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不同产地蒙古黄芪中黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ和黄芪皂苷Ⅲ含量的比较与分析＊
目的：采用HPLC-ELSD法测定了16批不同产地蒙古黄芪中黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ的含量。方法：使用DIKMA Diamonsil C18（150 mm×4.6 mm，5μm）色谱柱，乙腈-水为流动相，梯度洗脱，流速：1 mL·min-1，柱温：30℃。ELSD检测器参数：漂移管温度90℃，空气流量2.8 L·min-1。采用SPSS 16.0进行聚类分析。结果：黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅰ、黄芪皂苷Ⅱ和黄芪皂苷Ⅲ在进样量分别为0.0932-1.02μg（r =0.9995），0.789-8.78μg（r =0.9997），0.506-3.13μg（r =0.9996），0.0161-1.38μg （r =0.9992）范围内，平均回收率分别为97.55%、98.61%、99.68%、98.58%，RSD分别为1.2%、1.3%、1.3%、1.2%。聚类分析结果表明，单一采用黄芪甲苷为指标的聚类分析无法区分各省份蒙古黄芪，而同时采用4种皂苷含量为指标，可将不同省份蒙古黄芪明显区分开。结论：本方法简单、快捷、准确，能够更加直接地反映出不同产地蒙古黄芪原药材的质量状况，为蒙古黄芪药材的质量控制研究提供了新思路。
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黄芪提取物对肺纤维化小鼠肺泡炎症影响及抗纤维化作用研究
目的:研究黄芪多糖、黄芪总黄酮、和黄芪总皂苷对博莱霉素(BLM)诱导肺纤维化KM小鼠肺泡炎症影响及抗肺纤化的作用.方法:KM小鼠随机分为假手术组、模型组、药物处理组(黄酮组、多糖组、皂苷组、皂苷+黄酮组)共6组,模型组及药物处理组小鼠气管内一次性滴注BLM,假手术组予等量生理盐水,造模后予相应药物或生理盐水灌胃,第28天取材;分别行肺泡灌洗液细胞计数分类,肺组织HE、Masson染色,免疫组化及western blot测TGF-β1、TNF-α表达水平.结果:①与对照组比较,模型组肺泡灌洗液(BALF)单核细胞和巨噬细胞明显增多(P＜0.05),黄芪黄酮治疗组改善较明显,且优于其他成份组(P＜0.05);②Masson结果和HE结果具有高度一致性,炎症反应强度和纤维化程度成正比.黄芪总黄酮能明显改善肺纤维化炎症反应,抑制早期纤维化结节出现,黄芪多糖和黄芪皂苷改善作用不如黄芪黄酮;③模型组TNF-α、TGF-β1免疫组化阳性颗粒明显比对照组增多,与模型组比较,黄芪黄酮能有效降低TNF-α、TGF-β1水平,黄芪多糖组和黄芪皂苷组与模型组比较虽有一定改善,但是效果不如黄芪黄酮;黄芪皂苷+黄酮联合应用无协同作用;④蛋白印迹结果与免疫组化结果具有一致性.结论:黄芪黄酮能有效抑制肺纤维化炎症反应及后期的纤维化过程,该抑制作用与抑制TNF-α、TGF-β1表达具有密切关系.
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黄芪皂苷对大鼠萎缩性胃炎的治疗作用及对MyD88,TLR4受体的影响
目的:观察黄芪皂苷对萎缩性胃炎(CAG)大鼠的治疗作用,以及对髓样分化因子(MyD88),Toll样受体4(TLR4)受体的影响.方法:采用综合法造模,建立大鼠萎缩性胃炎模型,造模成功后,分别用生理盐水、黄芪皂苷(14.93mg·kg-1)和硫糖铝(360mg·kg-1)ig.在ig的10周、15周时分别处死大鼠,取大鼠全胃,取材、切片,HE染色,固定切片后,显微镜下观察有无肠上皮化生、假性幽门腺化生、不典型增生的发生情况,检测不同组别大鼠各期的胃组织中的MyD88,TLR4的表达,比较各组间MyD88,TLR4表达的差异,并检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性,研究黄芪皂苷对萎缩性胃炎大鼠的治疗作用.结果:黄芪皂苷对萎缩性胃炎大鼠具有治疗作用,黄芪皂苷治疗后,肠上皮化生、假性幽门腺化生、不典型增生的发生情况明显减少,同时MyD88,TLR4的表达较空白组、硫糖铝组明显降低,而SOD活性的表达以黄芪皂苷组较高,与空白组相近,其次为硫糖铝组.结论:黄芪皂苷可以阻止MyD88,TLR4受体的激活,提高SOD活性,对于萎缩性胃炎具有治疗作用.
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黄芪皂苷的提取及含量测定
目的:研究黄芪药材中黄芪皂苷的提取工艺及含量测定.方法:采用70%乙醇回流提取,水饱和正丁醇萃取,D101大孔吸附树脂富集纯化黄芪总皂苷,硅胶柱层析分离不同的皂苷组分;采用薄层色谱法(TLC)、高效液相-示差检测器法(HPLC-RID)进行皂苷类成分的鉴定和含量测定.结果:从黄芪总皂苷中分离出六种黄芪皂苷化合物(AS-Ⅰ～AS-Ⅵ),其中AS-Ⅰ部分经鉴定主要含皂苷Ⅱ,质量分数为29.4%,AS-Ⅲ部分经鉴定主要含皂苷Ⅳ,质量分数为22.82%.其余4个部分有待于进一步鉴定.结论:此法能较好的分离和纯化黄芪皂苷,TLC和HPLC-RID法操作简便,可作为黄芪皂苷的鉴定和含量测定方法.
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HPLC-ELSD测定黄芪提取物中黄芪皂苷Ⅰ,Ⅱ及乙酰黄芪皂苷
目的:研究以HPLC-ELSD法测定黄芪提取物中黄芪皂苷Ⅰ,Ⅱ,乙酰黄芪皂苷Ⅰ的含量.方法:色谱柱为Wele C18(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为乙腈和水,梯度洗脱,流速1 mL·min-1,柱温30 ℃,漂移管温度80 ℃,气体(空气)压力为50 psi.结果:黄芪皂苷Ⅰ,Ⅱ,乙酰黄芪皂苷Ⅰ的平均回收率分别为101.16%,99.34%,100.43%,RSD分别为2.76%,2.28%,2.55%,含量分别为4.01%,1.70%,3.67%.结论:方法简单易行,结果可靠,分离效果好,可作为黄芪提取物中皂苷类成分定量的方法.
关键词： 黄芪提取物 黄芪皂苷 含量 高效液相-蒸发光散射检测 -
筛选调控植物黄芪皂苷含量诱导子的研究
目的:筛选调控黄芪次生代谢产物皂苷含量诱导子.方法:利用正交试验设计,以黄芪皂苷含量为衡量指标,对调控相应代谢途径的诱导子进行了筛选.结果:水杨酸(SA)、茉莉酸甲酯溶液(MeJA)进行地上部位处理3d的处理组合是对黄芪叶皂苷含量影响的佳处理组合;硝酸银(AgNO3)、MeJA进行地上部位处理3d的处理组合是对黄芪茎皂苷含量影响的佳处理组合;水及内生菌发酵液溶液进行地下部位处理3d的处理组合是对黄芪根皂苷含量影响的佳处理组合.结论:黄芪皂苷代谢途径的佳诱导子是MeJA,处理部位是地下部位,佳处理时间是3d,佳皂苷含量变化检测部位是黄芪根部.
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黄芪皂苷注射液指纹图谱的研究
目的:建立黄芪皂苷类成分注射液(包括药材、中间体及注射液制剂)的HPLC-ELSD指纹图谱质量控制方法.方法:Agilent Zorbax SB-C18柱,流动相为A水-B乙腈,二元梯度洗脱:15%～60%B(0～65 min),流速0.8 mL·min-1,蒸发光散射检测器,漂移管温度105℃,载气流速2.7 L·min-1.结果:药材、中间体、注射液制剂中标定的各共有峰相对保留时间的RSD值均小于1.0%,单峰面积大于或等于10%峰的峰面积比值也比较稳定,三者的图谱间具有很好的相关性,10批样品间具有很高的相似度.结论:本方法可作为黄芪皂苷注射液质量控制的依据.
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黄芪皂苷提取物对糖尿病大鼠肾脏的保护作用
为研究黄芪皂苷提取物对糖尿病大鼠肾脏的保护作用,将经链脲佐菌素诱导成功的32只糖尿病大鼠随机分为黄芪皂苷高、低剂量组、阳性对照组、模型组,分别以黄芪皂苷提取物200,50 mg·kg-1·d-1、缬沙坦25 mg·kg-1·d-1、生理盐水10 mL·kg-1·d-1灌胃,另取8只正常大鼠作为正常对照组(生理盐水10 mL·kg-1·d-1),连续给药6周.给药后每周称量大鼠体重,第2,4,6周检测空腹血糖;第6周代谢笼法检测24h尿量及尿蛋白总量(U-TP);第6周末处死大鼠,心脏取血,检测血清中血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、尿酸(UA)、总胆固醇(CH)、甘油三酯(TG)等指标的含量;取双肾,计算肾肥大指数,观察肾脏病理切片.实验结果显示,模型组大鼠的血糖,24 h代谢值,肾肥大指数,U-TP,BUN,Scr,UA,TG较正常组均有显著性升高(P＜0.01,P＜0.05),病理改变明显加重;经黄芪皂苷提取物治疗后,高剂量组大鼠的24h代谢值,肾肥大指数,U-TP,BUN,Scr,UA,TG均有明显下降(P＜0.01,P＜0.05),低剂量组大鼠的肾肥大指数,BUN,Scr,UA,TG亦下降明显(P＜0.05),2组大鼠的肾脏病理改变均有所减轻.本实验结果说明黄芪皂苷提取物对糖尿病大鼠具有一定的肾脏保护作用.
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应用基于LC-TOF-MS分析的质量亏损过滤方法筛选黄芪注射液中的皂苷类成分
采用液相色谱与四极杆飞行时间质谱(LC-TOF-MS)联用技术分析黄芪注射液(HI)样品,获取正负离子模式下HI中化学成分的LC-TOF-MS分析数据.根据前期相关文献报道,建立黄芪皂苷类化合物的质量亏损过滤(MDF)方法,用于系统筛选HI中所含有的皂苷类成分.每个筛选化合物的存在需由不少于2个准分子离子进行确认.后依据其母离子和子离子信息对所筛选的化合物进行初步鉴定.终共从HI中筛选并初步鉴定出62个皂苷类化合物,其中15个为新发现的皂苷类化合物.鉴定结果提示,乙酰化、氢化、去氢化、甲氧基化和水化可能为HI中皂苷所涉及的主要转化反应.该研究丰富了黄芪化学物质基础研究内容,同时也表明基于LC-TOF-MS分析的MDF方法,是一种可行且有效的中药成分系统筛选工具.
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反相气相色谱法(IGC)测定补阳还五汤中黄芪皂苷溶度参数的评价
探讨用反相气相色谱法(IGC)测定补阳还五汤中黄芪皂苷的溶度参数的方法评价.采用葵二酸二正辛酯替代样品进行方法学考察,测得准确度实验的相关系数为0.992 1,精密度实验表明IGC测得结果准确、可靠.IGC测样品溶度参数方法中,以将样品均匀地涂布在惰性担体表面上,以N2气体作为载气,以不同极性的溶剂异丙醇、甲苯、丙酮、氯仿、环己烷作为探针,TCD检测器温度150℃,气化室温度120℃,采用类似顶空进样方式,取其上空气体1μL进GC测量,测试空气和探针分子在色谱柱内的保留时间t0和tR及各项参数.根据IGC方法所测得的t0,tR和相关参数结果,得到黄芪甲苷的溶度参数为(21.02±2.4) [J·cm-3]1/2,文献值为19.24 [J· cm-3]1/2,相关系数0.984 5.IGC测定成分溶度参数结果有效、准确.
关键词： 补阳还五汤 黄芪皂苷 溶度参数 反相气相色谱(IGC) -
黄芪皂苷抑制HEK293sw细胞Aβ生成的机制研究
目的:探讨黄芪皂苷(AST)抑制HEK293sw细胞一淀粉样肽(Aβ)生成的作用机制.方法:采用HEK293sw细胞,常规培养后加入不同浓度(0,0.1,1和10μmol·L,'-1>)AST处理,荧光法测定β-分泌酶活力,并用Western blot和RT-PCR技术检测淀粉样前体蛋白(APP)和β-位点APP切割酶1(BACE1)的表达.结果:在HEK293sw细胞模型上,AST终浓度1和10 μmol·L-1显著降低β-分泌酶活力.1和10 μmol·L-1 AST对APP的蛋白和mRNA表达无影响,但对BACE1的蛋白水平都有降低作用,同时也显著降低mRNA的水平.结论:AST可能通过抑制β-分泌酶而降低AB的产生.
关键词： 黄芪皂苷 β-淀粉样肽 淀粉样前体蛋白 β-分泌酶 β-位点APP切割酶1 -
HPLC-ELSD-大孔吸附树脂分离法测定黄芪皂苷脂质体的包封率
目的对黄芪皂苷脂质体进行质量评价,测定黄芪皂苷脂质体的包封率.方法采用大孔吸附树脂分离脂质体与游离药物,用高效液相色谱-蒸发光散射检测器检测药物含量,计算包封率.结果该方法在0.026～1.229 mg·mL-1间线性良好(r=0.999 7),精密度小于1.24%,加样回收率在99.97%～101.67%之间,预饱和大孔吸附树脂柱对空白脂质体的平均回收率为100.16%,且能很好保留溶液中及脂质体制剂中游离药物.结论该方法具有操作简单,重现性好的优点.
关键词： 高效液相色谱-蒸发光散射检测 大孔吸附树脂 黄芪皂苷 脂质体 包封率 -
HPLC-ELSD法测定黄芪及其注射液中黄芪皂苷Ⅳ,Ⅲ,Ⅰ的含量
目的研究以HPLC-ELSD法测定6种黄芪及黄芪注射液中黄芪皂苷Ⅳ,Ⅲ,Ⅰ的含量.方法色谱柱:Shim-pack ODS柱(150 mm×6 mm);流动相:乙腈-水(36∶64);流速:0.8 mL*min-1;柱压:4.90 MPa;ELSD参数:漂移管温度为90℃,氮气压力0.15 MPa.结果黄芪皂苷Ⅳ,Ⅲ,Ⅰ的平均回收率分别为99.25%,99.91%,100.60%,RSD分别为3.35%,3.00%,2.91%.结论此法简便,快捷,结果可靠,分离效果好,无干扰,可用于黄芪及其制剂的品质评价,并验证了以黄芪皂苷Ⅳ为母核的黄芪皂苷经碱处理可转化为黄芪皂苷Ⅳ.
关键词： 高效液相色谱-蒸发光散射检测器法 黄芪 黄芪皂苷 -
黄芪注射液临床应用进展
黄芪系豆科植物黄芪干燥的根,味甘微温,为中药益气药,有补益脾肺、益气补阳之功效.现代药理学研究表明[1-3],黄芪含有黄芪皂苷、黄酮、多种氨基酸和微量元素,具有显著增强心肌收缩力、扩张冠状动脉、保护心肌细胞和改善心脏功能等用,可以扩张血管,降低血压,还能清除自由基,减少过氧化脂质.增强超氧化歧化酶活性,抑制血小板聚集,降低血液粘稠度,改善微循环,增强肾上腺皮质功能,改善肾功能,防止肝糖原减少.保护肝脏.近年来的研究还表明,黄芪有增强机体非特异性免疫力和增强机体抵抗力的功能,并且有抗疲劳、抗缺氧、抗衰老作用.目前,黄芪注射液广泛应用于临床,本文就其临床应用进展综述如下,以供参考.
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高效液相色谱法测定黄芪精中黄芪甲苷含量
黄芪精为黄芪制备的口服液,具有补血养气,固表止汗等功效,临床主要用于气虚血亏,四肢乏力,精神不足等病症.其主要成分为黄芪皂苷和多糖,目前<中国药典>中黄芪的质量标准是以黄芪甲苷作为对照品,采用薄层扫描法进行测定[1],HPLC法对黄芪药材及其复方制剂中的黄芪甲苷的测定已有报道[2].HPLC 法具有快速、高效、准确的优势,本文采用了HPLC法对黄芪精口服液中的黄芪甲苷的含量进行测定.
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黄芪注射液的不良反应
黄芪注射液是由中药黄芪提取而来的,主要成分为氨基酸、黄酮及黄酮类似物黄芪皂苷,其中主要是黄芪皂苷Ⅴ,还含有多糖及微量元素.具有抗病毒、强心、调节免疫功能、增强代谢的作用.临床上常用于病毒性心肌炎、心功能不全、免疫功能低下、支气管哮喘、慢性支气管炎的预防和治疗.该药药性温和,不良反应较少.随着临床上的广泛应用,其不良反应逐渐发现,笔者检索近年来的医学文献,将其不良反应综述如下,以期在临床应用时引起注意.
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黄芪皂苷和黄芪多糖对乳鼠肥大心肌细胞线粒体膜电位的影响
目的 观察黄芪皂苷和黄芪多糖对心肌细胞线粒体膜电位(mitochondrial lnemhmlle potential,MMP)的干预作用,初步探讨黄芪防治心衰的机理.方法 将体外培养乳鼠心肌细胞分为对照组、模型组、黄芪皂苷组、黄芪多糖组、黄芪皂苷+多糖组.除对照组外各组加血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)造成肥大细胞模型,给药组予黄芪皂苷、黄芪多糖干预,分别测定各组24 h、48 h时心肌细胞MMP.结果 24 h时MMP比较:模型组较对照组下降,有显著性差异(P<0.01);3个给药组较模型组升高,有显著性差异(P<0.01);黄芪皂苷组较对照组升高,有显著差异(P<0.01).48 h时MMP比较:模型组较对照组下降明显(P<0.01);3个给药组较模型组升高,以黄芪皂苷组、黄芪皂苷+多糖组明显,与模型组比较有显著性差异(P<0.01).结论 AngⅡ使心肌细胞MMP下降,黄芪皂苷和黄芪多糖使MMP趋于正常,黄芪皂苷和黄芪多糖可拮抗AngⅡ减低心肌细胞MMP的作用,这可能是黄芪防治心衰的机理之一.
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黄芪皂苷对小鼠化疗贫血模型白介素-2、白介素-4和白介素-6的影响
目的：考察黄芪皂苷对化疗贫血模型小鼠血清中白介素-2(IL-2)、白介素-4(IL-4)和白介素-6(IL-6)的影响。方法选取6~7周龄昆明种小鼠64只,随机分为空白组、模型组、阳性对照组和给药组,每组16只,雌雄各半。采用环磷酰胺建立化疗贫血模型,空白组正常饲养,不予特殊处理。模型组、阳性对照组和给药组分别于1、3、5 d按0.2 g/kg体重剂量腹腔注射环磷酰胺。于造模第7天灌胃给药,空白组、模型组均按10 mL/kg体重胃饲蒸馏水；阳性对照组按5 mL/kg体重胃饲黄芪精混悬液；给药组按10 mL/kg体重胃饲黄芪皂苷溶液,灌胃治疗14 d后,摘眼球取血。利用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定血清中IL-2、IL-4和IL-6的含量。结果与空白组IL-2[(911.5±157.6)ng/L]、IL-4[(711.4±119.8)ng/L]、IL-6[(193.3±71.0)ng/L]含量比较,模型组IL-2[(245.0±104.3)ng/L]、IL-4[(124.3±54.9)ng/L]含量明显下降,IL-6[(1245.7±254.5)ng/L]含量显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组比较,给药组IL-2[(640.8±192.8)ng/L]、IL-4[(574.0±112.4)ng/L]含量明显升高,IL-6[(521.5±203.8)ng/L]含量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论黄芪皂苷能提高化疗贫血模型小鼠血清中IL-2、IL-4的含量,降低IL-6的含量。 IL-2、IL-4、IL-6与环磷酰胺引起的免疫失调和造血功能抑制有关；黄芪皂苷能够改善环磷酰胺所致的小鼠免疫力低下和骨髓抑制情况。
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黄芪皂苷对神经胶质瘤的体外抑制作用及机制研究
目的 探讨黄芪皂苷体外抗神经胶质瘤活性及相关机制.方法 采用体外培养的SHG44细胞株为研究对象,流式细胞仪检测黄芪皂苷作用后SHG44细胞凋亡率,免疫印迹法检测细胞凋亡关键蛋白p53、Bax、Bcl-2的表达变化.结果 黄芪皂苷可诱导SHG44肿瘤细胞凋亡;黄芪皂苷可引发SHG44肿瘤细胞促凋亡蛋白p53、Bax高表达,抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低.结论 黄芪皂苷可通过p53信号通路激活和Bcl-2家族介导的细胞色素C途径诱导癌细胞凋亡,从而对神经胶质瘤细胞产生抑制作用.
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黄芪的临床药理研究简介
黄芪为豆科植物膜荚黄芪或蒙古黄芪的干燥根,又名口芪、绵黄芪、条芪.其性温,味甘,归脾、肺经.具补气固表,利尿排毒,排脓生肌的功效,为重要的补气药.现代药学研究表明黄芪含有多种有效成分,主要有黄芪多糖A、B、C、D,25种氨基酸,黄芪皂苷甲、乙、丙,黄酮类,生物碱,蛋白质,维生素,及硒、硅、钴、钼等微量元素.相应的药理作用及应用也就比较多.随着中药药理研究及应用的快速发展,人们对黄芪的药理作用有了更高的认识,取得了一系列突破.
