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高锰酸钾褪色分光光度法测定工作场所空气中硫氢化钠
目的 建立高锰酸钾褪色分光光度法测定工作场所空气中硫氢化钠方法.方法 空气中硫氢化钠用微孔滤膜采集后,加10 mL纯水振荡洗脱,取5 mL洗脱液,加1.2 mmol/L酸性高锰酸钾溶液5 mL,溶液褪色,根据褪色程度与标准系列比较定量.结果 方法检测限为9.5 μg/m3,线性范围为0～90 μg,r=-0.9995,RSD =0.23％ ～ 1.93％,加标回收率范围99.2％ ～ 100.7％.结论 方法操作简便,准确、灵敏、干扰少,能够满足工作场所空气中硫氢化钠的检测要求.
关键词： 硫氢化钠 高锰酸钾褪色分光光度法 空气 -
硫化氢对柯萨奇病毒感染的病毒性心肌炎小鼠的保护作用
目的研究硫化氢对柯萨奇病毒B3（Coxsachievirus B3， CVB3）感染的病毒性心肌炎小鼠的保护作用以及胱硫醚γ-裂解酶（ CSE）/硫化氢（ H2 S）通路在其体内的表达情况。方法将110只5周龄的雄性BALB/c小鼠随机分为4组：正常对照组、病毒性心肌炎组、硫氢化钠（外源性H2 S供体）组和DL-炔丙基甘氨酸（ PAG，CSE不可逆抑制剂）组。以腹腔注射CVB3建立急性病毒性心肌炎模型，接种当天记为第0天，24 h后每组每日经腹腔分别注射相应干预药物。分别于接种后第4天和第10天从各组随机抽取10只处死，留取血清和心肌标本。观察心肌炎症病理改变，酶联免疫吸附法检测H2 S及IL-6、TNF-α等炎症因子含量，逆转录-聚合酶链反应法检测心肌组织CVB3、CSE的mRNA表达水平，免疫组化及蛋白质印迹法定性、定量检测CSE蛋白水平表达。结果与正常对照组比较，病毒性心肌炎组血清和组织H2 S浓度、CSE mRNA、CSE蛋白水平表达均明显下调，给予NaHS干预可明显上调H2 S水平，减轻心肌损伤、减轻炎症细胞浸润以及间质水肿，对病毒CVB3 mRNA的表达有抑制作用，而给予PAG干预，可明显抑制H2 S和CSE表达，加重心肌损伤、炎症细胞浸润及间质水肿，促进CVB3 mRNA的复制。结论在病毒性心肌炎中，CSE/H2 S通路表达明显受到抑制，给予PAG干预可明显抑制该通路的表达，加重心肌损伤，促进病毒复制，外源性供给硫化氢可对感染心肌起到保护作用，且可抑制病毒复制。
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硫化氢对MDA及GSH在大鼠肝星状细胞氧应激中表达的影响
目的:探讨硫化氢对MDA与GSH在大鼠肝星状细胞氧应激中表达的影响.方法:将HSCT6分为8组:空白组(B组,HSC-T6)、对照组(C组,B组+500 μmol/L Fe-NTA)、NaHS组(N1:C组+20 μmol/L NaHS;N2:C组+100 μmol/L NaHS;N3:C组+200μmol/L NaHS)、格列苯脲组(G1:C组+20μmol/LGLBN;G2:C组+200 μmol/L GLBN;G3:C组+700 μmol/L GLBN).用MDA试剂盒测试血清MDA含量;用GSH试剂盒测定上清中GSH含量.结果:24 h后MDA含量对照组和空白组有明显差异(P<0.05),而GSH含量12与24 h均有明显差异(均P<0.05).给予NaHS后,MDA含量24 h N2和N3组与对照组均有明显差异(4.48±0.07 nmol/mg prot,3.58±0.02 nmol/mg protvs 5.05±0.07 nmol/mg prot,均P<0.05),12与24 h GSH含量N2和N3组与对照组有明显差异(35.57±2.02 mg/g prot,36.92±2.30 mg/g protvs 33.64±2.95 mg/g prot;36.49±2.08 mg/gprot,37.59±2.03 mg/g prot vs 31.06±3.08 mg/g prot,均P<0.05).给予GLBN处理后,各项指标结果与给予NaHS处理后结果相对应,各组与相对应组比较均有明显差异(均P<0.05).结论:氧应激下硫化氢对HSC细胞具有保护作用,可抑制肝纤维化的发生发展.
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外源性硫化氢通过抑制凋亡减轻肺移植后肺缺血再灌注损伤
目的：观察外源性H2S对大鼠移植肺细胞凋亡的影响，进一步探讨其在肺移植后肺损伤中发挥保护作用的可能机制。
方法：以硫氢化钠(NaHS)作为外源性H2S供体，30只Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠随机分为3组（n=6）。假手术组（sham组）：开胸游离左肺门，未行肺移植；肺移植组（LTx组）：左肺移植后开放再灌注2 h；NaHS干预组（H2S组），在再灌注开放前1 h腹腔注射NaHS（14μmol/kg）。再灌注2 h后行以下检测：①肺损伤指标：左肺组织湿干比（W/D）；左肺组织HE染色观察病理学损伤改变；②凋亡相关指标：TUNEL技术检测细胞凋亡并计算凋亡指数（apoptosis index，AI）；Western Blot技术检测凋亡执行蛋白Caspase-3的表达；RT-PCR技术检测各组肺组织中凋亡相关基因Bax及Bcl-2 mRNA的表达。 -
硫化氢供体对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞小窝蛋白的影响
目的 探讨硫化氢供体硫氢化钠(NaHS)对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞小窝蛋白1(Cav-1)的影响.方法 采用间断常压低氧法建立低氧大鼠模型.利用混合气体培养法制备大鼠低氧肺动脉平滑肌细胞模型.将32只SD大鼠随机分为4组(每组8只):常氧组、低氧组、常氧+NaHS组和低氧+NaHS组.免疫组织化学方法检测肺小动脉中膜厚度、肌化及增殖程度.采用荧光探针法检测活性氧(ROS)含量.蛋白免疫印迹法检测Cav-l的表达.结果 低氧组大鼠右心室收缩压、右心室质量指数、肺小动脉中膜厚度、肌化及平滑肌增殖程度明显增加;低氧组大鼠肺动脉平滑肌细胞ROS产生增加及Cav-1表达降低;NaHS给予大鼠可改善肺动脉血流,缓解肺动脉中膜增厚,抑制肺动脉平滑肌细胞增殖,减少肺动脉平滑肌细胞ROS产生及增加Cav-1表达.结论 NaHS可通过降低低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞ROS产生,上调Cav-1表达,抑制肺动脉平滑肌细胞增殖,缓解肺动脉重构.
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胱硫醚-γ-裂解酶/硫化氢系统在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的保护作用
目的 研究胱硫醚-γ-裂解酶/硫化氢(CSE/H2S)系统在大鼠肝脏缺血再灌注损伤中的保护作用,探讨其病理生理学意义.方法 将72只健康Wistar大鼠平均分为4组:假手术组(sham组)、缺血再灌注组(IR组)、IR+硫氢化钠组(IR+NaHS组)、IR+DL-炔丙基甘氨酸组(IR+PAG组).采用Pringle法夹闭30 min后恢复血流建立缺血再灌注损伤模型.再灌注后1、3、6 h取材检测血清H2S水平和CSE活性、肿瘤坏死因子(TNF)-α和白介素(IL)-10水平、肝组织中凋亡蛋白TNF-α表达、观察细胞凋亡状态以及肝脏组织学变化.结果 与sham组比较,IR组各时间点的血清H2S水平以及CSE活性均明显上升(P＜0.05),血清炎性细胞因子含量明显增高(P＜0.01),凋亡蛋白TNF-α表达也显著增加(P＜0.05).NaHS的应用可显著降低缺血再灌注后血清中炎性因子水平(P＜0.01)、减少细胞凋亡蛋白表达(P＜0.05)及减轻肝脏损伤(P＜0.05),而应用抑制剂PAG则结果相反.结论 CSE/H2S系统参与肝脏缺血再灌注损伤的内源性防御体系,应用外源性H2S通过参与炎症反应、减轻肝细胞损伤、抑制凋亡,从而在肝脏缺血再灌注损伤中起到保护作用.
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硫氢化钠抑制离体大鼠急性心肌缺血损伤作用的线粒体机制
目的 研究硫氢化钠(NaHS)对离体大鼠急性心肌缺血损伤的线粒体保护途径,并初步探讨其可能机制.方法 通过结扎冠状动脉左前降支,制备离体急性心肌缺血损伤模型.心肌缺血2h后,模型组继续灌注K-H液2 h;NaHS组分别灌注含NaHS 5,10和20 μmol· L-1的K-H液2h.透射电镜观察心肌线粒体超微结构;差速离心法分离线粒体,测定心肌线粒体活力、膜肿胀度及线粒体总ATP酶、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)含量;测定冠脉流出液中乳酸脱氢酶(LDH)活性.结果 与假手术组相比,模型组线粒体膜肿胀,线粒体活力下降;模型组线粒体内总ATP酶、GSH-Px和SOD活性[分别为4.76±0.25,68.59±2.00和(23.37±1.13)kU·g-1蛋白]低于假手术组[分别为11.23±0.65,133.37±3.47和(74.42±1.97)kU·g-1蛋白],MDA含量[(1.45±0.09) μmol· g-1蛋白]高于假手术组[(0.85±0.05) μmol· g-1蛋白];冠脉流出液中LDH活性(104±6)U·L-1高于假手术组(50±3) U·L-1(P＜0.01).与模型组相比,NaHS 5,10和20 μmol·L-1组明显抑制膜肿胀,线粒体活力有所恢复;线粒体内总ATP酶[分别为5.06±0.22,7.72±0.37和(10.57±0.44)kU·g-1蛋白]、GSH-Px[分别为87.94±1.65,106.66±2.14和(125.57±2.12)kU·g-1蛋白]和SOD[分别为39.00±1.00,57.46±1.21和(69.56±1.56)kU·g-1蛋白]活性明显升高,MDA[分别为1.28±0.09,1.06±0.06和(0.89±0.04) μmol· g-1蛋白]含量降低(P＜0.05或P＜0.01);冠脉流出液中LDH活性[分别为84±3,70±4和(60±4)U·L-1]显著减低(P＜0.01).结论 NaHS对离体急性心肌缺血损伤有保护作用,其机制可能与降低线粒体脂质过氧化水平有关.
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42吨硫氢化钠流入河道的事故调查
某日下午2时许，涟源市青山硫铁矿存放在梅子塘火车站(涟源钢铁厂专线铁路)装有42t硫氧化钠的铁罐车被不法之徒砸掉阀门，即时，硫氢化钠液体喷射而出，浸没铁罐车前面的空坪后，经明沟向附近的七星街镇归水河流去。不久，硫氢化钠流过的河道浮起了一层死鱼，并顺水漂移，河水变成乳白色，并有臭鸡蛋嗅味。该次事故的发生，致使沿河两岸包括自办水厂的8家水厂被迫关闭，计50余万人口生活饮用水发生困难。 事故发生后，当地卫生、环保、水利、公安等部门紧急行动，各负其责，进行水质追踪监测和事故调查。涟源市卫生防疫站对河水进行跟踪监测，即随HS-液在河水中的流向进行设点采样。
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硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶系统在肺缺血/再灌注损伤中的作用
目的 探讨硫化氢/胱硫醚-γ-裂解酶(H2S/CSE)系统在肺缺血/再灌注损伤(LIRI)中的作用.方法 将40只SD大鼠随机均分成假手术组、LIRI组、NaHS组、炔丙基甘氨酸(PPG)组4组.制备在体大鼠单肺原位LIRI模型.NaHS组和PPG组分别于制模前腹腔注射NaHS 28 μmol/kg或PPG 30 mg/kg;假手术组和LIRI组给予生理盐水0.5 ml.实验结束后取血,检测血浆H2S浓度、超氧化物歧化酶(SOD)、髓过氧化物酶(MPO)活性和丙二醛(MDA)含量;检测肺组织H2S含量、CSE活性和CSE mRNA表达水平;计算肺系数及肺泡损伤率(IAR);并观察肺组织病理改变.结果 与假手术组比较,LIRI组血浆和肺组织H2S水平、肺组织CSE活性和CSE mRNA表达均降低(均P<0.01),血浆SOD降低,MDA、MPO升高(均P<0.01);肺系数、IAR增高(均P<0.01);同时LIRI组肺组织有明显的病理改变.与LIRI组比较,预先给予NaHS组血浆和肺组织H2S水平、肺组织CSE活性和CSE mRNA表达均升高(均P<0.01),血浆SOD升高,MDA、MPO降低(均P<0.01),肺系数、IAR降低(均P<0.01);同时肺组织病理改变减轻.而预先给予PPG组则相反,可加重LIRI所致的肺损伤(P<0.05或P<0.01).结论 H2S/CSE系统功能下调参与LIRI的病理过程,预先给予NaHS对肺组织有保护作用.
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硫氢化钠对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化及结缔组织生长因子表达的影响
目的 探讨硫氢化钠(NaHS)对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌纤维化及结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响.方法 2016年1月—2016年12月于武汉市第一医院无特定病原体(SPF)级动物实验室完成实验.通过腹主动脉缩窄术构建CHF大鼠模型,将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、NaHS低剂量组和NaHS高剂量组,每组6只.治疗4周后,采用超声心动图检测每组大鼠心功能,采用HE及Masson染色观察每组大鼠心肌病理形态变化,采用荧光定量PCR(qPCR)和Western blot分别检测各组大鼠心肌组织转化生长因子-β1(TGF-β1)和CTGF mRNA及蛋白的表达.结果 各组间比较左心室舒张末内径(LVEDD)、左心室收缩末内径(LVESD)、左心室质量/体质量(LVW/BW)、心脏质量/体质量(HW/BW)及左心室射血分数(LVEF)有显著差异(F=15.898、10.010、46.437、21.520、9.743,P=0.004、0.013、0.000、0.000、0.014).与模型组比较,NaHS低剂量组和NaHS高剂量组的LVEDD、LVESD、LVW/BW及HW/BW均明显降低(P<0.05),而LVEF明显升高(P<0.05),心肌组织病理形态学明显改善,心肌组织中TGF-β1和CTGF mRNA及蛋白的表达显著降低,且高剂量组的效果优于低剂量组(P<0.05).结论 NaHS能够降低CHF大鼠的心肌纤维化程度,改善心功能,其作用机制可能与抑制心肌组织中TGF-β1和CTGF的过度表达有关.
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静脉使用不同剂量硫氢化钠对正常大鼠机体的影响
目的 观察静脉使用硫化氢(H2S)供体硫氢化钠(NaHS)对正常Wistar大鼠机体的影响.方法 以正常雄性成年Wistar大鼠为实验对象,随机分为对照组、NaHS 2.8 μmol/kg组、NaHS 8.4 μmol/kg组、NaHS 14.0 μmol/kg组;分别在给药后0.5 h、1 h、2 h、4 h测血流动力学改变,4 h后用亚甲蓝分光光度法测定血浆中H2S浓度;用ELISA法测定血浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、髓过氧化物酶(MPO) 浓度,同时光镜下观察大鼠心、肝、脑、肺及肾组织细胞形态学变化.结果 与对照组相比,NaHS 2.8 μmol/kg组、NaHS 8.4 μmol/kg组、NaHS14.0 μmol/kg组在不同时间点对血流动力学的影响无统计学意义,而血浆中H2S含量呈浓度依赖性的增加;NaHS14.0 μmol/kg组可显著增加血浆中TNF-α、MPO浓度(P<0.05),使肺组织细胞水肿并有炎细胞浸润、出血.结论 血浆中H2S的含量随NaHS浓度的增加而增加;NaHS14.0 μmol/kg静脉注射可增加正常大鼠血浆中TNF-α、MPO的浓度并使肺脏发生形态学的改变,而NaHS8.4 μmol/kg及2.8μmol/kg静脉注射对大鼠机体是安全的.
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硫氢化钠对糖尿病视神经病变大鼠氧化应激及血浆睫状神经营养因子水平的影响
目的：探讨外源性硫化氢（H2S）供体硫氢化钠（NaHS）对糖尿病（DM）大鼠视神经病变（DON）的防治作用及其对氧化应激睫状神经营养因子（ CNTF）的影响。方法在50只SD大鼠随机抽取10只作为对照组，另40只建立DON模型，对32只造模成功大鼠以随机数字表法随机分为DM模型组和NaHS处理组，各16只。 NaHS处理组通过玻璃体腔注射NaHS生理盐水溶液（剂量为100μmol／kg体重），对照组和DM模型组注射等量生理盐水，1次／d ，共8 w。对三组大鼠的视神经髓鞘切片行劳克坚牢蓝染色，观察三组切片中视神经髓鞘结构的组织病理学改变，并比较髓鞘所占比率的差异，以紫外分光光度法测定血浆中的H2S水平，分别采用试剂盒检测血浆中氧化应激指标活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（ SOD）水平，酶联免疫法（ ELISA）试剂盒检测血浆CNTF水平。结果8 w 后三组大鼠血浆中 H2 S水平比较差异显著，且 NaHS 处理组高于DM模型组和对照组（P＜0．05）；显微镜下可见DM模型组与NaHS处理组大鼠的视神经髓鞘结构出现明显溃变，NaHS处理组溃变程度较DM模型组明显减轻，两组髓鞘比率显著低于对照组，而NaHS处理组高于糖尿病模型组（P＜0．05）；DM模型组和NaHS处理组大鼠的ROS和MDA水平显著高于对照组，而NaHS处理组水平低于DM模型组（P＜0．05）；DM模型组和NaHS处理组大鼠的SOD水平及CNTF水平均低于对照组，而NaHS 处理组水平高于DM模型组（P＜0．05）。结论玻璃体腔注射NaHS可作为外源性H2S供体，提高体内的H2S水平，而H2S可以防治DON，其机制可能与改善氧化应激损伤，提高血浆中CNTF水平有关。
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钾通道Kv4.2、Kv1.4在硫化氢后处理对大鼠短暂全脑缺血神经保护中的作用研究
目的 研究硫氢化钠(sodium hydrosulfide,NaHS)后处理对短暂全脑缺血大鼠海马中钾通道Kv4.2和Kv1.4 mRNA表达变化的影响及其脑保护作用,从而探讨NaHS对大鼠短暂全脑缺血神经保护作用的机制.方法 用4VO方法建立大鼠短暂性全脑缺血(transient global cerebral ischemia,tGCI)模型,大鼠被随机分配到3组,分别为:假手术组(sham)、tGCI组、NaHS后处理组.NaHS后处理组为 tGCI之后1 d,给予大鼠腹腔注射NaHS 24 μmmol/kg或者180 μmmol/kg.通过尼氏染色与NeuN免疫染色确定海马神经元的死亡,通过RT-PCR方法检测海马组织Kv4.2和Kv1.4 mRNA 水平的表达变化.结果 (1)与tGCI组比较,在tGCI之后1 d给予24 μmol/kg NaHS后处理使海马CA1区存活细胞数目显著增加,而高剂量的 NaHS(180 μmol/kg)后处理对tGCI大鼠海马CA1区则无明显的保护作用.(2)在Re 26 h和Re 48 h,海马组织中Kv4.2、Kv1.4的mRNA 表达水平均明显低于假手术组(P<0.05).在Re 26 h+NaHS组,kv4.2(1.24±0.08)和kv1.4(1.11±0.07)的mRNA表达水平均分别高于Re 26 h组的kv4.2(0.75±0.04)和kv1.4(0.79±0.06),差异均有显著性(P<0.05).结论 外源性NaHS可能通过上调大鼠tGCI后海马区Kv4.2和Kv1.4 mRNA的表达,从而导致膜电位超极化,降低神经元兴奋性和氧耗,继而保护神经元免受脑缺血损伤.
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硫化氢与大鼠急性重症胰腺炎相关性的实验研究
目的 探讨硫化氢(H2S)对大鼠急性重症胰腺炎(SAP)组织损伤的影响.方法 健康雄性大鼠160只,大鼠随机分四组:对照组,n=40;SAP组,n=40;SAP+硫氢化钠(NaHS)组,n=40;SAP+ DL-炔丙基甘氨酸(PAG)组,n=40.每组随机分为四小组,分别对应末次注射L-Arg后3h、12h、24 h、36 h四个时间点,每小组n=10.分别测定血清H2S、淀粉酶、胰腺组织中胱硫醚-γ-裂解酶(Cystathionine-γ-synthase,CSE)含量、组织病理形态学变化.结果 SAP+ NaHS组血清淀粉酶较SAP组有显著升高;CSE表达与SAP组无显著性差异;镜下见比SAP组更早出现坏死和小叶结构破坏.SAP+ PAG组与SAP组对照发现,预先腹腔注射PAG后,血清淀粉酶、H2S含量及组织CSE含量明显降低,其差异有显著性,病理结果显示,显著延缓了胰腺组织损伤的出现,出血、炎症细胞浸润明显减少,Grewal胰腺病理损伤评估证实与SAP组有显著差异.结论 血清H2S含量与组织损伤呈正相关,PAG有减轻大鼠胰腺炎模型胰腺组织的损伤作用.
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Ki67和p53蛋白表达在外源性硫化氢抗内皮细胞老化过程中的作用
目的 探索外源性硫化氢(H2S)抗内皮细胞老化过程中对Ki67和p53表达量的影响.方法 将大鼠主动脉内皮细胞(RAECs)随机分为3组,即年轻组(原代RAECs传至第4代)、老年组(原代RAECs传至第12代)、硫氢化钠(NaHS,细胞内H2S的供体,即外源性H2S)组(RAECs从第4代开始给予NaHS 10μ mol/L处理至第12代).用β-半乳糖苷酶(SAβ-gal)染色法鉴定细胞老化程度,DAPI荧光染色检测老化相关的异染色质位点(SAHF)的表达变化,Western blot方法检测Ki67及p53蛋白的表达量.结果 给予NaHS处理后,细胞老化程度及SAHF的表达明显低于老年组(P ＜0.01);Ki67及p53蛋白在老年组RAECs中表达量明显低于年轻组(P＜0.01),而NaHS处理后Ki67及p53表达量较老年组明显增加(P＜0.05).结论 外源性H2S(即NaHS)延缓内皮细胞老化过程中Ki67及p53基因的表达显著增加,提示外源性H2S延缓血管内皮细胞老化可能与提高Ki67、p53表达有关.
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硫化氢对大鼠肺缺血再灌注氧化损伤的影响
目的 探讨硫化氢对大鼠肺缺血再灌注氧化损伤的影响.方法 以硫化氢钠(NaHS)作为硫化氢供体.50只健康SD大鼠,随机分成假手术组、肺缺血再灌注组及硫氢化钠(NaHS)组,后者进一步分为NaHS 10、20、30μmol·kg-13个剂量组;每组10只.NaHS组实验前5 d开始每天按体重分别腹腔注射不同剂量的NaHS,实验前15min再次给药;假手术组和肺缺血再灌注组同时同方法给予生理盐水1ml·kg-1.建立大鼠在体肺缺血再灌注模型,实验结束时左心房放血处死大鼠,观察肺组织病理改变,测定肺湿/干重(W/D)值及肺组织匀浆内丙二醛(MDA)、髓过氧化物酶(MPO)含量及超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性.结果 肺缺血再灌注组肺组织W/D值、MDA、MPO水平均较假手术组明显升高(P<0.01),而NaHS组上述指标高于假手术组但低于肺缺血再灌注组(均P<0.05);肺缺血再灌注组肺组织SOD、GSH-Px活性较假手术组明显降低(P<0.01),NaHS组上述指标低于假手术组但明显高于肺缺血再灌注组(P<0.05或P<0.01).上述指标在NaHS 3个剂量组间的差异无统计学意义.肺组织病理学检查结果显示,NaHS组肺缺血再灌注损伤减轻.结论 硫化氢具有一定的抗大鼠肺缺血再灌注氧化损伤的能力,其作用机制与清除氧自由基及增加内源性抗氧化酶活性有关.
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外源性血管内皮衍生超极化因子对脑缺血再灌注损伤的影响
目的:硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)为一种假定的血管内皮衍生超极化因子(endotheliurn- derived hyperpolarizing factor,EDHF),本研究探讨外源性H2S,即外源性假定的EDHF对脑缺血再灌注损伤的影响.方法:采用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血(MCAO)再灌注损伤模型,测定动物行为功能、脑组织梗死体积、脑组织含水量、血清乳酸脱氢酶( LDH)活性及丙二醛(MDA)含量,用HE染色法观察脑组织学改变.结果:H2S供体硫氢化钠(NaHS,i.v.)0.195、0.390、0.780 mg/kg能明显改善神经功能状态,降低缺血再灌注后脑梗死体积百分比,降低脑含水量,显著地抑制局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠血清MDA含量和LDH活性,并不同程度地改善大鼠脑病理组织学的变化.结论:NaHS可明显改善大鼠脑缺血再灌注性损伤,提示外源性EDHF (H2S)有抗脑缺血再灌损伤作用.
关键词： 内皮依赖性超极化因子 硫化氢 硫氢化钠 脑缺血再灌注损伤 -
硫化氢下调MMP-9的表达抑制肝癌HepG2细胞的迁移
目的 研究硫化氢(H2S)对人肝癌HepG2细胞迁移及MMP-9表达的影响.方法 划痕愈合和Transwell实验检测H2S供体硫氢化钠(NaHS)对HepG2细胞迁移的影响;Western blot检测NaHS对HepG2细胞MMP-9表达的影响.结果 划痕实验结果显示,200和400 μmol·L-1的NaHS作用HepG2细胞16 h后,较未处理组划痕距离明显增加(P＜0.05),表明H2S可抑制HepG2细胞的愈合能力.Transwell实验结果显示,100、200和400 μmol·L-1的NaHS作用HepG2细胞24 h后,穿膜细胞数分别为(18.3±1.16)、(16.3±1.52)、(12.3±0.58)个,较未处理组的(24.0±1.73)个明显减少(P＜0.05),表明H2S可抑制HepG2细胞迁移.Western blot结果显示,100、200和400 μmol·L-1的NaHS作用HepG2细胞24 h后,MMP-9蛋白表达明显降低(P＜0.05).结论 H2S可抑制人肝癌HepG2细胞的迁移,其机制可能与下调MMP-9有关.
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硫化氢在大鼠阿霉素心肌病发病中的意义
目的 探讨新型气体信号分子硫化氢(hydrogen sulfide,H2S)对阿霉素(adriamycin,ADR)心肌病大鼠心肌细胞凋亡的影响.方法 ♂性Wistar大鼠66只,随机分为6组①阿霉素组(ADR组,n=12):腹腔注射ADR,每次2.5mg·kg-1,1次/周,共用药10 wk;②ADR+小剂量NaHS组(n=12):ADR用药方法同ADR组,同时经腹腔注射H2S供体NaHS,2.8 μmol·kg-1·d-1,连续用药10 wk;③ADR+大剂量NaHS组(n=12):ADR用药方法同ADR组,同时经腹腔注射NaHS,14 μmol·kg-1·d-1,连续用药10 wk;④ADR+PPG组(12只):ADR用药方法同ADR组,同时经腹腔注射PPG 30 mg·kg-1·d-1,连续用药10 wk;⑤对照组(n=9):用相同容量的生理盐水代替ADR,给药方法同ADR组;⑥NaHS组(n=9):经腹腔注射NaHS,14 μmol·kg-1·d-1,连续用药10 wk.于第10周检测大鼠心功能和血流动力学指标,处死大鼠,取心肌组织制作病理切片,分别于光镜及透射电镜下观察其显微以及超微结构,用TdT介导dUTP缺口末端标记法(TUNEL)方法检测心肌细胞凋亡及用免疫组化测定心肌细胞中Fas和Bcl-2蛋白的表达,同时用敏感硫电极法测定血浆及心肌组织里的H2S含量.结果 阿霉素组大鼠左室内压大上升速率(+dp/dtmax)及左室内压大下降速率(-dp/dtmax)明显降低(P均＜0.01),心肌病理结果显示阿霉素组心肌细胞变性、线粒体和肌浆网水肿、细胞内空泡增多,呈心肌病样改变;心肌细胞凋亡数明显增加,心肌细胞中的Fas蛋白表达明显增加,Bcl-2蛋白的表达明显降低(P均＜0.01);同时大鼠血浆及心肌组织H2S含量均明显低于对照组(P＜0.01).经外源性补充H2S供体NaHS后,大鼠心功能较前明显改善,光镜及电镜显示ADR+小剂量NaHS组及ADR+大剂量NaHS组心肌组织病理损害程度明显较阿霉素组减轻;心肌细胞凋亡率明显降低,Fas蛋白表达明显降低,Bcl-2蛋白表达明显增加(P均＜0.01).ADR+PPG组与ADR组相比较,差异无显著性,NaHS组和对照组相比较,差异无显著性(P＞0.05).结论 H2S参与大鼠阿霉素心肌病的发病过程,外源性补充H2S供体可以改善阿霉素心肌病大鼠心功能,减轻心肌损伤,减少细胞凋亡,对其发病起到调节作用.
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硫化氢对创伤后应激障碍大鼠空间学习记忆能力及海马神经元放电的影响
目的：探讨创伤后应激障碍（posttraumatic stress disor-der，PTSD）大鼠行为学改变及脑内胱硫醚-β-合成酶（cysta-thionine-β-synthase，CBS）／硫化氢（hydrogen sulfide，H2 S）水平的变化，并研究外源性补充 H2 S 对大鼠行为学影响的作用及机制。方法应用连续单一应激方案制备创伤后应激障碍动物模型，用 Morris 水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力，Western blot 技术和亚甲基蓝法检测海马脑区 CBS ／H2 S体系含量，用多管微电极在体细胞外电生理记录海马神经元放电情况。结果①与正常对照组比较，PTSD 组大鼠逃避潜伏期增加（P ＜0.01），在平台所在象限停留时间百分比和通过原平台位置次数明显减少（P ＜0.01）；海马脑区的CBS ／H2 S 体系含量明显降低（P ＜0.01，P ＜0.05）。②与PTSD 组比较，PTSD ＋硫氢化钠（sodium hydrosulfide，NaHS）组大鼠逃避潜伏期减小（P ＜0.01），在平台所在象限停留时间百分比和通过原平台位置次数明显增加（P ＜0.01）。③微量压力注射 L-半胱氨酸（L-cysteine）使海马神经元自发放电频率明显升高（P <0.01）。结论PTSD 大鼠通过抑制海马脑区 CBS ／H2 S 体系导致空间学习记忆能力降低。H2 S改善 PTSD 大鼠空间学习记忆能力的机制可能与其增加海马神经元放电频率和兴奋性有关。
