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防御素HNP-3成熟肽酵母双杂交诱饵质粒的构建及自激活和毒性检测
目的 用含防御素HNP-3成熟肽cDNA片段构建酵母双杂交诱饵质粒,进行自激活和毒性检测.方法 培养HL-60细胞,提取RNA,RT-PCR扩增含防御素HNP-3成熟肽的cDNA片段,克隆入pBluescript-SK-II质粒,经测序鉴定后,再亚克隆到人酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中,PCR及测序鉴定.重组诱饵质粒用缺陷培养基筛选方法进行自激活和毒性检测. 结果构建的重组质粒pBluescript-SK-II-HNP-3,经测序鉴定,插入片段为HNP-3成熟肽的cDNA序列.亚克隆构建的重组诱饵质pGBKT7-HNP-3,测序鉴定表明其插入目的 基因序列无误.重组诱饵质粒自激活和毒性检测显示无自激活现象发生,对酵母细胞AH109无毒性作用. 结论成功构建了防御素HNP-3成熟肽的酵母双杂交诱饵载体;为用酵母双杂交技术研究与防御素HNP-3成熟肽相互作用蛋白质打下了基础.
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烫伤大鼠延迟复苏后肠道防御素-5 mRNA表达变化
目的探讨烧伤后延迟复苏诱导肠道细菌移位是否与肠道黏膜内帕内特细胞受损、防御素产生减少有关.方法 SPF级Wistar大鼠56只,分为3组:对照组(n＝8);早期复苏组(n＝24),30%Ⅲ度烫伤后即刻复苏;延迟复苏组(n＝24),烫伤后6h复苏.观察回肠黏膜防御素-5(RD-5)mRNA表达、帕内特细胞形态学改变及肠系膜淋巴结(MLN)、肝、脾、肺细菌移位情况.结果早期复苏组和延迟复苏组RD-5 mRNA表达量在伤后8h显著升高,伤后24h降低,但仍高于正常水平,而伤后72h降至正常水平以下;组间比较显示,延迟组伤后8h值显著高于早期复苏组,而72h显著低于早期复苏组;两组回肠帕内特细胞与对照组比较无明显形态学改变.伤后24h细菌移位频率早期复苏组和延迟复苏组显著高于对照组,延迟复苏组显著高于早期复苏组.结论延迟复苏后的肠黏膜损伤并不涉及帕内特细胞;伤后24h内发生的细菌移位与RD-5 mRNA表达改变关系不大,而72h后RD-5 mRNA降低可能对细菌移位产生影响.
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中性粒细胞防御素抗SARS冠状病毒研究
目的检测人和兔中性粒细胞防御素的抗SARS冠状病毒活性,探讨防御素在SARS发生发展过程中的作用.方法应用酸-尿素-聚丙烯酰胺凝胶洗脱电泳(CAU-PAGE)从人和兔中性粒细胞中分别纯化人中性粒细胞防御素(HNP1-3)和兔中性粒细胞防御素(RNP1-5),通过微量培养法观察不同浓度防御素对SARS冠状病毒BJ01株感染Vero-E6细胞及病毒复制的影响.结果用CAU-PAGE分离的HNP1-3和RNP1-5经15%SDS-PAGE电泳后在分子量4 000左右呈现单一条带,HNP1-3经ELISA定量检测确认.HNP1-3和RNP1-5的抗大肠杆菌(ATCC25922菌株)活性的IC50分别在25～50μg/ml和5～10μg/ml之间,保持了天然的抗菌活性.在抗SARS冠状病毒实验中,HNP1-3和RNP1-5在25～100μg/ml浓度时,不能阻断SARS冠状病毒致细胞病变效应(CPE),也不能抑制SARS冠状病毒在Vero-E6细胞中的复制.结论天然防御素HNP1-3和RNP1-5对SARS冠状病毒没有抑制和杀灭活性,可能提示家兔和人对SARS冠状病毒不具备天然免疫力.
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人防御素的抗病毒活性及机制
防御素属于阳离子抗菌肽家族，具有广泛的抗微生物活性、细胞毒性和免疫趋化作用，在先天免疫系统中起着重要作用。近些年，随着防御素抗病毒的研究更加深入，越来越多的证据表明防御素不仅能直接灭活病毒和阻止病毒吸附、穿入及细胞内信号转导抑制病毒复制，还可以间接通过介导免疫反应发挥抗病毒作用。这种天然的抗菌肽具有抗包膜病毒和无包膜病毒的活性。
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抗菌肽、防御素与消化系统疾病
抗菌肽(antibacterial peptides)是广泛存在于动、植物体内,具有一定抗菌谱的小分子肽.可参与先天免疫和炎性应答诸多方面,目前已从动、植物等不同物种中分离、纯化出多种抗菌肽,在哺乳动物中发现的抗菌肽主要有防御素(defensins)、cathelicidins和histatins.防御素是普遍分布于哺乳动物、昆虫及植物体内,抗菌谱广,对细菌、真菌、被膜病毒有很强作用的阳离子多肽.根据其结构特征和生物学来源不同,分为:α-防御素、β-防御素、θ-防御素、昆虫防御素、植物防御素等.目前已明确的人类α-防御素有6种,β-防御素主要有4种.抗菌肽、防御素与消化系统疾病,如幽门螺杆菌感染、炎症性肠病、消化道肿瘤的关系已成为研究热点.
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人类防御素的结构与功能研究进展
人类防御素是一种存在于血液、肠道及表皮细胞中具有特殊空间结构,富含精氨酸的阳离子多肽.对革兰氏阳性、阴性细菌,真菌以及被膜病毒都能产生较强的杀伤作用.是生物体天然免疫机制的重要组成部分,并与某些炎症性疾病有密切关系,是一种有前途的抗菌肽.本文就其在人体内的分布,生化特性,生物学活性及与某些疾病的关系作一概述.
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益气温阳护卫法防治支气管哮喘作用机制与防御素的相关性研究
目的 研究与分析益气温阳护卫法防治支气管哮喘作用机制及与防御素的相关性.方法 将240只SPF级雌性SD大鼠根据随机数字表法分为6组,A组(正常对照组)、B组(模型组)、C组(卡介菌多糖核酸组)、D组(益气温阳护卫低剂量组)、E组(益气温阳护卫中剂量组)和F组(益气温阳护卫高剂量组),每组各40只.分别于激发2周、4周、6周及8周各检测6组大鼠的肺组织α防御素及β防御素表达情况.结果 激发2周、4周、6周及8周B~F组的肺组织α防御素及β防御素表达持续升高,且均高于A组,C~F组的表达均低于B组,D~F组的表达低于C组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 支气管哮喘大鼠的肺组织防御素表达增强,益气温阳护卫法对支气管哮喘大鼠的防御素表达控制较好,因此在支气管哮喘中的防治作用较好.
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防御素在口腔医学领域中的研究进展
抗菌肽(antimicrobial peptides)广泛存在于生物物种中,具有较强的抗菌、抗病毒、抗肿瘤活性及免疫学活性,在先天免疫系统中起着至关重要的作用.防御素(defensins)是近年来备受关注的一组内源性抗菌肽,其中,人类β-防御素(HBD)具有诱导表达特性,在口腔医学领域中具有重要作用[1],现对其在口腔医学领域中的研究进展综述如下.
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β防御素2转基因小鼠抗金黄色葡萄球菌感染的研究
目的探讨转基因小鼠抗金黄色葡萄球菌作用.方法用分子克隆方法构建β防御素2(HBD-2)全长cDNA重组质粒,通过显微注射技术,将重组片段注射入小鼠雌原核细胞,聚合酶链反应(PCR)方法检测小鼠HBD2基因整合情况,免疫组化检测转基因小鼠HBD2表达和组织分布.用金黄色葡萄球菌腹腔攻击转基因阳性小鼠观测全身情况和死亡数.结果DNA序列测定证明重组质粒插入HBD-2cDNA片段无误,PCR显示7只小鼠已整合HBD-2基因,PCR阳性小鼠免疫组化显示HBD2基因在肺、肠道、肝、肾、睾丸、小脑等组织广泛表达.腹腔攻击实验显示7只转基因小鼠4只存活,而野生小鼠10只全部死亡.结论HBD-2在体内具有显著抗金色葡萄球菌感染能力.
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人防御素与女性生殖
人防御素是近年来在人体内发现的富含半胱氨酸的内源性抗微生物活性肽,具有广谱抗细菌、抗真菌、抗原虫、抗病毒活性,同时具有调节固有免疫和获得性免疫的作用,是机体抵御病原微生物入侵的重要组成部分.女性生殖道是防御素产生的主要部位.近年来,在女性生殖领域中,防御素受到了相当的重视,对其研究也愈见深入.就防御素在女性生殖道的表达和分布,及其在生殖系统感染和肿瘤中的免疫防御作用综述.
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抗微生物多肽在口腔疾病中的研究进展
本文介绍了以防御素家族和cathelicidins家族为代表的抗微生物多肽(antimicrobial peptides,AMPs)的结构、分类和生物学性能及其研究的新进展,并对抗微生物多肽在口腔疾病中的应用研究现状加以综述.抗微生物多肽在口腔医学中的研究和应用尚处于起步阶段,具有较大的发展空间和良好的发展前景.
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防御素与肺部疾病的研究进展
防御素是先天性免疫和获得性免疫系统的重要组成部分,已成为生物医学研究的热点.本文主要总结防御素与肺部疾病相关的内容,对防御素在呼吸系统的表达与肺部感染、肺损伤、肺结核、肺纤维化、COPD、支气管哮喘的关系进行简述.
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防御素和cathelicidins/LL-37在肺部抗感染防御中的研究现状
抗菌肽是宿主防御系统的重要组成部分.在人气道上皮中主要表达2种阳离子小分子抗菌肽,即防御素和cathelicidins/LL-37,它们通过直接杀菌、调节天然或适应性免疫、损伤修复等生物学活性对抗肺部常见病原体的侵袭.本文就防御素和cathelicidins/LL-37的来源及结构特征、表达调节、在肺部抗感染免疫防御中的作用进行综述.
关键词： 防御素 cathelicidins/LL-37 病原体 天然免疫 -
急性肺损伤对肺组织β-防御素-2基因表达的影响
目的研究急性肺损伤(ALI)对肺组织β-防御素-2基因表达的影响.方法将60只雄性健康SD大鼠随机分成两组:对照组和急性肺损伤组,每组30只.5%苯巴比妥钠120mg/kg腹腔注射麻醉,以LPS 200ug/kg尾静脉注射复制急性肺损伤模型;对照组用等量生理盐水(NS)尾静脉注射.于尾静脉注射LPS或NS后0h、6h、12h、1d、3d、5d时杀死大鼠,剖胸取出肺组织.采用Trizol一步法提取肺组织总RNA,以GAPDH为内参,半定量RT-PCR检测肺组织β-防御素-2基因的表达水平,双脱氧末端终止法测序鉴定PCR产物的特异性.结果对照组0h时肺组织中β-防御素-2基因表达水平为0.77±0.14,各时间点肺组织中β-防御素-2基因表达水平无显著性变化(P＞0.05).ALI组6h时肺组织β-防御素-2基因的表达水平与对照组相比无显著性差异(P＞0.05),而12h、1d、3d、5d时显著增高(P＜0.05).结论β-防御素-2基因在大鼠肺组织中有组成型表达,ALI上调肺组织中β-防御素-2基因的表达.β-防御素-2基因的诱导性表达可能与ALI的发生发展有关.
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重组β-防御素-2预处理对急性肺损伤大鼠肺组织ICAM-1表达的影响
急性肺损伤(ALI)系创伤、感染等诱因触发的全身炎性反应综合征或代偿性抗炎反应综合征在肺组织的表现,脓毒症是其主要的诱发因素[1].β-防御素-2不仅对多种病原微生物有高效杀伤作用,而且对树突状细胞具有趋化和调理吞噬作用[2-4].而β-防御素-2在内毒素性ALI防治中的作用尚无定论.本研究拟观察重组β-防御素-2对内毒素性ALI大鼠肺组织胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响,探讨其对ALI的防治作用.
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防御素在口腔疾病中的研究进展
抗菌肽(antibacterial peptides)是广泛存在于生物体内具有抵御外界微生物侵害,清除体内突变细胞的一类小分子多肽,在动物的免疫细胞、空腔脏器粘膜、皮肤及植物中都广泛存在.抗菌肽主要分为防御素和cathelicidin两类[1].
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β-防御素及其与呼吸道疾病关系研究
近年来发现了一组具有抵抗外界微生物侵害的小分子多肽,称为防御素.防御素具有十分广泛的生物活性,是机体免疫系统的重要组成部分,与多种临床疾病关系密切,因此对于它的研究目前是一个研究热点.本文现就β-防御素的发现、其分子结构、生物活性及其与呼吸道疾病的关系做一综述.
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防御素在系统性红斑狼疮中的表达及其与肺部感染的关系
防御素是近年来发现的一组富含半胱氨酸的阳离子小分子多肽,具有广谱的抗菌、抗病毒活性和非特异的细胞毒性作用,同时具有免疫调节作用,是先天性和获得性免疫系统的重要组成部分.
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人β-防御素的研究进展
防御素是一类阳离子抗菌肽,具有天然的抗菌活性.β-防御素(HBD)主要表达于哺乳动物的皮肤和黏膜上皮细胞,是机体抵御外界生物侵袭和参与天然免疫应答的重要成员,具有很强的抗菌、抗病毒、抗肿瘤活性及免疫学活性.同时β-防御素在多种疾病(如炎症性肠病、恶性肿瘤等)中的表达有助于寻找致病基因和更好的治疗方法.本文将对β-防御素的研究进展进行综述.
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人β - 防御素 - 3基因真核表达载体的构建
目的克隆人β - 防御素 - 3的基因并构建其真核表达载体 . 方法采用 RT- PCR的方法从人皮肤组织获取人β - 防御素 - 3基因 , 连接入 pcDNA3载体 ,转化 DH5α感受态宿主菌 , 对酶切鉴定正确的克隆进行序列测定 . 结果获得了人β - 防御素 - 3基因 , 该基因在重组真核表达载体 pcDNA3- hBD3中序列正确 , 无突变 . 结论从人皮肤组织中获得了人β - 防御素 - 3基因全长 cDNA序列并成功构建了其真核表达载体 pcDNA3- hBD3.
