首页 > 文献资料
-
环介导等温扩增法检测空肠弯曲菌
目的 空肠弯曲菌是重要的食源性疾病病例标本的病原菌检测项目,用环介导等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)的方法,对食源性致病菌空肠弯曲菌进行快速检测.方法 以空肠弯曲菌mapA基因序列为检测靶基因,建立了空肠弯曲菌的LAMP快速检测方法.空肠弯曲菌的LAMP反应由DNA扩增试剂盒提供的反应体系加入引物和模板进行.做了空肠弯曲菌DNA模板灵敏度的检测、菌液灵敏度的检测和特异性检测.结果 我们方法对空肠弯曲菌DNA的检测灵敏度为84.5fg/反应管;对空肠弯曲菌菌液检测灵敏度为0.8 CFU/反应管;特异性100％.结论 对食源性疾病腹泻样本的空肠弯曲菌检测项目,可以采用mapA-LAMP方法进行等温扩增初筛,初筛阳性的样品再有针对性地进行后续的传统培养.
-
EMA-PCR方法检测饮用水中3种食源性致病菌活菌研究
目的 将EMA (Ethidium Monoazide Bromide)选择渗透性与PCR技术相结合,建立有效快速检测饮用水中3种食源性致病菌活菌EMA-PCR方法.方法 以鼠伤寒沙门菌invA、肠出血性大肠杆菌O157∶H7 rfbE、铜绿假单胞菌oprI基因为PCR检测靶基因,纯培养物提取模板进行PCR,进行EMA使用浓度及灵敏度试验.结果 EMA浓度不大于10μg/ml对活菌DNA扩增没有明显抑制,终浓度为1μg/ml EMA能有效抑制死菌扩增;对鼠伤寒沙门菌、肠出血性大肠杆菌O157∶H7、铜绿假单胞菌的EMA-PCR灵敏度分别为1.2×104 CFU/ml、2×105 CFU/ml、3×104 CFU/ml;用10 μg/ml EMA处理饮用水水样,可同时检测出饮用水中含有的3种食源性致病菌活菌.结论 EMA-PCR方法可一次检测饮用水中3种食源性致病菌活菌,能避免PCR检测可能造成假阳性结果.
-
嵊州市2011-2012年食品中食源性致病菌检测结果分析
目的 了解嵊州市食品中食源性致病菌的污染状况,为食源性疾病预防和控制提供科学依据.方法 依据浙江省食源性致病菌监测工作手册要求,采集本地7类400份样品,按照GB4789进行沙门菌、志贺菌、副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特菌、大肠埃希氏菌O157:H7、金黄色葡萄球菌、阪崎肠杆菌、蜡样芽孢杆菌等致病菌检测.结果 400份样品有28份检出上述致病菌,致病菌总检出率为7.00％.结论 嵊州市食品中存在食源性致病菌污染,是食源性疾病潜在的危险因素,应加强监管,提高食品安全.
-
食源性金黄色葡萄球菌9种肠毒素基因的多重PCR检测
目的 建立多重PCR方法检测食源性金黄色葡萄球菌9种肠毒素基因,了解其在食源性金黄色葡萄球菌中的分布状况.方法 建立多重PCR方法检测144株食源性金黄色葡萄球菌的9种肠毒素基因,对其分布状况进行研究.结果 建立的多重PCR方法特异、高效,9种肠毒素基因在144株食源性金黄色葡萄球菌中的检出率由高到低依次为SEU (25.69％)、SEG (22.22％)、SEM (20.83％)、SEK (20.14％)、SEQ (18.06％)、SEH (15.97％)、SEN (10.42％)、SEJ (8.33％)、SEL(5.56％)；52.78％的菌株含有该9种肠毒素基因中的至少1种,34.03％的菌株含有9种肠毒素基因中的两种或两种以上.结论 该多重PCR方法特异性高,快速简便,可用于金黄色葡萄球菌肠毒素基因的分布研究；144株食源性金黄色葡萄球菌中9种肠毒素基因均有检出,其中以SEU、SEG、SEM、SEK检出率较高.
-
食源性致病菌多重聚合酶链反应快速检测
[目的]建立快速检测食源性致病菌的多重聚合酶链反应(PCR)方法.[方法]以出血性大肠杆菌的编码大肠杆菌不耐热毒素的B亚单位(LTB)基因、福氏志贺菌侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)、霍乱弧菌肠毒素细胞外分泌蛋白(EPSM)基因作为目的基因,分别设计一对引物,优化各种工作条件,建立一种多重PCR诊断方法.[结果]应用所建立的多重PCR方法能快速、特异地检测出出血性大肠杆菌194 bp、福氏志贺菌606 bp、霍乱强菌482 bp的目的基因.[结论]该检测方法简单、快速、准确、灵敏度高,可广泛应用于食品卫生检测和临床检验等领域.
-
食源性致病菌六联融合毒素的构建及免疫学特性研究
[目的]构建4种食源性致病菌融合毒素基因及重组表达载体,制备六联融合毒素的血清抗体. [方法]采用柔性Linker序列(G-G-G-G-S)对目的基因进行串联(HblA-VT1B-SEA-VT2B-BoNTaHc-SEB),构建重组表达质粒pET-22b(+)-F6并在E.coli BL21中进行表达,将表达蛋白纯化后免疫豚鼠制备血清抗体,利用ELISA和琼脂扩散试验验证抗体的特异性与敏感性. [结果]成功构建了重组表达质粒pET-22b(+)-F6并在E.coli BL21中成功表达,37℃表达蛋白主要以包涵体形式存在(表达量10.2%),基因序列全长3 384bp,编码1 127个氨基酸,蛋白分子量为127 205,测序结果与设计序列一致性为100%.ELISA和琼脂扩散试验表明,融合毒素F6与4种食源性致病菌有良好的反应原性,与多种非目标菌不反应. [结论]成功构建了多联融合毒素基因的表达质粒及制备了抗血清,为利用融合毒素的方法检测食源性致病菌,进而建立食源性致病菌广谱、快速的检测方法奠定基础.
-
多重PCR-毛细管电泳-激光诱导荧光检测食源性致病菌
[目的]建立单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,L.m)hly基因、金黄色葡萄球菌(Staphyl ococcus aureus,S.a)nuc基因、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus,B.c)16S-23S ITS基因的多重PCR产物的毛细管电泳-激光诱导荧光检测方法(CE).[方法]提取细菌DNA后,分别设计扩增单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)hly基因、金黄色葡萄球菌(Staphyl ococcus aureus,S.a)nuc基因、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)16S-23S ITS基因的引物,进行三重PCR扩增,采用无胶筛分毛细管电泳作为分离手段,以激光诱导荧光检测PCR扩增产物.[结果]对多重PCR扩增产物的条件进行了优化,20 min内即可完成3种致病菌的同时检测.迁移时间的日内相对标准偏差为0.92%～1.58%.[结论]所建立的方法可以同时快速检测3种食源性致病菌并应用食品样品的检测.与单-PCR扩增和传统的凝胶电泳相比,快速简便,灵敏可靠,为食源性致病菌检测提供可靠的快速检测方法,为应对突发性的公共卫生事件提供检测手段,对保障食品安全具有一定的实际意义.
-
海淀区2002～2006年食源性致病菌监测分析
[目的]了解我区2002～2006年(2004年除外)食品中食源性致病菌的污染状况,分析其动态变化,为预防食源性疾病及食品卫生监督监测提供科学依据.[方法]从我区农贸批发市场、超市及餐饮饭店共随机采集619件食品样品,依据"北京市食品污染物监测2005年食源性致病菌监测实验室技术手册"及GB/T4789-94 2003.进行食源性致病菌检测.[结果]共抽检食品样品619件,检出3种食源性致病菌共115株,总检出率18.58%;其中检出单核细胞增生李斯特氏茵58株、沙门氏菌26株,金黄色葡萄球菌31株,副溶血性弧菌、肠出血性大肠杆菌0157:H7、空肠弯曲菌均未检出.[结论]海淀区近年食品中存在食源性致病菌污染,总检出率高于国内近年食品污染水平,其中2005年总检出率为38.00%.检出的致病菌为单核细胞增生李斯特氏菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌,主要污染的是生肉类.6种食源性致病菌中,单核细胞增生李斯特氏菌检出率高.
-
变性高效液相色谱法同时检测5种食源性致病菌
[目的]建立变性高效液相色谱方法(DHPLC),同时检测5种食源性致病菌(包括沙门菌、副溶血弧菌、福氏志贺氏菌、大肠埃希菌O157:H7和单核细胞增生李斯特氏菌).[方法]针对5种食源性致病菌特异毒力基因设计引物,进行多重PCR扩增,扩增产物用高效变性液相色谱仪检测.[结果]柱温50%时,5种致病菌PCR扩增产物分别呈现特异DHPLC色谱图,并可充分分离.本方法检测灵敏度小于5 cfu/ml,对目的分离株的正确检出率大于98%,(82/83),38株非目的分离株检测均为阴性;对人工污染食品中的5种致病菌均可正确检测.[结论]该DHPLC方法具有较高的灵敏度和特异性,可同时检测5种食源性致病菌,适合于大批样品的快速筛检.
-
多重荧光PCR结合HANDS系统快速检测4种食源性致病菌
目的 建立快速、准确检测食品中沙门菌、志贺菌、金黄色葡萄球菌和溶血性链球菌的多重荧光PCR方法.方法 将多重荧光PCR技术与HANDS系统结合,采用同源加尾的方式,构建四重荧光PCR体系,分析该体系的特异性,并进行模拟实验,该方法与国家标准检测方法进行方法比对实验.结果 该系统检测出了4种目标致病菌.初始菌浓度分别为5、9、10、2、50、3 cfu/ml的沙门菌、志贺菌、金黄色葡萄球菌和兰氏A群、C群、G群链球菌增菌液,在增菌18h后都被体系检出.该方法与国家标准方法对样品的检测结果一致.结论 首次结合HANDS系统构建了同时检测4种致病菌的多重荧光PCR方法,该方法特异性强、灵敏度高,是检测沙门菌、志贺菌、金黄色葡萄球菌和溶血性链球菌的快速、准确方法.
-
2006年北京市东城区4类食品食源性致病菌污染状况分析
[目的]为了解食品中单增李斯特菌、沙门氏菌、肠出血性大肠杆菌O157H7、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、空肠弯曲菌的污染状况,初步确定可能污染上述致病菌的高危食品,为控制各类食品污染致病菌HACCP及食物中毒监测提供科学依据.[方法]依据国标方法,同时采用进口显色培养基,对样品分别进行6种致病菌的分离、生化及血清学鉴定.[结果]检测生肉(猪、牛、鸡)、熟肉、水产品、生食蔬菜4类食品共计160件,检出致病菌72株,总检出率为45%;其中检出单增李斯特菌31株,检出率为19.4%;检出金黄色葡萄球菌34株,检出率为21.2%;检出沙门氏菌6株,检出率为3.8%;检出副溶血性弧菌1株,检出率为0.6%. 4类食品中以生肉单增李斯特菌污染高,为35%,金黄色葡萄球菌27.5%,沙门氏菌为7.5%;生食蔬菜金黄色葡萄球菌污染率为35%,水产品金黄色葡萄球菌污染率为16%;熟肉制品致病菌污染率为11.4%.[结论]北京市东城区居民食用的4类食品存在程度不同的食源性致病菌污染,生肉和生食蔬菜污染较严重,生肉单增李斯特菌和金黄色葡萄球菌污染高,其污染率分别为35%和27.5%,生肉(猪肉)沙门氏菌污染较高为20%;水产品中不仅有副溶血性弧菌污染,同时存在严重的金黄色葡萄球菌污染.4类食品中均未检出肠出血性大肠杆菌O157H7、空肠弯曲菌.
-
自制裸磁珠对常见食源性致病菌吸附性能的研究
目的:研究自制裸磁珠对常见食源性致病菌和卫生指示菌的吸附性能,摸索从样品中快速分离和浓集细菌的方法.方法:试验裸磁珠对细菌的吸附性能,摸索温度和样品成分对其吸附性能的影响.结果:自制裸磁珠在37℃对常见食源性致病菌和卫生指示菌有很强的吸附,吸附率均高于97%.食品成分对其吸附有一定影响,吸附率低为58.42%.结论:自制裸磁珠可望用于环境和食品样品中多种细菌的非特异性吸附分离和浓集,值得进一步研究和推广.
-
2010-2016年内蒙古自治区肉及肉制品中食源性致病菌监测
目的 了解2010-2016年内蒙古自治区肉及肉制品中食源性致病菌污染状况,评价其存在的主要危害因素,为预防和控制食源性疾病提供科学依据.方法 随机采集市售肉及肉制品样品,根据《国家食品污染物和有害因素风险监测工作手册》标准操作程序,监测单核细胞增生李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠埃希氏菌O157∶H7、致泻大肠埃希氏菌和弯曲菌等6种常见食源性致病菌.结果 3 759份样品中共检出485株阳性菌株,致病菌总检出率为12.90％.其中单核细胞增生李斯特氏菌污染较严重,检出率为7.21％ (255/3 539),空肠弯曲菌次之,检出率为3.51％(13/370),金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、致泻大肠埃希氏菌和大肠埃希氏菌O157∶H7检出率分别为2.98％(92/3089)、2.95 ％(111/3 759)、1.20％(12/998)和0.11％(2/1 830).各类食品总检出率范围为2.89％～ 34.78％,调理肉制品检出率高,熟肉制品低.结论 肉及肉制品食源性致病菌污染率较高,存在导致食源性疾病的潜在危险.
-
2015-2016年渭南市市售食品中食源性致病菌污染状况监测与分析
目的 了解渭南市市售食品中食源性致病菌的污染状况,为食品安全风险评估提供基础数据.方法 2015-2016年共采集渭南市售12类共411份食品样品,按照《陕西省食品微生物及致病因子监测工作手册》中的方法对霍乱弧菌、金黄色葡萄球菌和蜡样芽胞杆菌等10种食源性致病菌进行检测.结果 411份样品中共检出食源性致病菌111株,总检出率27.01％(111/411);其中霍乱弧菌检出率高(34.04％,32/94),其次为金黄色葡萄球菌(16.73％,43/257)和蜡样芽胞杆菌(15.83％,19/120).不同食品类别中生畜肉中致病菌检出率高(66.67％,20/30),其次为生禽肉(63.64％,14/22)和淡水产品(49.35％,38/77).不同采样场所中采自养殖场的样品中致病菌检出率高(48.33％,29/60),其次为零售便利店(33.33％,25/75)和街头摊点(28.89％,13/45).结论 渭南市食品中食源性致病菌污染状况不容乐观,霍乱弧菌、金黄色葡萄球菌和蜡样芽胞杆菌是污染食品的主要致病菌,生畜禽肉和淡水产品是易引发食源性疾病的高危食品.
-
2010-2015年郴州市410份即食食品中食源性致病菌监测分析
目的 了解郴州市即食食品中食源性致病菌污染状况,为监管部门采取有针对性的控制措施提供科学依据.方法 2010-2015年从餐饮服务环节和流通环节随机抽取410份样品,依据《国家食品污染和有害因素风险监测工作手册》中的方法对样品中8种食源性致病菌进行检验.结果 410份样品中65份检出食源性致病菌,总检出率为15.85％;其中致病菌中蜡样芽胞杆菌检出率高(16.09％),凉拌菜类食品致病菌的检出率高(21.52％);流通环节致病菌检出率高于餐饮服务环节,差异有统计学意义(x2=5.72,P=0.0167).结论 郴州市即食食品食源性致病菌的污染较严重,应加强对即食食品卫生状况的监管,防止食源性疾病的暴发流行.
-
2012-2015年徐州市市售食品中食源性致病菌监测结果分析
目的 掌握徐州市市售食品中食源性致病菌污染状况和可能来源,为采取针对性的控制措施提供依据.方法 2012-2015年共采集11类1 300份食品样品,按照全国食源性致病菌监测网工作手册进行沙门氏菌、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌等9种食源性致病菌的检测.结果 1 300份样品检出致病菌81株,总检出率6.23％.铜绿假单胞菌检出率高(15.00％),其次为副溶血性弧菌(12.50％)、蜡样芽胞杆菌(4.13％)、金黄色葡萄球菌(2.93％)、创伤弧菌(1.22％)、单增李斯特氏菌(0.92％)和沙门氏菌(0.79％),未检出志贺氏菌和O157.各类食品中桶装饮用水食源性致病菌检出率高(21.43％),其次为乳与乳制品(16.28％)、水产品(14.93％)、肉与肉制品(9.76％)、冷冻饮品(4.92％)和餐饮食品(2.82％);各类食品食源性致病菌检出率差异有统计学意义(x2=92.13,P＜0.05).不同采样地点中采自公共场所的食品中致病菌检出率高(15.00％),其次为网店(10.00％).结论 徐州市市售食品中桶装饮用水、乳与乳制品、水产品、肉与肉制品食源性致病菌污染情况较严重;主要致病菌为铜绿假单胞菌、副溶血性弧菌、蜡样芽胞杆菌和金黄色葡萄球菌,相关部门要采取有效监管措施,预防和控制食源性疾病的发生.
-
2010-2015年南京市食品中微生物污染监测分析
目的 了解2010-2015年南京市食品中微生物污染水平,为食品安全风险评估和监督管理提供依据.方法 按照《江苏省食品中微生物及其致病因子监测工作手册》,在南京市11个区(县)采集13类1 318份食品样品,按其检验标准操作程序进行检测.结果 样品总不合格率为6.4％(84/1 318),其中卫生指示菌超标严重的食品是非发酵豆制品和干酪,超标率分别为28.0％和35.0％.致病菌共检出7种54株,总检出率为4.1％(53/1 288),检出多的是蜡样芽胞杆菌和副溶血性弧菌,主要污染的食品分别为盒饭和生鲜动物性水产品.从生鲜动物性水产品中共检出17株副溶血性弧菌、3株单增李斯特菌及1株创伤弧菌.集体食堂、批发市场及网店的食品微生物污染较重.结论 南京市干酪、盒饭和生鲜动物性水产品等部分类别食品中微生物污染较重;主要污染食源性致病菌为蜡样芽胞杆菌和副溶血性弧菌;污染食品的场所来源主要为集体食堂、批发市场及网店.
-
山东省1090份市售水产品中食源性致病菌污染状况分析
目的 了解山东省市售水产品中食源性致病菌的污染状况,为相关部门有针对性地开展预防控制及标准制定提供科学依据.方法 对2015-2016年山东省监测的1 090份市售水产品样品中的副溶血性弧菌、霍乱弧菌、沙门菌、单核细胞增生李斯特菌等4种常见食源性致病菌的污染现状进行分析.结果 1 090份水产品中,4种食源性致病菌检出率为32.29％(352/1 090).其中,淡水产品的检出率高于海水产品(分别为35.95％和28.60％).水产品中副溶血性弧菌检出率高,为27.06％ (295/10 90),其次为霍乱弧菌5.24％(30/572)和沙门菌3.49％ (38/1 090),单增李斯特菌检出率低,为1.74％(19/1 090).淡水甲壳类、淡水螺类是食源性致病菌检出率较高的水产品种类,检出率分别为44.72％(55/123)、37.74％(20/53).结论 山东省市售水产品中污染的食源性致病菌主要以副溶血性弧菌为主,建议相关部门进一步加强水产品市场监管及风险监测工作.
-
2012-2016年遂宁市食品中食源性致病菌监测结果分析
目的 掌握遂宁市市售食品中食源性致病菌污染状况和水平,判定高危食品种类,为食源性疾病的预防和控制提供科学依据.方法 依据2012-2015年《全国食源性致病菌监测工作手册》,在遂宁市范围内随机抽取11大类1088份食品样品后进行沙门菌等8种食源性致病菌的检测.结果 5年共检测食品样品1 088份,在172份样品中共检出致病菌200株,食源性致病菌检出率为15.81％,以铜绿假单胞菌的检出率高43.75％,其次为大肠埃希氏菌12.11％,沙门菌的检出率低0.96％;检出致病菌居前3位的的食品包括桶装饮用水(43.75％)、水产品(30.59％)、肉及肉制品(24.87％).结论 桶装饮用水和水产品为主要的污染食品,应加强监管;同时作为直接入口的熟肉制品和乳制品的污染不可忽视.
-
2011-2016年广西焙烤食品食源性致病菌污染状况分析
目的 了解广西市售焙烤食品食源性致病菌污染状况,为食品安全预警和食源性疾病预防提供科学依据.方法 2011-2016年从广西14个市采集饼干、蛋糕、面包、中式糕点和膨化食品5大类焙烤食品,按照国标方法进行7种致病菌检验.结果 (1)共检测8 143份样品,致病菌总阳性率3.39％,各类焙烤食品不同年度的阳性率范围分别为:饼干0.24％～ 7.72％,蛋糕3.46％～8.26％,面包1.23％～2.84％,膨化食品0.58％～8.54％,中式糕点0.99％～ 9.01％.(2)蛋糕中金葡阳性率高达4.94％,饼干、膨化食品和中式糕点中蜡样阳性率高于其他致病菌,分别达7.09％、9.41％和10.71％.(3)各年度不同致病菌阳性率范围分别为:金葡1.34％～4.36％,沙门0.00％～0.29％,单增0.00％～ 0.69％,蜡样7.90％,0157、志贺和致泻均无检出.(4)不同监测地区致病菌阳性率范围为0.86％～ 7.65％.结论 广西市售焙烤食品普遍存在食源性致病菌污染现象,且多年来污染现象持续存在.应加强焙烤食品生产和销售过程的卫生监管,减少致病菌的污染和繁殖.
