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Neuregulins 1对中枢神经系统胶质细胞的作用
Neuregulins(NRGs)是一类作用于ErbB受体酪氨酸激酶家族的细胞-细胞间信号转导蛋白,有4个不同的基因编码.Neuregulin(NRG)的命名早是由Mark Marchionni提出的,它代表了早期对神经系统中这类重要因子命名以及认识的总结[12].NRG1对于心脏、乳腺,尤其是神经系统的发育起着极为重要的作用.虽然NRG1初被认为是胶质细胞的有丝分裂原,但现在已经公认NRG1对于神经细胞及非神经细胞的存活、迁移和分化均起重要作用.有关NRG1对于周围神经系统发育的作用明确已久.NRG1能使神经嵴细胞定向分化为雪旺细胞,能促进雪旺细胞前体细胞的增殖,能调节形成髓鞘雪旺细胞的数量.近年来研究发现NRG1对于少突胶质细胞谱系的建立,以及星形胶质细胞的存活、分化也起重要作用,提示NRG1对于中枢神经系统的发育起着与周围神经系统相似的作用.本文就NRG1和ErbB受体的结构、分类及其在中枢神经系统胶质细胞发育过程中所起的作用作一综述.
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神经元性组织工程化周围神经的在体研究
周围神经缺损后的修复与功能重建是世界性的难题.自体神经移植会造成取材部位的功能缺失和长度大小、口径等难以匹配等问题.目前多以雪旺细胞或干/祖细胞为种子细胞,体外或在体诱导分化为雪旺细胞构建组织工程化神经,但存在新生轴突需跨越两个吻合口、增加了神经再生的难度,神经-效应器失配及效用器废用性萎缩等问题.
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microRNA-146a 在 LPS 诱导的大鼠雪旺细胞损伤模型中的表达
目的：探讨microRNA‐146a（miRNA‐146a）在体外培养的大鼠雪旺细胞炎性反应模型中的表达变化。方法：采用脂多糖（lipopolysaccharide ，LPS）建立大鼠雪旺细胞炎性反应模型（LPS组），加入 LPS 6 h后给予环氧合酶‐2（COX‐2）抑制剂NS398处理，正常组仅在LPS组加入LPS时更换培养基。采用 real‐time PCR及CCK‐8方法检测miRNA‐146a的表达水平及雪旺细胞的增殖能力。结果：与正常组相比，LPS组miRNA‐146a的表达明显升高（P＜0．05），而且miRNA‐146a的表达随LPS浓度升高而增加；经1．0μg／mL的 LPS处理6 h后给予NS398处理，miRNA‐146a表达水平下降（P＜0．05）。经10μg／mL的 LPS处理6 h后，雪旺细胞的增殖能力下降；而LPS处理6 h后加入NS398，雪旺细胞的增殖能力改善。结论：miRNA‐146a参与了体外培养的大鼠雪旺细胞炎性反应的调控，其表达水平在一定程度上可反应炎性反应的严重程度。
关键词： 雪旺细胞 miRNA-146a 炎性反应 -
成年兔雪旺细胞与医用组织引导再生胶原膜联合培养后植入体内的实验研究
目的:探索用组织工程方法构建人工神经的可行性.方法:应用医用组织引导再生胶原膜作为支架与成年兔雪旺细胞培养2周,以雪旺细胞胶原膜复合物的形式修复自体神经缺损.8周后对所获得的组织工程神经移植物进行形态学研究.结果:成年兔雪旺细胞在医用组织引导再生胶原膜上生长良好并均匀分布于支架表面,形成bungner带,且基质分泌旺盛.神经已通过移植物长入远端,胶原膜已吸收.结论:雪旺细胞可以在医用组织引导再生胶原膜上得到扩增,形成的三维立体结构具有人工神经的基本特性,本研究为组织工程方法修复长段神经缺损打下基础.
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人胚雪旺细胞组织工程神修复坐骨神经缺损的实验研究
目的:探索人胚雪旺细胞作为组织工程的种子细胞修复周围神经缺损的可行性.方法:通过组织工程方法用PLGA导管和polyglactin 910纤维负载人胚雪旺细胞预先构置好人工神经,然后用于修复大鼠20 mm的坐骨神经缺损,并与神经切断后原位缝合以及用单纯的PLGA导管进行修复的实验组进行对照.通过活体肢体功能观察、靶器官肌肉测量、电生理检测、辣根过氧化物酶示踪、连续组织切片图像分析以及透射电镜等检查神经再生情况.结果:人工神经修复组神经再生良好,效果接近于神经原位缝合组,明显优于单纯的PLGA导管修复组.结论:人胚雪旺细胞构建的人工神经可以修复20mm的周围神经缺损.
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食管颗粒细胞瘤1例并文献复习
颗粒细胞瘤(GCT)是一种罕见的软组织肿瘤,来源于神经鞘的雪旺细胞,现也称为颗粒细胞雪旺瘤[1],好发于舌,其次为皮肤和皮下组织,仅有8%~10%的GCT发生于消化道[2],其中1/3位于食管.自1931年Abrikossoff报道首例食管GCT以来,全球见300余例报道,主要集中于食管中下段.国内报道约10余例,此例为贵州省首例报道,结合文献复习如下.
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激活态雪旺细胞信号转导通路的初步研究
目的 培养、鉴定激活态的雪旺细胞,探索激活态雪旺细胞信号转导通路.方法 用改良成年SD大鼠雪旺细胞培养法激活态的雪旺细胞,S-100染色鉴定,Western Blot法测定ERK1/2水平,初步探索激活态雪旺细胞的信号转导通路.结果 光镜下激活态雪旺细胞和正常态的雪旺细胞形态上无差异,S-100染色均为阳性,Western Blot法检测细胞内的ERK1/2水平无明显的差异,但P-ERK1/2水平两者差异有统计学意义(P＜0.01).这可能是雪旺细胞被激活的一个关键.结论 激活态雪旺细胞和正常态雪旺细胞是同一细胞的二种不同存在的状态,有活性的P-ERK1/2水平的升高可能是雪旺细胞激活的关键.对于激活态雪旺细胞完整的信号转导通路尚需要进一步研究.
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培养雪旺细胞NGF、CNTF和GDNF共表达和共定位实验研究
目的探讨将雪旺细胞和背根节神经元共同培养后去除背根节神经元后雪旺细胞神经生长因子(nerve growth factor,NGF)、睫状神经营养因子(ciliang neurotrophic factor,CNTF)和胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)共表达变化特点及其细胞共定位.方法运用多彩色荧光原位杂交和计算机图像处理技术实现雪旺细胞NGF、CNTF和GDNFmRNA共表达变化的定量分析和细胞共定位,并通过免疫组织化学方法验证有关结果.结果 NGF、CNTF和GDNFmRNA表达变化可同时定位于单个雪旺细胞;通过mRNA和蛋白表达水平的图像分析发现,去除背根节神经元后NGF和GDNF表达在迅速下降后随即逐渐增高,但2周时仍低于共培养表达水平(P<0.05),CNTF表达则持续下降(P<0.01).结论雪旺细胞和背根节神经元共同培养后建立相互营养支持的体系,当失去神经元营养支持后,需要分泌神经生长因子和多种神经营养因子以维持自身环境的稳定;同时上述研究提供的方法能对雪旺细胞中多种神经营养因子的共表达定位进行可视化研究.
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生长因子促进转基因小鼠坐骨神经体外预变性的实验研究
目的 探索一种简便高效的小鼠坐骨神经体外预变性的方法,以便在短期内获取大量高活性的雪旺细胞.方法 选用绿色荧光蛋白(GFP)转基因的小鼠24只,随机分为A、B、C和D四组.A、B、C组切取双侧坐骨神经,分别置于DMEM、DMEM+10％FBS及含生长因子的雪旺细胞培养液中体外预变性1周,D组切断一侧坐骨神经体内预变性1周.1周后取材,行免疫组织学和细胞学方面的检测,比较各组获取的雪旺细胞量和纯度.结果 C组获得的雪旺细胞量及纯度较高,与D组的雪旺细胞相似.结论 生长因子能促进小鼠坐骨神经的体外预变性,具有与体内预变性相似的效果,能在短期能获得大量雪旺细胞.
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复合胶原酶消化法制备高纯度小鼠雪旺细胞
目的 建立高效、快速获得大量高纯度雪旺细胞的方法,为组织工程神经构建提供优质、足量的种子细胞.方法 取新生6～7 d的小鼠,在解剖显微镜下分离双侧坐骨神经,0.25%复合胶原酶37℃消化90 min,然后将细胞悬液接种于预先用层粘蛋白铺盘的培养瓶,贴壁培养48 h后,0.05%复合胶原酶37℃消化30 min,振荡分离雪旺细胞与成纤维细胞.经过两次纯化后,运用免疫细胞化学和流式细胞仪检测所得的雪旺细胞的纯度.结果 经过两次纯化后,P75NTR免疫细胞化学及流式细胞仪检测证实,通过本方法可获得纯度为99%以上的雪旺细胞,每个25 cm2培养瓶可获得(102.8±5.9)×104个细胞.结论 复合胶原酶差速消化法是一种高效、快捷的雪旺细胞纯化方法,仅需5 d即可制备高纯度的雪旺细胞.
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基膜管-自体神经嵌合体修复大鼠周围神经缺损的实验研究
目的 寻找一种简单有效,修复长段周围神经缺损的方法.方法 在两段同种异体大鼠的脱细胞坐骨神经之间置入一段自体坐骨神经,形成基膜管-自体神经嵌合体,与单纯基膜管、硅胶管带自体神经、单纯硅胶管、自体神经等其他桥接物比较修复神经缺损的效果.结果 分组动物实验显示基膜管-自体神经嵌合体组的神经功能、形态恢复佳.结论 基膜管-自体神经嵌合体修复周围神经缺损简单有效,并能延长修复长度,在修复长段周围神经缺损方面有着良好的应用前景.
关键词： 基膜管-自体神经嵌合体 雪旺细胞 脱细胞基膜管 层粘蛋白 周围神经缺损 -
雪旺细胞在实验性损伤性应答时的生化反应
雪旺细胞又称神经膜细胞,由神经嵴细胞分化而成.雪旺细胞使周围神经轴突成鞘,是周围神经系统的卫星细胞[1].近年来,该细胞在生理病理条件下其结构与功能所表现出的可塑性问题受到了学术界的普遍关注,其中有关雪旺细胞损伤性生化应答的研究进展喜人,现综述如下.
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Wister大鼠乳鼠雪旺细胞的分离和培养
目的 通过用不同方法分离和培养雪旺细胞的研究,寻找一种能够满足临床需要的方法.方法 通过常规的热酶消化法、组织块法以及冷酶消化对雪旺细胞进行分离;雪旺细胞培养通过双差速贴壁和有丝分裂抑制剂阿糖胞苷(Ara-C),去除或抑制成纤维细胞生长,通过成纤维细胞生长因子(bFGF)使雪旺细胞得到进一步增殖.结果 冷酶联合消化法在8h内能分离106以上的雪旺细胞,细胞纯度达到90%以上.结论 冷酶联合消化法从分离时间、纯度、浓度和细胞活性,均达到从自体组织快速分离和培养雪旺细胞的要求.
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细菌纤维素与雪旺细胞体外生物相容性研究
目的 探讨雪旺细胞与细菌纤维素体外共培养时的生物相容性,为细菌纤维素制备成组织工程化神经提供实验依据.方法 将背根神经节与细菌纤维素膜体外共培养,分别在培养的第1、2、5天通过扫描电镜和光镜观察雪旺细胞的形态及增殖、迁移情况,免疫细胞化学染色检测S-100蛋白表达情况;将坐骨神经来源的纯化雪旺细胞在细菌纤维素浸出液中培养,分别在24、48、72 h采用倒置显微镜和免疫细胞化学染色观察雪旺细胞形态及S-100蛋白的表达情况,并通过MTT检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞周期来综合评价雪旺细胞与细菌纤维素的生物相容性.结果 雪旺细胞能在细菌纤维素膜表面正常生长、迁移;与普通培养基相比,细菌纤维素浸出液对雪旺细胞的生长、增殖及S-100蛋白的表达无明显影响.结论 雪旺细胞能够在细菌纤维素膜表面及细菌纤维素浸出液中良好生长,体外与细菌纤维素具有较好的生物相容性.
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小肠黏膜下层复合雪旺细胞粗制品桥接周围神经缺损
目的 观察小肠黏膜下层(SIS)复合雪旺细胞粗制品修复周围神经缺损的效果.方法 选取健康雄性SD大鼠36只,随机平均分为3组(n=12).致大鼠坐骨神经12 mm缺损后,分别用SIS桥接修复(A组),SIS复合雪旺细胞粗制品修复(B组)和自体神经移植修复(C组).术后16周取材,通过组织学观察、肌肉湿重测量、计算机图像分析、Trueblue逆行示踪和透射电镜观察来评价神经再生效果.结果 组织学观察、Trueblue逆行示踪和透射电镜观察证实三组均有再生神经纤维通过缺损区;B组和C组大鼠的小腿三头肌湿重、单位面积轴突数量和神经组织面积均显著优于A组(P＜0.05),B、C两组间的差异则无统计学意义(P＞0.05).结论 SIS复合雪旺细胞粗制品修复周围神经缺损可达到自体神经移植的效果,有望替代自体神经移植.
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复合雪旺细胞的小肠黏膜下层修复急性脊髓损伤的研究
目的 应用复合雪旺细胞(SC)的小肠黏膜下层(SIS)修复大鼠急性脊髓损伤.方法 选取健康的SD大鼠36只,随机分成实验组和对照组,每组各18只.实验组用复合SC的SIS移植修复损伤区,对照组原位植入原先切除的脊髓组织.术后4、8、12周进行一般情况观察、组织形态学检查、体感诱发电位检查和计算机图像分析.结果 实验组移植区炎性细胞浸润不明显,有大量再生的有髓神经轴突,无明显变性坏死和胶质瘢痕增生现象,明显优于对照组.计算机图像分析示实验组与对照组相比,轴突的平均直径较大,单位面积的轴突数量较多,且有显著性差异(P<0.05).结论 复合SC的SIS具有促进急性脊髓损伤修复的作用.
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FK506对雪旺细胞体外增殖能力的影响
目的研究普乐可夫(FK506)促进周围神经再生的作用和机制.方法将纯化的兔雪旺细胞分3组:10μg/L FK506、100μg/L FK506和空白对照组,继续培养10 d,相差显微镜观察计数,绘制各自的增殖曲线.在24和72 h对各组细胞进行流式细胞分析.结果FK506组雪旺细胞生长良好,而成纤维细胞可以发现细胞肿胀,胞质内出现空泡;活细胞计数对照组雪旺细胞的倍增时间为8 d,10μg/L组和100μg/L组倍增时间为6.2d.用FK506培养24、72 h后对雪旺细胞增殖的流式细胞分析处于S期的雪旺细胞较对照明显增高(P＜0.01).结论FK506有促进体外培养的雪旺细胞快速增殖和抑制成纤维细胞生长的作用.免疫抑制剂FK506的双重作用在神经再生治疗中具广阔的应用前景.
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成年兔坐骨神经雪旺细胞的分离纯化培养
目的探讨从成年新西兰兔坐骨神经分离培养获得大量雪旺细胞的有效手段。方法利用成年兔发生wallerian变性的坐骨神经用植块法进行培养，通过相差显微镜活细胞计数和S-100细胞化学标记相结合鉴定了雪旺细胞增值和纯化程度。结果通过上述方法获得大量雪旺细胞纯度达95％，并绘制其生长曲线，体外培养的雪旺细胞倍增时间为8 d。结论本方法能获得大量高纯度的雪旺细胞，为组织工程修复周围神经缺损打下基础。
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周围神经组织工程进展
20世纪80年代末材料工程的发展极大地促进了周围神经损伤修复的研究.人工神经是由具有良好生物相容性的可降解高分子载体,结合以雪旺细胞为主的活性细胞,形成的具有特定三维结构的复合体.该领域的研究目前还处于起步阶段,主要研究内容包括:种子细胞的分离纯化培养;支架材料的开发;人工神经的组织还原[1].
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高葡萄糖对与内皮细胞共培养的雪旺细胞的损伤作用
目的 观察高葡萄糖对与内皮细胞(endothelial cells,EC)共培养的雪旺细胞(Schwann cells,SC)的损伤情况.方法 建立大鼠SC与EC的共培养模型,根据形态学和MTT选定25 mmol/L高葡萄糖浓度和48 h作用时间.将细胞分为正常葡萄糖SC与EC共培养组、高葡萄糖SC与EC共培养组及高葡萄糖SC组,通过形态学和MTT、凋亡率(流式细胞仪)和Casepase-3 mRNA表达(Real time PCR)观察细胞损伤.结果 形态学及MTT显示,与EC共培养的SC在高葡萄糖条件下,比正常葡萄糖共培养以及高葡萄糖单培养的SC存活率明显下降;SC凋亡率比正常葡萄糖共培养及高葡萄糖单培养的SC明显增高;Casepase-3 mRNA表达较正常葡萄糖共培养组明显升高,但与高葡萄糖单培养组相比其增高尚无统计学显著性意义.结论 在高葡萄糖环境下,与EC共培养的SC损伤更明显,可能与两种细胞相互作用加重SC损伤有关.
