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FHIT基因异常与消化道恶性肿瘤
目的探讨消化道恶性肿瘤细胞中三联脆组(fragile histidine triad,FHIT)基因的异常转录情况.方法应用巢式逆转录聚合酶链反应(nested RT-PCR)对96例消化道恶性肿瘤(21例食管癌、43例胃癌和32例结肠癌)及相应的癌旁组织,18例正常组织FHIT基因cDNA片断进行扩增.结果在33.3%的食管癌组织,51.2%的胃癌组织和31.3%的结肠癌组织中检出异常FHIT转录,而在相应的食管、胃、结肠癌旁组织中FHIT异常转录检出率分别为4.8%、20.9%和9.4%,二者差异有显著性(P＜0.05);18例正常组织中未见FHIT异常转录.结论食管癌、胃癌和结肠癌组织FHIT基因的异常转录可能与消化道恶性肿瘤的发生、发展有关.
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血浆p16和FHIT基因甲基化在食管癌及癌前病变检测的临床意义
目的:研究食管癌及癌前病变患者血浆中p16和FHIT基因甲基化情况,探讨其对食管早期癌和癌前病变诊断的临床应用价值.方法:应用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)方法,对食管癌及癌前病变、慢性食管炎患者组织及血浆标本进行了p16和FHIT基因甲基化检测.结果:在44例癌前病变、14例原位癌、37例浸润癌和10例慢性食管炎共105例患者组织DNA中,分别发现18例、11例、24例和1例p16基因甲基化,15例、9例、25例和0例FHIT基因甲基化.癌前病变和慢性食管炎患者血浆中未发现两基因甲基化.51例食管癌患者血浆中共检出14例p16基因和16例FHIT基因甲基化,其中2例为原位癌.结论:p16及FHIT基因甲基化检测有望将食管癌的筛查提前到原位癌阶段,为食管癌的早期发现提供帮助.
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肺癌患者FGIT基因突变及其与吸烟、化疗敏感性的关系
脆性组氨酸三联体(MIT)基因是Ohta等[1]于1996年在3p14.2上找到的一种新的抑癌基因,在肺癌发生中起重要作用,在吸烟者中这种作用更加明显,其低表达可促进肺癌的发生和发展,影响某些化疗药物敏感性,并具有预后评估价值.FHIT基因包括t(3;8)断裂点、FRA3B及HPV16整合位点,在染色体上占据了约2 Mb的位置.
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恶性黑素瘤FHIT基因蛋白的表达与肿瘤细胞增殖、凋亡关系的研究
目的研究恶性黑素瘤(maligmant melanoma,MM)脆性组氨酸三联体(FHIT)基因的表达及与肿瘤细胞增殖、凋亡的关系.方法用免疫组化SP法检测57例原发性MM和20例正常人皮肤中FHIT蛋白和增殖细胞核抗原的表达水平,用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测其细胞凋亡指数.结果①MM中,FHIT蛋白的表达水平明显低于正常人皮肤(P＜0.001),增殖细胞核抗原的表达水平和细胞凋亡指数显著高于正常人皮肤(P＜0.001);②FHIT蛋白、增殖细胞核抗原蛋白表达水平及细胞凋亡指数与MM患者的年龄、性别和肿瘤发生的部位无明显相关,而与其Clark分级和淋巴结转移状态明显相关(P＜0.01);③MM与正常人皮肤相比,其细胞凋亡指数与增殖细胞核抗原的比值显著降低(P＜0.001);④FHIT蛋白表达与MM细胞活跃增殖和凋亡受抑之间存在一定相关性(P＜0.01).结论FHIT基因可能参与了MM肿瘤细胞的增殖、凋亡的调节,其表达下降可能与MM的发生、发展过程有关.
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纤维支气管镜活检标本FHIT基因检测对肺癌诊断的价值
目的:研究肺癌患者纤维支气管镜(纤支镜)活检标本中FHIT基因缺失的情况及其在肺癌发生发展中的作用,探讨检测FHIT基因缺失在肺癌早期诊断中的应用价值.方法:采用反转录--聚合酶链反应方法,对52例肺癌患者和9例肺良性疾病患者的纤支镜活检标本中FHIT基因缺失进行检测.结果:肺癌患者活检标本FHIT基因缺失率为65.4%,肺良性疾病患者活检标本FHIT基因缺失率为22.2%,二者比较差异有显著性意义(P＜0.05).FHIT基因缺失率在编码区和非编码区无差异.FHIT基因失活与吸烟相关,但与肿瘤部位、组织学类型、分化程度和临床分期无关.早期肺癌患者就有较高的FHIT基因缺失率.结论:FHIT基因缺失在肺癌中是频发事件,与肺癌的发生发展有关,并且可能是肺癌发生的早期分子事件.检测纤支镜活检标本FHIT基因缺失有可能作为肺癌诊断的一个参考指标.
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FHIT基因微卫星变异与宫颈癌关系的分析
[目的]探讨FHIT基因微卫星变异与宫颈癌的关系.[方法]选取FHIT基因的两个微卫星多态标记,采用聚合酶链反应法(PCR)对50例宫颈癌及40例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)组织进行杂合性丢失(LOH)和微卫星不稳定性(MI)的检测.[结果]在D3S1234位点上宫颈癌的LOH发生率为46%(23/50),CIN的LOH发生率为40%(16/40),宫颈癌与CIN的LOH发生率差异无统计学意义(P>0.05),宫颈癌的MI发生率为18%(9/50),CIN的MI发生率为12.5%(5/40),差异无统计学意义(P>0.05);在D3S4103位点上宫颈癌的LOH发生率为40%(20/50),CIN的LOH发生率为37.5%(15/40),差异无统计学意义(P>0.05),宫颈癌的MI发生率为14%(7/50),CIN的MI发生率为7.5%(3/40),差异无统计学意义.但宫颈癌在两位点上LOH和MI发生频率均高于CIN,且高级别CIN发生率高于低级别CIN.[结论]FHIT基因的变异发生在宫颈癌变的晚期;FHIT基因的LOH与MI对于宫颈癌的筛查、早期诊断及判断预后可能具有临床实用价值.
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FHIT基因5'CpG岛甲基化及其与结直肠癌的关系
[目的]探讨结直肠癌FHIT基因甲基化及去甲基化试剂5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对HCT1116细胞生长的影响.[方法]用甲基化特异性PCR(MSP)检测4个结肠癌细胞株、30例结直肠癌患者的原发肿瘤组织及其对应的正常组织的FHIT基因甲基化状态,用流式细胞术、HE染色及免疫细胞化学检测5-Aza-CdR对HCT1116细胞生长的影响.[结果]4个结肠癌细胞株中有3个细胞株(75%)存在FHIT基因5'CpG岛的甲基化,30例原发肿瘤组织有14例(46.7%)检出FHIT基因5'CpG岛的甲基化;用5-Aza-CdR处理HCT1116细胞后,其凋亡率由用药前的1.49%增加到32.6%.[结论]FHIT基因的5'CpG岛甲基化与结直肠癌的发生发展可能密切相关,5-Aza-CdR可能通过诱导细胞凋亡而抑制HCT1116细胞生长.
关键词： FHIT基因 甲基化 结直肠肿瘤 5-氮-2'-脱氧胞苷 -
非小细胞肺癌FHIT蛋白表达与吸烟关系的研究
[目的]探讨非小细胞肺癌中FHIT蛋白表达与吸烟的关系.[方法]采用SP免疫组化法检测77例非小细胞肺癌组织和25例非恶性肿瘤肺组织中FHIT蛋白的表达.[结果]病例组FHIT蛋白表达缺失率显著高于对照组(63.64%vs20.00%,χ2=14.42,P=0.001),病例组中吸烟患者FHIT蛋白表达阴性率显著高于不吸烟患者(70.97%vs33.33%,χ2=7.39,P=0.007).[结论]FHIT可能是烟草致癌物的作用靶点.
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人抑癌基因FHIT真核表达质粒的构建与鉴定
[目的]构建人抑癌基因FHIT真核细胞表达载体.[方法]采用PCR方法,从人胎脑组织的总cDNA中扩增出444bp的人FHIT cDNA片段,然后定向克隆到真核细胞表达载体pcDNA3.1/mye-His(-)B中,用限制性内切酶EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切后酶切分析和DNA序列分析鉴定重组质粒;用该表达质粒转染COS-7细胞,Western blot法检测FHIT蛋白的表达情况.[结果]人FHIT基因cDNA以正确方向插入到真核细胞表达载体pcDNA3.1/myc-His(-)B中;转染COS-7细胞后,可见转染细胞有Fhit蛋白的表达.[结论]本实验成功地构建了人抑癌基因FHIT的真核表达质粒peDNA3.1/myc-His(-)B-FHIT,为研究FHIT基因在肿瘤的发生中的作用提供了有效的工具.
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外源性FHIT基因表达对胃癌细胞株MGC-803凋亡作用的影响
目的:探讨外源性FHIT基因的表达对胃癌细胞株凋亡作用的影响.方法:将载有人外源性FHIT基因的真核表达质粒pRcCMV-FHIT用脂质体介导转入胃癌细胞株MGC-803,用流式细胞仪、普通光镜、透射电镜观察FHIT基因的表达对MGC-803细胞凋亡的影响.结果:转染FHIT基因的MGC-803细胞的凋亡水平(32%)与空质粒转染组(12.15%)相比明显增高,且存在显著性差异(P<0.01),同时细胞的生长周期出现了明显的G0/G1期阻滞(64.375% vs 49.5%).结论:外源性FHIT基因能诱导胃癌细胞株MGC-803凋亡,细胞生长周期阻滞.
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胃癌FHIT基因表达与肿瘤细胞增殖关系的研究
目的探讨人胃癌组织中脆性组氨酸三联体(FHIT)基因的表达及与肿瘤细胞增殖的关系.方法采用免疫组化法检测60例胃癌组织及其癌旁正常组织中FHIT基因、Ki-67蛋白、p21wafl蛋白的表达.结果(1)胃癌组织中FHIT基因表达水平显著低于癌旁正常组织(P＜0.01).(2)胃癌组织中FHIT基因表达水平与胃癌细胞增殖活性呈显著负相关(P＜0.01).(3)胃癌组织中FHIT基因表达水平降低与p21wafl蛋白的丢失存在显著正相关(P＜0.01).结论FHIT基因作为一种抑癌基因,其表达在胃癌组织中明显下降,与肿瘤细胞增殖过度有关.FHIT基因可能通过p21wafl蛋白参与了对肿瘤细胞周期的调控.
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痰标本FHIT、P16、MGMT、RASSF1A、APC基因甲基化在肺癌诊断中的作用
目的 探讨肺癌患者痰标本中FHIT、P16、MGMT、RASSF1A和APC等抑癌基因启动子异常甲基化及其联合检测在肺癌筛查及早期诊断中的价值.方法 采用甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)法,检测47例肺癌组织及对应的痰标本FHIT、P16,MGMT、RASSF1A和APC基因启动子区甲基化状态.24例肺良性疾病患者痰标本作为对照.结果 47例肺癌组织标本中FHIT、P16、MGMT、RASSF1A、APC基因启动子区甲基化检出率分别为40.4%(19/47)、53.2%(25/47)、36.2%(17/47)、21.3%(10/47)和38.3%(18/47);对照的痰标本中五者甲基化检出率分别为38.3%(18/47)、48.9%(23/47)、36.2%(17/47)、17.0%(8/47)和29.8%(14/47),两组甲基化检出率存在着一致性[P>0.05;κ(0.8～1.0)].24例肺良性病变痰标本中未检测到任何异常甲基化,与肺癌组比较差异有统计学意义(P<0.05).五项指标联合检测可明显提高肺癌检测的灵敏度(80.9%)和特异度(100.0%).FHIT和P16基因痰标本甲基化检出率与患者吸烟指数有相关性(P<0.05).结论 痰标本中多个肺癌相关基因甲基化联合检测有望成为肺癌筛查、早期诊断简便有效的指标.
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子宫颈癌FHIT基因表达与杂合性丢失
目的探讨抑癌基因FHIT基因在子宫颈癌发生中的作用及其失活的可能机制.方法选取FHIT基因内2个微卫星位点D3S1300和D3S1234,对56例经显微切割分离肿瘤组织的原发性子宫颈癌进行杂合性丢失(LOH)分析,同时采用免疫组化方法(S-P法)检测FHIT的表达情况.结果 D3S1300和D3S1234的LOH发生率分别为36.2%(17/47)、32.7%(16/49),52%(29/56)的子宫颈癌组织至少在一个位点存在LOH.57.1%的子宫颈癌FHIT表达减弱或缺失,其中71.9%存在FHIT基因LOH,FHIT低表达与FHIT基因LOH之间有相关性(P<0.01).子宫颈鳞癌组织的LOH发生率及FHIT低表达率均高于腺癌(64.3% vs 14.3%,69.0% vs 21.4%, P<0.05).子宫颈鳞癌LOH发生率及FHIT低表达与组织学分级、FIGO分期均不相关(P>0.05).结论 FHIT基因可能在子宫颈鳞癌发生中起重要作用,杂合性丢失可能是FHIT基因失活的重要机制.
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FHIT基因与肿瘤
脆性组氨酸三联体(fragile histindine triad,FHIT)基因是1996年Ohta等[1]用外显子捕获法(exon trapping)确定并克隆出来的人类基因.FHIT存在于大多数正常组织中.研究发现,FHIT基因在人类多种恶性肿瘤及多种恶性肿瘤细胞系中呈现高频率的纯合缺失、杂合缺失(1oss of het-erozygosity,LOH)或异常转录,因此FHIT基因被拟定为抑癌基因并成为近年来的研究热点.
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5-氮杂脱氧胞苷对非小细胞肺癌细胞A549中抑癌基因FHIT表达的影响
DNA甲基化是表观遗传修饰的主要方式之一,启动子CpG的高甲基化是除突变和缺失外肿瘤中抑癌基因失活的重要机制[1].脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad,FHIT)是第一个将脆性位点和肿瘤联系起来的抑癌基因[2],并且FHIT基因甲基化异常是肿瘤发生和发展过程中的早期事件.去甲基化治疗已成为一种新的抑制细胞增殖和诱导细胞分化的肿瘤治疗方法.5-氮杂脱氧胞苷(5-Aza-dC)是一种脱甲基化试剂,实验采用5-Aza-dC处理非小细胞肺癌细胞株A549细胞,观察其FHIT基因甲基化改变及对A549生长的影响.
关键词： 5-氮杂脱氧胞苷 肺肿瘤 FHIT基因 甲基化 甲基化特异性聚合酶链式反应 -
FHIT及P16两种因子在肝癌发生发展中的临床意义
目的 分析FHIT及P16两种因子在肝癌发生发展中的临床意义.方法 行手术肝癌患者148例,标本术后使用盐水冲洗,清除血污和坏死组织,在10％福尔马林保存,完成包埋与切片;选取标本离切除的肝癌组织1～2 cm为癌旁组织组,90例;选取标本离切除的肝癌组织≥5 cm为远肝癌组织组,90例;选取手术的切除标本为肝癌组织组,148例,对三组标本进行免疫组化染色,分析三组标本内PHIT和P16阳性表达与相关性状况.结果 P16蛋白定位于细胞核及胞质内,SP染色以后表征是棕黄色或者黄色;FHIT蛋白定位在细胞胞质内,SP染色后表征是棕黄色或者黄色;远癌组P16及PHIT蛋白为强阳性表达,高于癌旁组和肝癌组,差异均有统计学意义(P＜0.05),癌旁组P16及PHIT蛋白阳性表达高于肝癌组,差异有统计学意义(P＜0.05);肝癌患者中P16蛋白阳性表达与肿瘤分化程度、肿瘤大小有关(P＜0.05),FHIT阳性表达与肿瘤分化程度、TNM分期、形成门静脉癌栓及淋巴结转移有关(P＜0.05).结论 P16和FHIT基因可抑制肝癌患者机体内癌细胞的生长与增殖,且两种因子呈正相关关系.
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FHIT基因甲基化检测对肺癌早期诊断的临床意义
目的 探讨人原发性肺癌中FHIT基因启动子区的甲基化状态及其临床意义.方法 采用甲基化特异性聚合酶链技术(MSP),对59例人原发性肺癌组织(肺癌组)、32例肺正常组织(正常组)、15例癌旁组织(癌旁组)及11例支气管鳞状化生组织进行FHIT基因5'-CpG岛甲基化状况检测,甲基化阳性标本采用基因克隆测序技术进行序列测定.结果 肺癌组、癌旁组和正常组的FHIT基因甲基化率分别为37.3%(22/59)、20.0%(3/15)、0(0/32),三组相比差异有统计学意义(P＜0.01);支气管鳞状化生组织的甲基化阳性率为18.1%(2/11).FHIT基因甲基化率肺癌吸烟者与非吸烟者差异无统计学意义(P＞0.05).FHIT甲基化扩增产物测序结果显示,所有CpG岛中的胞嘧啶均保持不变,而CpG岛二核苷酸以外的胞嘧啶经过PCR扩增后,则被胸腺嘧啶取代.结论 FHIT基因5'-CpG岛甲基化参与了肺癌的演变,可能在肺癌发生的早期阶段,采用MSP方法进行FHIT甲基化检测,可能对肺癌的早期诊断具有一定的临床意义.
关键词： FHIT基因 甲基化 肺癌 甲基化特异性聚合酶链技术 -
FHIT基因蛋白在前列腺癌组织中的表达及意义
目的 探讨FHIT基因在前列腺癌组织中的表达特点及其与临床病理参数的关系.方法 采用免疫组化二步法检测52例前列腺癌和20例前列腺增生组织中的FHIT蛋白表达.结果 FHIT基因在前列腺增生组织中阳性表达率为90.0%(18/20),在前列腺癌组织中阳性表达率为38.5%(20/52),两者间差异有统计学意义(P<0.05).肿瘤不同分级中随恶性程度的增高而表达减少,但差异无统计学意义(P>0.05);不同临床分期中随分期的增高,表达减少,但T1～T2与T3～T4比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 FHIT基因与前列腺癌的发生发展有关,FHIT蛋白异常表达可能是前列腺癌的发病机制之一.
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FHIT基因及错配修复基因MLH1在结直肠癌中的表达研究
目的探讨FHIT、MLH1基因在结直肠癌组织中的表达及其意义.方法采用免疫组化S-P法检测84例结直肠癌组织中FHIT、MLH1基因表达.结果FHIT、MLH1基因在84例结直肠癌中表达阳性率分别为48.81%和92.86%.FHIT基因水平低或不表达与患者年龄、性别、肿瘤部位、组织学类型无关(P＞0.05),而与肿瘤浸润深度、分化程度、Dukes分期和淋巴结转移有关(P＜0.05);结直肠癌组织中FHIT基因表达与MLH1基因表达无显著相关性(P＞0.05).结论FHIT基因参与了结直肠癌的演化和进展,是结直肠癌的1个候选抑癌基因;结直肠癌组织中FHIT、MLH1基因表达的关系还有待深入研究.
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FHIT基因甲基化与肿瘤发生的关系
DNA启动子区域甲基化是人类多种肿瘤发生中常见的基因后成事件[1].在正常组织中,基因CpG岛都是以非甲基化形式存在的,仅在胚胎发育、基因沉默、基因组印记、X染色体失活时,基因启动子区域的CpG岛才有广泛的甲基化,而某些抑癌基因启动子CpG岛被重新甲基化后,可使这些基因失活,从而导致肿瘤的发生.据估计,每一肿瘤中甲基化的CpG岛数目平均可达600个.FHIT基因的杂合性缺失在多种肿瘤中常见,但其另一等位基因抑制性突变却较少发生.
