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龟板对帕金森病大鼠行为和脑内多巴胺水平的影响
目的探讨益肾中药龟板对帕金森病大鼠的治疗作用.方法 6-羟基多巴胺脑内定位注射制备帕金森病模型,随机将40只SD大鼠分为实验组和对照组,观察动物单侧旋转行为以及多巴胺及其代谢产物3、4-二羟苯乙酸和高草酸含量的变化.结果造模8周后实验组帕金森病大鼠旋转圈数6.97±1.67比对照组9.45±1.75明显减少(P＜0.05);其纹状体内多巴胺(DA)及其代谢产物3、4二羟苯乙酸(DOPAC)、高香草酸(HVA)含量显著提高,分别为3.12±0.48,0.27±0.06和0.35±0.06,而对照组仅为0.49±0.04,0.07±0.03和0.27±0.03(P＜0.05).结论益肾中药龟板对大鼠帕金森病具有潜在的临床应用价值.
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龟板对脊髓损伤后大鼠功能和骨形态发生蛋白4表达的影响
目的观察龟板对大鼠损伤脊髓骨形态发生蛋白4(BMP4)表达和后肢功能恢复的影响.方法应用改良Allen脊髓损伤模型,于术后1、7、14、21、28 d分别对大鼠进行Tarlov评分和斜板试验检查后肢功能.应用免疫组织化学技术检测BMP4的表达,观察龟板对脊髓损伤后BMP4的影响.结果脊髓损伤后第1 d,在两组受损伤脊髓灰质中都可见到BMP4的表达.第14 d时达到高峰,龟板组为37.24±5.73,损伤组21.48±6.83(P＜0.05).龟板组可使损伤的脊髓BMP4持续高表达至术后第28 d,而损伤组仅持续表达至术后21 d.增加的BMP4阳性细胞数与神经功能的改善平行.结论龟板可减轻神经损伤症状和促进脊髓损伤后BMP4表达.
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龟板联合β-细辛醚对帕金森病模型大鼠作用及机制的初步研究
目的：研究龟板联合石菖蒲有效成分β-细辛醚对6-OHDA诱导的SD大鼠帕金森病（PD）模型的神经保护作用及机制。方法以大鼠自主活动度和滚轴实验研究动物的行为学，以中脑黑质酪氨酸羟化酶（TH）观察多巴胺能神经元的损伤程度，并观察纹状体中α-突触核蛋白（α-syn）含量来探讨药物作用机制。结果模型组自主活动次数、滚轴运动能力均显著低于正常对照组（P<0.05）；多巴胺能神经元中TH阳性细胞数明显减少；纹状体内的α-syn蛋白水平明显升高。龟板联合β-细辛醚给药后能明显改善模型组大鼠的行为学表现，增加TH阳性细胞数，降低纹状体内α-syn蛋白水平。结论龟板联合β-细辛醚具有神经保护作用，能对抗模型组大鼠PD模型中的神经损伤，其机制可能与下调α-syn蛋白水平有关。
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龟板对大鼠骨髓间充质干细胞向成骨分化的影响
目的探讨益肾中药龟板对大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)体外向成骨分化的影响.方法使用密度梯度法分离成年大鼠骨髓间充质干细胞,观察在培养液中添加不同浓度龟板血清条件下MSCs的成骨变化.应用形态学、碱性磷酸酶组织化学染色、Von Kossa 染色、骨钙素测定等方法观察细胞成骨活性.结果形态学表明,MSCs贴壁细胞呈集落生长,有成纤维细胞外观.龟板组碱性磷酸酶、钙化结节、骨钙素明显升高,与对照组比较具有显著性差异(P<0.05).结论 MSCs受龟板诱导高效地向成骨细胞分化,可以为体内骨组织工程提供种子细胞.
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补肾开窍方通过抑制IRE1/XBP1内质网应激通路发挥对帕金森病模型大鼠的神经保护作用
[目的]探讨补肾开窍方对6-羟基多巴(6-OHDA)诱导的帕金森病(PD)模型大鼠的神经保护作用及可能机制.[方法]将60只SD大鼠随机分为6组,即假手术组、模型组、石菖蒲挥发油组、龟板组、补肾开窍方组、IRE1抑制剂组,每组10只.采用大鼠左脑立体注射6-OHDA法建立PD大鼠模型.造模结束后,石菖蒲挥发油组大鼠给予30 mg/kg石菖蒲挥发油灌胃,龟板组大鼠给予3.77 g/kg龟板液灌胃,补肾开窍方组给予3.77 g/kg龟板液、30 mg/kg石菖蒲挥发油灌胃,IRE1抑制剂组大鼠给予15 mg/kg STF-083110腹腔注射,每日2次,给药30 d.高效液相色谱(HPLC)法测定纹状体内单胺类神经递质多巴胺(DA)的含量,流式细胞术测定中脑内酪氨酸羟化酶(TH)的表达率,蛋白免疫印迹(Western blot)法测定纹状体内葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP家族同源蛋白(CHOP)、磷酸化需肌醇酶1(p-IRE1)和X盒结合蛋白1(XBP1)的表达.[结果]与假手术组比较,模型组大鼠的自主运动功能、平衡能力与协调性及感觉运动整合功能显著降低(P<0.05),单胺类神经递质DA和TH表达显著降低(P<0.05),内质网应激(ERS)指标GRP78、CHOP表达及纹状体内p-IRE1、XBP1表达均升高(P<0.05).补肾开窍方可使大鼠的行为学改善,增加脑内DA和TH含量,使ERS指标GRP78、CHOP表达降低,降低纹状体p-IRE1和XBP1水平[与IRE1抑制剂组比较无显著性差异(P>0.05)].[结论]补肾开窍方可能通过抑制ERS的IRE1/XBP1通路对6-OHDA诱导的PD模型大鼠产生神经保护作用.
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龟甲及几种混伪品的鉴别
龟甲为常用中药,始载于<神农本草经>,列为上品.<本草图经>中记载:"龟甲入药,以生脱者为上."<本草纲目>中载"龟甲,古者上、下甲皆用之,至<日华>始用龟板,而后人遂主之矣."龟甲具有滋阴潜阳,益肾强骨,养血补心之功能,用于阴虚潮热、骨蒸、盗汗、头晕目眩、虚风内动、筋骨痿软、心虚健忘.
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龟板体外抗氧化活性的研究
目的:研究龟板的体外抗氧化活性,为抗衰老药物的筛选提供参考.方法:将龟板分别用石油醚、乙酸乙酯、95%乙醇等极性依次递增的溶剂进行提取得不同提取部位溶出物,用DPPH法进行体外抗氧化活性检测,并与抗坏血酸进行比较.结果:龟板95%乙醇提取部位溶出物与石油醚、乙酸乙酯部位提取物相比抗氧化活性均存在显著性差异(P＜0.01),且以95%乙醇提取部位溶出物体外抗氧化活性强,其EC50与抗坏血酸比较相差2.38个数量级.结论:龟板95%乙醇提取部位溶出物具有很强的体外抗氧化活性,可作进一步研究.
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龟板对脊髓损伤后脊髓雌激素α受体及其基因表达的影响
目的:观察龟板对脊髓损伤后脊髓雌激素α受体(ER-α)及其基因表达的影响.方法:以改良的Allen法建立大鼠脊髓损伤模型,随机分为对照组、模型组和龟板治疗组,用免疫组织化学和原位杂交方法检测脊髓中ER-α及其mRNA的表达.结果:模型组中脊髓ER-α受体及其mRNA的阳性细胞数与对照组比较显著减少;治疗组中ER-α及其mRNA的阳性细胞数与模型组比较显著增加.结论:龟板可增加脊髓损伤后脊髓ER-α及其基因的表达.
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龟板炮制传统方法的探讨
龟板为常用中药,来源于龟科动物乌龟 Chinemysreevesii( Gray)的背甲及腹甲.现就其传统炮制方法作一探讨.
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两种不同产地龟板抗氧化活性研究
[目的]研究两种不同产地龟科动物乌龟Chinemys reeresii(Gray)腹甲提取物的抗氧化活性.[方法]采用DPPH法分别测定两种不同产地龟板的石油醚、乙酸乙酯、95%乙醇等不同极性溶剂提取物的抗氧化活性.[结果]不同产地龟板95%乙醇提取物抗氧化活性均强;海南产龟板抗氧化活性比湖北汉阳产龟板强,差异有统计学意义(P＜0.01).[结论]不同产地的龟板所含抗氧化成分存在一定的差异.
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强肌健力口服液与龟板混合血清对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖的影响
目的:观察强肌健力口服液与龟板混合血清对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外增殖的影响.方法:使用密度梯度离心法分离大鼠MSCs,5-溴脱氧嘧啶(Brdu)和CD44双重免疫组化鉴定,传3代后的MSCs分为强肌健力口服液与龟板混合血清组和空白血清组、强肌健力口服液组,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组MSCs的生长情况.结果:强肌健力口服液与龟板混合血清各组均能促进MSCs的增殖,与空白血清组比较P均＜0.01,强肌健力口服液与龟板中剂量混合血清组5μl+95μl/ml、25μl+75μl/ml、50μl+50μl/ml与强肌健力口服液组比较,P＜0.01.结论:脾肾并补较之单纯补脾更能促进MSCs的生长.
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中药龟板对Parkinson病大鼠模型BMP4表达的影响
为研究益肾中药龟板对Parkinson病(PD)模型大鼠骨形成蛋白4(BMP4)表达的影响,本研究将6-羟基多巴胺注入大鼠黑质建立PD大鼠模型,对模型大鼠行高、低剂鼍龟板水煎液口服治疗45 d后,采用ELISA和RT-PCR方法进行血清中BMP4酶联免疫试验和脑黑质、纹状体中BMP4 mRNA的检测.结果显示:PD模型组的BMP4表达明显降低.用龟板治疗后可以显著阻碍此趋势,而且高剂量组比低剂量组效果更为明显(P<0.05).本研究结果提示,龟板有明显的促进BMP4及BMP4 mRNA表达的作用.
关键词： 龟板 Parkinson病 骨形成蛋白4 大鼠 -
龟板促进Parkinson病大鼠黑质骨形态发生蛋白信号分子的表达
为了进一步探讨骨形态发生蛋白(BMP)/分化抑制因子(Id)通路在龟板抗PD大鼠多巴胺能神经元凋亡中的作用,本实验用6-羟基多巴胺(6-OHDA,0.2%)于大鼠芹侧黑质致密带沣射2μl造成PD模型,设立正常对照组、模型组和龟板组,用免疫组织化学染色方法观察PD大鼠中脑黑质骨形态发生蛋白IB受体(BMPR-IB),Smad8和Id1阳件细胞数目;用Western-blotting检测BMPR-IA、BMPR-IB、BMPR-Ⅱ、Smad1、Smad5、Smad8和Id1蛋白表达水平的变化.免疫组化染色显示龟板组PD大鼠中脑黑质BMPR-IB,Smad8和Id1的阳性细胞数明显多于模型组(P<0.05).Western-blotting结果显示龟板组PD大鼠中脑黑质BM-PR-IB,Smad8和Id1的蛋白表达水平高于模型组,而BMPR-IA,BMPR-Ⅱ,Smad1和Smad5没有被检测出.以上结果表明龟板能上调6-OHDA诱导的PD大鼠中脑黑质BMPR-IB,Smad8和Id1的表达,这可能足其抗PD大鼠多巴胺能神经元凋亡的分子机制.
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龟板抗Parkinson病大鼠多巴胺能神经元凋亡的作用
为探讨补肾中药龟板抗Parkinson病大鼠模型黑质神经元凋亡的作用,本研究用6-羟基多巴胺(6-OHDA,0.2%)于大鼠左侧黑质致密带注射2 μl造成Parkinson病(PD)模型,同时设立龟板组(灌胃补肾中药龟板2 g/次,2次/d,连续12周)、模型组和正常对照组,观察其行为改变,再用HE、TH染色或DIG-dUTP染色观察黑质神经元的变化,免疫组化染色检测Bcl-2和Bax蛋白的表达.结果显示:龟板组PD大鼠的旋转行为改善明显,黑质致密部的TH染色阳性神经元增多,DIG-dUTP染色阳性率降低,Bel-2蛋白表达增加和Bax蛋白表达减少.本文结果提示,长期龟板治疗对PD模型大鼠多巴胺能神经元凋亡具有明显的保护作用,且该作用可能与龟板升高Bcl-2和降低Bax的表达有关.
关键词： 龟板 Parkinson病 多巴胺能神经元 凋亡 大鼠 -
龟板对植入大鼠损伤脊髓内骨髓间充质干细胞分化为神经元的影响
应用密度梯度法分离大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)进行培养,经5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记和CD44(cell differentiation protein44)染色及BrdU/CD44双标染色鉴定,将标记有BrdU的MSCs分别植入脊髓损伤体内和龟板治疗脊髓损伤体内.于移植后1周、2周、3周、4周和6周取损伤脊髓组织,对BrdU、神经丝蛋白(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)进行免疫组化染色及BrdU/NF和BrdU/GFAP双标染色检测移植后MSCs的存活和分化.结果发现:移植后1周,两组在移植区内都可见BrdU单位、BrdU/NF双标细胞,移植后2周达到高峰.龟板组可使BrdU单位和BrdU/NF双标细胞持续高表达至移植后6周,而脊髓损伤组BrdU单位和BrdU/NF双标细胞表达减少至移植后4周,组间比较差别有显著性.结果提示益肾龟板能促进脊髓损伤移植MSCs存活和分化为神经元.
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龟板对脊髓损伤大鼠神经干细胞的作用
为了观察龟板对大鼠脊髓损伤后nestin表达和后肢功能恢复的影响,本实验于手术后1 d、7 d、14 d、21 d、28 d分别对大鼠进行Tarlov评分和斜板试验检查后肢功能,处死动物后应用免疫组织化学技术检测神经上皮干细胞蛋白的表达,用图像分析仪进行定量分析,观察了龟板对脊髓损伤后神经上皮干细胞蛋白的影响.结果表明,脊髓损伤后第1 d,在两组受损伤脊髓灰质中都可见到nestin的表达;第14 d时达到高峰,龟板组为38.24±6.83,损伤组为22.48±7.83(P＜0.05).龟板组可使损伤的脊髓中nestin持续高表达至术后第28 d,而损伤组仅持续高表达至术后21 d.增加的nestin阳性细胞数量与神经功能的改善平行.本研究结果提示:龟板可减轻神经损伤症状和促进脊髓损伤后神经干细胞的增殖.
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龟板促骨髓间充质干细胞肝脏归巢的作用研究
目的 探讨龟板饲养对移植骨髓间充质干细胞(MSCs)肝脏归巢的作用.方法 密度梯度离心法分离、培养大鼠MSCs,带绿色荧光蛋白腺病毒转染标记移植MSCs,激光共聚焦检测肝脏组织MSCs分布,Western blot检测肝脏肝细胞生长因子(HGF)蛋白及MSCs c-met蛋白表达,携带siRNA腺病毒转染下调c-met表达.结果 龟板饲养较普通饮食明显增加移植MSCs肝脏归巢(P＜0.05)；同时,龟板饲养增加大鼠肝脏HGF蛋白表达,阻断HGF/c-met可部分逆转龟板促MSCs归巢的作用.结论 龟板饲养可能通过HGF/c-met轴促MSCs向肝脏组织归巢.
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龟板促MSCs肝脏归巢在大鼠肝损伤后修复中的作用研究
目的 探讨龟板促MSCs肝脏归巢在大鼠肝损伤后修复中的作用.方法 原代培养大鼠MSCs,腺病毒(携带绿色荧光蛋白)转染标记MSCs,激光共聚焦检测归巢至肝脏组织的MSCs含量,Western blot检测肝脏肝细胞生长因子(HGF)水平,天狼星红染色法检测肝脏I型胶原面积,胃酶酸解法检测肝组织羟脯氨酸(Hyp),全自动生化分析仪检测血清白蛋白、谷丙转氨酶(ALT)水平.结果 肝损伤后肝脏HGF含量增加,向肝脏定植的MSCs增加,同时龟板饲养可进一步促进损伤肝组织表达HFG,促进移植的MSCs向肝脏定植.另外,龟板饲养可降低肝损伤模型大鼠肝脏I型胶原面积和Hyp及血清ALT水平,增高血清白蛋白含量.结论 龟板饲养可能通过促MSCs向肝脏组织归巢加速肝损伤修复.
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龟板安老汤加减治疗绝经前后诸证100例
绝经前后诸证临床表现为绝经前后出现月经紊乱、烘热汗出、精神倦怠、便溏纳呆、下肢浮肿、烦躁易怒、情志不宁、失眠健忘、腰背酸痛等与绝经有关的症状,病程长短不一,短者数月、长者可迁延数年乃至十几年不等.自1993年以来,笔者用龟板安老汤加减治疗绝经前后诸证100例,疗效较佳,现介绍如下.
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补肾生育方治疗不育症临床体会
1993～2004年笔者自拟补肾生育方治疗不育症取得较满意疗效,现报告如下.自拟补肾生育方由制首乌15g,肉苁蓉15g,菟丝子10g,沙苑子10g,覆盆子10g,仙茅10g,仙灵脾10g,炙龟板20g(打碎),鹿角胶10g(烊),炙甘草6g组成.应用时根据不同证型,灵活加减.
