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雪旺细胞移植改善心肌梗死后副交感/交感神经重塑
目的:对心肌梗死后的心脏进行雪旺细胞(Schwann cells)移植,从而改善心肌梗死的心脏神经的重塑,降低心肌梗死后室性心律失常易感性,以达到雪旺细胞移植治疗心肌梗死后心率失常的目的.方法:利用结扎Lewis大鼠冠状动脉前降支的方法建立急性大鼠心肌梗死模型,并将心肌梗死的大鼠随机分为细胞移植组(n=31)和对照组(n=30).雪旺细胞取自大鼠坐骨神经,经爬片S100染色鉴定雪旺细胞表面标记物.并将经体外培养扩增后的雪旺细胞(5× 106)通过注射的方式移植于心肌梗死周边区,并在细胞移植后的2周用免疫荧光及免疫组织化学方法检测心肌梗死边缘区副交感、交感神经,动态心电图和程序性电刺激(PES)检测室性心律失常的易感性.结果:通过S100染色发现,培养获得的雪旺细胞纯度达到95％以上,在雪旺细胞移植后的2周,免疫组织化学和免疫荧光结果显示,雪旺细胞移植能够显著改善心肌梗死边缘区副交感/交感神经的比例,并且能够显著降低动态心电图频域检测中低频/高频的比值,同时显著降低了室性心律失常的易感性.结论:雪旺细胞移植能够有效改善心肌梗死部位副交感/交感神经的比例,从而降低心肌梗死后室性心律失常的发生率.
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人组织激肽释放酶对大鼠坐骨神经挤压伤后神经形态学及氧自由基的影响
目的:评价人组织激肽释放酶(HTK)对SD大鼠坐骨神经挤压伤模型坐骨神经的形态学及氧自由基水平的影响.方法:取60只体质量为180 ～ 200 g的SD大鼠,随机分成3组(n=20):假手术组(Sham 组),只分离坐骨神经不压迫损伤,不给予任何药物治疗;人组织激肽释放酶组(HTK组),坐骨神经挤压伤后半小时以及术后每日尾静脉注射17.5×10-3 PNAU/kg HTK治疗;对照组,坐骨神经挤压伤后半小时以及术后每日尾静脉注射等量的0.9％氯化钠溶液.随机抽取5只大鼠取受损段神经行光镜观察有髓神经纤维的数目和形态,另随机抽取5只大鼠坐骨神经电镜下观察神经形态学以及雪旺细胞(SCs)的凋亡情况,剩余10只大鼠取坐骨神经行丙二醛(MDA)含量和总超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定.结果:与对照组相比,HTK组SOD活性较高(P＜0.05),MDA含量则较低(P＜0.05);术后14 d光镜观察,与HTK组相比,对照组神经纤维排列紊乱;术后14 d电镜观察,对照组神经纤维髓鞘水肿、神经纤维内部分细胞器水肿明显,并有大量SCs凋亡,而HTK组较对照组明显改善,且未观察到SOs凋亡.结论:HTK具有改善神经周围微环境,调节局部氧自由基水平,和促进周围神经系统损伤后修复的作用.
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新生SD大鼠坐骨神经Wallerian变性规律及其S-100蛋白表达和雪旺细胞增殖研究
目的:了解新生SD大鼠周围神经Wallerian变性不同时间点S-100蛋白表达变化及对雪旺细胞增殖的影响.方法:10 d龄SD大鼠坐骨神经进行结扎预变性,分别于术后24 h、3 d、5 d、7 d和9 d,进行雪旺细胞培养和S-100免疫组织化学染色观察.结果:在损伤周围神经的近端发生可逆性变性,远端则发生永久性Wallerian变性.实验组雪旺细胞增殖速率与S-100蛋白阳性染色率均优于对照组,7 d组增殖能力达到高峰,S-100蛋白阳性染色率约51%～56%,与对照组比较差异有显著性.结论:新生SD大鼠周围神经受损后变性过程类似于经典的Wallerian变性,且能在变性中期获得活力较强及倍增时间较短的雪旺细胞.
关键词： 雪旺细胞 Wallerian变性 人工神经 组织工程 -
影响周围神经再生的细胞学因素
周围神经再生过程涉及雪旺细胞的变性、增殖和迁移;巨噬细胞向损伤区的定向趋化,对变性雪旺细胞和崩解髓鞘的吞噬;轴浆的运输和轴突的再生等方面的变化,其间有多种细胞因子参与起作用.本文对影响周围神经再生的几种主要的细胞因素进行总结和分析.
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纵隔恶性外周神经鞘膜瘤1例并文献复习
恶性外周神经鞘膜瘤(malignant peripheral nerve sheath tumor,MPNST).是起源于神经或继发于神经纤维瘤或显示不同程度的神经鞘细胞分化的梭形细胞肉瘤,因为该瘤不仅有雪旺细胞,还有神经束衣参与,故称为恶性外周神经鞘膜癌[1].本文报告1例原发于上纵隔的MPNST并结合有关文献进行复习.
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新型超顺磁性氧化铁在雪旺细胞移植后活体示踪中的应用研究
目的:研究一种新型超顺磁性氧化铁(Superparamagnetic iron oxide,SPIO)在雪旺细胞(SCs)标记及磁共振(MRI)活体示踪中的应用.方法:以二巯基丁二酸修饰三氧化二铁(Fe2O3)配制成一种新型SPIO,用于标记SCs.实验组用SPIO标记SCs,对照组不用SPIO标记,每组各10个样本.对标记后的SCs行普鲁士蓝染色鉴定、MTT测试细胞相对数量.后将标记后的SCs移植入大鼠脑内,MRI扫描活体示踪.结果:普鲁士蓝染色发现该SPIO可高效率标记SCs,MTT测试表明实验组与对照组的雪旺细胞相对数量无统计学差异(P＞0.05),MRI检查发现脑内移植的SPIO标记SCs在T2相上呈明显的低信号.结论:通过二巯基丁二酸修饰Fe2O3获得了新型SPIO,该新型SPIO对细胞增殖及活力无明显影响,不需要转染剂仍可高效率标记SCs,MRI活体显影示踪效果良好.
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雪旺细胞移植治疗脊髓损伤的研究现状
脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)一直是困扰医学界的难题.细胞移植治疗已经逐渐成为该领域的前沿,而雪旺细胞(schwann cell,Sc)有能够明显促进周围神经再生的作用,逐渐被人们所认识,而将其引入到中枢神经系统,改变其不利于再生的微环境,成为治疗SCI的热点,现就Sc移植治疗SCI做如下综述.
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基因修饰的雪旺细胞与脊髓再生关系的研究进展
脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)的治疗是临床医学中的一大难题,受到国内外许多学者关注.过去一直认为中枢神经系统损伤后受损神经元或轴突不能再生,而基因修饰的细胞移植带来了新的希望,在这些研究中,基因修饰的雪旺细胞(Schwann cells,SCs)移植促进脊髓轴突再生引起人们越来越广泛的关注.本文对近年来基因修饰的雪旺细胞与脊髓损伤后再生的实验研究情况作一综述.
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S-100蛋白与脑损伤的研究
S-100蛋白是一类分子量较小的EF手型钙结合蛋白,具有广泛的生物学活性,主要存在于中枢神经系统的星形细胞和少突神经胶质细胞以及周围神经系统的雪旺细胞,是神经胶质的标记蛋白[1].S-100蛋白在血清和脑脊液中的浓度变化可反映中枢神经系统损害的程度,已成为判断和评估脑损害的特异性指标.近年来,S-100蛋白与中枢神经系统疾病的关系引起国内外学者广泛的关注与研究,特作简要综述.
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成年兔雪旺细胞体外培养增殖和纯化的实验研究
目的 探讨从成年大白兔周围神经体外分离、纯化、培养的条件,观察雪旺细胞在体外存活、生长情况,目的 在于改进雪旺细胞的体外培养条件,寻找一种较好的获取雪旺细胞的方法.方法 利用成年兔发生Wallerian变性的双侧坐骨神经,剪碎至1 mm的植块,经改良后反复差速贴附法进行培养,应用b-FGF刺激SC增殖;采用相差显微镜下观察雪旺细胞状态计数和S-100细胞免疫组化染色相结合鉴定;绘制生长曲线,按照细胞倍增时间公式计算其倍增时间.结果 采用发生Wallerian变性后的兔双侧坐骨神经,经改良后差速贴壁培养方法能够明显抑制成纤维细胞的生长,但对雪旺细胞的生长影响较小,可获得大量高纯度的雪旺细胞,经S-100蛋白免疫组化鉴定,雪旺细胞纯度达94%以上,细胞数量达1×106/mL以上;绘制其生长曲线,并计算得出体外培养的第三代雪旺细胞体外倍增时间为3 d;一定浓度的b-FGF和NGF可促进雪旺细胞的增殖.结论 ①联合采用发生Wallerian变性后的神经、改良差速贴壁培养、b-FGF和NGF促进雪旺细胞增殖是一种较经济、简便、实用的方法,可获得较高纯度的雪旺细胞.②本培养方法能够获得大量高纯度的雪旺细胞,可作为周围神经组织工程实验研究的细胞来源.
关键词： 雪旺细胞 细胞培养 组织工程 碱性成纤维细胞生长因子 神经生长因子 -
异种雪旺细胞移植在中枢神经系统损伤修复中的作用
中枢神经系统(central nervous system,CNS)损伤是指任何原因所导致的脑或脊髓的损伤,包括创伤、炎症、退行性变及缺血、缺氧引起的改变等,CNS的功能破坏严重影响着病人的生活质量,传统观点认为,哺乳动物在成熟期CNS内神经元几乎无再生能力.1958年,Liu CN等[1]首先发现损伤的哺乳动物脊髓具有可塑性.
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雪旺细胞与脊髓再生
脊髓损伤(Spinal Cord Injury,SCI)是一种严重的神经系统创伤,多发生于16～30岁的青壮年.此类患者在美国每年每百万人口新发生30～40例,有些地区甚至高达60例,给受害者个人和社会都带来了巨大损失.对于脊髓损伤,目前临床尚无有效的治疗对策,但也不是毫无希望,至少在动物实验已取得了令人鼓舞的结果,有的还表现出一定程度的功能恢复.在这些研究中,雪旺细胞(Schwann Cell,SC)移植促进脊髓轴突再生引起人们越来越广泛的关注,本文就近年来雪旺细胞与脊髓损伤后再生的实验研究作一综述.
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轴突信号与周围神经髓鞘形成关系的研究进展
神经胶质细胞包绕神经元轴突形成髓鞘,从而使郎飞结之间的轴突与外界绝缘,保证了神经冲动快速的跳跃式的传导.髓鞘的形成是一个复杂的动态的过程,神经元和神经胶质细胞之间的精细调节控制着成髓鞘的各个阶段.
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异种雪旺细胞移植对大鼠损伤脊髓Nogo-A表达的影响
目的：观察微囊化雪旺细胞对大鼠SCI后脊髓Nogo-A表达的影响，探讨微囊化异种雪旺细胞修复损伤脊髓的机制。方法通过对兔双侧坐骨神经干预变性处理后取出并进行细胞培养，通过使用海藻酸钡微囊化技术，制成微囊化雪旺细胞；实验大鼠随机分组：A组(微囊化雪旺细胞组)；B组(雪旺细胞组)；C组(单纯损伤组)；D组(假手术组)。分组后取得脊髓损伤水平下脊髓组织进行Nogo-A免疫组化染色及Western-blot检测脊髓组织中Nogo-A蛋白表达水平。结果 SCI后A、B、C组大鼠右侧脊髓Nogo-A表达较D组明显增加。1周后A、B组Nogo-A表达较C组有显著下降（P<0.05），A、B组间Nogo-A表达无差异；SCI后4周，A组Nogo-A表达下调程度较B、C组更显著（P<0.05）。结论微囊化兔坐骨神经雪旺细胞移植可抑制脊髓损伤大鼠脊髓前角Nogo-A表达，促进轴突的再生，从而促进损伤神经元的修复。
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雪旺细胞的培养和种植与神经移植
雪旺细胞是周围神经纤维的重要组成成份,在神经再生中起非常重要作用.有髓纤维中雪旺细胞形成髓鞘包绕轴突,无髓纤维则无.包绕神经纤维的雪旺细胞包绕一基底膜层,基底膜层连续无间断[1].神经纤维受损伤发生瓦氏变性后,处于静止期的雪旺细胞激活,自身分泌或促进神经再生所需的各种营养成分汇聚,如神经生长因子(GNF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、胰岛素样生长因子(IGF)等,为轴突再生提供一个合适的微环境.同时雪旺细胞也能产生基底膜组分,如IV型胶原及层粘素.基底膜对轴突再生的方向性起重要的引导作用[2,3],所以雪旺细胞培养与其基底膜功能的神经移植材料的研究一直是个热门问题.现就雪旺细胞的培养与种植的发展状况作一综述.
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双向差速法制备高纯度雪旺细胞的实验研究
[目的]利用乳鼠的雪旺细胞与成纤维细胞贴壁及复合酶消化分离速度不同的特点,建立简单而快速提取和纯化雪旺细胞的方法.[方法]取3 dSD大鼠双侧坐骨神经,在解剖镜下剥离去除神经外膜,剪碎后用0.2％复合胶原酶( Collagenase NB4)消化,细胞悬液接种于预先用多聚赖氨酸包被的培养瓶差速贴壁30 rain,然后将细胞悬液移入一新的培养瓶培养48 h；用0.05％复合胶原酶37℃消化30 min,振荡分离雪旺细胞与成纤维细胞,培养48 h后在相差显微镜下观察细胞形态；计数、纯度测定；免疫细胞化学鉴定和流式细胞仪检测所得的雪旺细胞的纯度.[结果]经过2次纯化后,每25 cm2培养瓶可获取约(117.2+3.4) xl04个细胞；第一轮纯化后雪旺细胞纯度达86.99％±1.53％,经2次纯化后纯度为98.32％ +0.12％,两轮纯化之间有显著性差异,P<0.001；P75NTR免疫细胞化学鉴定细胞为阳性,流式细胞仪检测雪旺细胞纯度达97.9％.[结论]双向差速复合胶原酶消化法是一种高效、快捷的雪旺细胞纯化方法.
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Wnt/β-catenin信号通路在吡咯喹啉醌促雪旺细胞增殖中的作用研究
[目的]研究Wnt/β-catenin信号通路在吡咯喹啉醌促雪旺细胞增殖过程中的作用,探讨吡咯喹啉醌促进雪旺细胞增殖的可能的信号分子机制.[方法]体外培养纯化雪旺细胞,S-100免疫荧光鉴定;分别采用10 nmol/L与100 nmol/L吡咯喹啉醌作用雪旺细胞24 h,观察雪旺细胞的形态学改变;分别用RT-PCR及Western blot检测β-catenin在雪旺细胞经不同浓度吡咯喹啉醌作用72 h后的表达情况.[结果]10 nmol/L及100 nmoL/L吡咯喹啉醌均可促使雪旺细胞发生形态学上的变化,且吡咯喹啉醌的浓度为100 nmol/L时对雪旺细胞的形态学影响更明显;RT-PCR及Western blot结果均表明吡咯喹啉醌在1～1 000 nmol/L范围内可使雪旺细胞内β-catenin表达增加,当吡咯喹啉醌浓度为100 nmol/L时其促进β-catenin表达的效果强(P<0.05).[结论]不同浓度的吡咯喹啉醌均可促使雪旺细胞发生形态学变化,使β-catenin表达增高;Wnt/β-catenin通路在吡咯喹啉醌促进雪旺细胞增殖过程中发挥作用.
关键词： 吡咯喹啉醌 雪旺细胞 Wnt/β-catenin 增殖 -
吡咯喹啉醌对雪旺细胞增殖及NF-κB表达的影响
[目的]观察吡咯喹啉醌对雪旺细胞的增殖作用及其对体外培养雪旺细胞NF-κB表达的影响.[方法]新生鼠雪旺细胞体外原代培养及纯化,S-100免疫荧光标记鉴定雪旺细胞,设实验组与对照组,实验组吡咯喹啉醌的浓度为100 nmol/L;加药72 h后提取总mRNA及总蛋白进行RT-PCR和Western blot分析.[结果]采用RT-PCR和Western blot检测NF-κB的表达,结果均表明实验组表达较对照组高(P<0.05).[结论]吡咯喹啉醌可促进雪旺细胞增殖,NF-κB上调在吡咯喹啉醌促雪旺细胞增殖中起作用.
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骨髓干细胞诱导分化构建组织工程神经
[目的]探讨组织工程化神经修复周围神经缺损的作用.[方法]以DMEM为培养基体外诱导人骨髓基质干细胞分化为雪旺细胞,与细胞外基质及可降解聚乳酸导管构建组织工程化神经;建立坐骨神经缺损10 mm的Wistar大鼠动物模型,A组:经诱导骨髓基质干细胞分化雪旺细胞与天然细胞外基质(extra cellular matrix,ECM)凝胶及可降解聚乳酸导管构建组织工程化神经桥接神经缺损;B组:单纯将ECM凝胶注入可降解聚乳酸导管桥接神经缺损;C组:自体神经移植组.术后12周进行神经电生理检测、新生神经组织学观察和轴突计数等检测坐骨神经功能恢复情况.[结果]1.诱导后骨髓基质干细胞呈梭形、胞核大、周围有光晕、突起细长呈纵形排列,GAFP及S-100免疫组织化学染色阳性.动物模型各组经移植术后12周,再生神经已通过缺损区长至神经远端.A组、C组组织学及电生理检测指标均优于B组(PAB=0.021,PBC=0.001),A组与C组无显著性差异(PAC=0.065);A、B组聚乳酸导管降解吸收明显.[结论]骨髓基质于细胞在体外可诱导分化为雪旺氏细胞,利用其与细胞外基质及可降解聚乳酸导管构建组织工程化神经可以修复周围神经缺损.
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组织工程化人工神经构建的方法研究
目的:探索用组织工程方法构建人工神经的可行性.方法:用鼠尾胶和层粘蛋白共同修饰的polyglytin 910纤维以及生物膜作为支架与成年兔雪旺细胞培养2周.观察细胞生长迁移情况.结果:雪旺细胞能在共聚物纤维上迁移包裹,均匀分布于支架之间及吸附在支架表面.雪旺细胞在生物膜上也能吸附生长.结论:成年雪旺细胞可以在修饰后的polyglytin 910纤维和生物膜上得到扩增,二者共同形成的三维立体结构具有人工神经的基本特性.
