A群C群脑膜炎球菌结合疫苗的制备

目的 制备A群C群脑膜炎球菌结合疫苗,并对其进行生化检测及免疫原性和抗原性分析.方法 经溴化氰(CNBr)分别活化的A群、C群脑膜炎球菌荚膜多糖,在己二酰肼(ADH)的连接作用和碳二亚胺(EDAC)的偶联作用下,与破伤风类毒素(Tetanic toxoid,TT)形成结合物.以不同剂量的GAMP-TT和GCMP-TT的混合物免疫小鼠,检测小鼠血清中GAMP、GCMP和TT的抗体滴度,评价其免疫效果.根据剂量试验结果,制备A群C群脑膜炎球菌结合疫苗并进行抗原性检测,并与市售同类产品进行对比试验.结果 制备的3批GAMP-AH和3批GCMP-AH的批间差异较小,GAMP-AH和GCMP-AH的衍生率相差较大,由GCMP-AH制备的GCMP-TT的结合率明显高于GAMP-TT(P＜0.01),结合物含量差异无统计学意义(P＞0.05).GAMP-TT和GCMP-TT具有良好的免疫原性和抗原性,多糖蛋白结合物组较多糖组可诱导产生更高水平的GAMP和GCMP抗体,且具有免疫记忆.由以上两者制备的A群C群脑膜炎球菌结合疫苗生化指标、血清抗体效价与市售的同类产品差异无统计学意义(P＞0.05).结论 成功研制了具有良好免疫原性和抗原性的A群C群脑膜炎球菌结合疫苗,为其产业化奠定了基础.

我国部分地区儿童b型流感嗜血杆菌荚膜多糖抗体水平的调查

目的 调查我国部分地区儿童b型流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae type b,Hib)荚膜多糖的组分多聚核糖基-核糖醇磷酸盐(polyribosylribitol phosphate,PRP)的抗体(抗-PRP)水平.方法 采用ELISA法对2007 ～ 2014年间来自我国广西壮族自治区、江苏省、河南省的13 799份2月龄～5岁健康儿童的血清标本进行抗-PRP自然抗体水平的检测.结果 2007 ～ 2014年间我国2月龄～5岁儿童抗-PRP自然抗体阳性率、抗体浓度达到长期保护水平的比例及抗体几何平均浓度(GMC)呈逐年升高的趋势,其中2～11月龄儿童的抗-PRP自然抗体阳性率较低;不同地区儿童抗-PRP自然抗体水平差异不大,且不同性别间抗体水平分布较均衡.结论 我国2～11月龄儿童仍是Hib的易感人群,是需进行Hib结合疫苗预防接种的重点人群.

CDAP活化多糖制备5型肺炎链球菌荚膜多糖-破伤风类毒素结合疫苗

目的 用1-氰基-4-二甲氨基.吡啶四氟硼酸(CDAP)代替溴化氰(CNBr)活化5型肺炎链球菌荚膜多糖,制备5型肺炎链球菌荚膜多糖-破伤风类毒索(TT)结合疫苗.方法 将5型肺炎链球菌荚膜多糖溶液加CDAP活化,经ADH和缩合剂EDAC与破伤风类毒素进行偶联,经凝胶过滤柱层析纯化,得到5型肺炎链球荫多糖-TT结合物,并对其生化指标、血清学特异性、安全性及免疫原性进行检测.结果 多糖-TT结合物的游离多糖含量与多糖的衍化率成反比;血清学特异性良好;经动物实验证明其安全性合格;具有良好的免疫原性,且游离多糖含量越低,免疫原性越强.结论 用CDAP活化工艺制备的5型肺炎链球菌荚膜多糖-TT结合物适宜制备疫苗.

C群和W135群脑膜炎球菌发酵工艺的优化

目的 优化C群和W135群脑膜炎球菌的发酵工艺,提高荚膜多糖产量.方法 在5L发酵罐中,通过调整溶氧(DO)、pH值、培养温度、葡萄糖补料速率等参数,了解C群和W135群脑膜炎球菌在发酵过程中的代谢规律,优化发酵工艺,并将C群脑膜炎球菌在100 L发酵罐中放大发酵.结果 在发酵过程中,DO在20%～40%范围内对多糖合成无明显影响;在pH 6.6左右,培养温度37℃,有利于多糖合成;发酵中间补加葡萄糖可增加多糖合成,低速补糖较高速补糖更有利于多糖合成.C群脑膜炎球菌在100 L罐中放大发酵,多糖产量可达5 L罐水平.结论 通过参数优化,确定了C群和W135群脑膜炎球菌的佳发酵工艺.

W135和Y群脑膜炎球菌培养和多糖纯化

目的培养W135和Y群脑膜炎球菌及荚膜多糖的纯化.方法采用综合培养基代替半综合培养基在75 L生物反应器中对两群脑膜炎球菌进行培养,研究培养基处方、发酵、多糖提取及纯化工艺.结果综合培养基可代替半综合培养基对两群脑膜炎球菌进行培养.在培养过程中补加葡萄糖溶液、优化搅拌速度及通气量均有利于两菌群生长;在多糖纯化过程中,通过对比试验选择25%乙醇沉淀核酸,2～8℃的酚溶液,萃取蛋白的次数控制在3～4次为好.结论所研制的综合培养基及多糖纯化的工艺具有较好的可行性,为四价脑膜炎球菌多糖疫苗的研制提供了试验基础.

四价脑膜炎球菌多糖单克隆抗体的制备及其应用

目的 制备四价脑膜炎球菌多糖的单克隆抗体,并将其应用于速率散射比浊试验.方法 分别用A、C、W135、Y群脑膜炎球菌多糖(meningococcal polysaccharides of group A,C,W135 and Y,分别简写为GAMP、GCMP、GWMP、GYMP)与白喉毒素无毒变异体CRM197结合物(GAMP-CRM 197、GCMP-CRM 197、GWMP-CRM197、GYMP-CRM 197)免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,采用间接ELISA法筛选杂交瘤细胞株,对阳性细胞株进行特异性检测及纯化抗体效价检测.每种血清群选1株单抗,用于速率散射比浊试验定标.结果 分别获得稳定分泌抗GAMP、GCMP、GWMP、GYMP细胞株20、18、9和13株,其中抗GAMP特异性单抗5株,抗GCMP特异性单抗5株,抗GWMP特异性单抗3株,抗GYMP特异性单抗5株,均与CRM 197及其他3个血清群多糖无交叉反应.抗GAMP纯化抗体效价均＞1∶4000000,抗GCMP纯化抗体效价均＞1∶200000,抗GWMP纯化抗体效价均可达1∶40000,抗GYMP纯化抗体效价均可达1∶40000.抗GAMP单抗6B7和抗GCMP单抗2H4在标准品浓度2～10 μg/ml范围内,可用于速率散射比浊试验定标,R2分别为0.990 9和0.991 9;抗GWMP单抗5F1在标准品浓度4.33～21.7μg/ml范围内,可用于速率散射比浊试验定标,R2为0.851 8;抗GYMP单抗7C6在标准品浓度1～8μg/ml范围内,可用于速率散射比浊试验定标,R2为0.998 7.结论 成功制备了四价脑膜炎球菌多糖特异性单抗,并应用于速率散射比浊试验.

肺炎链球菌5型发酵工艺的优化

目的:采用正变试验设计方法进行肺炎链球菌5型发酵工艺的研究.方法:根据正交试验设计表L9(34)设计的试验条件组合进行了9次肺炎链球菌5型的发酵,采用70升发酵罐进行发酵工艺的摸索,提取了肺炎链球菌5型荚膜多糖粗糖.结果:佳的发酵培养条件组合为温度37℃、葡萄糖20克/升、大豆胨15克/升、pH值7.3,佳的纯化条件组合为冷酚抽提三次、沉核酸乙醇浓度23％、超滤膜孔径50kD、终沉糖乙醇浓度60％,在此筛选得到的佳条件下,连续进行了5个批次肺炎链球菌5型的发酵与荚膜多糖提取,荚膜多糖粗糖的平均收率为808.6mg/L,相对标准偏差为3.84％.结论:上述发酵培养条件组合适合用于肺炎多糖疫苗的研究和生产.

空肠弯曲菌热稳定抗原性质及与周围神经病关系的研究进展

热稳定抗原是空肠弯曲菌常用的分型基础.此菌某些血清型的核心寡糖外核结构与人周围神经神经节苷脂的结构相似.通过交叉免疫导致周围神经损伤可能是引起格林-巴利综合征的原因.一直以来,人们普遍认为热稳定抗原的分子结构有两类:含高相对分子质量O多糖的脂多糖和缺乏高相对分子质量O多糖的低聚脂糖,但新的研究发现:空肠弯曲菌存在荚膜结构,并认为荚膜多糖可能为热稳定抗原的抗原决定子.

新生隐球菌的荚膜多糖合成研究进展

新生隐球菌是一重要的致病真菌，其细胞壁外层的多糖荚膜是第1个被公认的新生隐球菌毒性因子。本文总结了在荚膜生理和生化合成方面的研究进展，介绍了研究新生隐球菌荚膜合成的常用方法以及在新生隐球菌的荚膜代谢途径、生化合成酶、分泌、组装和调节这些广泛的研究领域存在的许多未解决的问题

8型荚膜多糖的过量产生能增强金黄色葡萄球菌的毒力

创伤弧菌溶细胞素细胞毒性机制的研究进展

创伤弧菌(Vibrio vulnificus)是一种有荚膜的革兰阴性嗜盐弧菌,存在于海水及海产品中.该菌主要引起原发性败血症和严重的创口感染.原发性败血症病人多发生低血容量性休克伴多脏器功能衰竭,病死率高.创伤弧菌感染的致病机制至今尚未完全阐明.动物实验发现该菌的毒力可能包含诸多因素,如胞外溶细胞素(VVC)、金属蛋白酶(弹性蛋白分解酶)、荚膜多糖(CPS)等.VVC是由结构基因vvhA编码的一种相对分子质量(Mr)为50 851的细胞外蛋白质,是一种能使细胞形成孔道的细胞毒素和溶血毒素,是创伤弧菌向胞外释放的唯一细胞毒素,由大多数致病菌株产生,具水溶性,对热不稳定,能溶解哺乳动物红细胞及中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,具有血管渗透因子活性.经VVC注射的实验鼠可出现与创伤弧菌败血症病人同样的临床和病理表现,毫克以下水平即可对实验鼠致死.VVC在创伤弧菌感染致病机制中的确切地位尚有争议,但因其具有穿孔特性而颇受人们关注.目前对VVC的细胞毒性机制已有广泛研究和报道,但其确切机制尚未完全明了.本文将近年来国外有关研究的情况作一综述.

创伤弧菌致病机制的研究进展

创伤弧菌是一种致病性极强的细菌,可引起严重的伤口感染和败血症等疾患.其确切的致病因子和致病机制至今尚未完全阐明.兹将近年来有关其主要致病因素,如溶细胞素、金属蛋白酶、儿荼酚亲铁物质、荚膜多糖及磷脂酶的研究动态作一综述.

050 编码C群脑膜炎球菌荚膜多糖模拟肽的多表位DNA疫苗诱导的保护性抗体

153 不同方法制备的B群链球菌(GBS)荚膜多糖-霍乱毒素B亚单位结合疫苗的鼻腔免疫作用

059 O139型霍乱弧菌荚膜多糖-重组白喉毒素突变体结合疫苗的制备及免疫原性

A群脑膜炎球菌多糖结合疫苗与百白破疫苗联合接种的免疫原性初探

脑膜炎球菌、b型流感嗜血杆菌(Hib)、肺炎链球菌等细菌的荚膜多糖是重要的保护性抗原,其抗体可以保护机体免受侵害.

牙龈卟啉单胞菌脂多糖及荚膜多糖诱导THP-1细胞分泌IL-8的分析

目的·分离牙龈卟啉单胞菌(Pg)脂多糖(LPS)及荚膜多糖(CPS),分析两者体外诱导人单核细胞系THP-1细胞分泌IL-8的能力.方法·采用凝胶过滤色谱法分离已获得的Pg ATCC33277及SJD4多糖混合物,并作用于THP-1细胞.采用ELISA法检测THP-1细胞在不同菌株LPS和CPS的不同浓度及不同作用时间下,其上清液中IL-8的含量.结果·成功分离获得ATCC33277及SJD4的LPS及CPS,其相对分子质量分别为20000~50000及150000~500000;分离所得LPS及CPS均具有体外诱导THP-1细胞分泌IL-8的能力,且存在时间-剂量效应;在0.1μg/mL浓度下,模式菌株ATCC33277的LPS诱导能力均显著高于其CPS(均P<0.05),而临床菌株SJD4在作用24 h时其CPS的诱导能力显著高于LPS(P<0.05).结论 ·CPS作为Pg多糖提取物的组成成分,可单独体外诱导THP-1细胞分泌IL-8,且存在时间-剂量效应.

江苏省涟水、阜宁两县婴儿b型流感嗜血杆菌多糖抗体水平比较

目的 了解江苏省涟水、阜宁两县3～11月龄婴儿b型流感嗜血杆菌荚膜多糖(Hib-PRP)自然感染抗体水平,评价地区差异.方法 通过查阅预防接种证,在两县共筛选无Hib疫苗接种史3～11月龄婴儿3 061人,采集静脉血约2 mL,分离血清,采用酶联免疫吸附试验检测Hib-PRP抗体,计算两县入组婴儿Hib-PRP抗体几何平均浓度(GMC)、短期保护率、长期保护率,并进行比较.结果 Hib-PRP抗体总GMC为0.18 mg/L,涟水县为0.19 mg/L,阜宁县为0.18 mg/L,差异无统计学意义(P=0.178);阜宁县短期、长期保护率(1.64％、23.85％)均高于涟水县(0、21.56％).阜宁县3～5月龄婴儿抗体GMC(0.28 mg/L)明显高于涟水县(0.13mg/L);而6～8月龄和9～11月龄婴儿抗体GMC(0.10 mg/L和0.12 mg/L)明显低于涟水县(0.21 mg/L和0.57 mg/L),差异均有统计学意义(P值均＜0.05).随年龄增长,阜宁县短期保护率呈上升趋势,长期保护率呈先下降后上升趋势;涟水县长期保护率亦随年龄增长呈上升趋势.结论 江苏省涟水、阜宁县3～11月龄婴儿Hib-PRP自然感染抗体水平存在地区差异.

N,N'-羰基二咪唑作为A群脑膜炎球菌荚膜多糖活化剂制备多糖蛋白结合物

用N,N'-羰基二咪唑(CDI)作多A群脑膜炎球菌荚膜多糖(MenAps)的活化剂进行初步研究,以期开发一种新的多糖活化剂用于多糖蛋白结合物的制备.用A群脑膜炎球菌荚膜多糖作为原料,在水溶液条件下以CDI作为多糖活化剂进行活化;经活化的A群脑膜炎球菌荚膜多糖再与1,6-己二酰肼(ADH)衍生,得MenAps-ADH衍生物;衍生物与破伤风类毒素(TT)共价结合,形成MenAps-Tr结合物;检测衍生物和结合物的关键控制指标,并与《中国药典》三部(2015版)进行比较.当多糖:CDI的质量比为1∶1.5,1∶2时,获得的衍生物的衍化率分别为1.23％和1.76％;结合物的多糖含量、蛋白含量、游离多糖含量、游离蛋白含量均达到《中国药典》三部(2015版)的要求,MenAps-Tr结合物免疫的小鼠血清阳转率达到100％,几何平均抗体滴度(GMT)高,并与阴性对照组相比P =0.00423 (P ＜0.01)有显著差异.N,N'-羰基二咪唑(CDI)可在水相条件下活化多糖,并获得免疫原性良好的多糖蛋白结合物.

Triton X-114萃取法纯化b型流感嗜血杆菌荚膜多糖的应用

采用Triton X-114替代高腐蚀性的苯酚,以探索b型流感嗜血杆菌(Haemophilusinfluenzaetype b,Hib)荚膜多糖的纯化新方法.将Hib粗制荚膜多糖溶于不同浓度的Triton X-114溶液中,加入(NH4)2SO4,搅拌后,离心分层后,取下层溶液.重复多次,后用100 kD膜进行超滤.结果,加入Triton X-114的质量分数为15％,(NH4)2S04的质量分数为30％,抽提次数为3次时,对蛋白杂质的去除效果较好.采用Triton X-114萃取法连续纯化3批Hib荚膜精制多糖,其各项检测指标均符合《中国药典》2015版(三部)规定.研究表明Triton X-114萃取法可应用于Hib粗制荚膜多糖的纯化,且纯化效果良好.