立一种检测猪血清中弓形虫循环抗原(circulating antigen,CAg)的双抗体夹心ELISA法.方法 利用抗弓形虫表面抗原3(surface antigen 3,SAG3)的单克隆抗体Anti-A-SAG3-7作为捕获抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记抗弓形虫SAG3的单克隆抗体Anti-A-SAG3-23作为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA法,并对方法的捕获抗体(1∶400～1∶6400倍比稀释)、检测抗体(1∶400～1∶12800倍比稀释)、血清稀释度(1∶10～1∶80倍比稀释)及封闭液的种类(5％脱脂奶粉、10％胎牛血清、5％ BSA、1％ BSA)进行优化,同时验证该方法的敏感性、特异性及精密性.采用优化后的方法对广东和吉林地区的各94份猪血清样本进行检测.结果 双抗体夹心ELISA法的佳检测条件为:捕获抗体Anti-A-SAG3-7及检测抗体HRP-Anti-A-SAG3-23稀释度均为1∶3200,封闭液为1％ BSA,血清稀释度为1∶80.该方法检测两份猪囊虫阳性血清无交叉反应,灵敏度达1∶640,批内及批间的变异系数(CV)均＜11％.广东和吉林地区各94份样品的阳性率分别为20.2％(19/94)和11.7％(11/94).结论 该方法具有良好的特异性、敏感性及精密性,可用于猪弓形虫CAg的检测.

小鼠血清中弓形虫Peroxiredoxin抗原间接ELISA检测方法的建立

目的 建立小鼠血清中弓形虫Peroxiredoxin(Prx)抗原的间接ELISA检测方法.方法 应用棋盘滴定法确定佳被检血清包被浓度、一抗和二抗稀释度及封闭液,绘制蛋白定量标准曲线,并对建立的间接ELISA法进行验证.结果 间接ELISA的佳条件为:被检血清包被浓度为1:50,抗TgPrx阳性大鼠血清稀释度为1∶100(效价1∶128),酶标二抗稀释度为1:4 000,封闭剂对实验结果的影响不大.该方法灵敏度高、重复性好、特异性强,检测30份弓形虫感染小鼠血清的检出率为100%.结论 已建立了小鼠血清中弓形虫Prx抗原间接ELISA检测方法,可用于弓形虫病的诊断及流行病学调查.

囊虫病患者尿液中循环抗体与循环抗原的检测

目的探讨检测尿液中囊虫循环抗原和抗体对囊虫病的诊断价值.方法用单克隆抗体夹心-ELISA法检测囊虫病患者尿液和血清中循环抗原.间接ELISA法检测尿液和血清中特异性抗体.结果40例囊虫病患者尿液中循环抗原阳性率为 42.5%,特异性抗体的阳性率为47.5%,30例健康对照者均为阴性.结论检测尿液中囊虫病循环抗原和特异性抗体方法简便,为一种非损伤性的囊虫病诊断方法.

基于IgY抗体检测日本血吸虫循环抗原的间接红细胞凝集试验的建立

目的 建立基于IgY的血吸虫循环抗原的间接红细胞凝集试验(indirect hemagglutination test,IHA)并初步探讨IgY在诊断日本血吸虫病中的应用价值.方法 以日本血吸虫卵可溶性虫抗原(soluble egg antigen,SEA)免疫海蓝蛋鸡,获得抗SEA的IgY抗体.取人O型红细胞醛化、鞣化,形成鞣化后红细胞,并分别用磷酸盐、碳酸盐和柠檬酸盐缓冲液稀释抗SEA-IgY抗体,以确定IgY致敏红细胞佳缓冲液.将IgY溶解于佳的缓冲液中致敏鞣化后红细胞,形成IgY红细胞检测液,用此检测液分别检测感染30、20、10条日本血吸虫尾蚴和正常小鼠血清各10份,初步检测不同感染度小鼠血清的循环抗原.结果 pH7.2磷酸盐缓冲液溶解的IgY所得致敏红细胞检测血清佳,效价可达1∶320.用此IgY-IHA法检测中、高感染度血清(感染20条和30条日本血吸虫尾蚴)阳性率为100％,低感染度血清(感染10条日本血吸虫尾蚴)阳性率为70％,对照组10只小鼠血清全为阴性,特异性为100％.结论 建立了IgY-IHA法,此法检测日本血吸虫病循环抗原具有较高的敏感性.

巨片形吸虫26～28 kDa循环抗原的鉴定与特性分析