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FHIT基因在肺癌研究中的新进展
FHIT基因是近年来发现的基因,包括肺癌在内的多种肿瘤,特别是上皮性因环境致癌因素导致的肿瘤中常可检测出FHIT基因的纯合性和杂合性缺失,对研究肺癌特别是吸烟相关性肺癌的发生机制、早期诊断和治疗的探索提供了新的思路.它可能通过与P53无关的途径诱导凋亡,从而抑制肿瘤的发生.
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p16和FHIT基因启动子甲基化与肺癌的关系
目的 探讨外周血p16和FHIT启动子区甲基化与肺癌的发生关系.方法 应用实时荧光定量甲基化特异性PCR方法检测180例肺癌患者和180名健康对照者外周血p16、FHIT基因启动子序列的甲基化率,并对比分析两者的甲基化水平在肺癌患者和健康人群中存在的差异.探讨各个临床病理特征是否对两者的基因启动子的甲基化率产生影响,分析两者的甲基化水平以及性别、年龄和吸烟史等因素与发生肺癌的危险相关性.结果 肺癌组p16和FHIT基因的甲基化水平高于对照组(p16:Z=-2.560,P=0.010;FHIT:Z=-2.797,P=0.005).p16和FHIT基因的甲基化水平与性别、年龄、吸烟史、肺癌的组织类型及临床分期均无明显关联(p16:Z=-1.121,P=0.262,Z=-0.304,P=0.761,Z=-0.082,P=0.935,x2=0.582,P=0.748,Z=-1.605,P=0.108;FHIT:Z=-0.169,P =0.886,Z=-0.411,P=0.681,Z=-1.095,P=0.273,x2=2.97,P=0.227,Z=-1.189,P=0.234).单因素logistic回归分析结果显示性别对肺癌的危险性无影响(OR=1.274,P=0.297),年龄、吸烟、p16和FHIT甲基化水平对肺癌的危险性有影响(OR值分别为1.952、1.888、1.598、1.830,P值分别为0.002、0.003、0.027、0.005).多因素logistic回归分析结果显示FHIT随着其甲基化水平升高,患肺癌的危险性明显增加(OR =1.867,P=0.006);p16随着其甲基化水平升高,患肺癌的危险性增加可能性很大(OR=1.477,P=0.086).联合2个基因甲基化检测可提高对肺癌诊断的价值(AUC=0.832,P＜0.01).结论 外周血p16和FHIT基因启动子甲基化和肺癌有关;联合2个基因检测比单个基因检测对肺癌诊断价值高;p16和FHIT基因启动子甲基化水平检测有望成为肺癌筛查、早期诊断的指标.
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宫颈病变中FHIT基因遗传不稳定性与错配修复基因
宫颈癌是女性癌症中常见的死亡原因之一.在宫颈癌的发病机理中,除了HPV感染,遗传学改变在宫颈癌的发生方面也起了非常重要的作用.宫颈癌的发生包括三个方面:一是高危型HPVE6、E7癌蛋白通过与抑癌基因p53及Rb相互作用使之失活;二是病毒DNA整合进入宿主基因组;三是与HPV感染无关的频发的遗传学改变[1].从细胞自身的遗传性改变角度研究宫颈癌,以期发现除了HPV感染以外的细胞内源性因子,为宫颈癌的发生、发展机制提供新的研究方向.
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骨髓增生异常综合征患者P15INK4B FHIT基因甲基化的研究
目的 探讨P15INK4B基因和FHIT基因甲基化异常与骨髓增生异常综合征(MDS)发病机制的关系.方法 采用甲基化特异聚合酶链反应(MSP)技术和变性高效液相色谱(DHPLC)检测分析50例MDS患者,其中包括低危组3例、中危-1组10例、中危-2组27例和高危组10例骨髓细胞P15INK4B基因与FHIT基因的甲基化情况.结果 随着疾病的进展,即由低危组MDS向高危组MDS进展,P15INK4B基因和FHIT基因甲基化阳性率逐渐增高,且P15INK4B基因和FHIT基因甲基化在3组间的差异有统计学意义(P=0.022,P=0.026),其中低危组/中危-1组P15INK4B基因和FHIT基因甲基化阳性率低于高危组,且2组间的差异有统计学意义(P<0.05),而低危组/中危-1组与中危-2组、中危-2组与高危组间差异无统计学意义;2个基因的甲基化没有关联性.结论 P15INK4B基因和FHIT基因甲基化可能参与MDS的发病机制,并与疾病的恶化程度有关.
关键词： 骨髓增生异常综合征 聚合酶链反应 色谱法 p15INK4B基因 FHIT基因 -
膀胱移行细胞癌中FHIT基因异常甲基化及其与临床病理学的关系
目的 检测FHIT基因在膀胱移行细胞癌中的异常甲基化及其表达,探讨其与膀胱移行细胞癌临床病理学的关系.方法 收集膀胱移行细胞癌新鲜组织标本共49例和10例正常膀胱组织,采用免疫组织化学的方法(S-P法)检测FHIT蛋白表达,用甲基化特异性聚合酶链反应PCR(MS-PCR)方法研究膀胱移行细胞癌组织、正常膀胱组织中FHIT基因启动子区CpG岛甲基化状态.结果 FHIT蛋白在正常膀胱组织均为阳性;FHIT蛋白在膀胱移行细胞癌中阳性表达率为47%(23/49),肿瘤不同分级中随恶性程度的增高,表达减少,Ⅰ级与Ⅲ级比较,差异有统计学意义(P＜0.05),不同临床分期中随分期的增高,表达减少,Tis～T1期与T2～T4期比较,差异无统计学意义(P＞0.05).49例膀胱移行细胞癌组织中,有8例发生了甲基化,阳性率为16%(8/49).FHIT基因的异常甲基化和蛋白表达无相关性.正常膀胱组织FHIT基因启动子甲基化频率0(0/10).结论 FHIT基因与膀胱移行细胞癌的发生发展有关,FHIT蛋白异常表达可作为膀胱移行细胞癌肿瘤标志物.FHIT基因甲基化及表达缺失参与膀胱移行细胞癌的发生发展,且与其临床病理有一定关系,可能是影响膀胱移行细胞癌预后的重要因素.
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宫颈癌细胞FHIT基因启动子CpG岛甲基化状态分析
FHIT基因是一种与凋亡有关的肿瘤抑制基因,广泛存在于各种细胞凋亡系统中,在多种肿瘤及细胞系中失活,其启动子部位CpG岛甲基化是FHIT基因失活的主要机制之一.本研究应用甲基化特异性PCR(Methylation specific PCR,MSP)对不同宫颈鳞癌细胞系FHIT基因启动子CpG岛甲基化状态进行检测,在分子水平上了解FHIT异常甲基化与宫颈癌的相关性,为宫颈癌去甲基化治疗提供依据.
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胃癌中Fhit基因表达缺失临床分析
目的:采用免疫组化方法研究探讨Fhit蛋白表达缺失在胃癌发生发展中的意义.方法:免疫组化染色S-P法,DAB显色.以PBS缓冲液(0.01mol/L,PH7.4)代替第一抗体作阴性对照,用已知阳性组织切片作阳性对照.结果:早期胃癌Fhit蛋白的表达缺失率为50%(10/20),进展期胃癌为68.3%(41/60),两组比较无统计学意义(X2=3.312P＞0.05).Fhit蛋白缺失者在伴有淋巴结转移病例中的分布为83.3%(25/30),不伴淋巴结转移为52.6%,差异有显著性(x2=7.059 P＜0.05).结论:Fhit蛋白可能是一种重要的抑癌基因,在胃癌的发生、发展、转移过程中可能起着重要的作用.
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人乳头瘤病毒感染与非吸烟女性肺癌关系
目的 探讨人乳头瘤病毒(HPV)感染与非吸烟女性肺癌的相关性,以及HPV感染对脆性组氨酸三联体(FHIT)基因杂合性丢失的影响.方法 采用1:1匹配的病例对照研究方法,应用PCR技术检测肺癌组织与对照组织中HPV-DNA相关序列,同时检测FHIT基因杂合性丢失状况.结果 肺癌组织HPV-E6检出率高于对照组,OR=3.500,高危型HPV感染肺组织中FHIT基因杂合子丢失率较高.同时HPV感染与口服避孕药的使用、烹调油烟暴露及既往肺部疾病史间存在交互作用.结论 高危型HPV感染与女性肺癌的发生有关,HPV感染引发的肺癌可能与基因整合使FHIT基因杂合性丢失有关,同时与口服避孕药的使用、烹调油烟暴露及既往肺部疾病史等存在协同效应.
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FHIT和HPV与宫颈癌的研究进展
宫颈癌是常见妇科恶性肿瘤之一,发病与人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染密切相关,其中HPV16/18型常见.脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)基因是近年在染色体3p区域发现的候选抑癌基因,在人类许多肿瘤组织和细胞系中表现为高频率缺失和异常转录.FHIT基因可被HPV插入整合,这二者之间可能存在某种关联而共同参与宫颈癌的发病,因此FHIT基因及蛋白表达的检测有望和HPV一起作为宫颈癌早期诊断和基因治疗的工具.
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FHIT基因在宫颈CIN及鳞癌中的表达及其与HPV16/18感染的关系
目的 研究16、18型人乳头瘤病毒(HPV16/18)DNA与脆性组氨酸三联体(FHIT)基因在宫颈鳞癌和宫颈上皮内瘤变(CIN)中的表达情况,探讨其在宫颈癌变中的作用和意义.方法 采用原位杂交法检测HPV16/18在50例CIN和50例宫颈鳞癌中的感染情况,同时采用免疫组化S-P法检测FHIT基因的表达情况.结果 正常宫颈组织鳞状上皮、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和宫颈癌组织中FHIT表达下调或缺失表达率分别为0%(0/15)、13.33%(2/15)、33.33%(5/15)、50%(10/20)、78%(39/50),正常宫颈组织与宫颈癌之间、CIN与宫颈癌之间、低级别CIN(CINⅠ)与高级别CIN(CINⅡ、CINⅢ)之间比较,差异均有显著性(P＜0.05);在高、中、低分化的浸润性宫颈癌中,FHIT表达下调或缺失表达率分别为61.53%(8/13)、73.68%(14/19)、94.44%(17/18),P＜0.05;FHIT表达与宫颈鳞癌的临床分期及有无淋巴结转移无关.HPV16/18DNA在CIN和宫颈鳞癌中的阳性表达率分别为40%(20/50)、60%(30/50),均明显高于正常宫颈组0%(0/15),P＜0.05;宫颈癌中HPV16/18感染与FHIT表达呈明显正相关,P＜0.05.结论 FHIT表达缺失、HPV16/18感染均与CIN和宫颈癌的发生密切相关,FHIT缺失可作为CIN有可能发展为浸润癌的有用指标,HPV16/18感染可能是宫颈癌中FHIT异常的原因.
关键词： FHIT基因 HPV16/18感染 宫颈上皮内瘤变 宫颈癌 -
胃癌FHIT基因异常及与EB病毒感染相关性的研究
目的:检测胃癌FHIT基因转录、Fhit蛋白表达以及EB病毒(EBV)的感染情况,探讨EBV感染对FHIT基因异常表达的影响及其与胃癌发生的关系.方法:应用巢式RT-PCR法检测30例胃癌组织和30例配对正常胃黏膜组织中FHIT基因的表达,并对异常转录本进行测序;Western杂交法检测10例胃癌Fhit蛋白的表达;PCR法检测50例胃癌(包括RT-PCR检测30例)EBV的感染情况.结果:正常胃黏膜组织中均检测到正常大小转录本,11例(36.7%)胃癌检测到异常转录本;测序结果1例异常转录本缺失FHIT外显子5～7,1例缺失FHIT外显子4～7;4例(40.0%)Fhit蛋白表达缺失或降低;5例(10.0%)EBV阳性,其中4例(80.0%)同时存在FHIT基因的异常转录本.结论:FHIT基因及其产物Fhit蛋白的缺失在胃癌的发生发展中起重要的作用.EBV感染可能通过引起FHIT基因的异常导致胃黏膜上皮细胞癌变.
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胃癌FHIT基因杂合性缺失及微卫星不稳定性的研究
目的:检测胃癌FHIT基因的杂合性缺失(LOH)和微卫星不稳定性(MSI),探讨其与胃癌临床病理特征的关系.方法:从染色体3p14.2选取4个微卫星标记,PCR方法检测50例胃癌和远端正常胃黏膜组织FHIT基因的LOH和MSI.结果:胃癌组织中FHIT基因LOH和MSI发生的平均频率分别为32.4%和26.4%.LOH和MSI与胃癌的Bormann分型、组织学类型、Lauren分型均无显著相关.LOH阳性率胃癌穿透浆膜组显著高于未穿透浆膜组(P＜0.05).MSI阳性率无淋巴结转移组显著高于有淋巴结转移组(P＜0.05).结论:FHIT基因的MSI参与胃癌发生的早期阶段,LOH对胃癌的发展演变起重要作用.
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FHIT基因与脊索瘤的相关性研究
目的: 探讨脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)基因在脊索瘤发生中的作用.方法: 选择FHIT基因内3个微卫星多态标记对18例脊索瘤进行杂合性丢失(loss of hetorozygosity, LOH)和微卫星不稳定性分析(microsatellite instability, MI).结果: 在18例脊索瘤标本中,LOH的总发生率为44.4%,其中在D3S 1300,D3S 4130和D3S 1234的LOH发生率为37.5%、26.7%、23.1%.MI总发生率为33.3%,3个位点的MI发生率分别为25%、13.3%、15.4%.微卫星多态分析表明,FHIT基因在脊索瘤中既存在杂合性丢失,又存在微卫星不稳定现象. 结论: FHIT基因参与了脊索瘤的发生,可能是脊索瘤候选抑癌基因之一.
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FHIT基因--一种特殊的抑癌基因
FHIT基因定位于3p14.2,包含FRA3B,t(3;8)断裂点及HPV16整合位点.在许多肿瘤中均出现异常.由于FHIT在肿瘤中的基因改变不同于经典的抑癌基因,因此关于其是否为抑癌基因还存在不同的观点.阐明FHIT基因在肿瘤发生、演变中的作用,有可能为肿瘤的分子生物学研究提供新的思路.
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FHIT基因在宫颈癌细胞中的表达及其甲基化调控
目的:分析FHIT基因在宫颈癌细胞中表达情况以及甲基化的调控情况.方法:对RJC-1、SiHa、CS1213以及C4-1细胞进行培养,提取这些细胞的DNA并经过亚硫酸氢盐修饰,进行PCR反应和产物的检测.分析FHIT基因在宫颈癌细胞中表达情况以及甲基化的调控情况.结果:RJC-1、CS1213细胞仅有甲基化引物扩增出了目的条带,为完全甲基化状态.其他细胞则是甲基特异性引物与非甲基特异性引物共同扩增出73bp的目的条带,其状态为甲基化杂合性.通过5-aza-CdR处理细胞后,通过实时定量PCR检测FHIT mRNA的表达,显示处理后各种细胞中的FHIT mRNA的表达升高.结论:FHIT基因的甲基化是其表达下调的重要机制之一,是临床研究宫颈癌细胞的重要方向之一.
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人胃癌细胞系中FHIT基因mRNA的表达及pcDNA3.1-FHIT的构建与转染
目的:检测人胃癌细胞系中FHIT基因mRNA的表达状况及构建pcDNA3.1-FI-IIT真核表达载体.方法:RT-PCR法检测三种不同类型人胃癌细胞系中FHIT基因mRNA的表达,构建真核表达质粒pcDNA3.1-FHIT,通过酶切法、PCR扩增法和DNA序列分析鉴定重组质粒后,用脂质体转染至FHIT基因mR.NA阴性表达人胃癌细胞系MKN-45,经G418筛选后RT-PCR鉴定.结果:FHIT基因在人胃癌细胞系BGC-823中呈阳性表达,在MGC-803、MKN-45细胞系中呈阴性表达.FHIT基因cDNA正确克隆到真核细胞表达栽体pcDNA3.1中,并成功转染FHIT基因mRNA阴性表达人胃癌细胞系MKN-45.结论:FHIT基因在不同类型人胃癌细胞系中表达各异.成功构建pcDNA3.1-FHIT,并转染到FHIT基因mRNA阴性表达人胃癌细胞系MKN-45,使其唧T基因阳性表达.
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肝细胞癌中FHIT基因启动子甲基化状态分析及其与临床病理特征之间的关系研究
目的:分析肝细胞癌组织中FHIT基因启动子甲基化状态及其与FHIT基因表达和肝细胞癌临床病理特征的关系.方法:运用甲基化特异性PCR(MSP)方法分析肝细胞癌组织和癌旁正常肝脏组织中FHIT基因启动子甲基化状况;应用RT-PCT和Western免疫印迹方法检测FHIT基因mRNA和蛋白的表达情况;统计学分析FHIT基因启动子甲基化与肝细胞癌临床病理特征的关系.结果:MSP分析结果表明肝细胞癌组织中FHIT基因甲基化率(60.8%)显著高于癌旁正常组织中FHIT基因甲基化(16.2%;x2=31.071,P=0.000).同时我们还发现:发生完全或者部分甲基化的肝细胞癌组织或者癌旁正常肝组织中FHIT基因mRNA和蛋白表达水平显著降低.FHIT基因启动子甲基化和肝细胞癌患者的临床分期和肝外转移情况密切相关(P=0.006和0.049),而与其他临床病理特征无相关性(P>0.05).结论:FHIT基因甲基化是导致FHIT基因在肝细胞癌中失活的一个重要因素,与肝细胞癌的发生密切相关,有望成为肝细胞癌早期诊断的分子检测标志物和分子治疗新靶点.
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非小细胞肺癌中FHIT蛋白表达与暴露因素的关系
目的探讨非小细胞肺癌中FHIT蛋白表达与暴露因素的关系.方法采用S-P免疫组化法检测77例非小细胞肺癌组织和25例非恶性肿瘤肺组织中FHIT蛋白的表达.采用相同的调查表对病例和对照的既往暴露史进行直接询问调查.结果吸烟肺癌患者FHIT蛋白表达阴性的危险性比不吸烟肺癌患者增加3.83倍(95%CI=2.55-9.15,P=0.014);与不食用奶制品者相比,十年前食用奶制品者FHIT蛋白表达阴性的危险性减少40.00%(95%CI=0.50-0.74,P=0.018).结论吸烟、食用奶制品可能与FHIT蛋白异常表达有关.
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脆性组氨酸三联体(FHIT)基因外显子5,8纯合性缺失及突变与胃癌的关系
目的:探讨胃癌组织中抑癌基因FHIT外显子5,8纯合性缺失及突变情况.方法:采用外显子特异聚合酶链反应(PCR)及聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)-银染方法对30例胃癌和18例正常组织中FHIT基因外显子5,8的纯合性缺失和点突变显示检测和比较.结果:胃癌组织中FHIT基因外显子5、8总纯合性缺失率为23.33%,正常组织无一例缺失(P=0.011);外显子5、8纯合性缺失率分别为16.67%和13.33%(P＞0.05);FHIT基因外显子5、8纯合性缺失与胃癌的分化程度、病理分期及淋巴结转移无显著性相关(P＞0.05).所有胃癌组织标本均未检测到外显子5,8的点突变.结论:提示FHIT基因外显子5、8纯合性缺失可能在胃癌的发生中起重要作用.而点突变不是FHIT基因失活的主要方式.
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脆性组氨酸三联体基因与胃癌
脆性组氨酸三联体(FHIT)基因是一个候选抑癌基因,其抑癌作用可能通过诱导凋亡实现.在许多肿瘤特别是环境致癌物引起的肿瘤中常可发现FHIT基因的异常改变.胃癌是和环境致癌物密切相关的肿瘤,此文拟就FHIT基因与胃癌的发生、发展、转移、治疗等几方面进行综述.
