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花椒油对HaCaT细胞膜流动性及膜电位的影响及其机制研究
目的:本文选择HaCaT角质形成细胞测定花椒挥发油对其细胞膜流动性和膜电位的影响及其机制,研究花椒挥发油对皮肤活性表皮的影响,探讨其促进药物透皮吸收的作用机制.方法:采用CCK-8试验测定花椒挥发油的细胞毒性,利用荧光漂白恢复技术(FRAP)考察不同浓度花椒挥发油对细胞膜流动性的影响,采用流式细胞仪测定不同浓度花椒挥发油对细胞膜电位的改变,同时考察了花椒挥发油对HaCaT细胞内Ca2+浓度的影响,采用超微量Ca2+-ATP酶试剂盒测定花椒挥发油对HaCaT细胞内Ca2+-ATP酶活性的影响.结果:相对于常用化学促透剂氮酮,花椒挥发油具有较低细胞毒性,花椒挥发油可增加HaCaT细胞膜流动性、降低细胞膜电位,同时可降低Ca2+-ATP酶活性、增加HaCaT细胞内Ca>浓度而影响细胞Ca2+平衡.结论:花椒挥发油可能通过改变细胞内Ca2+平衡而影响细胞膜流动性及膜电位,增加活性表皮流动性以降低皮肤表皮屏障作用,从而利于药物的透皮吸收.
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冰片对HaCaT细胞膜流动性及膜电位的影响
目的：研究冰片对皮肤活性表皮作用方式，探究冰片作为经皮促透剂的促透作用机制。方法选择常用经典化学经皮促透剂氮酮作为阳性对照促透剂，采用CCK-8试剂盒测定并计算冰片对HaCaT细胞的半数抑制率(IC50)，利用荧光漂白恢复技术测定不同浓度冰片对HaCaT细胞膜流动性的影响，采用流式细胞仪测定冰片对HaCaT细胞膜电位及细胞膜内Ca2+浓度的影响。结果冰片和氮酮的药物IC50分别为2.826、0.172 mmol/L；冰片可增加HaCaT细胞膜流动性，且随着药物浓度的增大而增加，呈剂量依赖性关系；冰片可降低HaCaT细胞膜电位和HaCaT细胞内Ca2+浓度，表现出类似氮酮作用特点。结论冰片的经皮促透作用机制可能与其影响角质细胞内Ca2+浓度进而改变活性表皮角质形成细胞膜电位和膜流动性有关。
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萜烯类经皮促透剂对皮肤活性表皮层的影响及其机制研究
该文选择HaCaT皮肤角质形成细胞测定萜烯类经皮促透剂对皮肤活性表皮层的影响,探讨其促进药物透皮吸收的作用机制.选择具良好经皮促透效果的萜烯类化合物,即薄荷醇、柠檬烯、1,8-桉树脑、薄荷酮、4-萜品醇和长叶薄荷酮;采用MTr试验测定萜烯类经皮促透剂的细胞毒性,利用荧光漂白恢复技术(FRAP)考察不同萜烯类促透剂对细胞膜流动性的影响,采用流式细胞仪测定不同萜烯类促透剂对细胞膜电位的改变,同时考察了萜烯类促透剂对HaCaT细胞内Ca2+浓度的影响,采用超微量Ca2+-ATP酶试剂盒测定萜烯促透剂对HaCaT细胞内Ca2+-ATP酶活性的影响.实验结果表明,相对于常用化学促透剂氮酮,6种萜烯类促透剂均显示较低细胞毒性;所选择的萜烯类促透剂可显著增加HaCaT细胞膜流动性、降低细胞膜电位,同时可降低HaCaT细胞Ca2+-ATP酶活性和细胞内Ca2+浓度而影响细胞Ca2平衡.因此,萜烯类促透剂可能通过改变细胞内Ca2平衡而影响细胞膜流动性及膜电位,增加皮肤活性表皮流动性而降低皮肤屏障作用,从而利于药物的透皮吸收.
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定心方对大鼠缺氧及正常心肌细胞内钙、膜电位和线粒体膜电位的影响
目的：探讨定心方(DXR)抗心律失常的分子机理。方法：采用胰蛋白酶法分离培养心肌细胞，用不同荧光染料分别标记细胞，在激光共聚焦显微镜上测定DXR血清对心肌细胞内钙〔Ca2＋〕i、膜电位(MP)和线粒体膜电位(MMP)的变化。结果：缺氧使心肌细胞〔Ca2＋〕i和MMP升高，而使MP降低，DXR血清降低了正常和缺氧心肌细胞〔Ca2＋〕i，改善了缺氧引起的MP降低，使缺氧状态下MMP保持在基线水平。结论：DXR能通过抑制缺氧引起的〔Ca2＋〕i和MMP升高，及拮抗缺氧所致的MP降低，从而发挥保护心肌细胞，防治心律失常的作用。
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高张性宫缩乏力的诊断与处理
1 发病机理和原因1.1 在分娩过程中,子宫收缩是有节律性、对称性和极性的.即子宫体部肌肉产生有规则的、频率和强度逐渐增加的收缩,它是由子宫底部两侧开始向中央而往下移行以每秒约2cm的速度扩张,约在15分钟可遍及整个子宫.收缩波的传播接受雌激素、孕酮,PGS的影响并与肌细胞膜电位及其内部肌纤凝蛋白、ATP的浓度、离子情况以及牵张力量有关.子宫收缩力量在宫底比中段强,中段比下段强,将已成熟的子宫颁向上牵引,加之前羊水或先露部的下降而使宫颈容受和扩张.高张性宫缩乏力,是由于子宫收缩失去其极性和对称性,频率及强度亦不规则,子宫的收缩完全不协调,以致子宫肌肉在间歇期并不完全放松,处于持续紧张状态,而子宫腔内的压力及子宫的张力处于高张状态,因而不能发生有效宫缩,影响产程进展和宫口扩张.
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荧光共振能量转移技术在细胞离子研究中的应用
细胞许多新陈代谢活动都伴随着离子浓度的改变，通过对离子浓度的检测可以间接检测细胞代谢状态。荧光共振能量转移技术（ fluorescence resonance energy transfer，FRET）可以实现在活细胞内对离子浓度微弱变化的动态检测，为细胞离子代谢的可视化检测提供了有力工具。本文综述了FRET技术在离子浓度、离子通道以及膜电位检测方面的应用。
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大电导钙离子激活钾通道与糖尿病冠状动脉病变
钙离子(Ca2+)激活钾通道根据电导大小和药理特性的差异可分为3类:即大电导Ca2+激活钾通道(BK)、中电导Ca2+激活钾通道(IK)和小电导Ca2+激活钾通道(SK),其中BK通道因其对血管调节作用较大且分布广泛而备受关注[1].BK通道广泛存在于兴奋和非兴奋细胞,在血管平滑肌细胞(VSMCs)膜上表达尤为丰富,不仅参与细胞膜电位的形成,而且可以维持血管平滑肌细胞收缩和舒张的动态平衡.激活血管平滑肌细胞上的BK通道可增加钾离子(K+)外流,引起细胞膜超极化,使电压门控性Ca2+通道关闭,Ca2+内流减少,血管舒张.
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壳聚糖及其衍生物对HaCaT细胞膜电位的影响
目的 用流式细胞仪检测壳聚糖及其衍生物对HaCaT细胞膜电位的影响.方法 合成不同取代度的N-三甲基壳聚糖(TMC)和N-羧甲基壳聚糖(MCC);用纯水作对照,运用荧光分子探针DiBAC4(3)标记HaCaT细胞膜电位,流式细胞仪检测壳聚糖及其衍生物处理之后细胞膜电位的变化情况.结果 与纯水组比较,壳聚糖及其衍生物都能显著降低细胞膜电位,其中,TMC20组作用明显,TMC40组作用微弱.结论 壳聚糖及其衍生物降低细胞膜电位,可能是其具备透皮吸收促进作用的原因之一.
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薄荷油对HaCaT细胞膜流动性及膜电位的影响及其机制研究
目的 考察薄荷油作为天然经皮促透剂对HaCaT皮肤角质形成细胞膜流动性及膜电位的影响,探讨薄荷挥发油经皮促透作用机制.方法 采用细胞增殖-毒性试验(CCK-8)测定薄荷挥发油的细胞毒性,利用荧光漂白恢复技术(FRAP)考察不同浓度薄荷挥发油对细胞膜流动性的影响,采用流式细胞仪测定不同浓度薄荷挥发油对细胞膜电位的改变和对HaCaT细胞内Ca2+浓度的影响,采用超微量CA2+-ATP酶试剂盒测定薄荷油对HaCaT细胞内Ca2-ATP酶活性的影响.结果 与常用化学促透剂氮酮相比,薄荷挥发油具有较低细胞毒性.薄荷挥发油可增加HaCaT细胞膜流动性、降低细胞膜电位,降低Ca2+-ATP酶活性、增加HaCaT细胞内Ca2+浓度而影响细胞Ca2平衡.结论 薄荷挥发油可能通过影响皮肤表皮细胞Ca2平衡而改变细胞膜流动性及膜电位,降低皮肤屏障作用,从而促进药物的透皮吸收.
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刺激少商对太阴肺经前臂段经穴电位波动特性的影响
目前,国内外医学界对人体生物电现象及其机制进行了广泛而深入的研究.大量的临床及实验已经从生物电学,细胞膜电位改变等多方面证实了穴位生物电波动与其特异效应具有相关联性,并对其作用机制做出了科学的阐述.本实验试图以穴位生物电信息中的电位为指标,借助改良S E P(体感诱发电位)监测技术,观察刺激少商穴对太阴肺经前臂段经穴电位波动特性的影响,从生物电学角度阐述其产生机制,揭示经络的内在联系.
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甜菜碱对HepG2人肝癌细胞[Ca2+]i和细胞膜电位的影响
目的 研究甜菜碱对肝癌HepG2细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i)和细胞膜电位的影响.方法 Fluo-3/AM标记,激光扫描共聚焦显微镜观察HepG2细胞[Ca2+]i,TMRE标记,激光扫描共聚焦显微镜测定细胞膜电位的影响.结果 甜菜碱能够升高HepG2细胞[Ca2+]i,降低细胞膜电位.升高[Ca2+]i的强度具一定的剂量依赖性,随甜菜碱剂量的增大而升高.甜菜碱50、25 mg/mL组与对照组比较差异非常显著(P＜0.01),甜菜碱12.5 mg/mL组与对照组比较差异显著(P＜0.05).给药48 h时间段内细胞内的[Ca2+]i升高的幅度较大,72 h升高幅度相对较小.而降低膜电位上,在48 h时间段内,甜菜碱50、25、12.5 mg/mL各组膜电位均显著高于对照组(P＜0.05),但在72 h时间段内甜菜碱12.5 mg/mL组与对照组比较没有显著性差异(P＞0.05).结论 甜菜碱通过开放细胞膜上的通透性转换孔道(MPTP),从而升高HepG2细胞[Ca2+]i,启动细胞凋亡机制,诱导HepG2细胞凋亡.
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马钱子碱对人肝癌细胞HepG2细胞膜电位和通透性的影响
目的 探讨马钱子碱诱导HepG2细胞凋亡效应是否涉及其细胞膜通透性和细胞膜电位(MP)的改变,研究其抗肿瘤的分子机制.方法 以HepG2细胞为体外模型,采用吖啶橙/溴乙啶复合荧光染色通过荧光显微镜观察马钱子碱对HepG2细胞形态学和细胞膜通透性变化,采用膜敏感性荧光探针Di-4-ANEPPS标记细胞膜电位,利用激光共聚焦显微扫描技术研究马钱子碱对HepG2细胞膜电位在瞬间反应及不同时段的影响.结果 在瞬时反应中马钱子碱(0.5 mmol/L)对HepG2细胞的MP影响不明显,在4 h和8 h后,HepG2细胞的MP没有明显变化,此时细胞已开始出现早期的凋亡形态学变化,如核固缩、胞膜皱缩、核碎裂、胞浆空泡化、凋亡小体形成等,12 h后MP负值有所下降.但同时细胞膜保持完整,细胞膜通透性和完整性均没有明显变化.结论 马钱子碱在体外能通过诱导HepG2细胞凋亡来抑制其增殖,但这种早期诱导作用和细胞膜电位以及通透性没有明显相关性.
关键词： 马钱子碱 肝癌细胞HepG2 细胞膜电位 通透性 激光共聚焦显微扫描术 -
微乳对葛根素在MDCK-MDR1细胞的转运影响及机制研究
目的 探讨微乳制剂对葛根素在血脑屏障(BBB)细胞模型MDCK-MDR1的转运影响以及机制.方法 采用MTT法评价葛根素微乳与溶液的细胞毒性浓度范围,确定适宜给药质量浓度,考察葛根素溶液及微乳在MDCK-MDR1单层的双侧转运特性,通过免疫组化染色研究细胞紧密连接蛋白的表达,荧光光漂白恢复法测定细胞膜流动性的变化以及阴离子探针结合流式细胞技术研究细胞膜电位的改变,进而阐明微乳对葛根素转运影响的作用机制.结果 葛根素溶液质量浓度50～300 μg/mL,微乳稀释500倍以上对MDCK-MDR1无显著毒性.溶液中葛根素在MDCK-MDR1单层的吸收方向转运表观渗透系数(Papp)为1.04×10-6 cm/s,外排方向转运Papp值为1.05×10-6 cm/s,微乳中葛根素双侧转运Papp值均较溶液中葛根素显著增加(P＜0.05).微乳作用可以减少MDCK-MDR1紧密连接蛋白Claudin-1、Occludm、ZO-1、F-actin的表达,促进细胞膜流动,降低细胞膜电位.结论 微乳制剂可以促进葛根素在BBB细胞模型MDCK-MDR1的双侧转运,其作用机制与打开细胞间紧密连接,增加细胞膜流动性,使细胞去极化,降低膜电位进而增大葛根素细胞旁路渗透有关.
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华蟾素对MDA-MB-231细胞内钙离子和细胞膜电位的影响
目的:研究华蟾素对乳腺癌MDA-MB-231细胞内钙离子和细胞膜电位的影响及其作用机制.方法:根据原子力显微镜 (AFM) 高分辨率和高灵敏度的特点,从形态学上研究华蟾素对MDA-MB-231细胞的凋亡作用; 分别用DiBAC4 (3) 及Fluo-3/AM对MDA-MB-231细胞进行细胞膜电位和钙离子的荧光染色,然后用流式细胞仪检测不同浓度 (0、6.25、12.5、25、37.5、50 μg·mL-1) 华蟾素对细胞膜电位和细胞内钙离子的浓度变化.结果:原子力显微镜观察到华蟾素作用后,MDA-MB-231细胞形态及超微结构发生了明显变化,细胞表面粗糙度增加,从形态学上研究华蟾素的促凋亡作用.同时,用流式细胞仪检测到华蟾素作用细胞后,细胞膜电位发生去极化,并且细胞内钙离子浓度增加.结论:华蟾素作用于MDA-MB-231细胞,使得细胞发生去极化,从而激活了电压依赖型钙离子通道的开放,Ca2+是细胞内信号传导过程中重要的第二信使,进而介导了MDA-MB-231细胞的凋亡.
关键词： 华蟾素 原子力显微镜 MDA-MB-231细胞 Ca2+ 细胞膜电位 -
生物负电离子
生物负电离子的概念在第一讲,我们知道了负电离子对改善人体细胞膜电位,激活细胞,增强细胞膜流动性,提高新陈代谢,造就健康的身体,非常重要.那么,什么是生物负电离子呢?
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低铅负荷对淋巴细胞膜电位影响的分析
目的:探讨不同剂量铅对淋巴细胞增殖及细胞膜电位的影响,进一步明确低铅染毒淋巴细胞膜参数表达机制.方法:将小鼠脾淋巴细胞悬液分为四组,分别为10-6 mmol/L PbCl2染毒组、10-5 mmoL/L PbCl2染毒组、10-4mmol/L PbCl2染毒组,磷酸盐缓冲盐水(PBS)作为对照组;在培养不同时间段(0h,24 h,48 h,72 h)的细胞悬液中加入不等量的单克隆抗体,同时用细胞感受性色素diBA-C4标记淋巴细胞,测定细胞膜电位,从而确定细胞膜受体表达的情况以及淋巴细胞增殖情况的变化.结果:随pb2+染毒浓度增高及时间延长,pb2染毒淋巴细胞diBh-C4荧光强度明显增加,膜内的电位出现不同程度的升高,细胞膜受体表达呈阳性变化.10-6 mmol/L PbCl2染毒组与淋巴细胞的增殖指数比较,差异无统计学意义(P＞0.05),10-5 mmoL/L PbCl2染毒组、10-4 mmol/L PbCl2染毒组染毒72 h,淋巴细胞增殖指数与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:PbCl2染毒对淋巴细胞膜电位表达具有时间依赖性和饱和性;浓度＞ 10-6mmol/L PbCl2染毒淋巴细胞具有抑制淋巴细胞增殖的作用.
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早期胚胎心肌细胞兴奋收缩耦联模式
目的 研究胚胎心肌细胞兴奋收缩耦联的机理;方法 使用膜片钳与钙离子浓度分析系统测量酶消化法得到的小鼠胚胎心肌细胞的膜电位与细胞内钙离子浓度;结果 细胚胎心肌细胞存在两种兴奋收缩耦联模式,一种与正常成熟心肌细胞的兴奋收缩耦联模式类似,与细胞膜上的钠通道、L-钙离子通道相关;另一种由细胞内钙振荡诱发,这种钙振荡通过细胞膜上的钠钙交换蛋白引起了细胞膜电位的小幅度变化,该模式是一种更基本的兴奋收缩模式.近似熵分析表明,与后一种模式相比较,前一种模式的规律性更强.结论 胚胎心肌细胞存在两种兴奋收缩耦联模式.
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易卒中型自发性高血压大鼠(SHR-SP)基底动脉反应性的研究
应用细胞内微电极记录法,以血管平滑肌细胞膜电位为指标,研究了易卒中型自发性高血压大鼠基底动脉对有代表性的二类激动剂氯化钾(KCl),去甲肾上腺素(NE)及乙酰胆碱(ACh)的反应性.观察到SHR-SP基底动脉平滑肌细胞膜电位(Em)为(-45.7±3.9)mV,明显低于Wistar大鼠的(-55.1±2.0)mV(P＜0.05),故其反应性增强.KCl(10～50 mmol/L)及NE(10-8～10-6mol/L)引起膜电位的去极化,ACh(10-7～10-5mol/L)引起膜电位超极化,且皆呈剂量依赖性特征.
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血管平滑肌细胞钾通道的研究进展
血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells ,VSMCs)上分布着多种钾通道,它们参与了细胞膜电位的复极与超极化,影响细胞膜的兴奋性,调节VSMCs的舒缩活动,对血管紧张度的调控具有十分重要的作用.
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映山红花总黄酮对大鼠神经元及EA.hy926内皮细胞超极化作用及机制
目的:观察映山红花总黄酮(total flavones of rhododendra,TFR)对大鼠海马神经元及EA.hy926内皮细胞膜超极化作用及机制研究.方法:体外培养大鼠海马神经元和EA.hy926内皮细胞,利用DiBAC4(3)荧光染料在钙离子成像系统488 nm激发波长下检测EA.hy926和大鼠海马神经元荧光强度变化以反映膜电位改变情况.结果:与Control组比较,TFR(270 mg/L)和TFR(810 mg/L)能显著降低EA.hy926内皮细胞内荧光强度,即细胞发生了超极化现象,且BKCa特异性阻断剂IbTX及联用IKCa阻断剂ChTX和SKCa阻断剂apamin均能抑制TFR (270 mg/L)引起的荧光强度降低现象,而内源性硫化氢(hydrogen sulphide,H2S)合成酶抑制剂DL-炔丙基甘氨酸(DL-propargylglycine,PPG)对这一超极化效应无显著影响;与Control组比较,TFR(270 mg/L)和TFR(810 mg/L)也能显著降低大鼠海马神经元荧光强度,且IbTX能抑制TFR(270 mg/L)引起的荧光强度降低现象.结论:TFR可引起大鼠海马神经元和EA.hy926细胞膜超极化,其作用机制可能与激活细胞膜上钙激活钾通道(Ca2+-sensitive K+channels,KCa)有关.
