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X线电离辐射诱导人鼻咽癌CNE-2细胞发生上皮-间充质转化及其潜在机制
目的:探讨X线电离辐射诱导鼻咽癌CNE-2细胞发生上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及其可能的信号通路.方法:分别采用0 Gy、2 Gy、4 Gy和8 Gy的X线照射鼻咽癌CNE-2细胞,通过倒置显微镜观察照射24 h后细胞形态的改变;应用细胞划痕实验和Transwell实验观察细胞迁移和侵袭能力的变化;分别采用real-time PCR和Western blot法检测EMT相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cad-herin)和波形蛋白(vimentin)mRNA及蛋白水平的变化,并采用Western blot法检测Akt和p-Akt蛋白水平的变化.结果:经X线照射后鼻咽癌CNE-2细胞呈典型的"鹅卵石"样或纺锤形,且伸出伪足,细胞间隙增大,细胞的侵袭和迁移能力增强(P<0.01);real-time PCR和Western blot法检测结果显示,与未照射组相比,各照射组细胞中E-cad-herin mRNA和蛋白的表达水平均显著下调(P<0.01),而N-cadherin和vimentin mRNA和蛋白的表达水平明显上调(P<0.05);PI3K/Akt信号通路中p-Akt蛋白的水平显著升高(P<0.01),而Akt的表达无明显变化.结论:X线电离辐射能够诱导鼻咽癌CNE-2细胞发生EMT,其机制可能与PI3K/Akt信号通路的激活有关.
关键词： 鼻咽癌 电离辐射 上皮-间充质转化 PI3K/Akt信号通路 -
MCPH1在电离辐射诱导食管癌细胞DN A 损伤通路中的作用
目的：研究MCPH1在电离辐射诱导食管癌细胞DNA损伤通路中的作用。方法：应用已构建的沉默MDC1的食管癌ECA109细胞株接受8 Gy电离辐射后1 h，检测相关因子核内斑点形成情况。构建沉默MCPH1的食管癌ECA109细胞株，检测此细胞株接受同样照射条件后相关因子核内斑点的形成情况。结果：成功构建沉默MCPH1的食管癌ECA109细胞；电离辐射使MDC1、MCPH1与γ-H2AX蛋白相互作用。沉默MDC1不影响γ-H2AX和MCPH1核内斑点的形成；沉默MCPH1使电离辐射导致的MDC1核内斑点减少，不影响γ-H2AX核内斑点的形成。结论：MCPH1在电离辐射诱导的DNA损伤通路中可能位于H2AX下游、MDC1上游，可以调控MDC1核内斑点形成。
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医务人员医用电离辐射知识调查分析
目的 了解医务人员对医用电离辐射相关知识的知晓情况,为加强医务人员的医疗照射防护知识教育提供科学依据.方法 采用自行设计的问卷,对深圳地区3所医院总共300名医务人员进行医用电离辐射相关知识及认知水平的问卷调查.结果 回收有效问卷总共278份,问卷有效率为92.7％.绝大部分的被调查者认为电离辐射防护知识在日常医疗诊疗过程十分重要(72.4％,201/278),62.2％ (173/278)的被调查者在日常医务工作中很少告知被检查者电离辐射的相关危害.关于电离辐射暴露剂量及其危险度的知识共12题,1题1分,平均得分6.6分,影像专业医务人员较非影像专业医务人员有更高的得分(8.9 VS 5.8,P＜0.0001),两者差异具有统计学意义.结论 医务人员医用电离辐射知识缺乏,应进一步加强对患者电离辐射暴露的监控及医务人员电离辐射防护知识的教育.
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结直肠癌细胞Kiss-1基因表达在X线照射后的变化及其与肿瘤细胞增殖和凋亡的关系
目的 研究X线照射后人结直肠癌SW480细胞中肿瘤转移抑制基因Kiss-1表达水平变化及其对细胞增殖和凋亡能力的影响.方法 SW480细胞分为对照组(0Gy)和不同照射剂量(2、4、6和8Gy)的实验组.实验组经6-MV X线照射后48 h,应用细胞免疫组织化学、实时定量PCR法检测细胞中Kiss-1蛋白及mRNA水平,通过软琼脂集落形成实验和流式细胞法检测细胞增殖和凋亡情况.结果 与对照组相比,2、4Gy剂量组细胞Kiss-1蛋白表达无明显改变(P＞0.05),6、8Gy剂量组表达明显上调(P＜0.05)；在2、4、6Gy剂量组细胞Kiss-1基因mRNA水平上调(P＜0.05),8Gy剂量组则无明显改变(P＞0.05)；与对照组相比,各剂量组细胞克隆形成数均明显减少(P＜0.05)；4、6、8 Gy剂量组细胞凋亡率增加(P＜0.05),2Gy剂量组细胞凋亡率无明显改变(P＞0.05).结论 X线照射有可能上调SW480细胞Kiss-1基因的表达,同时残存癌细胞凋亡率增高、增殖力下降.
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ATM与辐射激活的磷酸化P53、P21蛋白的相互作用
背景与目的:ATM基因属于PI-3K激酶家族成员,其编码蛋白具有调控DNA修复过程和调整细胞周期关卡的功能.毛细血管扩张性共济失调症(ataxia-telangiectasia,AT)患者AT细胞中ATM基因的突变导致了辐射诱发的P53、P21磷酸化缺失,说明辐射激活ATM基因可调控P53、P21的磷酸化.本实验利用免疫共沉淀及Western blot技术来研究辐射激活的ATM基因与p53的关系,并观察ATM基因是否不通过P53而直接调控P21的磷酸化.方法:利用电穿孔技术将含有ATM基因cDNA的真核表达载体pEBS7-YZ5转染到AT细胞中,用潮霉素筛选以获得稳定表达细胞株,RT-PCR检测ATM cDNA的转录以进一步验证;在ATM稳定表达的AT细胞中,利用免疫共沉淀及Western blot技术研究ATM基因与p53基因的相互关系;以K562细胞(p53突变)为p53突变细胞模型,研究ATM是否直接磷酸化P21.结果:pEBS7-YZ5成功转进AT细胞,RT-PCR检测到ATMcDNA片段;ATM稳定表达的AT细胞株在电离辐射诱导下,P53被磷酸化,免疫共沉淀显示ATM与P53相互作用;K562细胞经60Co γ射线照射后,P21被磷酸化,ATM抗体免疫共沉淀物中检测到P21蛋白的存在.结论:细胞遭受电离辐射作用后所激活的ATM激酶,可通过磷酸化P53继而活化细胞周期检控点P21蛋白,也可在电离辐射导致DNA损伤早期直接磷酸化P21蛋白,来启动DNA修复机制.
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乳头状甲状腺癌基因PTC1对ATM细胞定位和功能的影响
背景与目的:ret基因重排活化与乳头状甲状腺癌密切相关,但它致癌的分子机制还不清楚,本文将通过研究DNA双链断裂(double-strand breaks,DSBs)感应分子毛细血管扩张共济失调症突变蛋白ATM(mutatedin ataxiatelangiectasia)与原癌基因Ret重排活化蛋白PTC1的相互作用,探讨ret重排致癌的分子机制.方法:以抗ATM抗体免疫沉淀的ATM为激酶,抗HA抗体免疫沉淀的PTC1的TK结构域为底物,进行体外磷酸化,检测ATM对ret-TK结构域的磷酸化作用;分别分离COS7细胞胞浆和胞核蛋白,研究PTC1过表达对ATM-LZPR定位的影响;用磷酸化p53抗体检测PTC1过表达对p53磷酸化水平的影响;流式细胞术分析PTC1过表达对细胞周期的影响.结果:体外磷酸化实验证明TK可以被ATM体外磷酸化;Western印迹检测发现单独表达LZPR时其在胞浆、胞核均有表达,而PTC1与LZPR共表达后,LZPR结构域仅在胞浆表达;用磷酸化p53抗体检测发现过表达PTC1抑制了ATM对p53的磷酸化作用,引起细胞G1/S期周期阻滞.结论:PTC1可能通过使ATM滞留于胞浆,干扰ATM对p53的磷酸化及其对细胞下游靶基因的转录活化功能,从而使细胞周期检查点机制失控.
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鼻咽癌放疗患者血清α2-巨球蛋白水平及临床意义
目的 检测鼻咽癌放疗患者血清中不同放疗时段α2-巨球蛋白含量,了解其变化规律,探讨其作为反映放疗损伤的血清标志物的可行性.方法 采集23例鼻咽癌初诊患者在单纯放疗前、放疗10、20、30、33次5个时段的血标本,检测α2-巨球蛋白水平.采用SPSS17.0软件包,以配对t检验分析5个时段血清α2-巨球蛋白水平差异.结果 患者血清中α2-巨球蛋白水平随放疗次数增加而升高.放疗10次后鼻咽癌患者的血清α2-巨球蛋白浓度(12.04±5.72)U/L高于放疗前(10.81±5.38)U/L,差异具有统计学意义(t=-4.818,P<0.05);放疗20次后鼻咽癌患者的血清α2-巨球蛋白浓度(12.26±5.77)U/L高于放疗前,差异具有统计学意义(t=5.237,P<0.001);放疗30次后鼻咽癌患者的血清α2-巨球蛋白浓度(12.91±5.55)U/L高于放疗前,差异具有统计学意义(t=6.076,P<0.05);放疗结束时鼻咽癌患者的血清α2-巨球蛋白浓度13.43±6.05 U/L高于放疗前,差异具有统计学意义(t=5.189,P<0.05).结论 放射治疗可引起血清α2-巨球蛋白改变,α2-巨球蛋白可成为反映颌骨电离辐射损伤的血清标志物.
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分次电离辐射对食管癌细胞HIF-1α及MDR1表达的影响
目的 观察分次电离辐射对食管癌细胞EC9706的缺氧基因HIF-1α及耐药基因MDR1表达水平的影响.方法 对食管癌细胞进行1 Gy·2/d分次外照射,共20次.采用实时定量PCR及Western blotting对外照射前后处于缺氧/常氧培养下的食管癌细胞EC9706的HIF-1α和MDR1表达水平进行检测.MTT及克隆形成实验被用来评估细胞的存活率及化疗耐药指数.结果 单纯照射组及单纯缺氧组的HIF-1α和MDR1表达均较对照组明显升高(P＜0.05),且以单纯缺氧组为著.同缺氧+照射组对比,单纯照射组细胞的存活分数显著减低(P<0.05).单纯缺氧组的HIF-1α、MDR1表达水平显著高于缺氧+照射组(P<0.05).结论 缺氧是导致食管癌细胞化疗耐药及放射抗拒产生的较强因素.缺氧条件下分次外照射可以缓解食管癌细胞的缺氧程度,降低耐药指数,推测其后续化疗疗效应较好.
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电离辐射对缺氧条件下肝癌细胞HIF-1α及VEGF表达的影响
目的 探讨缺氧条件下电离辐射对肝癌细胞HepG2中缺氧诱导因子(HIF)-1α及血管生成因子(VEGF)表达的影响,从理论上寻找一种提高放射治疗肿瘤有效性的方法.方法 将HepG2肝癌细胞分为对照组、缺氧组、单纯照射组和缺氧加照射组.缺氧组:氯化钴处理细胞模拟缺氧条件;单纯照射组:按照照射率4 Gy/min,共8 Gy的剂量利用X射线照射细胞;缺氧加照射组:氯化钴处理细胞一定时间后,按照与单纯照射组相同的剂量照射细胞.利用荧光显微镜观察各组肝癌细胞的凋亡情况,MTT法分析细胞存活分数,RT-PCR技术检验各组肝癌细胞中的HIF-1α和VEGF表达情况.结果 (1)细胞凋亡情况:对照组未观察到细胞凋亡,缺氧组中少部分肝癌细胞出现凋亡,单纯照射组中大量肝癌细胞出现凋亡,但缺氧加照射组肝癌细胞凋亡情况较单纯照射组明显减少(P＜0.05).(2)MTT检测结果:细胞存活分数排列顺序为:对照组＞缺氧组＞缺氧加照射组＞单纯照射组.(3)HIF-1α表达情况:缺氧加照射组＞缺氧组＞正常组(P＜0.05).单纯照射组与正常组无明显差异;VEGF表达变化情况:缺氧加照射组＞缺氧组＞单纯照射组＞正常组(P＜0.05).结论 提示HIF-1α可能通过VEGF发挥重要的保护作用,从而降低实体瘤中内部癌细胞对辐射的敏感性.
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电离辐射致小鼠骨髓基质细胞凋亡的研究
目的探讨电离辐射致骨髓基质细胞(BMSC)凋亡的规律.方法采用流式细胞仪、电镜技术观察不同剂量60Coγ射线照射后BMSC的凋亡变化.结果经50 Gy剂量照射后,BMSC未见有明显的形态学改变,而经100和200 Gy照射后BMSC出现了明显的凋亡改变.流式细胞检测显示,经50 Gy剂量照射后,BMSC的凋亡率与正常对照相比变化不明显(P＜0.05);100 Gy照射后BMSC的凋亡率出现了明显改变(P＜0.01),而且这种变化始于照射后4 h,至照后24 h到达高峰,随后凋亡率慢慢下降;200 Gy照射组的凋亡率略高于100Gy组,但差异不明显(P＜0.05).结论体外培养的BMSC受一定剂量的60Coγ射线照射后可发生凋亡,并具有较强的辐射抗性.
关键词： 电离辐射 骨髓基质细胞:细胞凋亡 -
电离辐射对鼻咽癌CNE-2细胞自噬活性的影响
目的 研究电离辐射对CNE-2细胞自噬活性和EPG5表达的影响.方法 CNE-2细胞用不同剂量电离辐射照射后,透射电镜、qRT-PCR、Western blot分别检测自噬形态、自噬标志物(P62、LC3)及EPG5表达;用RNA干扰技术(siRNA)沉默EPG5基因表达,qRT-PCR及Western blot检测自噬标志物及EPG5表达.结果 电离辐射引起自噬小体数量增加、LC3Ⅱ/LC3 Ⅰ比值升高(P＜0.01)、p62蛋白表达增加、EPG5 mRNA表达下调(P＜0.01).EPG5-siRNA转染后EPG5 mRNA表达下调(P＜0.01),P62、LC3Ⅱ蛋白表达升高(P＜0.01).结论 电离辐射可能通过下调EPG5基因表达,阻滞自噬溶酶体形成,从而影响CNE-2细胞自噬水平.
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电离辐射与线粒体DNA的变异
线粒体DNA(mitchondrial DNA,mtDNA)是裸露的双链环状DNA分子结构,缺少组蛋白外衣的保护,复制快速,缺乏校读功能以及缺乏有效的DNA修复系统,极易发生突变.而电离辐射作为一种致DNA损伤的因素,现已发现它可以诱导线粒体DNA的突变,其中包括4977bp的缺失、点突变、插入突变等.
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131I的电离辐射对甲状腺功能早期影响的研究
目的:探讨131I的电离辐射与甲状腺组织功能早期改变的关系,如血清TNF、IL-1β、IL-6、IL-8等细胞因子水平变化以及甲状腺组织本身的病理改变等.方法:选用兔作动物实验(15只),分别在0、6、24、48、72 h及1周时抽血做IL-1β、IL-8测定,并每次随机处死1～2只兔以做病理切片观察,1周时同时做甲功测定(TT3、TT4、FT3、FT4)并与0 h比较.17例病情中及重度甲亢患者用治疗剂量的131I治疗(每人次用量146.2～469.9 MBq,平均267.5 MBq),治疗前和治疗后4～7天抽血做TNF、IL-1β、IL-6和IL-8测定.结果:①使用131I 6 h后即可见兔血清IL-1β增高(P<0.05),IL-8于48h达高峰(P<0.01),两种细胞因子于1周时皆降低到0 h水平(P>0.05).1周内兔血清甲状腺激素水平无明显变化(P>0.05).②甲亢患者131I治疗前后血清细胞因子的变化与兔有所不同,TNF无明显变化(P>0.05),IL-6和IL-8升高(P<0.05),而IL-1β反而降低,且差异显著(P<0.05).③摄取131I后兔甲状腺组织在不同时间内呈现不同的病理改变.结论:①甲状腺组织摄取一定剂量的131I在不同时间内呈现不同的病理改变, 但短期内甲状腺激素水平无明显变化. ②某些细胞因子IL-1β、IL-6、 IL-8等似可用作观察甲状腺组织对131I辐射效应反应的指标,但其临床价值有待于进一步探讨.
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Erlotinib对鼻咽癌细胞株放射敏感性的作用
目的:研究Erlotinib对人鼻咽癌细胞株CNE1及CNE2放射敏感性的影响.方法:人鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2经Erlotinib、深部X线照射或两者联合处理,采用细胞克隆形成法检测Erlotinib对鼻咽癌细胞株放射敏感性的影响；流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期的情况.结果:Erlotinib增强了鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2的放射敏感性,放射增敏比分别为1.076、1.109；Erlotinib联合电离辐射可导致鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2发生G2/M期阻滞；并促进鼻咽癌细胞株CNE2放射诱导的细胞凋亡.结论:Erlotinib联合电离辐射可致鼻咽癌细胞周期G2/M期阻滞,增强了鼻咽癌细胞株的放射敏感性.
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Cetuximab联合电离辐射抑制鼻咽癌细胞表皮生长因子受体磷酸化
目的 探讨Cetuximab联合电离辐射对鼻咽癌细胞表皮生长因子受体(EGFR)及其磷酸化形式(p-EGFR)的影响.方法 采用Western blot法分别检测鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2在不同剂量电离辐射联合不同浓度Cetuximab作用48 h后细胞株EGFR及p-EGFR蛋白的表达.结果 不同浓度的Cetuximab联合不同剂量的电离辐射作用于鼻咽癌细胞株CNE1及CNE2后,EGFR蛋白表达无明显变化;随着Cetuximab浓度的增加,p-EGFR蛋白表达逐步下降;且Cetuximab浓度不变时,辐射剂量的增加,p-EGFR蛋白表达逐渐下降,至Cetuximab浓度为5 μg/mL同时放射剂量为4 Gy时,几乎无p-EGFR蛋白表达.结论 Cetuximab联合电离辐射主要是抑制鼻咽癌细胞株EGFR磷酸化,降低p-EGFR蛋白水平,且呈剂量相关性,而对EGFR蛋白本身表达并无影响.
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G2／M期阻滞与细胞放射敏感性关系的研究进展
在肿瘤的临床治疗中，放射治疗的适应证宽泛，选择性大，故其在肿瘤治疗中的作用和地位日益突出。电离辐射可以引起肿瘤细胞的DNA损伤，之后通过多种机制杀灭肿瘤细胞。其中，影响肿瘤细胞的周期调控，即通过降低肿瘤细胞的G2／M期阻滞，从而影响肿瘤细胞受损DNA的修复，引起肿瘤细胞死亡就是其治疗肿瘤的主要机制之一。研究表明，肿瘤细胞的放射敏感性与其增殖周期和病理分级有关，不同组织器官来源的肿瘤在受到射线照射后的反应程度各不相同，放射治疗的疗效正是取决于肿瘤细胞对射线的敏感程度，即放射敏感性。如何提高肿瘤的放射敏感性正是现代医学的研究热点和难点。本文针对有关电离辐射造成DNA损伤后ATM介导的G2／M期细胞周期阻滞与肿瘤细胞放射敏感性关系的研究现状进行综述，以期为肿瘤的预防和放射治疗提供新的切入点。
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电离辐射对放射工作人员白细胞影响的Meta分析
目的 运用Meta分析方法探讨电离辐射暴露对放射工作人员白细胞的影响,为加强辐射防护和保障放射工作人员健康提供依据.方法 联合检索1998-2016年在《中国知网》、《万方数字化期刊数据库》、《维普中文科技期刊数据库》等数据库,对文献按纳入与剔除标准整理后进行Meta分析,探讨电离辐射对放射工作人员白细胞影响程度.结果 电离辐射致放射工作人员白细胞异常的风险,暴露组是对照组的3.83(95％ CI:3.08～4.58)倍.结论 电离辐射与放射工作人员的白细胞异常率有显著相关性.
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MCPH1在DNA损伤应答中的作用
目的：研究食管癌 ECA109细胞中 MCPH1在电离辐射诱导的 DNA 双链损伤中的作用以及与H2AX 的关系。方法：将食管癌 ECA109细胞接受8 Gy 照射后1 h 提取蛋白并进行免疫荧光检测，观察MCPH1与H2AX的蛋白表达情况及核内斑点的变化。建立稳定低表达H2AX的食管癌ECA109细胞株，检测沉默H2AX 后电离辐射导致的MCPH1与H2AX的蛋白表达情况及核内斑点的变化。结果：（1）成功建立了稳定低表达H2AX 的食管癌细胞株。（2）电离辐射可以诱导r-H2AX 与MCPH1蛋白水平增加，同时可引起r-H2AX 与MCPH1核内斑点增多。（3）低表达H2AX 的ECA109细胞中，电离辐射诱导的 r-H2AX 与MCPH1蛋白增高水平下降，核内斑点减少。结论：MCPH1参与到电离辐射诱导的DNA双链损伤中，并且它的位置位于H2AX 的下游，被H2AX调控。
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放射性口腔炎与组织工程化口腔黏膜
放射性口腔炎是一种放射线电离辐射导致的口腔黏膜损伤,是头颈部肿瘤放疗过程中常见的并发症之一.通常表现为咽痛、黏膜充血、溃疡形成,重者伴有出血、脓性分泌物等.患者常常疼痛难忍,影响其正常进食、睡眠等日常生活,并造成严重的心理负担,甚至被迫中断治疗[1].为了提高患者的生存质量,必须寻找有效的方法治疗放射性口腔炎.近年来组织工程学迅速发展,组织工程化口腔黏膜也成为治疗口腔黏膜损伤的重要方法之一.
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无精症动物模型的研究进展
无精症、 少精症以及弱精症是导致男性生殖障碍的重要原因.构建稳定可靠的实验动物模型,对研究疾病的发生机制和治疗方法有重要的意义.目前,常用于构建无精症动物模型的方法包括电离辐射法、 化疗药物注射法、 激素注射法、 热效应法等,但各种方法的构建效果存在一定差异.因此,本文就目前无精症动物模型构建的方法和现状进行综述,以期为未来的研究提供一定的参考.
