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中药诱导骨髓间充质干细胞的研究进展
通过查阅相关论著及新文献，对中药在诱导骨髓间充质干细胞中的运用及研究进展进行归纳，重点介绍丹参、三七、龟板、鹿茸、人参、黄芪等中药在骨髓间充质干细胞诱导与增殖领域的研究成果及相关实验结果。
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龟板对多发性抽动症模型大鼠的干预作用与对DA及D2受体的影响
目的：探究龟板对多发性抽动症( tourette syndrome,TS)模型大鼠的行为学改变,及其对纹状体多巴胺(dopamine,DA)、多巴胺D2受体(dopamine D2 receptor,D2R)、血浆中DA的含量的影响。方法将40只大鼠分为空白组、模型组、硫必利组和龟板组。腹腔注射亚氨基二丙腈( imino-dipropionitrile,IDPN)建立TS模型,并给予每组相应的生理盐水或药物灌胃。造模完成后每周进行行为学检测,并于造模第4周采用ELISA法检测纹状体DA、D2 R、血浆中DA的含量。结果(1)与模型组比较,两周后硫必利组大鼠刻板行为减少(P<0.05),三周后运动行为减少(P<0.05),四周后运动行为明显减少(P<0.01)。与模型组比较,龟板组两周后大鼠刻板行为与运动行为均减少(P<0.05)；(2)模型组大鼠较空白组大鼠血浆中DA含量升高(P<0.05),纹状体DA含量降低(P<0.05),纹状体D2R含量升高(P<0.05)。与模型组比较,龟板组大鼠血浆DA含量减少(P<0.05),硫必利组血浆DA明显减少(P<0.01),纹状体 DA 含量两组均升高(P<0.05),两组纹状体 D2 R 未发生明显变化(P>0.05)。结论龟板对TS有良好的治疗作用,其原因可能与调节DA的代谢有关。
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龟板的提取工艺研究
目的:研究龟板的水提工艺.方法:采用正交设计法,以煎出率及含氮量为考察指标,对影响龟板提取工艺的因素进行了优选.结果:实验设计四因素中粉碎度、提取次数、提取时间对提取效果有显著影响.结论:龟板提取的佳工艺为A2B3C2D2,即粉碎度为20～40目,加8倍量水,提取3次,每次2h.
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龟板改善激素性骨质疏松大鼠骨量、骨微细结构、骨生物力学和骨代谢的机制探讨
目的:研究补肾中药龟板对激素性骨质疏松大鼠骨量、骨微细结构、骨生物力学和骨代谢指标的改善作用,并对其分子机制进行探讨.方法:40只4月龄SD大鼠随机分为4组:空白组、模型组、阿伦磷酸钠组和龟板组.模型组、阿伦磷酸钠组及龟板组皮下注射地塞米松造模,成功后分别用0.9％氯化钠溶液、阿伦磷酸钠和龟板进行灌胃.12周后取大鼠腰椎(L1-6)和血清进行检测:双能X线检测腰椎骨量、micro-CT检测腰椎骨微细结构、压缩实验检测腰椎生物力学,HE染色观察腰椎形态学改变,ELISA检测大鼠PINP和β-CTX水平表达,qPCR检测腰椎Runx2、SP-7、CTSK和AP-1的mRNA表达.结果:空白组、龟板组及阿伦磷酸钠组骨密度、骨矿物质含量、骨表面积、骨小梁数量、骨小梁厚度、压缩强度明显高于模型组(P＜0.05,P＜0.01),骨小梁间距、PINP和β-CTX水平、CTSK mRNA表达水平明显低于模型组(P＜0.05,P＜0.01).结论:补肾中药龟板可能通过降低骨转换有效改善激素性骨质疏松;CTSK可能是龟板改善激素性骨质疏松大鼠骨量、骨微细结构、骨生物力学和骨代谢的作用靶点之一.
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龟板、鳖甲炮制研究概况
龟板、鳖甲传统的炮制方法是采用水浸泡法,其生产周期长,腐烂时发臭,影响环境卫生.另外由于大量的水长时间浸泡,会使一部分水溶性成分流失,影响药效.鉴于以上原因,不少中药工作者对龟板,鳖甲的炮制方法进行了研究.
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龟板含药血清促进骨髓间充质干细胞骨形态发生蛋白4的表达
目的 龟板有促大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖作用,本研究观察龟板含药血清对MSCs中骨形态发生蛋白4(BMP4)表达的影响.方法 使用密度梯度法分离大鼠骨髓间充质干细胞进行培养,传代纯化,在基础培养液中添加不同浓度龟板含药血清和对照血清,用荧光定量PCR和原位杂交方法检测BMP4 mRNA表达,用ELISA、免疫组织化学和免疫荧光组织化学法结合激光扫描共聚焦显微镜技术检测BMP4蛋白表达的变化.结果 BMP4蛋白和mRNA表达相一致,龟板含药血清以浓度依赖方式促进MSC的BMP4 mRNA及其蛋白表达.结论 龟板含药血清以时效和量效依赖性促进BMP4在MSCs的表达,可能与龟板促MSCs增殖作用有关.
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龟板、黄芪、丹参和党参诱导K562细胞合成γ珠蛋白的实验研究
本研究探讨龟板、黄芪、丹参和党参对K562细胞γ-珠蛋白合成的影响.以K562细胞为体外模型,用联苯胺染色方法确定龟板、黄芪、丹参及党参4种中药诱导K562细胞血红蛋白表达的剂量效应和时间效应,并用Western blot技术检测血红蛋白F(α2γ2)水平.结果表明:龟板、黄芪、丹参和党参作用于K562细胞6天,联苯胺染色阳性率高分别可达23.5%、19.8%、15.8%和14.5%;Western blot检测显示血红蛋白F表达增加.结论:龟板、黄芪、丹参及党参在体外可诱导K562细胞γ珠蛋白的合成水平增高,从而使血红蛋白F增加.4种中药具有与阳性对照丁酸钠相似的诱导γ珠蛋白合成增加的作用.
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龟地散与钙剂对去卵巢大鼠骨重、骨密度、骨强度的影响
使用补肾健骨中药龟地散对切除卵巢的雌性大鼠进行不同剂量的药物治疗,并与模型对照组和钙剂组进行比较.实验结果表明:龟地散显著提高模型对照组大鼠骨密度值(P<0.05)和骨矿含量(P<0.05),从而抑制骨矿溶解和丢失.与模型对照组相比,龟地散明显增加骨质疏松大鼠的骨重(P<0.01),并且对大鼠的骨长、骨直径、骨面积和体重也有一定的影响.龟地散还具有显著提高大鼠骨强度(P<0.01)等方面的作用.单纯补钙除骨强度明显改变外,其他如骨矿质、骨密度等多种指标均未有明显改变.
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龟板对脑缺血大鼠骨髓间充质干细胞移植后转分化为神经元的影响
自Prockop[1]于1997年报道了骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)可以分化为神经细胞以来,MSC为中枢神经系统损伤的替代修复提供了诱人前景[2,3].但是,MSC进行在体移植时,其神经元的分化率较低[4,5],为此,从中药中寻找提高神经元分化率的有关药物成为我们的研究目标.Pennisi[6]近报道了龟板可影响神经分化,而本课题组3年前的研究已表明龟板能促进神经干细胞增殖[7,8],为探讨龟板对MSC转分化的影响,提高MSC神经替代修复效率,我们进行了以下工作.
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柱前衍生化RP-HPLC法分析龟板中氨基酸
目的采用柱前衍生RP-HPLC法对龟板中13种氨基酸进行分析.方法用6 mol/L HCl水解提取龟板中总氨基酸,以异硫氰酸苯酯(PITC)为柱前衍生化试剂,采用外标法,梯度洗脱的方式分析.结果13种氨基酸在40 min内均可得到很好的分离,回收率(除甘氨酸外)为91.68%～106.26%,RSD为0.718%～4.386%.结论所建立的方法分离效果好、灵敏、准确、简便,且采用普通的C18色谱柱,可广泛用于含有多种氨基酸样品的分析.
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张大宁谈肾病-22常用补肾方剂之二
大补阴丸 组方:熟地、龟板各18克,黄柏、知母各12克,共为细末,猪脊髓蒸熟,同炼蜜为丸,温水或淡盐水送下.此方滋阴降火,适用于阴虚火旺证.症见五心烦热,骨蒸潮热,盗汗遗精,咳嗽咯血,心烦易怒,腰膝酸痛,舌红少苔,尺脉沉数等.本方主治因肝肾阴虚、相火亢盛所致诸证.方中重用熟地、龟板以滋阴潜阳,壮水制火,共为君药;黄柏、知母相须为用,苦寒降火,保存阴液,平其阳亢,均为臣药;方用猪脊髓并炼蜂蜜为丸,此为血肉甘润之品,既能滋补精髓,又能制约黄柏的苦燥,俱为佐使,诸药合用,滋阴精而降相火,以达培本清源之效.
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败将又有新贡献
败将又名龟板、龟甲、龟壳、神屋、败龟甲.味甘、微咸,性平而偏凉.归心、脾、肝经.它具有解热镇静、强筋健骨等功能.中医习惯用于治疗慢性肾炎、血虚等症.近年来,经临床实践证实,它有新功效.
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潜龙汤
潜龙汤原载于清代医家费伯雄撰著的《医醇剩义》.方药组成:龙齿6克,龟板24克,生地15克,龙骨6克,知母3克,黄柏3克,人参1克,玄参6克,蛤粉12克,肉桂1克.上方以鲍鱼50克,切片煎汤,代水煎药服,具有滋阴潜阳之功,用于肾火不蛰藏,飞腾于上,口燥咽干,面红目赤,耳流脓血,不闻人声.
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漫谈固经丸
固经丸是一首流传颇广的妇科常用方,由炙龟板、黄芩、椿根皮、白芍各15克,黄柏、香附各6克等药组成.原方本为丸剂,上述各药的剂量则是作汤剂服用时的参考用量,其中龟板应予先煎.
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龟板及其伪品的鉴别
龟板为脊索动物门爬行纲龟科(Testudinidae)动物乌龟Chinemys(Geoclemys)reevesii(Gray)的腹甲.始载于<神农本草经>列为上品,现代医学研究证明:含骨胶原,其中含天门冬氨酸,苏氨酸,蛋氨酸等多种氨基酸,具有滋阴潜阳,益肾健骨的功效.由于龟板资源紧缺,价格昂贵,常出现伪品.笔者就正品与常见伪品作以鉴别,以供参考,现报告如下.
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中药炮制与临床疗效——由鳖甲、龟板炮制引起的反思
中药成份复杂,缺少对其有效成分的定性、定量分析,患者用药依据传统,这既说明中药炮制的重要性,又暴露了传统炮制方法的弊端.大家知道,炮制是中医用药的特点,中医治病不是利用药物的所有作用,而是根据病情有所选择,通过炮制对药物原有性能予以取舍.所以中药炮制是药物在应用前或制成各种制剂前必须的加工过程,大部分药物在应用前都必须炮制,不同的炮制方法对药物贮藏、粉碎和煎出有效成分、矫臭味、特别是改变药物性能、增强药物疗效、减弱或消除药物毒性、劣性或副作用以及引药入经都起到重要作用.目前,国家对中药炮制都有严格要求,但临床用药情况复杂,“处方给付”问题出现,同种药材的生、炙、煅烧及药用部位异同影响临床疗效现就时儿味中药的炮制质疑和改进以及目前中药炮制临床需求疗效存在的问题综述如下,旨在和同仁探讨.
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龟板含药血清对骨髓间充质干细胞增殖细胞核抗原表达的影响
目的:观察益肾龟板血清对大鼠骨髓间质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)体外增殖过程的增殖细胞核抗原(Proliferation cell nuclear antigen,PCNA)表达的影响.方法:使用密度梯度法分离大鼠骨髓间质干细胞进行培养,经Brdu标记和CD44染色及两者双重染色鉴定后,观察在培养液中添加不同浓度龟板血清条件下MSC增殖过程.用免疫组织化学方法和原位杂交方法检测MSC的PCNA及其mRNA表达;免疫荧光细胞化学法结合激光扫描共聚焦显微镜技术检测PCNA蛋白表达的变化.结果:龟板血清以浓度依赖方式促进MSC的PCNA及其mRNA表达阳性细胞数和PCNA蛋白表达,与对照组比较有显著性(P＜0.05).结论:龟板血清促MSC增殖作用可能与上调PCNA表达有关.
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强肌健力口服液与龟板混合血清对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)成肌分化的影响
目的:观察强肌健力口服液与龟板混合血清对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)成肌分化的影响.方法:使用密度梯度离心法分离大鼠MSCs,5-溴脱氧嘧啶(Brdu)和CD44双重免疫组化鉴定,传3代后的MSCs分为强肌健力口服液与龟板混合血清组和空白血清对照组,免疫组化染色鉴定肌凝蛋白(myosin)、结蛋白(desmin)的表述.结果:诱导后第3、13天,强肌健力口服液与龟板混合血清组部分细胞出现desmin和myosin阳性表达.结论:强肌健力口服液与龟板混合血清能诱导MSCs向成肌细胞定向分化,为中医脾肾相关理论提供依据.
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中药对骨髓基质干细胞向神经细胞分化影响的研究
骨髓基质干细胞是一种具有自我更新能力和多向分化潜能的非造血干细胞.在一定的诱导条件下可以转化为神经细胞,随着中药提纯技术的不断改进,祖国医学在以中药制剂为诱导剂来治疗疾病的研究方面有了一定的进展.随着研究的不断深入,骨髓基质干细胞会有非常广阔的应用前景.
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龟牛散对去势大鼠骨质疏松症的药理学研究
1材料与方法1.1实验动物选用4月龄SD雌性大鼠40只,随机分为4组,购自沈阳药科大学实验动物中心.实验设空白对照组、模型对照组,龟牛散组和钙剂组.除空白对照组外,其他各组按文献法[¨切除大鼠双侧卵巢,造成由雌激素缺乏而引起的实验性大鼠骨质疏松症.
