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尾加压素Ⅱ对自发性高血压大鼠血管外膜成纤维细胞增殖活性及细胞外信号调节激酶1/2磷酸化的影响
目的 研究尾加压素Ⅱ(UⅡ)对自发性高血压大鼠(SHR)血管外膜成纤维细胞增殖活性的影响,并进一步探讨其可能涉及的信号转导通路. 方法 用胸腺嘧啶掺入法(3H-TdR)观察UⅡ诱导的SHR大鼠血管外膜成纤维细胞的增殖活性,及UⅡ受体拮抗剂Urantide、细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)特异性的抑制剂PD98059对UⅡ诱导SHR大鼠血管外膜成纤维细胞增殖活性的影响;用免疫印迹技术观察UⅡ诱导后ERK1/2的磷酸化,及Urantide、PD98059对ERK1/2磷酸化的影响. 结果 UⅡ可以剂量依赖性地诱导SHR大鼠血管外膜成纤维细胞的增殖活性,且这一作用可以完全及部分被Urantide、PD98059抑制;UⅡ可以时间依赖性地诱导血管外膜成纤维细胞ERK1/2的磷酸化,且这一作用可以完全被Urantide、PD98059抑制.结论 UⅡ可以诱导SHR大鼠血管外膜成纤维细胞的增殖活性,且该过程部分由ERK1/2信号通路所介导.
关键词： 尾加压素Ⅱ 成纤维细胞 增殖 细胞外信号调节激酶1/2 -
增生性瘢痕中细胞外信号调节激酶及其激酶基因表达的变化
目的:探讨细胞外信号调节激酶1/2 (extracellular-signal regulated protein kinase,ERK1/2)及其上游信号分子MEK1/2在增生性瘢痕和正常皮肤中基因表达的变化.方法:提取8例增生性瘢痕和8例正常皮肤组织的总RNA后,分离mRNA,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测这4种基因在不同组织中的表达变化规律.结果:在正常皮肤组织中,MEK1、MEK2、ERK1和ERK2基因表达较弱;而在增生性瘢痕中,这4种基因表达明显增强,其mRNA量的灰度比分别为正常皮肤的1.1倍、1.2倍、2.2倍和2.5倍.结论:增生性瘢痕的发生可能与MEK1/2和ERK1/2基因表达升高有关.
关键词： 细胞外信号调节激酶1/2 MEK1基因 MEK2基因 增生性瘢痕 -
ERK1/2信号转导通路参与冠心病致心肌炎症的机制
目的：探讨细胞外信号调节激酶（ERK）1/2信号转导通路参与冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）致心肌炎症的机制。方法45例尸检病例分为3组：冠心病死亡组、冠心病组、对照组（每组15例）。HE染色和免疫组织化学染色白细胞共同抗原（CD45）并观察心肌组织炎症细胞浸润情况；免疫组织化学染色和Western blot检测心肌组织的总ERK 1/2（t-ERK1/2）和磷酸化ERK 1/2（p-ERK1/2）的蛋白表达及分布；荧光定量RT-PCR分析肿瘤坏死因子（TNF）-α表达水平；应用电泳迁移率转变分析（EMSA）评价核因子（NF）-κB的活性。结果与冠心病组、对照组比较，冠心病死亡组心肌炎症细胞数、心肌组织p-ERK1/2蛋白表达、TNF-αmRNA表达及NF-κB活性明显增高（均P＜0.05）。Western blot检测冠心病死亡组p-ERK1/2和TNF-αmRNA、心肌炎细胞计数均呈正相关（r分别为0.675、0.893，均P＜0.01）。结论 ERK1/2信号转导通路激活是冠心病致心肌炎症反应的重要机制，抑制ERK1/2信号转导通路可能成为冠心病防治的潜在新靶点。
关键词： 丝裂原活化蛋白激酶1 冠状动脉疾病 心肌 炎症 肿瘤坏死因子α NF-κB 细胞外信号调节激酶1/2 -
罗格列酮对转移生长因子诱导的大鼠肺纤维化的影响及其作用机制研究
目的 采用转化生长因子(TGF-β1)诱导肺成纤维细胞,给予罗格列酮(过氧化物体增殖活化受体7激动剂)干预,明确其对肺纤维的治疗作用及其作用机制.方法 以组织贴块法培养肺成纤维细胞.实验分为0.4%血清组,TGF-β1刺激组,罗格列酮+TGF-β1处理组,采用免疫细胞化学染色法检测TGF-β1和罗格列酮对肺成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的作用;采用Westem blot法检测肺脏成纤维细胞ERK1/2及磷酸化ERK1/2蛋白的表达.结果 罗格列酮能够抑制TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞的增殖,抑制了Ⅰ型、Ⅲ型胶原的表达.同时磷酸化的ERK1/2蛋白的表达下降,而ERK1/2表达无明显改变,表明罗格列酮抑制了肺成纤维细胞的ERK1/2信号转导途径的活化.结论 TGF-β1能够通过激活ERK1/2途径促进大鼠肺成纤维细胞的增殖和胶原合成,而罗格列酮能够通过阻断TGF-β1介导的ERK1/2通路的激活进而抑制大鼠肺成纤维细胞增殖和胶原合成,对肺间质纤维化存在一定治疗作用.
关键词： 肺纤维化 罗格列酮 过氧化物体增殖活化受体γ TGF-β1 细胞外信号调节激酶1/2 大鼠 -
细胞外信号调节激酶1/2在谷氨酸引起的星形胶质细胞炎症反应中的作用
目的 观察谷氨酸诱导星形胶质细胞激活炎症细胞因子表达及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)的表达情况,探讨ERK1/2在星形胶质细胞激活炎症细胞因子中的作用.方法 传代体外培养的大鼠星形胶质细胞,分别用终浓度为20μmol/L 和50μmol/L的谷氨酸作用30min.应用ERK上游激酶MEK特异性阻断剂PD98059(10 μmol/L)阻断ERK信号转导通路,Western blot观察阻断前后星形胶质细胞磷酸化ERK1/2、白细胞介素-1β(IL-1β)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和环氧合酶-2(COX-2)蛋白表达水平的改变.结果 谷氨酸使体外培养星形胶质细胞磷酸化ERK1/2蛋白表达明显增加,同时,使iNOS、COX-2、IL-1β表达明显增加;PD98059可完全阻断谷氨酸引起的ERK1/2表达增加,也可抑制谷氨酸引起的iNOS、COX-2、IL-1β蛋白表达增加.结论 ERK1/2信号转导通路参与谷氨酸引起体外培养星形胶质细胞炎症反应的作用.
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血小板源性生长因子诱导大鼠心脏成纤维细胞胶原合成的信号转导途径研究
①目的 探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)途径在血小板源性生长因子(PDGF)刺激大鼠心脏成纤维细胞胶原合成中的作用.②方法 分离培养新生大鼠心脏成纤维细胞.免疫细胞化学法、Western blot法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的变化.③结果 与对照组相比,在PDGF刺激下,大鼠心脏成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达增加,PD98059 25μmol/L预孵育1小时能够抑制PDGF的刺激作用.④结论 PDGF能够通过ERK1/2途径调节大鼠心脏成纤维细胞的胶原合成.
关键词： 血小板源性生长因子 细胞外信号调节激酶1/2 心脏成纤维细胞 -
细胞外信号调节激酶1/2信号转导通路与细胞凋亡的研究进展
细胞外信号调节激酶1/2(extracellular-signa1regulated kinase,ERK1/2)是广泛存在于真核细胞内的一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,属丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)家族成员.从信号转导角度看,活化后的ERK1/2作用于胞浆或胞核内的底物蛋白,引起特定蛋白的表达或活化,调控细胞的增殖、分化、凋亡等.目前关于ERK1/2信号通路在神经细胞凋亡的研究尚处在起步阶段.本文对ERK1/2信号转导通路在细胞凋亡中的作用机制进行综述.
关键词： 细胞外信号调节激酶1/2 信号转导通路 细胞凋亡 -
莱菔硫烷抑制HepG-2细胞MMP-9的活性以及ERK1/2磷酸化
目的:探讨莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)对肝癌细胞系HepG-2细胞基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-9的活性及对细胞外信号调节激酶(extracelluar signal-regulated kinase,ERK)1/2磷酸化的影响.方法:体外培养HepG-2细胞,用SFN预处理后,四氮唑盐酶还原法检测细胞的增殖情况,以及LDH的漏出率;明胶酶谱实验和实时荧光定量PCR检测MMP-9的酶活性和mRNA表达水平;Western blot检测ERK1/2的磷酸化情况;后采用定量实时PCR法检测SFN对HepG-2细胞表达Raf激酶抑制蛋白(Raf kinase inhibitor protein,RKIP),Spred-1和Spred-2mRNA的影响.结果:0,20,40,50μM SFN处理24～72h后,均能抑制HepG-2的生长,LHD漏出率实验显示SFN对细胞无明显的毒性;SFN能明显抑制MMP-9的活性和mRNA的表达水平,同时能抑制ERK1/2的磷酸化.另外,SFN能明显提高RKIP、Spred-1和Spred-2 mRNA的表达水平.结论:SFN对HepG-2细胞生长以及MMP-9的活性具有抑制作用,它可能通过抑制ERK1/2磷酸化,诱导RKIP,Spred-1和Spred-2表达而发挥抗肿瘤的作用.
关键词： 莱菔硫烷 肝细胞癌 基质金属蛋白酶-9 细胞外信号调节激酶1/2 -
痹肿消汤干预胶原诱导关节炎模型大鼠关节滑膜组织细胞外信号调节激酶1/2及细胞外信号调节激酶5的表达
背景:滑膜细胞信号转导异常是类风湿性关节炎的重要发病机制之一.中药复方痹肿消汤治疗类风湿性关节炎具有较好的临床疗效,但在细胞信号转导水平探讨痹肿消汤治疗类风湿性关节炎的作用机制是十分必要的.目的:观察中药复方痹肿消汤对胶原诱导关节炎模型大鼠滑膜细胞外信号调节激酶1/2,5表达的影响.方法:SD大鼠45只随机数字表法分为对照组、模型组、痹肿消汤组.胶原诱导关节炎模型大鼠,用痹肿消汤药液3.0～ 3.5 mL灌胃,1次/d,连续14 d.检测造模后第14,21,28天大鼠滑膜细胞外信号调节激酶1/2,5的磷酸化水平.结果与结论:造模后,大鼠滑膜细胞外信号调节激酶1/2,5的磷酸化表达随时间而增加(P < 0.05).痹肿消汤治疗后,细胞外信号调节激酶1/2,5磷酸化表达水平则明显下降(P < 0.05).提示痹肿消汤能抑制细胞外信号调节激酶1/2,5蛋白激酶的激活,从而抑制细胞外信号调节激酶1/2,5信号转导通路的活化,这可能是其阻抑类风湿性关节炎滑膜异常增殖、关节骨质侵蚀的重要机制之一.
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细胞外信号调节激酶1/2传导通路对增生性瘢痕的影响
目的观察细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)传导通路对增生性瘢痕的影响.方法用免疫组化方法和常规病理技术检测Ras、磷酸化ERK1/2和Cfos在14例增生性瘢痕和14例正常皮肤中的表达变化规律.结果在正常皮肤中,Ras、磷酸化ERK1/2和Cfos蛋白表达较低,随着增生性瘢痕不断成熟,这3种蛋白表达逐渐增强.在成熟期瘢痕中,这3种蛋白阳性细胞率明显高于正常皮肤(P<0.01).结论增生性瘢痕的发生和成熟可能与激活ERK1/2信号传导通路,促进Cfos转录因子表达有关.
关键词： 细胞外信号调节激酶1/2 增生性瘢痕 皮肤组织 -
姜黄素对脂多糖诱导炎症致软骨细胞凋亡及增殖能力的影响
背景:在骨关节炎的相关研究中,姜黄素被证实具有抗炎抗氧化及抗凋亡的作用,但相关机制的研究还不够深入.目的:探讨姜黄素对脂多糖诱导的软骨细胞凋亡、增殖的影响,以及潜在的作用机制,为治疗骨关节炎疾病提供新思路.方法:取4周龄SD大鼠,进行软骨细胞的体外分离培养,甲苯胺蓝染色进行细胞鉴定.采用脂多糖诱导法建立体外软骨细胞炎症模型.将软骨细胞分为5组:对照组(普通培养基);模型组(含5μg/L脂多糖培养基);低剂量姜黄素组(含5μg/L脂多糖+5μmol/L姜黄素培养基);中剂量姜黄素组(含5μg/L脂多糖+10μmol/L姜黄素培养基);高剂量姜黄素组(含5μg/L脂多糖+20μmol/L姜黄素培养基).培养24 h后,ELISA法检测各组细胞上清液中白细胞介素1β和转化生长因子α的水平;流式细胞仪检测细胞凋亡状况;MTT法进行细胞增殖检测;Western blot法检测自噬相关蛋白及ERK1/2的表达变化.结果与结论:①经脂多糖诱导处理的软骨细胞上清液中白细胞介素1β和转化生长因子α的水平均显著高于对照组(P<0.01),各姜黄素组细胞上清液中白细胞介素1β和转化生长因子α的水平较模型组显著降低(P<0.05,P<0.01),且呈剂量依赖性;②经24 h培养后,模型组细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01),与模型组相比,各姜黄素处理的细胞凋亡率有所降低,且20μmol/L姜黄素处理的细胞凋亡率降低为显著(P<0.01);③MTT法检测结果显示,与对照组相比,模型组细胞增殖能力显著降低(P<0.01);与模型组相比,经不同浓度的姜黄素处理细胞后,细胞的增殖能力得以恢复,且20μmol/L姜黄素处理的细胞恢复效果好;④Western blot法检测结果显示,与模型组相比,各姜黄素组细胞自噬能力明显增强,自噬标志物LC3-II及相关蛋白Beclin-1表达量均显著升高(P<0.05,P<0.01),且p-ERK1/2蛋白表达量显著升高(P<0.05);⑤结果提示,20μmol/L姜黄素能显著缓解脂多糖诱导的软骨细胞炎症反应,抑制软骨细胞凋亡,并对脂多糖诱导的炎症软骨细胞增殖抑制具有一定的拮抗作用,这可能与姜黄素通过ERK1/2途径激活的自噬分子调控紧密相关.
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15-羟廿碳四烯酸对脑动脉平滑肌细胞ERK信号传导通路影响
目的 探讨缺氧时15-羟廿碳四烯酸(15-HETE)对细胞外信号调节激酶(ERK)1/2及ERK5通路的影响以及ERK1/2及ERK5通路在缺血缺氧性脑动脉收缩中的作用.方法 将大鼠脑动脉平滑肌细胞随机分为正常对照组、缺氧组、缺氧+去甲二氢愈创木酸(NDGA)组、缺氧+NDGA+15-HETE组、缺氧+NDGA+15-HETE+ERK抑制剂组、缺氧+ERK抑制剂组.将细胞分别应用Western blot技术和Real-time PCR技术检测大鼠脑动脉平滑肌细胞中p-ERK、ERK、电压门控性钾离子通道(Kv)2.1蛋白及mRNA的表达.结果 随着15-HETE作用时间延长,正常对照组中15-HETE活化ERK1/2以及ERK5作用降低;随着15-HETE浓度的升高,正常对照组中ERK1/2和ERK5的活性增加,差异均有统计学意义(P<0.05).随着15-HETE增多,p-ERK1/2表达增多,Kv2.1通道表达受抑制;加入ERK1/2抑制剂后,缺氧+NDGA+15-HETE+ERK1/2抑制剂组与缺氧+NDGA+15-HETE组相比较、缺氧+ERK1/2抑制剂组与缺氧组相比较,ERK1/2活性减弱的同时,Kv2.1通道表达增强,差异均有统计学意义(P<0.05).随着15-HETE的产生增多,ERK5表达减少,Kv2.1通道表达降低.缺氧+NDGA+15-HETE+ERK5抑制剂组和缺氧+ERK5抑制剂组,分别与缺氧+NDGA+15-HETE组和缺氧组相比较,ERK5活性明显受抑制,Kv2.1通道表达增多,差异均有统计学意义(P<0.05).加入ERK抑制剂后,ERK mRNA表达明显被抑制,缺氧+NDGA+15-HETE+ERK抑制剂组与缺氧+NDGA+15-HETE组相比较、缺氧+ERK抑制剂组与缺氧组比较,Kv2.1 mR-NA均上调,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 在缺氧条件下,脑动脉平滑肌细胞中15-HETE可能是通过上调ERK1/2信号传导通路的表达而抑制Kv2.1通道的表达,终导致脑动脉收缩.
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异氟醚对乙酰胆碱诱导的细胞外信号调节激酶磷酸化的抑制效应
目的：研究异氟醚如何影响乙酰胆碱诱导的细胞内信号传递,探讨挥发性麻醉药影响认知功能的分子机理。方法培养的神经元样 PC12细胞随机分成对照组和异氟醚组。对照组正常培养,异氟醚组用1．2%异氟醚处理2 h,分别于处理后0 min、1 h、3 h加入碘化乙酰胆碱( ACh)刺激2 min后收集细胞,采用West-em blot技术检测基础水平和乙酰胆碱诱导下细胞外信号调节激酶1/2( ERK1/2)的磷酸化水平和蛋白激酶 B (PKB)的活性。结果单纯ACh刺激可导致ERK1/2磷酸化水平显著增加(P<0．01),异氟醚处理后0 min和1 h乙酰胆碱诱导的ERK1/2磷酸化水平明显降低,3 h时恢复到正常水平。与对ERK的影响效应不同,单独异氟醚处理可迅速增加基础状态下PKB的磷酸化水平( P<0．05),但1 h后即恢复正常水平。结论异氟醚可以长时程减弱乙酰胆碱诱导的ERK活化,从而干扰胞内信号传递,这可能与术后认知功能障碍发生密切相关。
关键词： 异氟醚 乙酰胆碱 细胞外信号调节激酶1/2 蛋白激酶B -
细胞外信号调节激酶1/2在Aβ25-35引起体外培养星形胶质细胞炎症反应中的作用
目的 观察Aβ诱导星形胶质细胞激活炎症细胞因子表达及细胞外信号调节激酶1/2的表达.探讨细胞外信号调节激酶1/2是否参与了星形胶质细胞激活炎症细胞因子作用及其作用机制.方法 传代体外培养的大鼠星形胶质细胞,分别用终浓度为10μmol/L和20μmol/L的Aβ25-35作用30分钟.在PD98059组,加入Aβ25-3520μmol/L前1小时,加入PD培养.用Western blot分析iNOS、COX-2、IL-1β、P-ERK1/2的改变.结果 Aβ25-35可使体外培养星形胶质细胞P-ERK1/2蛋白表达明显增加,同时,Aβ25-35也可使iNOS、COX-2、IL-1β表达明显增加,ERK1/2上游激酶MEK特异性阻滞剂PD98059可完全阻断Aβ25-35引起的ERK1/2表达增加,也可抑制Aβ25-35引起的iNOS、COX-2、IL-1β蛋白表达增加.结论 ERK1/2信号转导通路参与Aβ25-35引起体外培养星形胶质细胞炎症反应的作用.
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抗氧化剂硫辛酸对实验性偏头痛大鼠细胞外信号调节激酶1/2的作用
目的 探讨α-硫辛酸(alpha-lipoid acid,α-LA)对硝酸甘油诱发的实验性偏头痛大鼠细胞外信号调节激酶1/2的作用.方法 48只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、α-LA组、溶剂组,采用皮下注射硝酸甘油(glyceryl trinitrate,GTN)法制作偏头痛大鼠模型.α-LA组在造模后30 min腹腔给予α-LA (60 mg· kg-1),观察大鼠行为学变化.采用Western blot印迹法和免疫组化法测定三叉神经节及三叉神经颈复合体、硬脑膜细胞外信号调节激酶1/2 (ERK1/2)、磷酸化ERKl/2(p-ERK1/2)表达.结果 模型组大鼠p-ERK1/2蛋白表达明显高于正常对照组;与模型组相比,α-LA组大鼠行为症状明显改善,p-ERK1/2蛋白表达下降,模型组与α-LA组组间比较有统计学意义(P＜0.05).结论 α-LA可减弱偏头痛大鼠模型中p-ERK1/2的表达,α-LA可能有防治偏头痛的作用.
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外源性硫化氢对嗜铬细胞瘤细胞β位淀粉样前体蛋白裂解酶1表达的影响
目的 观察外源性硫化氢(H2S)对嗜铬细胞瘤细胞(PC12)β位淀粉样前体蛋白裂解酶1( BACE1)表达的影响,并探讨可能涉及的细胞信号机制.方法用不同浓度的硫氢化钠(NaHS)处理体外培养的PC12细胞,利用RT-PCR和Western blot法检测细胞内BACE1 mRNA及蛋白表达；继以LY294002和PD98059分别阻断磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(PI3-K/Akt)及丝裂酶原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶1/2( MAPK/ERK1/2)通路,Western blot法检测其对NaHS诱导的通路下游蛋白Akt1和ERK1/2磷酸化的影响及其对BACE1蛋白表达变化的调节；ELISA法检测细胞培养液中Aβ42水平的变化.结果NaHS在实验浓度范围内呈剂量依赖性下调BACE1mRNA及蛋白表达,200μmo/L时明显,各NaHS组与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜ 0.05);LY294002抑制NaHS诱导的Akt1蛋白磷酸化,削弱NaHS对BACE1蛋白的下调作用,其表达在LY294002预处理组与NaHS 200μmol/L组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05)；而PD98059虽能抑制NaHS导致的ERK1/2蛋白磷酸化,但对其调节BACE1蛋白表达无影响,PD98059预处理与NaHS 200μmol/L组相比,差异无统计学意义(P＞0.05);不同处理条件下的Aβ42表达与BACE1变化趋势基本一致.结论外源性H2S下调PC12细胞BACE1表达,其机制可能与PI3-K/Akt信号通路的激活有关,而与MAPK/ERK1/2通路无关.
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细胞外信号调节激酶1/2抑制剂U0126上调脑缺血再灌注小鼠海马微管结合蛋白2的表达
目的 探讨细胞外信号调节激酶(ERK)1/2抑制剂U0126对脑缺血再灌注损伤小鼠海马微管结合蛋白2(MAP-2)表达的影响.方法 健康昆明小鼠150只,随机分为假手术组、缺血再灌注组和U0126组,每组50只,各组再根据缺血后再灌注的时间点细分为6、12、24、48和72h5个亚组.利用免疫组织化学方法和Western blot方法检测MAP-2在各组小鼠海马的表达变化,同时应用TUNEL法检测各组小鼠海马细胞的凋亡情况.结果 与假手术组相比,缺血再灌注组小鼠海马MAP-2的表达在6h时已经明显降低,24 h达低值,而在72 h略有回升(P＜0.01);与相同时间点的缺血再灌注组小鼠相比,U0126组小鼠海马MAP-2的表达明显升高(P＜0.01),而且海马细胞的凋亡情况明显好转(P＜0.01).结论 U0126能够上调脑缺血再灌注损伤小鼠海马MAP-2的表达,减少脑缺血再灌注损伤海马神经细胞的凋亡.
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慢病毒介导siRNA对大鼠脊髓组织细胞外信号调节激酶1/2及核因子E2相关因子2基因的影响
目的 评价慢病毒介导细胞外信号调节激酶1/2(extracellular-signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)-siRNA及核因子(nuclear factor,NF)E2相关因子2(NF-E2-related factor 2,Nrf2)-siRNA进入大鼠局部脊髓组织的转染效果.方法 采用NYU撞击法构建SD大鼠脊髓损伤模型(模型组),使用微量注射器将含荧光慢病毒载体(LV-Nrf2-RNAi和LV-ERK1/2-RNAi)稀释液注射至其脊髓T10水平背侧深约0.8mm处,荧光显微镜下观察不同时间点(12h、24 h、72 h、7d及14 d)转染效果.以只切除椎板,不打击脊髓的大鼠作为假手术组,在模型组和假手术组中同时设转染组和未转染组.取大鼠脊髓组织,采用RT-PCR及Western blot法检测转染后7d时ERK1/2及Nrf2基因mRNA转录及蛋白表达水平.结果 与假手术组相比,模型组大鼠脊髓组织在慢病毒转染后各时间点均有较强的荧光表达,病毒转染7d以内,荧光强度与时间呈正相关,在转染7d后达到高峰.转染7d后,假手术组与模型组中ERK1/2及Nrf2基因mRNA转录及蛋白表达水平均较未转染组明显降低(P均＜0.05).结论 慢病毒介导siRNA转染大鼠脊髓组织,能够有效沉默ERK1/2及Nrf2基因的表达.
关键词： 慢病毒 RNA干扰 细胞外信号调节激酶1/2 核因子E2相关因子2基因 脊髓组织 -
小檗碱通过抑制Traf2-MEKK1-MEK-ERK通路改善TNF-α诱导的胰岛素抵抗
目的:探讨小檗碱对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)所致人肝癌细胞株HepG2胰岛素抵抗的缓解作用及分子机制.方法:采用10ng/mL TNF-α诱导HepG2细胞产生胰岛素抵抗,同时以1 μmol/L小檗碱处理细胞,通过Western blotting检测胰岛素通路信号分子(IRS1、AKT)和TNF-α通路信号分子(Traf2、MEKK1、MEK1/2、ERK1/2)的蛋白表达.此外,通过过表达或抑制TNF-α通路的信号分子(MEK1、ERK2)进一步探讨小檗碱靶点.结果:TNF-α抑制HepG2细胞AKT(Thr308、Ser473位点)和IRS1(酪氨酸位点)的磷酸化(＜0.05),促进IRS1 (Ser307位点)和ERK1/2的磷酸化(P＜0.05),而这一作用能够被小檗碱所逆转(P＜0.05).同时,TNF-α对AKT活性的抑制作用能够被ERK1/2或MEK1/2的抑制剂拮抗(P＜0.05).此外,小檗碱并不能改善持续激活型ERK2 (CA)或MEK1 (CA)对胰岛素通路的抑制作用(P＞0.05),但是能阻碍Traf2与MEKK1的相互作用(P＜0.05).结论:小檗碱通过抑制Traf2-MEKK1-MEK-ERK通路改善TNT-α诱导的胰岛素抵抗.
关键词： 小檗碱 胰岛素抵抗 肿瘤坏死因子-α 细胞外信号调节激酶1/2 -
阿托伐他汀对甲状旁腺素致心肌肥大的保护作用
目的:观察阿托伐他汀对大鼠甲状旁腺素1-34(rPTH1-34)诱导的新生大鼠心室肌细胞肥大的抑制作用及丝裂素活化蛋白激酶激酶1/细胞外信号调节激酶1/2(MKK1/ERK1/2)表达的变化,分析阿托伐他汀抑制心肌肥大的可能机制.方法:以原代培养的新生Wsitar大鼠心室肌细胞为研究对象,3H-亮氨酸掺入率检测细胞蛋白合成速率,BCA法测定单个细胞蛋白含量,RT-PCR检测心房利钠尿肽mRNA (ANPmRNA)的表达,Western blot方法测定p-MKK1、p-ERK 1/2蛋白的表达.结果:1.10-7 mmol/LrPTH 1-34孵育24h可增加体外培养的心肌细胞蛋白合成速率和ANPmRNA表达,使p-MKK1及p-ERK1/2蛋白表达升高(P＜0.05).2.10-5 mmol/L阿托伐他汀能抑制心肌细胞蛋白合成速率及单细胞蛋白含量的增加(P＜0.05),且对正常心肌细胞没有影响(P＞0.05).3.10-5 mmol/L阿托伐他汀能抑制p-MKK1、p-ERK1/2的表达(P＜0.05).结论:阿托伐他汀能抑制PTH诱导的心肌细胞肥大的发生,可能与抑制MKK1/ERK1/2的活性有关.
