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p38MARK在百草枯急性中毒致肺损伤中的表达及意义
百草枯是我国引起急性中毒病死率较高的一种除草剂,目前研究仍未完全明了百草枯的中毒机制,也无有效拮抗药物.本文就其肺损伤机制中p38MARK的表达及意义进行综述.
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p-p38 MAPK在SD大鼠隐睾中的表达
目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)在隐睾所致生精障碍过程中的可能作用.方法:SD雄性大鼠40日龄时复制单侧隐睾模型,免疫组化SP法检测大鼠睾丸中p-p38MAPK的表达.结果:术后第7天,与正常侧睾丸相比,隐睾侧睾丸重量明显减少,生精小管内生精细胞排列紊乱,生精细胞与精子的数量减少,可见较多多核巨细胞;p-p38MAPK只见于隐睾侧睾丸内生精上皮及间质细胞,在正常侧睾丸内未见表达.结论:隐睾可导致p38MAPK活化,而p38MAPK活化可能与隐睾所致的生殖细胞凋亡有关.
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黄芪后处理对大鼠肝纤维化中的影响及TGF-β1/Smad2、p38MAPK作用
目的：研究黄芪对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝组织中TGF-β1、Smad2和p38MAPK表达的影响，探讨TGF-β信号通路在黄芪后处理中可能的抗纤维化机制。方法：60只Wistar大鼠被随机分成对照组、模型组、黄芪后处理组及鳖甲软肝片组，其中黄芪后处理组又分为小剂量组、常规剂量组和大剂量组，大鼠背部皮下注射CCl4构建肝纤维化模型，分别用HE和VG染色法染色，肝纤维化程度直接在光学显微镜下观测。同时采用SABC免疫组化方法检测各实验组TGF-β1、Smad2和p38MAPK的表达情况。结果：与对照组比较，模型组 TGF-β1、Smad2表达明显增强（P <0.05），而 p38MAPK 表达显著下降（P <0.05）。与模型组比较，黄芪后处理各组中大鼠肝组织中TGF-β1表达均有减弱（P <0.05），且随着黄芪剂量的增加而减少；随着黄芪剂量增加逐步下调Smad2的表达（P <0.05）、上调 p38MAPK的表达（P <0.05）。此外，黄芪组大鼠肝脏病理变化显著改善。结论：黄芪后处理明显影响大鼠肝组织TG F-β1信号表达，且对CCl4诱导的大鼠肝纤维化的作用呈剂量依赖性增强，其可能的机制为负性调节TGF-β1，减少Smad2及增强p38MAPK的表达。
关键词： 黄芪 TGF-β1信号通路 Smad2 p38MAPK 肝纤维化 -
大蒜素注射液对Ⅲ型前列腺炎疼痛的临床疗效及其前列腺液p38MAPK、COX-2的影响
目的:观察大蒜素注射液在治疗Ⅲ型前列腺炎疼痛方面的临床疗效,并借此探讨该注射液对前列腺液p38MAPK、COX-2的影响.方法:选取2015年7月至2016年2月收住我科的Ⅲ型前列腺炎并以疼痛为主要表现的男性患者90例,随机分成对照组和观察组,各45例.对照组服用塞来昔布片,2片/d,1次/片,治疗14 d,观察组采用大蒜素注射液配生理盐水静脉推注,同样治疗14 d后观察2组治疗的临床疗效、各临床功能评分、药物不良反应、前列腺液p38MAPK、COX-2及血浆IL-6、TNF-α水平的变化等情况.结果:1)治疗后观察组有效率86.67％,对照组有效率68.89％,2组有效率比较差异具有统计学意义(P＜0.05);2)2组患者治疗前各评分无统计学差异(P＞0.05),治疗后,NIH-CPSI、QOL均较治疗前降低,IIEF-5均升高,但均为对照组变化更明显,差异有统计学意义(P＜0.05);3)不良反应中,对照组出现10例(33.00％),观察组4例(8.80％),观察组不良反应明显低于对照组(P＜0.05);4)2组患者治疗前前列腺液p38MAPK、COX-2及血浆IL-6、TNF-α水平比较差异无统计学意义(P＜0.05).治疗14 d后,上述指标均较治疗前下降,但观察组下降更明显(P＜0.05).结论:大蒜素注射液在治疗Ⅲ型前列腺炎疼痛方面有显著的临床效果,且不良反应较传统止痛药明显降低,值得推广,同时,该药对前列腺炎性反应程度的指标也有明显降低作用,考虑其可能是通过类似机制起作用.
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苦苣菜水提物对小鼠的镇咳、祛痰和抗炎作用观察
目的:探析苦苣菜水提物对小鼠的镇咳、祛痰和抗炎作用.方法:制备急性炎性反应小鼠模型,二甲苯致耳廓肿胀模型及角叉菜胶致足跖肿胀小鼠模型,根据随机对照法分为正常空白对照组、模型组、苦苣菜水提物剂量I组、苦苣菜水提物剂量II组、苦苣菜水提物剂量III组,每组均为10只,截取耳廓和足跖,测算肿胀度;制备及提取血清样本、组织液,应用ELISA法检测炎性因子的变化;比较5组小鼠的镇咳作用(咳嗽次数、潜伏期);比较5组小鼠气管的酚红排泌量、苦苣菜水提物抗二甲苯致小鼠耳肿胀程度;比较不同剂量苦苣菜水提物环加氧酶2(COX-2)、P38活化蛋白酶丝裂原(p38MARK)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)含量的变化.结果:苦苣菜水提物I组、苦苣菜水提物II组、苦苣菜水提物III组、模型组与空白对照组比较其潜伏期、咳嗽次数均有降低,但苦苣菜水提物III组的咳嗽潜伏期、咳嗽次数显与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);苦苣菜水提物I组、苦苣菜水提物II组、苦苣菜水提物III组、模型组与空白对照组比较,其酚红排泌量均高于空白对照组,但苦苣菜水提物III组的酚红排泌量与空白对照组比较更显著,差异有统计学意义(P<0.05);苦苣菜水提物I组、苦苣菜水提物II组、苦苣菜水提物III组与空白对照组比较,其抗二甲苯致小鼠耳肿胀均有降低,但苦苣菜水提物III组更显著,差异有统计学意义(P<0.05);不同剂量的苦苣菜水提物与空白对照组比较COX-2、P38MAPK、TNF-α、IL-6指标均有降低,但苦苣菜水提物III组的临床指标显著低于空白组,差异有统计学意义(P<0.05).结论:苦苣菜水提物可不同程度的抑制炎性肿胀,其对急性炎性反应的保护作用可能与下调机体的COX-2、P38MAPK、IL-6、TNF-α等细胞因子和炎性反应介质的释放,以及调节机体有关炎性反应发生通路有关.
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四逆散加味抗肝纤维化的作用及机制研究
目的:研究四逆散加味对肝纤维化转化生长因子-β1(TGF-β1)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和基质金属蛋白酶(MMP-13)、金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)的作用及其相关性,探讨其抗肝纤维化的作用机制.方法:70只Wister大鼠随机分为7组:正常对照组、病理模型组、四逆散组、四逆散加味高、中、低剂量组、四逆散预防组.除正常对照组外,其余各组均采用猪血清ip诱发肝纤维化,0.5 mL/只,2次/周,连续10周,5周后即可形成肝纤维化.预防组于造模同时给药(以四逆散加味7 g·kg-1),各治疗组于造模第6周给药,连续10周.四逆散组4g·kg-1,四逆散加味高、中、低剂量组(14,7,3.5 g·kg-1).采用免疫组化S-P法检测肝组织TGF-β1,p-p38MAPK,α-SMA,MMP-13和TIMP-1蛋白阳性染色吸光度(A).结果:正常组与模型组的TGF-β1依次为[(0.75±0.25)vs(8.67±0.64),P＜0.01],p-p38MAPK[(21.71 ±0.37)vs(80.25 0.53),P ＜0.01],α-SMA[(3.32±0.64)vs(10.55 ±0.34),P ＜0.05]和TIMP-1[(25.57±6.46) vs(200.25±20.36),P＜0.01]蛋白表达均显著减弱.四逆散加味中剂量与模型组比较TGF-β1[(5.19±2.33)vs(8.67±0.64),P ＜0.05],p-p38MAPK[(47.55 ±0.58)vs(80.25 ±0.53),P ＜0.05],α-SMA (6.21 ±0.78)vs(10.55±0.34),P＜0.01)和TIMP-1 [(86.02 ±51.37)vs(200.25 ±20.36),P＜0.01]蛋白表达显著减弱；MMP-13 [(109.59 ±33.21)vs(35.87±6.35),P＜0.01]蛋白表达显著增强.结论:四逆散加味有明显的抗肝纤维化作用.其机制可能经TGF-β/p38MAPK信号转导通路抑制肝星状细胞(HSC)活化,使HSC低表达TIMP-1,高表达的MMP-13促进基质降解有关.
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糖肾平胶囊对STZ诱导糖尿病肾病大鼠肾脏保护及其对TGF-β1/p38MAPK信号转导通路的影响
目的:探讨糖肾平胶囊对链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用及其TGF-β1/p38MAPK信号通路影响.方法:雄性Wistar大鼠74只,随机分为正常组10只,模型组64只.模型组大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ) (45mg/kg),模型成功的大鼠按体质量随机分为模型组、厄贝沙坦组、糖肾平胶囊低、高剂量组.每周称体质量,隔周分笼收集24h尿液检测24h尿蛋白定量.第14周,处死大鼠取血检测血尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)、甘油三酯(TG)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)含量；肾组织行HE、Mallory、六胺银染色,观察肾组织的病理形态；肾组织原位杂交、RT-PCR、免疫组化观察转化生长因子β1(TGF-β1)、p38MAPK、Caspase-3 mRNA及蛋白表达.结果:模型组大鼠尿蛋白及血清BUN、Scr、TG、MDA含量显著增高(P＜0.01),NO、SOD含量显著降低(P＜0.01),肾固有细胞胞浆有大量TGF- β1、p38MAPK、Caspase-3 mRNA及蛋白表达；与模型组比较,各治疗组肾脏病理损害明显减轻,尿蛋白及血清BUN、Scr、TG、MDA含量显著降低(P＜0.01),NO、SOD含量明显增高(P＜0.01),肾固有细胞胞浆内TGF-β1、p38MAPK、Caspase-3 mRNA及蛋白表达明显减少(P＜0.01),糖肾平治疗组呈剂量依赖关系.结论:糖肾平胶囊可能通过调控糖尿病肾病肾组织TGF-β1/p38MAPK信号表达,减轻足细胞在内的肾固有细胞凋亡,进而降低24h尿蛋白定量、改善肾功能、降低TG和MDA含量；升高NO、SOD含量；减轻肾脏病理损害,起到明显的糖尿病肾病肾脏保护及延缓病程进展的作用.
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朝医鹿茸大补汤对哮喘小鼠气道炎性反应的影响
目的:探讨朝医鹿茸大补汤对哮喘小鼠气道炎性反应的影响.方法:BABL/e小鼠40只随机分成5组:正常对照组,哮喘模型组,鹿茸大补汤低、高剂量组,地塞米松治疗组,每组8只.采用ELISA法检测BALF中炎性细胞分类、计数及炎性细胞因子白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-5(IL-5)、白细胞介素-13(IL-13)、干扰素-γ(IFN-γ)含量;Western blot检测肺组织中磷酸化p38MAPK及NF-κB p65蛋白的变化;左肺组织行苏木精-伊红(HE)染色及NF-κB p65免疫组织化学染色.结果:与正常对照组比较,哮喘模型组小鼠支气管BALF中炎性细胞计数增多,IL-4、IL-5、IL-13水平增高(P＜0.01),IFN-γ水平降低(P＜0.01);肺组织磷酸化p38MAPK、NF-κB p65蛋白表达水平升高(P＜0.01).与哮喘模型组比较,朝医鹿茸大补汤低、高剂量组和地塞米松治疗组小鼠BALF中炎性细胞计数、IL-4、IL-5、IL-13水平和肺组织磷酸化p38MAPK及NF-κB p65蛋白表达水平均明显低,IFN-γ水平明显上升(P＜0.05,P＜0.01).结论:朝医鹿茸大补汤对小鼠哮喘具有保护作用,其机制可能部分与抑制磷酸化的p38 MAPK以及NF-κB信号通路有关.
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人参皂苷Rh2抗小鼠哮喘模型气道炎性反应的作用研究
目的:探讨人参皂苷Rh2对小鼠哮喘模型气道炎性反应影响的作用机制.方法:雌性BALB/c小鼠50只随机分成5组,即正常对照组,哮喘模型组,人参皂苷Rh2低、高剂量组、地塞米松组.在末次激发24h后所有小鼠取左肺组织行苏木精-伊红(HE)染色.分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)和蛋白质印迹检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素(IL)-4、IL-5、IL-13含量以及肺组织中磷酸化AKT、p38MAPK及核转录因子-κB(NF-κB) p65蛋白的变化.结果:与正常对照组比较,小鼠哮喘模型组BALF中炎性细胞计数、IL-4、IL-5、IL-13水平升高(P＜0.01);肺组织中磷酸化AKT、p38 MAPK及NF-κB p65蛋白表达水平升高(P＜0.05).与哮喘模型组比较,人参皂苷Rh2高剂量组小鼠BALF中炎性细胞计数、IL-4、IL-5、IL-13水平和肺组织中磷酸化AKT、p38MAPK及NF-κB p65蛋白表达水平均明显降低(P＜0.05).人参皂苷Rh2处理能明显减轻哮喘小鼠肺组织病理学改变,人参皂苷Rh2低、高剂量干预组之间比较,无显著差异.结论:人参皂苷Rh2对小鼠哮喘具有保护作用,其机制可能部分与抑制磷酸化的AKT、p38MAPK以及NF-κB信号通路有关.
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肠润方对功能性便秘大鼠结肠黏膜AQP3、AQP9表达的影响
目的:观察肠润方对功能性便秘模型大鼠结肠黏膜AQP3、AQP9表达的影响,探究其调控AQP3、AQP9表达的分子机制.方法:60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组(麻仁丸组)、肠润方组、肠润方联合P38MAPK抑制剂SB203580组.用复方地芬诺酯制造大鼠便秘模型,采用免疫组织化学及实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测大鼠便秘模型近端及远端结肠黏膜AQP3、AQP9的表达;Western Blot检测信号传导通路相关分子P38MAPK及P-P38MAPK的表达.结果:造模成功后,模型组近端结肠黏膜AQP3表达较空白组明显上升,而远端结肠黏膜AQP9表达较空白组明显下降(t值分别为3.148和7.069,P值均＜0.01);经肠润方及麻仁丸治疗后,近端结肠黏膜AQP3表达下降,而远端结肠黏膜AQP9表达上升,与模型组比较,差异均有统计学意义(t值分别为3.175和9.31,P值均＜0.05);各组间远端结肠黏膜AQP3表达及近端结肠黏膜AQP9表达比较,差异均无统计学意义(F值分别为1.639和2.544,P值均＞0.05).肠润方联合P38MAPK抑制剂SB203580治疗后,近端结肠黏膜AQP3 mRNA水平显著上升(t=5.922,P＜0.01);而远端结肠黏膜AQP9 mRNA水平显著下降(t=4.038,P＜0.01);P-P38/P38蛋白相对表达水平显著下降(t=19.419,P＜0.01).结论:肠润方对便秘模型大鼠的通便作用是通过抑制近端结肠AQP3表达及促进远端结肠AQP9表达来实现的,其调控机制可能与激活P38磷酸化,进而激活P38MAPK信号通路有关.
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凉膈散对LPS诱导的巨噬细胞丝裂素活化蛋白激酶p38活性的影响
目的:通过研究凉膈散对内毒素诱导的体内、体外细胞丝裂素活化蛋白激酶p38(P38MAPK)活性的影响,探讨凉膈散解毒作用的细胞信号转导调控机制.方法:分体内和体外实验两部分进行研究.体内实验部分采用凉膈散灌胃并用尾静脉注射制造内毒素损伤小鼠模型,采集腹腔巨噬细胞,用免疫沉淀及westernblot法测定磷酸化的p38MAPK(p-p38MAPK)活性.体外实验部分:制备凉膈散药物血清,培养巨噬细胞RAW264.7细胞.用免疫沉淀及放射自显影技术测定不同剂量药物血清对内毒素诱导的RAW264.7细胞p38MAPK活性的影响.结果:体内实验部分,与正常对照组相比,LPS损伤组的p-p38MAPK活性明显增强,各剂量药物组及地塞米松组均低于LPS损伤组,以高剂量药物组及地塞米松组低,中低剂量组次之,呈剂量依赖性.体外实验部分:不同剂量药物血清组及阳性药物组RAW264.7细胞p38蛋白激酶活性均低于正常血清组,以高剂量药物组及阳性药物组低,中低剂量次之,呈剂量依赖性.结论:不管在体内还是在体外,凉膈散都能明显抑制LPS诱导的磷酸化的p38MAPK活性的增强,并呈剂量依赖性.推断这是凉膈散解毒作用的细胞信号转导机制之一.
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眼针八区八穴对脑缺血再灌注24h大鼠海马组织中MAPK信号传导通路的影响
目的;观察八区八穴取穴眼针疗法对脑缺血再灌注损伤模型大鼠海马组织中p38MAPK、ERK1/2、JNK表达水平的影响,探讨八区八穴取穴眼针疗法治疗缺血性脑病的部分机制.方法:健康SPF级雄性SD大鼠40只,体质量(280±20)g.按体质量随机分组,分为空白对照组(8只)、假手术组(8只)和模型复制组(24只).对模型复制组24只大鼠采用线栓法进行模型复制,模型评价后,筛选模型合格的大鼠进行亚组划分,分别为模型对照组、眼针对照组,即分为正常组、假手术组、模型组、眼针组4组.眼针组大鼠给予眼针干预,再灌注即刻以及之后的每8h进行1次针刺治疗,至再灌注24 h取材进行相关指标检测.采用免疫组织化学法检测各组大鼠海马组织中P38MAPK、ERK1/2和JNK蛋白表达水平.结果:与空白对照组比较,模型对照组和眼针组大鼠海马组织中P38MAPK、ERK1/2、JNK蛋白表达水平均显著升高;与模型对照组比较,眼针组大鼠脑组织中P38MAPK、ERK1/2、JNK蛋白表达水平显著下降.结论:眼针可能通过抑制p38-MAPK信号传导通路而发挥其脑保护作用.
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通心络胶囊对自发性2型糖尿病KK/Upj-Ay小鼠坐骨神经细胞凋亡的机制研究
该研究通过观察通心络胶囊对自发性2型糖尿病KK/Upj-Ay小鼠坐骨神经细胞凋亡的影响,试探讨其改善糖尿病周围神经病变(DPN)的机制.实验以KK/Upj-Ay小鼠为DPN模型,随机分为模型组、通心络低、中、高剂量组(1,2,4g·kg-1),另设C57BL/6小鼠为对照组.灌胃给药12周,测定热痛觉阈值、运动神经传导速度(MNCV)和感觉神经传导速度(SNCV);流式细胞术测定细胞凋亡率;Real-time PCR和Western blot法测定坐骨神经B细胞白血病/淋巴瘤相关抗原2(Bcl-2)、白血病/淋巴瘤相关抗原相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)mRNA和蛋白的表达;Western blot法测定坐骨神经p38MAPK,p-p38MAPK蛋白水平.研究发现通心络胶囊能不同程度的升高痛觉阈值,增加MNCV和SNCV;通心络胶囊能降低坐骨神经细胞凋亡率;降低Bax和Caspase-3的表达,升高Bcl-2表达;通心络胶囊能降低p-p38 MAPK蛋白水平.结果表明通心络胶囊能够通过抑制p38MAPK磷酸化抑制DPN小鼠细胞凋亡,从而发挥糖尿病周围神经的保护作用.
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氧化苦参碱抑制p38MAPK通路减轻高脂喂养胰岛素抵抗小鼠氧化应激
该研究通过观察氧化苦参碱对高脂诱导胰岛素抵抗(IR)小鼠的影响,试探讨其对IR小鼠肝脏氧化应激及对p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)通路的作用.实验以高脂喂养ApoE-/-小鼠16周为IR模型,随机数字表法分为4组,即胰岛素抵抗组,氧化苦参碱低、中、高剂量(25,50,100 mg·kg-1)组,C57BL/6J小鼠设为对照组,灌胃给药8周.测定血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、脂肪酸(FFA)和胰岛素(FINS)含量;测定肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量;流式细胞术检测肝细胞活性氧簇(ROS)含量;荧光定量PCR和Western blot测定肝组织血红素氧合酶-1(HO-1)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)表达;Western blot测定肝组织p38MAPK,p-p38MAPK蛋白表达.研究发现氧化苦参碱能不同程度降低FBG,TG,TC和FFA,升高肝脏SOD,GSH-Px活性,降低MDA和ROS含量;氧化苦参碱50,100 mg·kg-1组γ-GCS,HO-1 mRNA和蛋白表达均升高,氧化苦参碱组p-p38MAPK表达均降低.结果表明氧化苦参碱能通过抑制p38 MAPK磷酸化水平减轻氧化应激,改善高脂诱导小鼠的胰岛素抵抗.
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黄葵胶囊对阿霉素肾病肾组织炎症信号通路p38MAPK的干预作用
目的:阐明黄蜀葵花(Abelmoschus manihot,AM)提取物制剂——黄葵胶囊(Huangkui capsule,HKC)调节阿霉素肾病(adriamycin-induced nephropathy,ADRN)模型p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路从而改善肾组织炎症性损伤的机制.方法:将19只SD大鼠随机分为假手术组、对照组和HKC组.对HKC组和对照组大鼠行右侧肾摘除术,并在4周内分2次经颈静脉注射阿霉素(adriamycin,ADR)建立ADRN模型.HKC组大鼠于第2次注射ADR后经灌胃给予HKC悬浊液,对照组和假手术组大鼠同时经灌胃给予蒸馏水,共干预4周.在HKC和蒸馏水干预前和干预后第1,2,3,4周末,分别称量大鼠体重,并检测24 h尿蛋白排泄量(24 h urinary protein excretion,Upro).肾摘除术后第8周末处死全部大鼠,抽取血液,摘除左肾并称重,观察血清生化指标、肾小球形态特征、肾小球α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原(collagen type Ⅰ)表达特征、肾小球巨噬细胞(macrophage,Mφ)浸润特征等,并且检测肾组织转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1,p38MAPK,磷酸化p38MAPK(phosphorylated p38MAPK,p-p38MAPK)蛋白相对表达量.结果:与对照组大鼠比较,HKC改善了模型鼠的蛋白尿和血清白蛋白(albumin,Alb),抑制了模型鼠系膜细胞(mesangial cell,MC)增殖、细胞外基质(extracellular matrix,ECM)及其胶原成分沉积,减轻了肾小球α-SMA,Ⅰ型胶原表达,减轻了肾小球ED1+,ED3+浸润,下调了模型鼠肾组织TGF-β1,p-p38MAPK蛋白表达.结论:HKC在体内具有减轻肾组织炎症性损伤的作用;HKC通过下调肾组织p38MAPK信号通路中关键信号分子——p-p38MAPK的蛋白表达,干预其相关信号通路的信号转导途径,减少肾组织内TGF-β1的表达和炎症细胞的浸润、活化,从而改善肾组织的炎症性损伤.
关键词： 黄葵胶囊 阿霉素肾病 炎症信号通路 p38MAPK 磷酸化p38MAPK -
基于p38MAPK通路初探大黄黄芩配伍对内毒素血证模型大鼠肝脏炎症的调节机制
为了探究大黄黄芩药对对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的内毒素血证模型大鼠肝脏炎症的调节机制,选取取雄性SD大鼠50只,随机分为空白组、模型组、地塞米松组、药对高剂量组、药对低剂量组,每组10只.各组大鼠给予相应药物进行预防性给药,连续给药7d.末次给药结束0.5h后尾静脉注射LPS(5 mg· kg-1)造模,后每0.5h测定一次动物肛温并记录,于造模后4h处死动物,测定脾脏胸腺系数;采用ELISA法检测肝组织中细胞因子白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;采用比色法测定肝组织中一氧化氮(NO)含量;采用Western blot法检测肝组织中Toll样受体蛋白4(Toll样受体-4),p38MAPK,磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)及一氧化氮合成酶(iNOS)蛋白相对表达量.结果显示,与空白组大鼠相比,模型组大鼠肝组织中TLR4蛋白表达、iNOS蛋白表达、p38磷酸化表达升高,IL-1β,NO,TNF-α含量显著升高(P＜0.05或P＜0.01).与模型组比较,药对高剂量能显著降低大鼠肝组织中IL-1β,NO,TNF-α的表达(P＜0.05或P＜0.01),下调iNOS蛋白表达与p38磷酸化表达(P＜0.05),但对TLR4蛋白并未出现显著的回调作用;药对低剂量能显著降低模型大鼠肝组织中IL-1β,NO的表达(P＜0.01),显著下调iNOS蛋白表达(P＜0.01),对p38磷酸化表达具有一定的下调趋势但不具有统计学意义,而对TLR4蛋白表达并没有表现出一定降低作用.大黄黄芩配伍使用可能是通过减少p38蛋白的磷酸化表达从而阻断p38MAPK信号通路,来减少iNOS蛋白表达和炎性因子IL-1β,NO,TNF-α的释放,从而达到减缓炎症反应保护机体组织的作用.
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补肾清肝中药配伍对间歇性低氧诱导人脐静脉内皮细胞损伤模型p38MAPK/NF-κB信号通路的干预效应研究
研究补肾清肝中药配伍对间歇性低氧致人脐静脉内皮细胞损伤模型p38MAPK/NF-κB信号通路的干预效应.实验采用改良的间歇性低氧诱导人脐静脉内皮细胞建立体外细胞损伤模型,以补肾清肝中药有效成分配伍(异钩藤碱、桃叶珊瑚苷及川芎嗪)作为干预药物,首先进行中药优配伍浓度体外筛选,然后选择优配伍浓度作为干预剂量,观察其对模型p38MAPK/NF-κB信号通路的干预效应.结果显示异钩藤碱、桃叶珊瑚苷及川芎嗪在0.01 mg·L“时具有佳的体外抗炎效应.间歇性低氧组NF-κB p65入核量及p-IκB较对照组与其他各组均显著增加,同时免疫荧光染色NF-κB p65可见间歇性低氧组出现明显NF-κB p65核移位表现,内皮细胞黏附程度明显增加;与间歇性低氧组相比,p38MAPK抑制剂组及补肾清肝中药配伍组p-p38MAPK,NF-κB p65入核量及p-IκB表达量均明显较少,内皮细胞黏附明显被抑制.该研究表明,补肾清肝中药优浓度配伍通过将抑制p38MAPK的磷酸化作为起始,继而阻断了NF-κB的核移位行为,抑制其转录功能,实现对间歇性低氧诱导血管内皮细胞损伤模型的保护效应.
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氧化苦参碱下调p38MAPK磷酸化及改善胶原沉积抑制TGF-β1诱导的CFBs增殖
目的:研究氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)对TGF-β1诱导心肌成纤维细胞(CFBs)增殖的作用,并分析可能的作用机制.方法:试验分为空白对照组(无血清DMEM)、模型组(20 μg·L-1 TGF-β1)、OMT低剂量组(OMT-L组,1.89×10-4 mol·L-1)、OMT中剂量组(OMT-M组,3.78×10-4 mol·L-1)、OMT高剂量组(OMT-H组,7.56 ×10-4mol·L-1)和SB203580(p38MAPK阻断剂,1×10-5 mol·L-1).免疫细胞化学法鉴定CFBs中波形蛋白,测定TGF-β1诱导CFBs 24 h后α-SMA的表达情况;采用MTT法分析CFBs增殖的抑制作用;苦味酸天狼星红染色观察Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的沉积;Western blot分析p38MAPK,p-p38MAPK,Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白的表达.结果:MTT结果提示3.78×10-4,7.56×10-4mol·L-1的OMT对TGF-β1诱导的CFBs异常增殖具有抑制作用(P ＜0.01);α-SMA免疫细胞化学实验提示OMT能够抑制CFBs-myFBs转换;苦味酸天狼星红染色显示OMT能明显减少Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的沉积;Western blot表明OMT可以显著抑制TGF-β1诱导Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的沉积及p38MAPK的磷酸化(P＜0.01).结论:OMT可抑制TGF-β1诱导CFBs增殖的作用并抑制相关胶原蛋白的表达,改善心肌纤维化,其机制可能与抑制p38MAPK磷酸化有关.
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P38MAPK的激活上调SH-SY5Y细胞APP表达及组蛋白H3乙酰化水平
目的 研究P38MAPK信号通路的激活对淀粉前体蛋白(APP)表达的影响及其相关表观遗传学机制.方法 体外培养神经母细胞瘤细胞(SH-SV5V),Western blot法检测SH-SYSY的APP蛋白表达及组蛋白乙酰化酶(HAT)和组蛋白去乙酰化酶(HDAC)的表达;吸光度值法检测组蛋白3(H3)和组蛋白4(H4)整体乙酰化水平.结果 P38MAPK信号通路经特异性激动刺激活SH-SY5Y 72 h后,APP表达明显增高至对照组的1.5倍(0.41±0.09 vs0.28±0.08,P<0.01);同时组蛋白H3整体乙酰化水平增高(0.20±0.04 vs 0.06±0.03,P<0.01),但H4乙酰化水平无明显改变;组蛋白乙酰化酶CBP表达增高至对照组的2.5倍(0.30±0.03 vs 0.11±0.05,P<0.01),而组蛋白去乙酰化酶HDAC3表达下降至对照组的40%(0.19±0.05 vs 0.49±0.03,P<0.01).结论 P38MAPK信号通路可能通过上调组蛋白乙酰化水平增加SH-SYSY的APP蛋白表达.
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低氧预适应小鼠脑组织内P38 MAPK磷酸化水平增高
目的 探讨P38丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,P38 MAPK)在小鼠脑低氧预适应形成过程中的作用.方法 用成年雄性BALB/c小鼠制备小鼠整体低氧预适应模型,小鼠随机分为正常对照(H0)、早期(H1～H4)和延迟性(H5～H6)低氧预适应等7组;应用Western bolt并结合Gel Doc凝胶成像系统,定量检测小鼠脑组织内P38 MAPK磷酸化水平和蛋白表达量.结果 与H0组小鼠相比,H2～H6组的海马和皮层及H3～H6组的下丘脑中P38 MAPK磷酸化水平明显增高 (P＜0.05,每组n=6);H1～H6组的皮层、海马和下丘脑中P38 MAPK蛋白表达量无明显变化.结论 P38 MAPK磷酸化激活而非蛋白表达量的变化可能参与了小鼠脑低氧预适应的发生、发展过程.
