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黄芩茎叶总黄酮对高甘油三酯血清刺激的VSMCs增殖的影响
目的:观察黄芩茎叶总黄酮(SSTF)对单纯高甘油三酯血清(HTG)刺激的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的抑制作用及可能的分子机制.方法:体外培养大鼠胸主动脉VSMCs,HTG诱导其增殖,观察SSTF对细胞增殖、细胞周期、CO含量、血红素氧化酶-1(HO-1)平EFLK/p-ERK蛋白表达的影响.结果:50HD mg·L~(-1)的SSTF可明显抑制HTG诱导的VSMCs增殖,增加VSMCs培养上清液中CO的生成量,抑制细胞周期进程(P＜0.05,P＜0.01),并呈时间和剂量依赖趋势;500 mg·L~(-1)的SSTF显著诱导细胞ERK/p-ERK蛋白的表达(P＜0.01),但是对HO-1蛋白的表达无影响.结论:SSTF通过阻滞细胞周期进程直接参与抑制VSMCs增殖的作用,ERK信号通路可能参与SSTF介导的细胞保护作用.
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24-乙酰泽泻醇A对ox-LDL诱导大鼠VSMCs增殖影响的机制研究
24-乙酰泽泻醇A作为泽泻的主要组成部分有抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)作用且AS与血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖密切相关,故该研究通过活体取材及培养大鼠腹主动脉VSMCs,50 mg·L-1 ox-LDL诱导VSMCs建立细胞增殖模型,探讨24-乙酰泽泻醇A对ox-LDL诱导大鼠VSMCs增殖影响的作用机制.不同浓度24-乙酰泽泻醇A(5,10,20 mg·L-1)干预细胞增殖模型12,24,48 h,MTT检测VSMCs增殖情况,Western blot法检测VSMCs PCNA,cy-clinD1,cyclinE,p21,p27蛋白表达的变化,RT-PCR检测VSMCs PCNA,p21和p27 mRNA表达情况.MTT结果显示ox-LDL诱导VSMCs的增殖(P<0.05);ox-LDL促进VSMCs PCNA,cyclinD1,cyclinE蛋白表达的增加(P<0.05),抑制p21,p27蛋白及mRNA的表达(P<0.05);24-乙酰泽泻醇A可显著抑制ox-LDL诱导VSMCs的增殖(P<0.05)及PCNA,cyclinD1,cyclinE蛋白表达,同时提高p21,p27蛋白及mRNA的表达量(P<0.05),该现象随着24-乙酰泽泻醇A浓度的增加作用越明显.24-乙酰泽泻醇A可抑制ox-LDL诱导大鼠VSMCs的增殖,其机制可能通过抑制VSMCs细胞周期蛋白(cyclinD1,cyclinE,p21,p27蛋白等)表达有关.
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AngⅡ促进大鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移
血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)的增殖、迁移和细胞外基质的合成是高血压、动脉粥样硬化和血管成形术后再狭窄等血管重塑性疾病发生、发展的重要细胞病理学基础[1].血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)的促生长作用参与了高血压、动脉粥样硬化、血管再狭窄等血管增殖性疾病的发生和发展.本实验观察AngⅡ对VSMCs细胞增殖及迁移的影响,进一步阐明血管增殖性疾病的发病机理,为临床防治提供理论依据.1材料与方法1.1细胞培养与试剂:80～100 g健康雄性SD大鼠,取胸腹主动脉血管中膜用贴块法分离、培养VSMCs[2].取3～6代细胞进行实验.待细胞生长至70％～80％汇合后换用无血清培养液饥饿培养16 h,使细胞处于静止期,然后换用含2％FBS的培养液,分别加入不同浓度(10-8、10-7和10-6 mol/L)的AngⅡ(Sigma公司)孵育24h,或10-7 mol/L的AngⅡ孵育不同时间(3、6、12、24和48 h),收集细胞用于实验.
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ERK促进大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞Smad7表达
研究表明,在多种细胞,转化生长因子(transforming growth factor-β,TGF-β)/Smad与细胞外信号调节蛋白激酶(extra cellalar signal regulated protein,ERK)信号传导通路可在多个环节存在相互调节[1].但在血管平滑肌细胞(vascu-lar smooth muscle cells,VSMCs),这两条通路是否存在类似关系,作为抑制性分子Smad7的作用目前还不清楚.本研究观察大鼠胸主动脉VSMCs内ERK通路对Smad7蛋白及其mRNA表达的影响.
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大电导钙离子激活钾通道与糖尿病冠状动脉病变
钙离子(Ca2+)激活钾通道根据电导大小和药理特性的差异可分为3类:即大电导Ca2+激活钾通道(BK)、中电导Ca2+激活钾通道(IK)和小电导Ca2+激活钾通道(SK),其中BK通道因其对血管调节作用较大且分布广泛而备受关注[1].BK通道广泛存在于兴奋和非兴奋细胞,在血管平滑肌细胞(VSMCs)膜上表达尤为丰富,不仅参与细胞膜电位的形成,而且可以维持血管平滑肌细胞收缩和舒张的动态平衡.激活血管平滑肌细胞上的BK通道可增加钾离子(K+)外流,引起细胞膜超极化,使电压门控性Ca2+通道关闭,Ca2+内流减少,血管舒张.
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氧化低密度脂蛋白在血管成形术后再狭窄发生机制中作用的实验研究
动脉粥样硬化闭塞症(atherosclerosis obliterans,ASO)病变基础上血管成形术后再狭窄发生机制的研究一直是血管外科领域研究的热点.氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,oxLDL)在ASO发生发展中起重要作用,它主要通过促进血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)的增殖和移行,导致动脉狭窄或闭塞[1].
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γ射线对大鼠血管平滑肌细胞抑制作用的机理
目的探讨γ射线对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)抑制作用的机理.方法应用克隆形成实验绘制VSMCs剂量存活曲线,采用3H掺入法观察γ射线对VSMCs增殖的影响.应用流式细胞仪和"DNA Ladder”技术检测γ射线对VSMCs凋亡的影响.结果 VSMCs的D0值为1.95 Gy,Dq值为1.76 Gy,D37值为3.71 Gy,N值为2.47.射线对VSMCs增殖的抑制作用呈剂量依赖性,随剂量增加而增大.2、10、20 Gy照射后48 h内VSMCs凋亡数量均未增加.结论γ射线可抑制VSMCs增殖,其机理主要是γ射线对VSMCs中有克隆形成能力的细胞进行杀伤以及抑制其进行有丝分裂.
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miR-26a在动脉粥样硬化发生中的作用
目的 MicroRNAs通过调节血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化、增殖、迁移来影响动脉粥样硬化斑块形成,本文探讨miR-26a在动脉粥样硬化发生过程中的作用.方法 采用终浓度为50 mg/L的氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)诱导VSMCs构建动脉粥样硬化模型;采用real-time PCR检测VSMCs中miR-26a表达;运用western blot检测平滑肌α-肌动蛋白(SM α-actin)和平滑肌肌球蛋白重链(MYH11)蛋白表达;流式细胞仪、BrdU和transwell迁移实验检测VSMCs凋亡、增殖和迁移能力变化.结果 oxLDL诱导VSMCs中miR-26a表达显著升高(3.22±0.21 vs 1.03±0.03,t=10.56,P＜0.001),anti-miR-26a转染VSMCs能显著减少oxLDL诱导的miR-26a表达(P＜0.05).功能学实验发现oxLDL显著下调VSMCs分化标志物SM α-actin和MYH11蛋白表达、抑制细胞凋亡、促进细胞增殖和迁移(P＜0.05),而anti-miR-26a能够逆转oxLDL对VSMCs的作用(P＜0.05).结论 oxLDL处理的VSMCs中miR-26a异常升高,miR-26a促进VSMCs增殖和迁移并抑制细胞凋亡和分化,提示miR-26a在动脉粥样硬化过程中可能发挥关键作用.
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补肾活血通络法对动脉粥样硬化易损斑块内VSMCS凋亡与RANTES水平相关性研究
目的:(1)观察补肾活血通络法对动脉粥样硬化易损斑块的稳定作用及其稳定斑块的可能机制;(2)探讨血清和斑块局部受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(Regulated on Activated Normal T cell Expressed andSecreted factor,RANTES)水平与血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)凋亡程度的相关性.方法:将健康雄性新西兰兔34只,随机分成空白对照组(K组)和造模组(B组).空白对照组8只,给予普通饲料喂养18周.造模组(B组)26只,给予高脂饲料喂养,实验开始第1周一次性注射牛血清白蛋白,实验第10周,随机抽取2只兔做病理检测证实模型组已形成粥样斑块.其余B组兔随机分为模型对照组、辛伐他汀组、健脑软脉方组.辛伐他汀组、健脑软脉方组分别予以辛伐他汀、健脑软脉方水煎剂干预,模型对照组予以生理盐水灌胃,持续8周,实验结束,于处死动物前24 h和48h 2次给予药物触发易损斑块(中国斑点蝰蛇毒和组胺).空白对照组(K组)按上述给药时间和部位给予同等剂量无菌生理盐水注射.实验终点处死实验兔,开胸迅速分离主动脉全长,检测各项指标.结果:模型对照组的主动脉病变程度、血脂水平、血清RANTES水平、斑块内RANTES mRAN和蛋白表达水平、VSMCs凋亡率与健脑软脉方组、辛伐他汀组、空白对照组相比有显著差异(P＜0.05),健脑软脉方组和辛伐他汀组与空白对照组相比有显著差异(P＜0.05),健脑软脉方组和辛伐他汀组之间无显著差异(P＞0.05).结论:本研究表明补肾活血通络法可能通过调节血脂水平,抑制炎症反应,抑制平滑肌细胞凋亡,从而抑制模型兔动脉粥样硬化斑块的不稳定性进展.
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血管平滑肌细胞钾通道的研究进展
血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells ,VSMCs)上分布着多种钾通道,它们参与了细胞膜电位的复极与超极化,影响细胞膜的兴奋性,调节VSMCs的舒缩活动,对血管紧张度的调控具有十分重要的作用.
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黄酮类化合物作用mTOR抑制VSMCs增殖的研究进展
VSMCs的异常增殖是血管增殖性疾病的病理基础.mTOR具有调控细胞存活、增殖和凋亡等重要功能.RAP与mTOR结合,抑制下游底物磷酸化,阻止细胞周期进程,抑制增殖.黄酮类化合物结构与RAP相似,可作用于mTOR及其结合蛋白,抑制VSMCs增殖.
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川芎嗪对AngⅡ诱导的VSMCs增殖中CaM和CaN活性的影响
目的探讨不同浓度川芎嗪在不同作用时间内对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的VSMCs(VSMCs)增殖的抑制作用.方法建立AngⅡ诱导VSMCs增殖模型,用酶促反应定磷法观察不同浓度的川芎嗪在不同时段内对VSMCs中钙调蛋白(CaM)和钙调神经磷酸酶(CaN)活性影响.结果成功建立AngⅡ诱导的VSMCs增殖模型,川芎嗪各组CaM和CaN活性随川芎嗪的浓度和作用时间的延长而显著下降(P＜0.01).结论川芎嗪对AngⅡ诱导的VSMCs增殖的抑制作用有剂量和时间依赖性,其抑制机制可能与其干预CaN依赖的信号转导途径有关.
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AngⅡ和Cx43通过VSMCs参与血管钙化的研究进展
血管钙化(vascular calcification)主要由过量的钙盐在细胞介导下主动沉积于血管组织所致.钙化血管的舒张功能下降,血管僵硬度增加,并且血管里面的血小板粘附和聚集性都增强,易引起动脉血栓的形成和动脉粥样硬化斑块的破裂,因此,可以认为血管钙化是导致心血管疾病的重要危险因子.目前已有研究表明 [1],血管钙化的形成类似于骨发育和软骨的形成,是一个主动且可调控的过程,有许多蛋白质和细胞因子的参与,但尚不清楚其发生和发展的具体机制.因此,了解血管钙化的具体形成机制和相关调控途径对血管钙化的预防和治疗具有重要意义.
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环腺苷二磷酸核糖对血管平滑肌细胞钙调控的研究进展
游离钙在介导和调节血管平滑肌细胞(vascular smoothmuscle cells,VSMCs)的功能中起着重要作用,很多血管活性物质也都通过改变胞内钙浓度来实现它们的功能.已有较多认识的三磷酸肌醇(inositol,1,4,5-trisphosphace,IP3)是胞内重要的第二信使,它通过肌浆网上的IP3受体介导钙释放,从而引起胞内钙浓度的变化.cADPR作为一个新近认识的钙动员第二信使也参与了对胞内钙的调控,而且是独立于IP3通路的.目前越来越多的研究已经开始关注这条通路,并取得了一系列的研究结果,本文就cADPR信号通路在VSMCs钙调控中的作用作一综述.
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PDGF启动子区DNA甲基化在Hcy致VSMCs增殖的作用机制研究
目的:探讨血小板源性生长因子(Platelet-derived growth factor,PDGF) DNA甲基化在同型半胱氨酸((homocysteine,Hcy)致血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖的作用机制.方法:正常人脐动脉VSMCs体外培养,随机分为对照组、治疗组(Hcy100μmol/L+叶酸30 μmol/L)、Hcy干预组(50、100、200、500μmol/L)总计6组,以MTT检测VSMCs的增殖率,巢式降落式PCR (nMS-PCR)法检测PDGF启动子区DNA甲基化的改变.结果:不同浓度Hcy干预的VSMCs与对照组和治疗组相比,随着Hcy浓度的增加VSMCs增殖率增加.治疗组与对照组比所有结果均无明显变化.PDGF甲基化水平增高,100μmol/L、200 μmol/L Hcy组与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01和P＜0.05),而治疗组与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:Hcy可导致人VSMCs PDGF启动子区域甲基化异常从而促进VSMCs的增殖.
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高糖对MMP-2与TIMP-2的表达及血管平滑肌细胞增殖的影响
目的 探讨高糖作用下大鼠胸主动脉平滑肌细胞基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及其组织抑制剂-2(TIMP-2)的表达情况及高糖对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响.方法 大鼠胸主动脉平滑肌细胞培养及传代后,分为正常浓度葡萄糖组(NG组,5.5mmol/L葡萄糖)、甘露醇高渗对照组(5.5 mmol/L葡萄糖+19.5 mmol/L甘露醇)、高浓度葡萄糖组(HG组,25 mmol/L葡萄糖)和GM6001组(25 mmol/L葡萄糖+5μmol/L GM6001),在4组不同的培养环境下分别培养72h后,用RT-PCR技术检测MMP 2与TIMP-2的表达情况,同时用MTT比色法检测4种不同培养环境下VSMCs的增殖情况.结果 HG组与NG组相比,MMP-2与TIMP-2 mRNA的表达增强,差异具有统计学意义(P＜0.01),甘露醇高渗对照组、GM6001组与NG组相比,MMP- 2与TIMP-2 mRNA的表达差异无统计学意义(P＞0.05)；HG组与NG组相比,MMP-2与TIMP-2 mRNA的相对表达量的比值显著增加,差异具有统计学意义(P＜0.01),甘露醇高渗对照组、GM6001组与NG组相比差异无统计学意义(P＞0.05);HG组各时间点细胞增殖与NG组相比差异具有统计学意义(P＜0.05),而GM6001组、甘露醇高渗对照组各时间点的细胞增殖与NG组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 高浓度葡萄糖促进血管平滑肌细胞增殖,这可能是通过MMP-2与TIMP-2表达失衡介导的.
