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灯盏花乙素对肝星状细胞及 TGF-β1/Smad信号通路的作用评价
目的：观察灯盏花乙素( scutellarin)对肝星状细胞( hepatic stellate cell,HSC)及转化生长因子β1( TGF-β1)/Smad 信号通路的影响,探讨 scutellarin 抗肝纤维化的机制。方法建立TGF-β1诱导的HSC LX-2模型, CCK-8法检测 scutellarin 对细胞增殖的作用,化学发光法检测scutellarin对 Caspase3/7活性的影响,酶联免疫吸附测定( enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)法检测细胞上清液Ⅰ型前胶原的含量,ELISA法检测细胞Smad2和Smad3磷酸化水平。结果scutellarin能抑制HSC增殖,增强细胞 Caspase3/7活力,抑制Ⅰ型前胶原分泌,降低 LX-2细胞Smad2和Smad3磷酸化水平。结论抑制TGF-β1/Smad信号通路可能是scutellarin抗肝纤维化的作用机制。
关键词： 灯盏花乙素 肝星状细胞 TGF-β1/Smad信号通路 -
鲤鱼汤对多柔比星肾损害模型鼠肾纤维化的影响
目的:观察鲤鱼汤对多柔比星肾损害大鼠的肾保护作用.方法:50只Wistar雄性大鼠随机分为正常组(A组)、模型组(B组)、鲤鱼高(C组)、低(D组)剂量组、厄贝沙坦组(E组).尾静脉一次性注射多柔比星6.2mg/kg建模.造模后14d灌胃相应药物干预.HE、Masson染色观察肾脏病变,免疫组化检测肾组织成纤维细胞特异性蛋白-1(S100A4)、Smad7、转化生长因子β1 (TGF-β 1)及胶原蛋白Ⅰ(Col-Ⅰ)的表达.结果:与B组相比,C组大鼠12h尿蛋白浓度(12h-Upc)、尿素氮(BUN)、血清肌酐(SCr)、肾组织TGF-β1、S100A4、Col-Ⅰ、肾小球硬化指数(GSI)及间质损伤指数(TII)降低(P＜0.05),血清总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、12h尿量(12h-Uv)及肾组织Smad7升高(P＜0.05),除12h-Upc及12h-Uv外,上述指标C组D组E组间无差异.S100A4表达与Col-Ⅰ、GSI及间质胶原沉积呈正相关(P＜0.01),与Smad7呈负相关(P＜0.01).结论:鲤鱼汤利尿消肿、拮抗纤维化保护肾脏;上调Smad7负反馈调节TGF-β 1/Smad信号转导、抑制EMT及ECM可能是其作用机制之一.
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橙皮苷对肝星状细胞TGF-β1/Smad信号通路的影响
肝纤维化是不同致病因素引起的肝脏慢性损伤的共同病理过程,是向肝硬化发展的必然阶段.课题组前期研究发现,橙皮苷(HDN)对四氯化碳诱导的化学性肝纤维大鼠具有很好的保护作用.该实验在前期研究的基础上,通过建立体外血小板衍生生长因子(PDGF)诱导的肝星状细胞(HSC)-T6模型,观察HDN对HSC-T6增殖的抑制作用,ELISA法检测HSC-T6上清液中Ⅰ型胶原(Collagen)的含量,RT-PCR技术测定HSC-T6中转化生长因子(TGF)-β1,Smad2,Smad3,Smad7,结缔组织生长因子(CTGF) mRNA的表达,Western blot技术检测HSC-T6中TGF-β1,CTGF蛋白的表达,探讨HDN对HSC中TGF-β1/Smad信号通路的影响及其可能的作用机制.结果显示,PDGF不仅可明显促进HSC-T6增殖与Collagen Ⅰ的生成,还可显著增加TGF-β1,Smad2,Smad3,CTGF mRNA和TGF-β1,CTGF蛋白的表达;给予HDN干预后,可显著抑制HSC-T6增殖与Collagen Ⅰ的生成,降低TGF-β1,Smad2,Smad3,CTGF mRNA和TGF-β1,CT-GF蛋白的表达,升高Smad7 mRNA的表达.表明HDN抗肝纤维化作用可能与其调控TGF-β1/Smad信号通路,从而抑制HSC的活化、增殖有关.
关键词： 橙皮苷 肝星状细胞 TGF-β1/Smad信号通路 -
温阳化浊通络方含药血清对系统性硬化病皮肤成纤维细胞TGF-β1/Smad信号通路的影响
目的 探讨温阳化浊通络方含药血清对系统性硬化病(systemic sclerosis,SSc)皮肤成纤维细胞TGF-β1/Smad信号通路的影响.方法 将36例SSc患者按随机数字表分为中药组、西药组和中西药组,每组12例,中药组予口服温阳化浊通络方汤剂(每日1剂),西药组予口服青霉胺片(每次0.125 9,每日2次)和醋酸泼尼松片(每次20 mg,每日1次),中西医组予口服青霉胺片、醋酸泼尼松片及温阳化浊通络方汤剂,治疗1个月制备含药血清;另取10例未治疗的SSc患者血清作为对照组.健康皮肤成纤维细胞来源于2例女性整形外科患者上臂外侧健康皮肤组织.各组血清分别加入SSc患者和健康皮肤成纤维细胞培养体系中.Western blot法测定皮肤成纤维细胞转化生长因子-β1Ⅰ型受体(transforming growth factor β1 receptor typeⅠ,TGF-β1RⅠ)、TGF-β1Ⅱ型受体(TGF-β1 RⅡ)、p-Smad2/3及Smad7蛋白表达,RT-PCR法检测SSc皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原(Col-Ⅰ、Col-Ⅲ)mRNA的表达,ELISA法测定SSc皮肤成纤维细胞培养上清液中MMP-9及TIMP-1含量.结果 与对照组比较,西药组、中药组和中西药组SSc患者和健康皮肤成纤维细胞TGF-β1 RⅠ、p-Smad2/3蛋白水平降低,Smad7蛋白水平升高(P ＜0.05,P＜0.01),同时中西药组TGF-β1RⅡ蛋白表达降低(P ＜0.05,P＜0.01);与西药组比较,中药组和中西药组TGF-β1 R Ⅰ、p-Smad2/3表达降低,中西药组Smad7蛋白表达升高(P＜0.01).SSc患者皮肤成纤维细胞中,与对照组比较,西药组、中药组和中西药组Col-Ⅰ、Col-Ⅲ mRNA表达水平降低(P ＜00 05,P＜0.01),且中西药组Col-ⅢmRNA表达水平明显低于西药组(P＜0.01).与对照组比较,西药组、中药组和中西药组MMP-9水平及MMP-9/TIMP-1比值明显升高(P ＜0.05,P＜0.01),而中药组和中西药组TIMP-1表达水平降低(P＜0.01);与西药组比较,中西药组MMP-9水平和MMP-9/TIMP-1比值升高,中药组和中西药组TIMP-1水平降低(均P＜0.01).结论 温阳化浊通络方含药血清可能通过调控SSc皮肤成纤维细胞TGF-β1/Smad信号通路中关键分子TGF-β1 RⅠ、p-Sm ad2/3及Smad7的表达,抑制TGF-β1/Smad信号通路传导,减少Col-Ⅰ、Col-Ⅲ表达.
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肝豆扶木汤对TX小鼠肝纤维化的保护作用及机制研究
目的 探讨肝豆扶木汤(Gandou Fumu Decoction,GDFMD)对Wilson病肝纤维化模型TX(toxic milk)小鼠TGF-β1/Sm ad信号通路表达的影响.方法 60只TX小鼠随机分为模型组、GDFMD高、中、低剂量组和青霉胺组,每组12只,另设正常组12只.GDFMD高、中、低剂量组按31.2、15.6、7.8g生药/kg进行灌胃,青霉胺组按0.1 g/kg(0.2 mL/10 g)灌胃,模型组和正常组给予等容积生理盐水,每天1次,连续灌胃4周.采用赖氏法检测血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)活力,溴甲酚绿法检测血清白蛋白(album in,ALB)含量;采用HE染色、Masson染色观察肝组织病理变化;采用RT-PCR和Western blot检测肝组织中TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7 mRNA和蛋白的表达.结果 (1)与正常组比较,模型组血清ALT、AST活力升高,ALB含量降低(P＜0.01),与模型组比较,GDFMD高、中剂量组和青霉胺组ALT、AST活力降低,ALB含量升高(P＜0.01),GDFMD低剂量组AST活力降低,ALB含量升高(P＜0.05).(2)模型组可见肝纤维化特征性病理表现,备用药组均有不同程度改善.(3)与正常组比较,模型组TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA和蛋白表达升高,Smad7 mRNA和蛋白表达降低(P＜0.01),与模型组比较,GDFMD高、中剂量组和青霉胺组TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA和蛋白表达降低,Smad7 mRNA和蛋白表达升高(P ＜0.05,P＜0.01),GDFMD低剂量组TGF-β31 mRNA和蛋白、Smad2蛋白表达降低,Smad7蛋白升高(P ＜0.05,P＜0.01).结论 GDFMD具有抗肝纤维化作用,其作用机制可能与调控TGF-β1/Smad信号通路相关因子的基因与蛋白表达有关.
关键词： 肝豆扶木汤 Wilson病 肝纤维化 TX小鼠 TGF-β1/Smad信号通路 -
基于TGF-β1/Smad信号通路的加味黄芪赤风汤抗肾脏纤维化机制研究
目的 观察加味黄芪赤风汤对TGF-β1/Smad信号通路的影响,探讨其抗肾脏纤维化的机制.方法 采用血清药理学方法,大鼠予加味黄芪赤风汤和替米沙坦灌胃,制备含药血清.体外培养小鼠系膜细胞,以脂多糖作为炎症刺激因子.实验分为6组:正常组、模型组、替米沙坦组、加味黄芪赤风汤(简称中药)高、中、低剂量组.含药血清干预72 h后,采用酶联免疫法吸附试验测定各组细胞上清液中层粘连蛋白(lam inin,LN)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的含量;采用Western blot法检测各组细胞中TGF-β1、p-Smad2/3、Smad7、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)蛋白表达.结果 (1)与正常组比较,模型组上清液中LN和FN含量增加(P＜0.01);与模型组比较,替米沙坦组与中药中剂量组LN及FN含量减少(P＜0.05,P＜0.01),中药低剂量组上清液中FN含量亦减少(P＜0.01).(2)与正常组比较,模型组TGF-β1、p-Smad2/3、CTGF蛋白表达显著增加,Smad7蛋白表达减少,差异均有统计学意义(P＜0.01).与模型组比较,替米沙坦组、中药高、中、低剂量组TGF-β1、CTGF蛋白表达均降低(P＜0.01,P＜0.05),替米沙坦组、中药高、中剂量组p-Smad2/3蛋白表达降低(P＜0.01),中药高、中剂量组Smad7蛋白表达明显增加(P＜0.05).结论 加味黄芪赤风汤能够抑制致炎因子诱导的肾小球系膜细胞分泌细胞外基质增加和肾小球系膜细胞TGF-β1/Smad信号通路的过度激活,这可能是加味黄芪赤风汤抗肾脏纤维化的机制之一.
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温阳化浊通络方对系统性硬化症模型小鼠TGF-β1/Smad信号通路的影响
目的 探讨温阳化浊通络方治疗系统性硬化症(SSc)的可能作用机制.方法 将60只C3H/He小鼠随机分为正常组、模型组、西药组和中药低、中、高剂量组,每组10只.除正常组外其余各组给予皮下注射博莱霉素3周建立SSc小鼠模型.西药组小鼠灌服青霉胺片65 mg/(kg·d),中药低、中、高剂量组分别灌服温阳化浊通络方水煎剂11.75、23.50、47.00 g/ (kg·d),模型组和正常组给予等体积的生理盐水,共干预8周.采用HE染色观察皮肤组织病理变化,采用RT-PCR法检测皮肤转化生长因子β1 (TGF-β1)、Smad2、Smad7 mRNA表达,采用Western blot法检测皮肤Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白(COL-Ⅰ、COL-Ⅲ)表达.结果 模型组较正常组皮肤真皮变厚,胶原增加、变粗,真皮小血管周围炎症细胞浸润,西药组和中药低、中、高各剂量组与模型组比较真皮变薄、胶原含量减少,血管周围炎症细胞浸润减轻.与正常组比较,模型组TGF-β1、Smad2 mRNA及COL-Ⅰ、COL-Ⅲ蛋白表达升高,Smad7 mRNA表达降低(P＜0.01);与模型组比较,西药组和中药低、中、高剂量组TGF-β1、Smad2 mRNA及COL-Ⅰ、COL-Ⅲ蛋白表达减少,Smad7 mRNA表达增加(P＜0.05或P＜0.01);中药高剂量组TGF-β1、Smad2、Smad7 mRNA及COL-Ⅰ、COL-Ⅲ蛋白表达改善优于西药组和中药低剂量组(P＜0.05或P＜0.01).结论 温阳化浊通络方可拮抗SSc纤维化,可能与干预rGF-β1/Smad信号通路、降低皮肤胶原蛋白含量有关,且高剂量效果更佳.
关键词： 系统性硬化症 温阳化浊通络方 TGF-β1/Smad信号通路 胶原蛋白 -
柚皮素通过抑制TGF-β1/smad信号传导通路缓解糖尿病肾病大鼠肾损伤
目的 探讨柚皮素对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用及其对TGF-β1/smad信号传导通路的影响.方法 将糖尿病肾病模型大鼠随机分为糖尿病肾病组和糖尿病肾病+柚皮素组,用药治疗6周.检测大鼠24 h尿蛋白定量、肌酐清除率和肾脏指数;HE染色观察肾组织形态和检测肾小球面积;实时荧光定量PCR检测Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白、TGF-β1、Smad2和Smad7 mRNA的表达;Western blot检测Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白、TGF-β1、smad7、总smad2和磷酸化smad2蛋白.结果 糖尿病肾病组大鼠24 h尿蛋白(P＜0.01)和肾脏指数(P＜0.01)显著升高,肌酐清除率明显下降(P＜0.01),肾小球明显肥大(P＜0.05),Ⅳ型胶原和纤维连接蛋白的mRNA水平和蛋白表达量均升高,TGF-β1和磷酸化smad2蛋白的表达量均升高,smad7蛋白表达量降低;经柚皮素50 mg/kg治疗后能明显降低糖尿病肾病大鼠的24 h尿蛋白(P＜0.01)和肾脏指数(P＜0.05),提高肌酐清除率(P＜0.05),减轻肾小球肥大(P＜0.05),Ⅳ型胶原和纤维连接蛋白的mRNA水平和蛋白表达量降低,TGF-β1和磷酸化smad2蛋白的表达量均降低,smad7蛋白表达量升高.结论 柚皮素可能通过调控糖尿病肾病肾组织TGF-β1/smad信号通路表达,减轻肾脏病理损害.
关键词： 柚皮素 细胞外基质 TGF-β1/Smad信号通路 糖尿病肾病 -
乌骨藤总皂苷对四氯化碳诱导的雄性大鼠肝纤维化的保护作用
目的:探讨乌骨藤总皂苷(the Saponins of Marsdenia Tenacissima,SMT)对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化的保护作用及可能机制.方法:将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、SMT给药组(10,20和40 mg·kg-1)和秋水仙碱阳性药(0.1 mg·kg-1)对照组.通过对大鼠皮下注射CCl4制备肝纤维化模型,0.3 mL·100 g-1,每周2次,共12周.造模4周后给药组分别给予相应剂量的药物灌胃(ig)给药,正常组和模型组ig给予等剂量的0.9％ NaCl溶液.12周后处死大鼠,测定肝脾指数;测定血清中HA,LN,CⅣ含量;制备肝脏匀浆,ELISA法测定SOD,GSH-Px活性及HyP,MDA含量;HE,Masson染色观察肝组织病理及胶原沉积变化;免疫组化法检测肝组织α-SMA蛋白表达;Western blot法检测肝组织TGF-β1,Smad7水平.结果:与模型组比较,SMT明显降低肝纤维化大鼠的肝脾指数及HA,LN,CⅣ水平,减少肝组织Hyp,MDA含量,提高SOD及GSH活性,减轻大鼠肝脏病理损伤程度,减少肝组织中α-SMA,TGF-β1的表达,升高Smad7的表达.结论:乌骨藤总皂苷对CCl4诱导的实验性肝纤维化大鼠有显著的保护作用,其机制可能与抗氧化及抑制TGF-β1/Smad信号通路相关.
关键词： 乌骨藤总皂苷 肝纤维化 抗氧化 TGF-β1/Smad信号通路 -
黄芩总黄酮对博莱霉素致大鼠肺纤维化的干预作用及其机制研究
目的 观察黄芩总黄酮对博莱霉素致大鼠肺纤维化的影响及其作用机制.方法 SD大鼠随机分为5组:对照组、模型组、泼尼松龙阳性对照(3.34 mg/kg)组、黄芩总黄酮高剂量和低剂量(50、25 mg/kg)组.大鼠气管内注射博莱霉素制备肺纤维化模型后,各给药组ig给予相应药物,每天给药1次.28 d后处死动物,观察大鼠血清中总抗氧化能力(T-AOC)、还原性谷胱甘肽(GSH)、髓过氧化物酶(MPO)的水平；取固定部位肺组织分别行HE、Masson染色,进行病理组织学检查;RT-PCR法检测黄芩总黄酮对大鼠肺组织中TGF-p1、Smad2、Smad7、a-SMA、胶原Ⅰ的mRNA表达水平.结果 与模型组相比,黄芩总黄酮给药组大鼠血清中T-AOC、GSH水平均升高,MPO水平显著降低；肺泡炎和肺纤维化程度明显减轻(P＜0.05、0.01);TGF-β1、Smad2、α-SMA、胶原Ⅰ基因表达显著降低,Smad7表达显著升高(P＜0.05、0.01).结论 黄芩总黄酮对博莱霉素所致大鼠肺纤维化具有一定的治疗作用,其机制可能与抗氧化损伤、抑制炎症细胞的浸润活化及调控TGF-β1/Smad信号通路有关.
关键词： 黄芩总黄酮 肺纤维化 TGF-β1/Smad信号通路 抗氧化 博莱霉素 -
TGF-β1／Smad 信号通路在皮肤病理性瘢痕及瘢痕癌组织中的变化
目的：探讨TGF-β1/Smad信号通路在皮肤病理性瘢痕及瘢痕癌组织中的变化。方法：将20份病理性瘢痕组织标本设为观察A组、20份瘢痕癌组织标本设为观察B组，20份正常皮肤组织设为对照组，分别使用蛋白免疫印迹（Western blotting）和实时荧光PCR（real time PCR）观察三组组织标本TGF-β1和Smad蛋白和基因的变化情况。结果：①Western blotting：观察B组的TGF-β1和Smad蛋白显著高于观察A组和对照组（ P＜0．01），TGF-β1和Smad在观察A组与对照组之间无统计学差异（ P＞0．05）；②Real time PCR：观察B 组的TGF-β1和Smad 基因显著高于观察A组和对照组（ P＜0．01），TGF-β1和Smad在观察A组与对照组之间无统计学差异（P＞0．05）；③相关性分析：在皮肤瘢痕癌标本中TGF-β1与mRNA TGF-β1（r＝0．727 P＜0．01），Smad与mRNA Smad（r＝0．812 P＜0．01）的表达均呈正相关。结论：瘢痕癌变上调TGF-β1、Smad的表达，在瘢痕癌中TGF-β、Smad 同时存在蛋白水平和基因水平的异常表达，可将改变TGF-β1/Smad信号通路的标志蛋白的表达做为治疗疤痕癌的靶方向。
关键词： 皮肤病理性瘢痕 瘢痕癌 TGF-β1/Smad信号通路 -
肝豆扶木汤对TX小鼠肝纤维化TGFβ1/Smad信号通路的影响
目的 观察肝豆扶木汤(GDFMT)对 TX小鼠肝纤维化转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad信号通路的影响,探讨其抗肝纤维化的作用机制.方法 将24只雄性 TX小鼠随机分为模型组、青霉胺组、GDFMT组,另设正常对照组.采用竞争性放免分析法检测血清肝纤维化透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PC-Ⅲ)、Ⅳ型胶原(C-Ⅳ)含量,免疫组化法观察肝组织 TGF-β1、Smad2和 Smad7蛋白的表达.结果 血清肝纤维化指标结果:与正常对照组比较,模型组血清肝纤维化 HA、LN、PC-Ⅲ、C-Ⅳ含量均明显升高(P<0.01);与模型组比较,青霉胺组和 GDFMT组血清肝纤维化 HA、LN、PC-Ⅲ、C-Ⅳ含量均降低(P<0.05或P<0.01);与青霉胺组比较,GDFMT组血清肝纤维化 HA、LN、PC-Ⅲ、C-Ⅳ含量均降低(P<0.05).免疫组化法观察结果:与正常对照组比较,模型组 TGF-β1和 Smad2蛋白表达明显升高,Smad7蛋白表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,青霉胺组和 GDFMT组 TGF-β1和 Smad2蛋白表达明显降低(P<0.05),Smad7蛋白表达明显升高(P<0.01);与青霉胺组比较,GDFMT组 TGF-β1和 Smad2蛋白表达明显降低(P<0.05),Smad7蛋白表达明显升高(P<0.05).结论 GDFMT可以能降低 TX小鼠肝纤维化血清学指标,具有良好的抗肝纤维化的作用,其作用机制可能是抑制 TGF-β1和 Smad2蛋白的表达,上调 Smad7蛋白的表达.
关键词： 肝纤维化 肝豆扶木汤 TX小鼠 TGF-β1/Smad信号通路 -
鹿茸Ⅰ型胶原对MC3T3-E1细胞TGF-β1/Smad基因蛋白表达的影响
目的 研究梅花鹿茸I型胶原(SDC-I)对MC3T3-E1细胞TGF-β1及Smad2/3基因蛋白的影响,探究SDC-I治疗骨质疏松的作用机制.方法 分别用不同浓度的SDC-I处理小鼠成骨细胞MC3T3-E1.采用MTT法检测MC3T3-E1细胞增殖活性;应用RT-PCR及ELISA方法检测MC3T3-E1细胞TGF-β1/Smad通路相关因子TGF-β1、Smad2和Smad3的mRNA及蛋白表达水平.结果 SDC-I促进MC3T3-E1细胞的增殖;SDC-I不同浓度作用于MC3T3-E1细胞48 h以后,能显著上调TGF-β1、Smad2以及Smad3基因蛋白表达的水平.与空白对照组相比具有显著性差异,同时SDC-I的浓度越高,效果越明显.结论 SDC-I能刺激MC3T3-E1细胞Smad 2/3和TGF-β1的表达,可通过TGF-β1/Smad信号通路促进骨的形成,为骨质疏松症的防治提供理论依据.
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大鼠背根神经节神经元转化生长因子-β1/Smad信号传导通路的实验研究
目的 探究大鼠背根神经节(dorsal root ganglia,DRG)神经元中是否存在转化生长因子β1/Smad信号通路.方法 人工培养大鼠背根神经节神经元,运用免疫荧光组织化学及实时荧光定量PCR技术研究DRG神经元中是否存在TGF-β1/Smad信号传导通路相关蛋白分子的表达以及TGF-β1信号对其基因转录的影响.结果 大鼠DRG神经元中存在TβR1、Smad2、Smad4等蛋白分子的表达,同时TGF-β1信号可以调控Smad分子基因的转录.结论 大鼠背根神经节神经元中存在受TGF-β1分子调控的Smad信号通路.
关键词： 大鼠 背根神经节 神经元 TGF-β1/Smad信号通路 -
福辛普利对肾小球系膜细胞 TGF-β1/Smad 信号通路的干预作用
目的 观察新型血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)--福辛普利(fosinopril,FOS)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)Ⅰ型胶原(ColⅠ)蛋白分泌和Smad2、Smad7 mRNA表达量的影响.方法 建立体外培养的大鼠GMC,鉴定后3 ～ 10代用于实验.实验分为正常对照组、TGF-β1刺激组(加5 ng/L TGF-β1和5%的胎牛血清)和FOS组(加5 ng/L TGF-β1、10 μmol/L FOS和5%的胎牛血清)3组,分别于6、24和48 h后ELISA法测定细胞培养上清液中ColⅠ蛋白表达量,荧光定量PCR法检测Smad2、Smad7 mRNA表达量的变化.结果 ①正常培养的大鼠GMC均有一定量的ColⅠ蛋白表达;TGF-β1刺激组在各时间点ColⅠ蛋白分泌均高于对照组(P ＜ 0.01),FOS各组ColⅠ蛋白分泌均低于TGF-β1刺激组(P ＜ 0.05).②正常培养的大鼠GMC可表达一定量Smad2、Smad7 mRNA,TGF-β1刺激组在各时间点Smad2、Smad7 mRNA表达量均高于对照组,FOS治疗组Smad2 mRNA表达量均低于TGF-β1刺激组;Smad7 mRNA表达量在TGF-β1刺激组和FOS治疗组间差异无统计学意义(P ＞ 0.05).结论 FOS可抑制TGF-β1诱导的GMC分泌ColⅠ增加,且能够从mRNA水平抑制TGF-β1诱导的大鼠Smad2 mRNA的表达量;FOS 可能部分通过抑制TGF-β1/Smad信号通路中的Smad2的表达而发挥延缓肾小球硬化的作用.
关键词： 肾小球系膜细胞 TGF-β1/Smad信号通路 福辛普利 -
隔药饼灸对慢性肾衰竭兔肾组织TGF-β1、Smad3、 Smad7蛋白表达的影响
目的:观察隔药饼灸对慢性肾衰竭兔肾组织中TGF-β1、Smad3、Smad7蛋白表达的影响,探讨隔药饼灸抗慢性肾衰竭兔肾纤维化的分子机制.方法:健康新西兰纯种雄性兔45只,随机分为正常对照组、模型组、隔药饼灸组、直接灸组、氯纱坦钾组.除正常对照组用等量蒸馏水灌胃外,其他兔用腺嘌呤灌胃21 d致兔肾间质纤维化,建立慢性肾衰竭动物模型.除正常对照组和模型组外各组分别进行相应干预,均持续3个月,其中穴位为Ⅰ组(肾俞、脾俞)、Ⅱ组(足三里、关元)交替.干预结束通过免疫组化法检测各组兔肾组织TGF-31、Smad3 、Smad7蛋白表达.结果:免疫组化染色结果显示,与正常对照组比较,模型组兔肾组织TGF-31、Smad3阳性表达明显增加(P＜0.05),Smad7阳性表达明显降低(P＜0.05);与模型组比较,隔药饼灸组、直接灸组、氯纱坦钾组肾组织TGF-β1、Smad3阳性表达均明显下降(P＜0.05),Smad7阳性表达明显升高(P＜0.05);隔药饼灸组Smad7阳性表达较直接灸组、氯纱坦钾组升高更明显(P＜0.05).结论:隔药饼灸能有效干预慢性肾衰竭兔肾纤维化的形成,其分子机制可能是通过调节TGF-β1/Smad信号通路发挥抗肾纤维化的作用.
关键词： 隔药饼灸 慢性肾衰竭 TGF-β1/Smad信号通路 肾纤维化 兔 -
丹参酮ⅡA对人肾小管上皮细胞TGF-β1/smad信号通路的干预作用
目的:探讨中药单体丹参酮ⅡA抗肾间质纤维化可能的作用机制.方法:将体外正常培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)随机分为空白对照组、转化生长因子(TGF-β1)组(TGF-β1,10 ng/ml)、丹参酮ⅡA低剂量组(丹参酮ⅡA 1 μg/ml+ TGF-β1 10 ng/ml)、丹参酮ⅡA中剂量组(丹参酮ⅡA 5μg/ml+ TGF-β110 ng/ml)、丹参酮ⅡA高剂量组(丹参酮ⅡA10μg/ml+ TGF-β110 ng/ml),分别予相应的药物干预后吸取细胞上清液,用ELISA法检测Ⅲ型胶原的含量,细胞裂解后采用Western-blot法检测smad2和smad3的蛋白表达量.结果:与空白对照组比较,TGF-β1组的Ⅲ型胶原表达明显上升,加入丹参酮ⅡA后各剂量组的Ⅲ型胶原表达均下降,且呈剂量效应关系;TGF-β1组能促进smad2、smad3蛋白的表达,加入丹参酮ⅡA后各剂量组的smad2蛋白、smad3蛋白的表达量均低于TGF-β1组,但是无明显的剂量效应关系.结论:丹参酮ⅡA可以抑制TGF-β1诱导的Ⅲ型胶原的分泌,且可抑制由TGF-β1介导的smad2、smad3信号蛋白的表达,表明丹参酮ⅡA可能是通过抑制TGF-β1/smad信号通路中smad2、smad3蛋白的表达发挥其抗肾间质纤维化的作用.
关键词： 丹参酮ⅡA 肾小管上皮细胞 Ⅲ型胶原 TGF-β1/Smad信号通路 -
TGF-β1/Smad信号通路与放射线诱导颌骨组织纤维化
TGF-β1/Smad信号通路广泛参与体内细胞间的信号转导,通过促进细胞外基质的大量合成与改建,在组织纤维化过程中起着关键作用.研究表明,该信号通路也参与放射线诱导的组织纤维化.颌骨组织接受放射治疗后,可诱发组织纤维化,骨组织逐渐被纤维组织所取代,终发生放射性颌骨坏死.本文就TGF-β1/Smad信号通路及其他辅助信号通路与放射线诱导颌骨组织纤维化的关系作一综述.
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夏枯草总三萜对PDGF-BB干预的肝星状细胞中TGF-β1/Smad通路调控作用
目的:观察夏枯草总三萜(TTP)对血小板衍生因子(PDGF-BB)干预的肝星状细胞(HSC-T6)中TGF-β1/Smad通路调控以及其抑制HSC增殖的作用.方法:用不同浓度的TTP(10、30、100、300、1000 μg/mL)及PI3K抑制剂(LY294002,10 μmol/L)对PDGF-BB刺激的HSC-T6进行处理,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;RT-PCR和Western blot法检测HSC-T6中TGF-β1信号转导通路下游中介分子smad2、smad3、smad7表达.结果:TTP给药组可抑制PDGF诱导的HSC-T6增殖,下调smad2、smad3表达,升高smad7表达.结论:TTP对PDGF-BB刺激的HSC-T6增殖具有较好的抑制作用,其机制可能与阻断TGF-β1/Smad信号通路传导有关.
关键词： 夏枯草总三萜 HSC PDGF-BB TGF-β1/Smad信号通路 -
夏枯草总三萜调控ERK、TGF-β1/Smad通路对肝纤维化大鼠的保护作用研究
目的：研究夏枯草总三萜( TTP)对四氯化碳( CCl4)致肝纤维化大鼠的保护作用及其分子机制。方法 SD大鼠随机分为正常组、模型组、TTP(25、50、100 mg·kg-1)组和阳性对照组(秋水仙碱0．1 mg·kg-1),除正常组外,其余各组分别于大鼠背部皮下注射CCl40．1 ml·(100 g)-1,每周2次,连续12周,自造模第5周起开始给药,各给药组分别给予相应的药物,正常组、模型组给予等体积的溶媒,每天1次。实验结束后,比色法测定血清中丙氨酸氨基转氨酶( ALT)、天冬氨酸氨基转移酶( AST)含量；放免法测定透明质酸( HA)、Ⅲ型前胶原( PCⅢ)、Ⅳ型胶原( CⅣ)含量；同时取固定部位肝组织,苏木精伊红染色( HE)、Masson染色观察肝纤维化程度；制备100 g·L-1肝匀浆,进行丙二醛( MDA)、超(过)氧化物歧化酶( SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶( GSH-Px)、羟脯氨酸( Hyp)含量测定；RT-PCR法检测α-SMA、Procollagen I、Smad2、Smad3和 Smad7 mRNA表达；Western blot法检测p-ERK蛋白表达。结果与模型组相比, TTP (25、50、100 mg ·kg-1)给药组不仅能降低肝纤维化大鼠ALT、AST、HA、CⅣ、PCⅢ、Hyp水平,改善肝脏病变程度,降低MDA水平,增强SOD以及GSH-Px活性,还可抑制肝组织中α-SMA、Pro-collagen I、Smad2、Smad3及 p-ERK 表达,升高 Smad7表达。结论夏枯草总三萜对CCl4诱导的肝纤维化大鼠具有较好的保护作用,其机制可能与下调p-ERK表达,调控TGF-β1/Smad信号通路有关。
