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京大戟化学成分及药理作用研究概述
京大戟为大戟科( Euphorbiaceae)多年生草本植物大戟Euphorbia pekinensis Rupr.的干燥根，具有泻水逐饮、消肿散结的功效，临床上常用于治疗水肿胀满、胸腹积水、痰饮积聚等症，是基础和临床科研工作者共同关注的重点。本文查阅近年来国内外对京大戟研究的文献资料，主要从化学成分和药理作用两个方面对其研究进展进行了归纳总结。京大戟主要含二萜类、三萜类、黄酮类、鞣质类等成分，具有泻下、利尿、抗炎、抗肿瘤和抗白血病等药理作用，并存在一定的毒性。
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醋制对京大戟毒性和药效的影响
目的:考察醋制对京大戟的毒性和药效的影响.方法:昆明种小鼠,分别灌胃给予京大戟和醋京大戟石油醚部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位、水提物和醇提物样品溶液,各样品剂量为(生药量)3.9 g·kg-1,进行碳末肠推进试验、利尿试验和小鼠耳肿胀试验.结果:乙酸乙酯部位是京大戟的毒性部位.京大戟和醋京大戟的半数致死量(LD50)分别为160.3,234.8 g·kg-1,二者95％可信区间分别为(142.5 ～180.3),(209.7 ～262.8) g·kg-1.醋制后京大戟毒性明显降低.与空白对照组相比,京大戟、醋京大戟醇提物、石油醚部位、乙酸乙酯部位可明显促进小肠推进运动和利尿作用(P＜0.05),并且二者的乙酸乙酯部位肠推进作用和利尿作用非常明显(P＜0.01),与生品各组比较,醋制后各组墨汁推进率和利尿作用皆有所降低,药性缓和.醋制后乙酸乙酯部位抗炎作用较生品明显提高(P＜0.05),抗炎作用增强.结论:京大戟的乙酸乙酯部位既是其毒性部位,又是其药效学主要部位.京大戟醋制后药性缓和,毒性作用显著降低,抗炎作用明显增强.
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HPLC同时测定京大戟生品和炮制品中3种三萜类成分含量
目的:建立同时测定京大戟生品和炮制品中甘遂甾醇、大戟二烯醇和24-亚甲基环阿尔廷醇含量的方法.方法:采用HPLC,Agilent XDB C8色谱柱(4.6 mm×150mm,5μm),流动相乙腈-水(90∶10),流速1.0 mL· min-,柱温35℃,检测波长205 nm.结果:甘遂甾醇、大戟二烯醇、24-亚甲基环阿尔廷醇分别在0.506 ～ 5.06μg(r=1.000 0),1.052 ～ 10.52 μg(r=0.999 9)和1.124～ 11.24 μg(r =0.999 8)线性关系良好.平均加样回收率分别为99.7％ (RSD 0.9％),99.4％(RSD1.0％),99.4％ (RSD 1.3％).结论:方法简便、快速、灵敏度高、专属性好,为京大戟药材及其炮制品质量控制提供依据.
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京大戟醋制前后脂肪油GC-MS分析
目的:建立京大戟脂肪油气相色谱-质谱联用(GC-MS)分析方法,考察醋制对京大戟脂肪油化学成分的影响.方法:采用索氏提取法对京大戟和醋京大戟脂肪油进行提取,以GC-MS技术进行分析和鉴定.结果:京大戟和醋京大戟中分别鉴定出24种和22种化学成分,分别占脂肪油总量的44.49％和69.33％.含量较高的三萜类化合物得到确证.结论:京大戟醋制后石脂肪油发生了明显的变化,有量变,也有质变.
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醋制降低京大戟对大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6毒性研究
目的:比较京大戟醋制前后对大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6的毒性差异,初步探讨京大戟醋制减毒机制.方法:以大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6为研究对象,采用MTT法检测京大戟醋制前后对IEC-6细胞活性的影响,采用倒置显微镜观察醋制前后对细胞形态的影响;采用高内涵细胞成像系统(HCS)分析醋制降低肠细胞线粒体凋亡通路.结果:与阴性对照组比较,增殖抑制实验显示京大戟生品具有较强的肠细胞毒性(P＜0.01),HCS分析结果显示京大戟可显著降低细胞核Hoechst荧光强度、线粒体膜电位荧光强度(P ＜0.05,P＜0.01),并显著增加Annexin V-FITC和PI荧光强度、细胞膜通透性荧光强度(P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01);醋制后与京大戟生品各剂量组比较,京大戟醋品可显著降低京大戟生品对肠细胞的增殖抑制作用,增加细胞核Hoechst荧光强度、线粒体膜电位荧光强度(P ＜0.05,P＜0.05),降低Annexin V-FITC和PI荧光强度、细胞膜通透性荧光强度(P＜0.01,P＜0.01,P＜0.05),且呈一定的剂量相关性.结论:醋制可降低京大戟对肠细胞的毒性,其可能机制为通过降低京大戟对IEC-6细胞膜通透性,从而为进一步阐明京大戟醋制减毒机制提供了一定的依据.
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醋制降低京大戟对人正常肝细胞LO2的毒性及机制研究
目的:比较京大戟醋制前后对人正常肝细胞LO2的毒性作用,并探讨其可能的作用机制.方法:体外培养LO2细胞,用不同浓度的京大戟生品和醋品对其进行处理,MTT法测定各样品对LO2细胞增殖的抑制作用；Hoeehst 33258荧光染色法观察细胞凋亡的形态学改变；AnnexinV/PI染色流式细胞术检测LO2细胞凋亡；PI染色流式细胞术分析其对细胞周期的影响；检测细胞培养液上清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)活力,细胞裂解上清超氧化歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量.结果:与阴性对照组比较,京大戟生品各浓度组均可抑制LO2细胞增殖,诱导细胞凋亡,引起细胞S期阻滞(P＜0.05)；能显著升高细胞培养液上清ALT,AST,LDH活力(P＜0.05),显著降低细胞裂解上清SOD活性和GSH含量、增加MDA含量.醋制后,与京大戟生品组比较,可显著降低细胞凋亡率、降低细胞周期阻滞,显著降低细胞培养液上清ALT,AST,LDH活力(P＜0.05),显著升高细胞裂解上清SOD活性和GSH含量、显著降低MDA含量.结论:醋制可降低京大戟对LO2细胞的毒性,其机制可能是减轻氧化损伤,从而降低细胞周期阻滞,减少细胞凋亡.
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京大戟毒性部位及其醋制前后成分变化研究
为比较京大戟不同极性部位的肠道毒性作用,分析毒性部位醋制前后成分变化规律,该实验以95％乙醇提取京大戟,石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯依次萃取得不同极性部位.不同极性部位小鼠灌胃3h后,测定粪便含水量及十二指肠、空肠、回肠、结肠含水量,考察不同极性部位对小鼠腹泻及肠道水肿的影响;采用MTT法比较不同极性部位对大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6细胞的增殖抑制作用,并采用RT-PCR法测定结肠中水通道蛋白AQP1,AQP3的mRNA表达水平,考察不同极性部位的毒性.研究结果显示,与空白组相比,京大戟醇部位、石油醚部位、乙酸乙酯部位均可导致小鼠粪便含水量及十二指肠及结肠的含水量增高,石油醚部位作用强.京大戟95％醇提物、石油醚部位对IEC-6细胞具有显著的增殖抑制作用,IC50分别为95.03,33.75 mg·L-1;京大戟95％醇提物、石油醚部位、乙酸乙酯部位均能导致结肠中AQP1的mRNA表达降低、AQP3的mRNA表达增高.表明京大戟可导致小鼠腹泻及肠道水肿,其作用与导致水通道蛋白AQP1,AQP3的mRNA表达水平变化相关;并可抑制IEC-6细胞增殖;京大戟的主要毒性部位为石油醚部位,通过成分分离及炮制前后成分变化比较,发现毒性的降低可能与石油醚部位的二萜类成分含量下降相关.
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京大戟醋制前后对斑马鱼胚胎的急性毒性研究
采用模式生物斑马鱼的胚胎评价京大戟醋制前后各提取物急性毒性,同时以大戟二烯醇为对照品测定了各提取物的总萜含量.选取24 h发育正常的斑马鱼胚胎,每个提取物设8个浓度和一个空白对照组,并观察给药后96 h斑马鱼胚胎的发育和死亡情况,计算不同样品对斑马鱼胚胎的半数致死浓度(LC50).结果显示对于斑马鱼胚胎,京大戟醋制前后各提取物均有急性毒性,与生品相比,醋制后毒性显著降低.不同提取方式中,醇提物毒性大于水提物;不同极性部位中毒性大小依次为石油醚>二氯甲烷>乙酸乙酯>正丁醇、剩余部位.结合萜类成分含量测定结果可推测萜类成分为京大戟主要毒性成分,且其毒性大小与萜类成分的含量呈正相关.表明斑马鱼胚胎模型适用于京大戟毒性评价,为进一步认识与评价京大戟的毒性成分及醋制减毒的作用机制提供合适的研究方法以及理论依据.
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多指标正交试验法优选京大戟醋制工艺
目的:优选京大戟佳醋制工艺.方法:采用L9(34)正交设计试验,以用醋量、醋水比例、煮制火候作为考察因素,以大戟二烯醇含量、醇浸出物、水浸出物、饮片外观、断面性状多指标综合加权评分为指标,优选京大戟炮制工艺.结果:优选出京大戟佳炮制工艺为每100g药材加入醋30 g和水270 g的醋水混合液,拌匀,闷润,文火煮至醋水被吸尽,取出,晾至6～7成干,切厚片.结论:本研究制定了京大戟炮制工艺量化技术参数,在该工艺技术条件下可生产出质量稳定可控的醋京大戟饮片.
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大戟属根类有毒中药醋制前后的毒性比较研究
目的:研究京大戟、甘遂、狼毒炮制前后的毒性变化并比较三者的毒性强弱.方法:采用肠推进运动模型及巨噬细胞炎症模型,评价3种大戟属根类有毒中药炮制前后的毒性.结果:京大戟、甘遂、狼毒生品及醋品均可明显促进小鼠小肠推进运动及巨噬细胞释放NO的能力,强弱顺序为甘遂＞京大戟＞狼毒,醋制后三者均可明显缓和这一作用.结论:京大戟、甘遂、狼毒可诱导炎症反应的发生并促进肠推进运动,产生强烈的泻下作用,醋制后致炎及肠推进作用显著减弱,表明醋制可缓和京大戟、甘遂、狼毒的泻下作用.
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关于红大戟醋制的探讨
历版<中华人民共和国药典>和各地的炮制规范对于红大戟是否需要醋制有着不同的规定.通过回顾其药用历史,探讨了目前存在分歧的原因,认为醋制红大戟的做法,既缺少古代临床的证实,也未见现代实验研究,而只是从醋制京大戟的方法移植而来,因此有必要开展相关的研究对其加以评价和规范.
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基于对小鼠利尿与泻下作用探讨京大戟与甘草配伍禁忌的理论依据
目的 探讨京大戟与甘草配伍禁忌的理论依据.方法 比较京大戟与甘草合用前后对正常小鼠的利尿及泻下作用,采用称质量法测定正常小鼠排尿量;采用炭末法测定正常小鼠的排便情况.结果 在《中国药典》2010年版等效剂量范围内,京大戟粉末的利尿作用强于其水提液;甘草水提液未表现出促进或抑制利尿的作用;京大戟粉末与甘草水提液合用,给药后1h内尿量明显减少;京大戟与甘草合煎液给药未引起尿量明显变化.京大戟粉末和甘草水提液混合液给药与等剂量的京大戟比较泻下作用无明显差异.结论 在药典用量范围内,甘草水煎液可明显抑制京大戟的利尿作用.基于药性分析其机制表明,甘草的甘缓之性减缓了京大戟的泻水逐饮之药势,可能是京大戟与甘草配伍禁忌的机制之一.
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大戟用药品种的探讨
中药大戟为泻水逐饮要药,由于具有毒性,历代医家用之谨慎.但现在市场上大戟的主流品种与古代所用大戟的品种发生了较大变化,而多数医生并不知晓,如还以本草所载大戟的功用、疗效、毒性作为处方依据,极易产生用药的偏差.现将目前市场上常用的大戟品种及混淆的品种做一辨析,并对其变化的原因作一探讨,以减少用药偏差.
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京大戟的研究进展
研究表明,大戟属植物的一个显著特征是含有白色或黄色的乳汁,其主要生物活性成分为二萜酯类成分,还含有三萜、黄酮、鞣质和有机酸等化学成分.具有显著的泻下利尿作用,还有抗癌、抗白血病的作用.目前,京大戟市场品种混乱、资源紧缺,对质量标准和混淆品种的鉴定方面的研究有待完善.
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京大戟石油醚提取部分化学成分的研究
目的:对京大戟(Euphorbia pekinensis Rupr.)进行化学成分研究.方法:采用溶剂提取、硅胶、ODS柱色谱及制备HPLC等进行分离纯化,根据化合物的理化性质和波谱数据鉴定结构.结果:从京大戟的石油醚提取部分分离得到3个化合物,分别鉴定为24-亚甲基-环阿尔廷醇(Ⅰ),大戟醇(Ⅱ),甘遂甾醇(Ⅲ).结论:化合物Ⅰ系首次从该植物中分离得到.
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京大戟化学成分的研究
目的 研究京大戟的化学成分.方法 利用硅胶柱色谱、制备薄层等手段进行分离纯化,通过波谱数据分析和理化性质鉴定化合物结构.结果 从京大戟中分离并鉴定了10个化合物,分别为二十四烷醇 (1)、正十八烷醇 (2)、十四烷酸 (3)、大戟醇 (4)、阿魏酸二十八酯 (5)、β-谷甾醇 (6)、(3β,12α,13α)-3,12-dihydroxypimara-7,15-dien-2-one (7)、pekinenal (8)、neomotiol (9)、3,3′-二甲氧基鞣花酸 (10).化合物7和8对人正常肝细胞LO2和人胃上皮GES-1细胞增殖具有抑制作用,化合物7对两种细胞的IC50为51.196 μg/mL和21.223 μg/mL;化合物8对两种细胞的IC50分别为15.722 μg/mL和13.294 μg/mL.结论 化合物1、3、7、9为首次从该植物中发现.
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京大戟中大戟二烯醇的HPLC测定
目的 改进京大戟饮片的质量控制标准.方法 采用薄层鉴别对京大戟进行定性鉴别.建立京大戟饮片中大戟二烯醇的HPLC定量测定方法.同时对其杂质、水分、灰分、浸出物等进行测定.结果 京大戟饮片薄层色谱斑点清晰,分离度好.大戟二烯醇在0.39～ 3.88μg范围内线性关系良好,相关系数为r2=1.000;平均回收率为99.96％,RSD为0.97％(n=6).结论 京大戟饮片建议标准为杂质不得过3.0％;水分不得过8.0％;总灰分不得过7.0％,酸不溶性灰分不得过1.5％;浸出物含量不得低于20.0％;按干燥品计算,含大戟二烯醇(C30H50O)不得少于0.60％.
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京大戟醋制前后大戟二烯醇和甘遂甾醇的变化
目的 比较京大戟醋制前后大戟二烯醇和甘遂甾醇的含有量变化,为京大戟醋制减毒机理研究提供一定的参考.方法 采用RP-HPLC法,以Agilent XDB C8(4.6 mm× 150 mm,5μm)为固定相,流动相为乙腈-水(93∶7),体积流量为1.0 mL/min,检测波长210 nm,柱温30℃.结果 大戟二烯醇和甘遂甾醇的线性范围分别为0.524 4～10.4880μg(r=0.999 9)和0.2132～4.264μg(r=0.9998),加样回收率分别为97.36％和98.72％,RSD分别为1.07％、0.77％(n=6).大戟二烯醇和甘遂甾醇经醋制后在乙酸乙酯超声提取液中的含有量降低较多.结论 京大戟经醋制后,大戟二烯醇和甘遂甾醇含有量降低,为进一步研究京大戟醋制减毒机理和质量控制提供了依据.
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京大戟中二萜类化合物pekinenal对肝癌细胞增殖、周期和凋亡的影响
目的：研究京大戟中二萜类化合物pekinenal对肝癌SMMC-7721细胞增殖、周期和凋亡的影响,并初步探讨其治疗肝癌可能的影响机制。方法采用MTT法分析不同浓度的pekinenal对体外培养SMMC-7721细胞增殖的影响；采用原位末端标记法( TUNEL)、Annexin V/PI双染法和电镜观察对细胞凋亡的作用；应用流式细胞术分析对细胞周期的影响。结果 MTT 结果显示,pekinenal 可明显抑制SMMC-7721细胞的增殖,呈浓度依赖性。Annexin V/ PI 双染法结果显示,随着pekinenal 浓度的增加,肝癌SMMC-7721细胞的凋亡率明显增加,与对照组比较,差异具有统计学意义(P <0．01)。TUNEL 法检测结果表明,不同浓度的pekinenal 作用于SMMC-7721细胞后均可诱导肝癌细胞凋亡,凋亡指数(AI)随着药物浓度的升高明显增加(P <0．01)。给药后电镜观察,与对照组比较,发现肝细胞线粒体肿胀、内质网扩张,胞质包涵体形成,部分细胞核呈现凋亡表现,并且随着药物浓度增加,凋亡现象越明显。流式细胞术分析显示,不同浓度的pekinenal 均可使细胞被阻滞于S 期。结论 pekinenal 对人肝癌细胞增殖有明显地抑制作用,并存在着明显的浓度依赖关系；pekinenal 可能是通过抑制癌细胞DNA 的合成,将人肝癌细胞周期阻滞在S 期,抑制其增殖,通过诱导人肝癌细胞发生凋亡等,发挥其抗肝癌作用。
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醋制降低京大戟细胞毒性部位对小鼠肝脏氧化损伤机制研究
京大戟为大戟科植物大戟(Euphorbia pekinensis Rupr.)的干燥根[1],始载于<神农本草经>,列为下品,为中医临床常用的峻下逐水药.其性寒,味苦,有毒.由于其生品毒性较大,故采用醋制法降低京大戟的毒性,缓和其泻下作用[2].本课题组前期实验已经证实京大戟的细胞毒性部位为石油醚、乙酸乙酯部位[3],但有关醋制降低京大戟毒性作用的物质基础和作用机制尚缺乏明确的揭示.因此,本实验拟采用整体动物模型,通过多次给予小鼠京大戟生品和醋品细胞毒性部位提取物,比较醋制前后对小鼠的肝组织形态和氧化损伤的影响,初步探讨醋制降低京大戟对小鼠肝毒性的作用机制,以期为进一步研究京大戟醋制减毒的物质基础及作用机制提供依据.
