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β-淀粉样蛋白诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化过程中Tau蛋白的过度磷酸化
背景:大多数学者认为β-淀粉样蛋白是阿尔茨海默病发病的始动因素,而Tau蛋白过度磷酸化可能是阿尔茨海默病重要的分子病理变化之一.目的:观察β-淀粉样蛋白25~35对大鼠骨髓间充质干细胞分化的神经元样细胞Tau蛋白磷酸化的影响.方法:体外分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,将第4代骨髓间充质干细胞分为两组:实验组中加入预诱导培养基和20 μmol/L β-淀粉样蛋白25~35,24 h后用含2%二甲基亚砜和200 μmol/L丁羟茴醚的DMEM诱导其向神经细胞分化,5 h后收取细胞.对照组诱导方法同实验组,但在诱导过程中未加入β-淀粉样蛋白25~35.结果与结论:光镜下可见纺锤状的骨髓间充质干细胞诱导后出现长突起,呈现神经细胞样形态,但实验组突起数量和长度均少于对照组;免疫细胞化学法检测两组诱导后的神经元样细胞为神经元特异性烯醇化酶阳性;免疫蛋白印记法证明实验组的GSK-3β、Tau[pSer262]和Tau[pSer396]表达均显著高于对照组.结果提示β-淀粉样蛋白25~35能够通过GSK-3β途径诱导骨髓间充质干细胞分化的神经元样细胞Tau蛋白过度磷酸化.
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人脐带来源间充质干细胞移植急性阿尔茨海默病模型小鼠引发的免疫应答反应
背景:阿尔茨海默病患者的外周血和脑脊液中相应细胞因子浓度较正常人相比有明显的改变,加强了阿尔茨海默病伴随着免疫应答的结论,提示炎性应答可能参与了阿尔茨海默病神经改变的级联反应.目的:探讨人脐带间充质干细胞在急性阿尔茨海默病小鼠模型中引发的免疫应答反应与外周血中各细胞因子水平的关系.方法:取第5代人脐带间充质干细胞,调整细胞浓度为1×109 L-1待用.C57小鼠随机分为4组,间充质干细胞组侧脑室注射β-淀粉样蛋白1～42,尾静脉注射1 mL人脐带间充质干细胞;模型组侧脑室注射β-淀粉样蛋白1～42,尾静脉注射等体积生理盐水;生理盐水组不造模,尾静脉给予等体积的生理盐水;正常组不造模,不给予任何干预措施.结果与结论:与正常组相比,模型组小鼠在Morris水迷宫实验中逃避潜伏期延长、第一次穿环时间增加而穿环次数减少,间充质干细胞组小鼠逃避潜伏期有所减少,第一次穿环时间减少,穿环次数有所提高,但改善情况较模型组比较不明显.与正常组小鼠相比,模型组在造模后4 d出现N-乙酰天冬氨酸降低,肌醇升高,造模后7 d外周血炎性因子白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α水平升高,白细胞介素10水平升高不明显;与模型组相比,注射脐带间充质干细胞7 d后外周血各炎性因子水平有所降低.结果表明人脐带间充质干细胞治疗阿尔茨海默病可能是通过调节免疫应答的途径来实现的.
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神经生长因子对β-淀粉样蛋白25-35诱导海马细胞毒性的防治作用
目的研究神经生长因子(NGF)对Aβ2535诱导海马细胞毒性的防治作用.方法取新生3d内大鼠海马细胞行体外培养7d,分别在加入Aβ2535前后加入NGF和等体积培养液,采用MTT和βtublin、ChAT免疫组化检测.结果βtublin免疫组化证实所培养的为特异性结构完整的海马神经元.MTT及免疫组化显示Aβ2535导致细胞活力显著降低及ChAT免疫阳性细胞明显减少.结论NGF能有效地阻止和轻度地修复Aβ2535诱导的海马细胞损伤,对阿尔茨海默病的防治提供了一定的实验依据.
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β-淀粉样蛋白对阿尔茨海默病大鼠脑局部神经元超微结构的影响
目的探讨 Meynert核注射β-淀粉样蛋白(Aβ)后对大鼠脑神经细胞超微结构的影响及其可能机制.方法将 1 μ l Aβ 1-40(10 μ g/μ l)在立体定向仪下注入大鼠右侧 Meynert核,分别于 1、4周时用透射电镜观察脑组织中神经细胞超微结构.结果 Aβ注射 1周后,实验组 Meynert核、海马区和皮层区均可见一些神经细胞核染色质浓缩成团块并见边聚现象,神经细胞有发生凋亡的趋势;4周时可见典型的神经细胞凋亡;突触结构数量减少.正常对照组和假手术组超微结构基本正常.结论 Aβ注入 Meynert核能引发 CNS神经细胞凋亡和突触结构减少,可能是 AD记忆障碍和痴呆形成的重要机制之一.
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丹参注射液联合脂肪干细胞移植改善脑梗死模型大鼠的神经功能
背景:研究发现,丹参注射液、脂肪干细胞分别对脑梗死大鼠具有明显的神经保护作用.目的:观察丹参注射液联合脂肪干细胞移植对脑梗死大鼠脑组织及血清中环氧合酶2、β-淀粉样蛋白水平的影响.方法:选取脑梗死模型大鼠63只,随机分为3组:脑梗死组、脂肪干细胞组、联合组,每组21只.造模后24 h,脑梗死组于尾静脉注射30 μL PBS,脂肪干细胞组尾静脉注射30 μL脂肪干细胞悬液(含有3×106 L-1个脂肪干细胞),联合组经尾静脉注射30 μL脂肪干细胞悬液(含有3x106 L-1个脂肪干细胞)+腹腔注射丹参注射液0.5 g/(kg·d),细胞注射1次,丹参注射液连续注射7d.治疗后1,2,3,4周进行神经功能学缺损评分;治疗后3周,采用ELISA法检测血清环氧合酶2及β-淀粉样蛋白水平,TFC染色观察脑梗死范围,RT-PCR和蛋白免疫印迹技术检测脑组织环氧合酶2及β-淀粉样蛋白的mRNA和蛋白表达.结果与结论:①脂肪干细胞组、联合组神经功能缺损评分明显低于脑梗死组(P＜0.05),联合组又明显低于脂肪干细胞移植组(P＜0.05);②与脑梗死组比较,脂肪干细胞组、联合组血清环氧合酶2及β-淀粉样蛋白水平显著降低(P＜0.05);联合组明显低于脂肪干细胞组(P＜0.05);③联合组梗死体积小于脂肪干细胞组(P＜0.05),脂肪干细胞组小于脑梗死组(P＜0.05);④与脑梗死组比较,脂肪干细胞组、联合组脑组织中环氧合酶2及β-淀粉样蛋白mRNA和蛋白表达明显下调(P＜0.05),联合组降低更为显著(P＜0.05);⑤结果表明,丹参注射液联合脂肪干细胞移植可改善脑梗死大鼠的神经功能,可能是通过降低脑组织及血清中环氧合酶2及β-淀粉样蛋白发挥作用.
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β-淀粉样蛋白25-35致伤对PC12神经元突触相关蛋白表达的影响
背景：脑内β-淀粉样蛋白的聚集可诱导神经细胞凋亡，大量神经元及突触的缺失和功能的损害尚无有效的干预手段，提高突触可塑性为治疗早期阿尔茨海默病提供重要方向。目的：筛选佳的阿尔茨海默病模型，检测β-淀粉样蛋白25-35致伤PC12神经元的突触相关蛋白表达。方法：采用50μg/L神经生长因子诱导PC12细胞分化为神经元样细胞，以不同浓度β-淀粉样蛋白25-35致伤PC12神经元样细胞。应用CCK8法检测细胞生存率。神经颗粒素、神经调节素免疫荧光染色观察模型细胞的形态学变化，Western blot法检测神经颗粒素、CAMKⅡ、PSD-95蛋白表达水平。结果与结论：随着β-淀粉样蛋白25-35浓度增高和作用时间的延长，PC12神经元生存率呈剂量依赖性降低；可见突触长度变短、神经元萎缩、神经元彼此连接疏松；神经颗粒素、CAMK Ⅱ、PSD-95蛋白表达均下调。结果提示，10μmol/Lβ-淀粉样蛋白25-35、48 h是筛选早期PC12神经元阿尔茨海默病细胞模型的佳干预浓度和时间。
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阿尔茨海默病药物治疗靶点的研究进展
阿尔茨海默病(AD)是一种常见的神经系统退行性疾病,临床以进行性记忆障碍为突出表现.我国AD患者已超过500万[1].迄今为止,AD仍然没有有效的治疗方法,寻找有效的AD治疗药物是目前临床面临的严峻挑战.近年来针对AD不同病理环节治疗药物的研究表明,针对AD的多环节的多靶点联合治疗可更加有效控制AD的发病,本文将从β-淀粉样蛋白(Aβ)、微管相关蛋白tau、神经元缺失、早期诊断与干预四个方面概述AD治疗靶点的新进展.
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雌激素对阿尔茨海默病神经保护的作用机制
阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是以进行性认知功能障碍和记忆损害为特征的原发性中枢神经系统退行性疾病,其病因不明,是老年性痴呆的主要类型,女性为男性的2～3倍[¨.老年斑,神经纤维缠结,脑淀粉样血管病以及广泛的神经元丢失而导致的脑萎缩是其主要的组织病理学标志.近年来,研究认为细胞凋亡是引起AD脑组织中神经元数目减少的重要原因之一,而雌激素对神经元具有明确的保护作用[2-3].本文就雌激素的神经保护作用机制进行综述.
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槲皮黄酮对Aβ诱导小神经胶质细胞损伤的保护机制研究
目的 探讨槲皮黄酮对β-淀粉样蛋白 (Aβ) 诱导小神经胶质细胞 (BV-2) 损伤的保护作用及其作用机制.方法体外培养BV-2 细胞, 利用Aβ 诱导BV-2 细胞发生损伤;将低 (10 μg/mL) 、中 (20 μg/mL) 、高 (40 μg/mL) 3 种浓度槲皮黄酮对细胞进行处理, 共24 h, 采用CCK8 实验对BV-2 细胞的增殖情况进行评价, 应用ELISA 试剂盒对细胞培养基上清中炎症因子IL-6、TNF-α 的表达水平进行分析, 采用免疫印迹技术分析β-分泌酶 (BACE) 、早老素 (PS1) 、呆蛋白 (NCT) 蛋白表达水平, 并对脑啡肽酶 (NEP) 、胰岛素降解酶 (IDE) 表达水平进行检测.结果 采用Aβ 诱导可较好地构建BV-2 细胞损伤模型, 经过低、中、高3 种剂量的槲皮黄酮处理后, BV-2 细胞的相对存活率较模型组显著增加 (P＜0. 05); 药物处理组细胞培养基上清中IL-6、TNF-α 表达水平低于模型组 (P＜0. 05); Western blot 结果显示, 槲皮黄酮组BACE、PS1、NCT 蛋白表达水平较模型组降低 (P ＜0. 05);槲皮黄酮可以促进Aβ 消化酶NEP、IDE 的表达.结论 槲皮黄酮对Aβ 诱导的BV-2 细胞损伤具有保护作用, 其作用机制可能与抑制Aβ 分泌酶表达和激活Aβ 消化酶表达有关.
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Aβ显像剂18F-AV45的合成研究
目的 制备Aβ正电子显像剂18F-AV45前体AV105,并利用国产氟多功能模块合成18F-AV45.方法 以4-氨基苯乙烯为起始原料,经Boc保护、甲基化、Heck反应、羟基保护合成AV105;AV105于130℃条件下进行亲核氟代反应,经盐酸水解、碱中和得到18F-AV45,并对前体用量、盐酸浓度进行了筛选.标记前体AV105及各步合成中间体的结构均经核磁共振谱和质谱确证.结果 成功合成显影剂18 F-AV45,标记率为(20.3+2.2)％(n=5,未经衰减校正),HPLC检测其放化纯度(RCP)大于98％.结论 初步探讨了18F-AV45前体的合成与标记过程,并对反应条件进行了优化,该方法提供的显像剂可满足临床研究的要求.
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尼可地尔对APPsw/SH-SY5Y细胞氧化应激和Aβ生成影响的研究
目的 探讨KATP开放剂尼可地尔对APPsw/SH-SY5Y细胞氧化应激和β-淀粉样蛋白(Aβ)生成的影响及其相关机制.方法 APP695 swe质粒瞬时转染SH-SY5Y细胞24h后,尼可地尔(1 mmol/L)和KATP阻断剂格列美脲(10μmol/L)分别或共同作用24h,收集细胞进行生化,real-time PCR,western blot和ELISA检测;PI3K抑制剂LY294002(10 μmol/L)预处理,检测p-AKT和p-GSK-3β蛋白的表达.结果 尼可地尔可以明显降低MDA的生成(P＜0.05),增加总SOD和GSH的水平(P＜0.05);尼可地尔可以明显降低APP695mRNA和APP695蛋白的表达(P＜0.05),并能降低细胞外液Aβ1-42的水平(P＜0.05).尼可地尔可以明显上调p-AKT和p-GSK-3β蛋白的表达(P＜0.05),并可被LY294002预处理所抵消.结论 尼可地尔可能通过抑制氧化应激,激活PI3 K/Akt/GSK-3β通路等机制减少APPsw/SH-SY5Y细胞Aβ的生成.
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阿尔茨海默病发病机制研究的现状与进展
阿尔茨海默病是年龄相关的神经系统变性病,其病因和发病机制不清、治疗效果不佳、发病后严重影响着患者的生存质量,受到人们越来越多的重视.阿尔茨海默病的发病机制有很多学说,如胆碱能学说、β-淀粉样蛋白瀑布学说、tau蛋白假说、神经血管学说、氧化应漱学说等.随着科学技术的飞速发展,人们对阿尔茨海默病有了新的认识,本文就现在比较公认的发病机制研究现状作一综述.
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醒脑静对麻醉后老年认知功能障碍大鼠学习记忆及海马区nNOS、血清β-淀粉样蛋白的影响
目的:探讨中成药醒脑静注射液对老年麻醉后认知功能障碍大鼠学习记忆功能及海马区一氧化氮合酶(nNOS)、血清β-淀粉样蛋白的影响,研究其改善老年认知障碍大鼠学习记忆功能的可能机制.方法:将40只老年大鼠随机分为空白对照组10只,余30只制备老年认知障碍大鼠模型后随机分为模型对照组10只、醒脑静低剂量组10只、醒脑静高剂量组10只,共4组.采用Morris水迷宫观察并评价其对空间学习记忆的改善.免疫组化法观察海马组织一氧化氮合酶(nNOS)表达,采用酶联免疫吸附(ELISA)法对各组大鼠血清中β-淀粉样蛋白含量进行检测.结果:与空白对照组比较,模型对照组、醒脑静低剂量组、醒脑静高剂量组逃避潜伏期显著延长、穿越平台次数显著减少(P＜0.01),给药6d后实验纽与模型对照组比较,醒脑静低剂量组、醒脑静高剂量组避潜伏期显著缩短,穿越平台次数显著增加(P＜0.05,P＜0.01)与空白对照组比较,模型对照组、醒脑静低剂量组、醒脑静高剂量组海马组织一氧化氮合酶(nNOS)表达显著减少、血清β-淀粉样蛋白含量增多(P＜0.01).经治疗后,与模型组比较,醒脑静低剂量组、醒脑静高剂量组海马组织一氧化氮合酶(nNOS)表达显著增多,血清β-淀粉样蛋白含量显著减少(P＜0.05,P＜0.01).结论:醒脑静注射液可增加海马区nNOS表达、降低血清β-淀粉样蛋白含量,从而保护海马组织形态的完整性,改善老年认知功能障碍大鼠的空间学习记忆能力.
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癫痫清颗粒对Aβ25-35所致阿尔茨海默病小鼠模型学习记忆的影响
目的:研究癫痫清颗粒对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)致阿尔茨海默病模型(AD)小鼠的学习记忆改善作用.方法:60只昆明种鼠随机分为假手术组,模型组,癫痫清颗粒低(3.12 g·kg-1)、中(6.24 g · kg-1)和高(9.36 g·kg-1)剂量组和盐酸多奈哌齐组(1.30 mg·kg-1),海马内注射(Aβ25-35),制作小鼠AD模型.连续灌胃给药15d.Y迷宫和Morris水迷宫实验检测各组小鼠认知行为改变,HE染色观察其对AD模型小鼠神经元的影响.结果:癫痫清颗粒可显著增加AD模型小鼠的自发交替反应率,缩短逃避潜伏期,减少总路程,延长游泳路程百分比,可改善海马区神经元细胞排列紊乱、水肿等现象,减少神经元死亡.结论:癫痫清颗粒对Aβ25-35致阿尔茨海默病模型小鼠学习记忆能力具有改善作用.
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文冠果壳苷对侧脑室注射Aβ_(1-42)致痴呆模型小鼠学习记忆障碍的改善作用
目的 考察文冠果壳苷对侧脑室注射β-淀粉样蛋白1-42(amyloid beta peptide fragment 1-42,Aβ_(1-42))致痴呆小鼠模型学习记忆障碍的改善作用,并初步探讨其作用机制.方法 通过Y迷宫和新物体辨别实验检测小鼠的学习记忆能力;使用分光光度计检测脑内丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、谷胱甘肽(glutathione,简称GSH)含量、谷胱甘肽与氧化型谷胱甘肽(glutathione oxidized,简称GSSG)的摩尔比值和总抗氧化能力(toral anti-oxidative capacity,T-AOC)的变化.结果 与Aβ_(1-42)模型组比较,文冠果壳苷能显著提高Y迷宫实验中小鼠自发交替反应率;显著延长新物体辨别实验中新物体探索时间并提高优先指数.生化结果显示文冠果壳苷能够不同程度地降低Aβ模型小鼠脑内的MDA含量,增加GSH含量,提高GSH与GSSG的摩尔比值,提高T-AOC活性.结论 文冠果壳苷对侧脑室注射Aβ_(1-42)小鼠学习记忆障碍具有显著的改善作用,其作用机制可能与对抗自由基损伤,抑制脂质过氧化反应有关.
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抗老年性痴呆天然产物研究进展
目的 为寻找抗老年性痴呆症的天然产物提供参考.方法 通过查阅国内外相关文献,对银杏科、豆科、念珠藻科、百合科、唇形科、龙胆科抗老年痴呆新化合物及结构新颖的天然产物进行综述.结果 现已研究的来源于天然产物的抗老年痴呆药物分布于多种植物中,具有不同的化学类别与结构特征,常见的有黄酮类、萜类、生物碱.结论 中药具有有效性和低毒性的特点,在老年性痴呆症的预防和治疗方面具有更大的潜力.
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β-淀粉样前体蛋白与β-淀粉样蛋白在糖尿病大鼠脑组织中的表达意义及行为学相关性研究
目的 观察糖尿病大鼠脑组织β-淀粉样蛋白(Aβ)、β-淀粉样前体蛋白(APP)表达,探讨糖尿病糖代谢异常在阿尔茨海默病中的作用机制.方法 腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱发糖尿病大鼠动物模型,随机分组:正常组(N组)、假手术组(S组)、4周模型组(M4组)、6周模型组(M6组)、8周模型组(M8组).穿梭箱实验、Morris水迷宫实验检测认知行为学改变,蛋白质免疫印迹法、RT-PCR和酶联免疫吸附法检测APP,酶联免疫吸附法检测Aβ,用图像分析仪测定光密度值.结果 模型组与正常组、假手术组比较有明显差别(P<0.01),模型组APP、Aβ表达明显增高.3个模型组比较无显著性差异,AB与APP正相关,APP表达水平与学习、记忆损伤负相关,Aβ与学习、记忆损伤正相关.结论 APP、Aβ在糖尿病大鼠脑组织表达增高,糖尿病糖代谢异常增强Aβ表达参与了阿尔茨海默病的发病机制,APP具有双重作用机制,既具有脑保护作用,又有增高Aβ表达作用.
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DMT1在APP/PS1转基因小鼠小脑皮质中表达上调
目的 研究二价金属离子转运体1(DMT1)在APP/PS1转基因小鼠小脑内的分布.方法应用免疫组织化学、免疫荧光双标染色和共聚焦激光扫描显微镜观察β-淀粉样蛋白(Aβ)在APP/PS1转基因小鼠小脑老年斑内的定位和分布,应用Western blotting检测DMT1在APP/PS1转基因小鼠小脑内的蛋白表达水平.结果DMT1和Aβ免疫阳性产物均定位于老年斑内,分子层内较多,而浦肯野细胞层和颗粒层较少.与野生型小鼠相比,DMT1蛋白表达水平在APP/PS1转基因小鼠小脑内显著升高.结论APP/PS1转基因小鼠小脑Aβ老年斑内有大量DMT1表达,提示DMT1及其参与转运的二价金属离子可能参与小脑Aβ老年斑形成.
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β-淀粉样蛋白诱导的阿尔茨海默病大鼠模型中BDNF与TRPC3的关系
目的 探讨经典瞬时受体电位通道蛋白3 (TRPC3)与脑源性神经营养因子(BDNF)在阿尔茨海默病(AD)大鼠模型海马组织中的表达及其相互关系.方法将SD大鼠随机分为PBS组、AD组和AD+BDNF组.采用β-淀粉样蛋白(Aβ1-42)侧脑室注射,制备AD模型.BDNF在造模14 d后经侧脑室导管注入.Morris水迷宫实验测定大鼠的空间学习记忆能力.实时PCR和Western blotting分别检测海马组织中TRPC3和BDNFmRNA和蛋白的表达情况.结果Morris水迷宫实验表明,AD组大鼠第5天逃避潜伏期较PBS组延长(P＜0. 05);AD+BDNF组大鼠的逃避潜伏期较AD组缩短(P＜0. 05).实时PCR及Western blotting结果表明,与PBS组相比,TRPC3和BDNF mRNA和蛋白在AD组表达均降低(P＜0. 05);与AD组相比,TRPC3 mRNA和蛋白在AD+BDNF组表达均增高(P ＜0. 05).结论BDNF和TRPC3在AD大鼠海马组织表达降低;外源性BDNF可能通过上调TRPC3表达,从而改善Aβ142导致的AD大鼠空间学习记忆障碍,起到保护神经元的作用.
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Alzheimer病褪黑素假说的哲学思考
Alzheimer病(Alzheimer's Disease,AD)正日益威胁人类健康,而其发病机理至今尚不清楚,治疗也无特效药物.褪黑素(Melatonin,MT)假说直到近几年有大量研究支持后才得到人们的重视,该假说为AD的研究与治疗打开了一个全新的视角.AD在MT方面的研究历程揭示了人类科学发现及科学认识的普遍规律.
关键词： Alzheimer病 褪黑素 β-淀粉样蛋白
