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国家中医药管理局抗抑郁中药研究与评价重点研究室暨沈阳药科大学吴春福教授课题组研究概况
一、负责人及团队吴春福,教授、博士生导师,为国家中医药管理局抗抑郁中药研究与评价重点研究室主任,辽宁省重大新药创制综合平台总负责人,辽宁省新药筛选重点实验室和药效评价重点研究室主任,辽宁省多酚研究与开发工程技术中心负责人.兼任中国药学会副理事长,中国药理学会常务理事,辽宁省药学会理事长,辽宁省科协常委,沈阳市科协副主席等.2000年享受国务院特殊津贴,2004年被批准为新世纪百千万人才工程首批国家级人选,2005年被评为辽宁省优秀专家,2010年被评为辽宁省首批领军人才.曾在国际上率先建立脑内微透析技术测定清醒动物脑内乙酰胆碱释放的方法,其研究成果在国际高水平杂志Proc Natl Acad Sci USA和Neurobiol Aging 上发表.吴春福教授领导的"葡萄多酚中功效因子的发现、活性评价及开发应用"研究获得2010年辽宁省科技进步一等奖,2011年获得吴阶平医学研究奖-保罗·杨森药学研究奖.
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首乌方与美多芭同用对PD模型大鼠纹状体细胞外液神经化学物质的影响
目的:应用清醒自由活动大鼠脑内微透析及其相关检测技术,探讨首乌方与美多芭同时应用对帕金森病(PD)模型大鼠纹状体细胞外液神经化学物质的影响.方法:SD大鼠,随机分为对照组、模型组、美多芭组(30 mg· kg-1)、首乌方+美多芭组(含首乌方生药量18 g·kg-1+美多芭30 mg· kg-1).单侧纹状体内注射6-羟基多巴胺造模,清醒自由活动状态下脑内纹状体微透析采样,高效液相-电化学检测样品中多巴胺(DA)及其代谢产物高香草酸(HVA)、二羟基苯乙酸(DOPAC)、羟自由基指标(2,3DHBA,2,5DHBA)浓度.结果:与美多芭组相比,首乌方+美多芭组纹状体细胞外液DA水平升高,高达(39.15 ±28.70) μg·L-1,DA变化率(△DA)降低；羟自由基指标在观察时间内始终低于美多芭组,有9个时间点P＜0.05.结论:首乌方可增加纹状体细胞外液DA递质的浓度并减少其波动；抑制羟自由基产生,对神经细胞具有保护作用.
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首乌方对帕金森病模型大鼠血液和纹状体细胞外液左旋多巴药代动力学影响的研究
目的:采用清醒自由活动大鼠血-脑双位点微透析采样的方法,同步探讨首乌方对左旋多巴(L-DOPA)在帕金森病(PD)大鼠血液和纹状体细胞外液药动学的影响.方法:SD大鼠分为4组,对照组、模型组、左旋多巴组、首乌方+左旋多巴组.脑内注射6-羟基多巴胺(6-OHDA)造模,首乌方+左旋多巴组提前ig首乌方煎剂(生药量18 g·kg-1·d-1)6 d,各给药组单次ip L-DOPA 24 mg·kg-1和盐酸苄丝肼6 mg·kg-1.血-脑双位点微透析采样,分别用高效液相-荧光法(HPLC-FLD)、高效液相-电化学法(HPLC-ED)检测血液、纹状体细胞外液L-DOPA浓度.应用DAS软件拟合药动学参数.结果:与左旋多巴组相比,首乌方+左旋多巴组血药浓度在6个时间点升高,纹状体细胞外液药物浓度在给药后15 min时降低(P＜0.05).左旋多巴组、首乌方+左旋多巴组血液药动学参数分别为:AUC(1 627.7±420.6)mg·L-1·min-1,(2 626.4±980.6)mg·L-1·min-1;Tmax 30 min,(37.5±8.2)min,MRT(0-t)(71.98±3.19)min,(83.44±9.53)min.纹状体细胞外液药动学参数分别为:Tmax(50.0 ±15.5)min,(81.0±27.3) min,MRT(0-t)(68.7±15.34)min,(107.9±26.7)min.与左旋多巴组相比,首乌方+左旋多巴组血液AUC增加(P＜0.05),Tmax延后(P＜0.05),MRT(0-t)延长(P＜0.05).纹状体细胞外液Tmax滞后(P＜0.05),MRT(0-t)延长(P＜0.05).结论:首乌方可减慢L-DOPA消除,增加血液L-DOPA的吸收,减少纹状体L-DOPA药物浓度波动.
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CQM对三叉神经痛模型大鼠的镇痛效应及其对脑内兴奋性氨基酸递质的影响
目的:观察自拟处方CQM对光化学诱导的三叉神经痛模型大鼠镇痛效应及其对脑内兴奋性递质谷氨酸(Glu)的影响.方法:将雄性SD大鼠随机分为假手术对照组和光化学诱导三叉神经痛手术组,后者再分为模型组、加巴喷丁组(100mg·kg-1),CQM低、高剂量组(35,70 mg·kg-1).采用机械痛敏测试的方法评价大鼠的疼痛行为,以机械痛阈反映药效.脑内微透析方法采集大鼠纹状体细胞外液,高效液相-荧光法检测其中Glu水平.结果:与对照组相比,光化学诱导的三叉神经痛模型大鼠的机械痛敏感行为明显增强(P＜0.01),脑内Glu浓度显著升高(P＜0.05).与模型组相比,各用药组机械痛阈均有上升,其中CQM高剂量组在3个时间点显著升高(P＜0.05),高达到(23±7.3)g,加巴喷丁组在2个时间点显著升高(P＜0.05),高达到(20.5±9.2)g.而反映大鼠脑内Glu浓度的指标各用药组均显著低于模型组(P＜0.05).结论:CQM能减轻光化学诱导的三叉神经痛模型大鼠的机械疼痛敏感行为,其镇痛效应可能与降低纹状体细胞外液中Glu水平有关.
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制首乌对脑内灌流6-羟基多巴胺所致大鼠纹状体细胞外液羟自由基升高的影响
目的观察制首乌对脑内灌流6-羟基多巴胺(6-OHDA)所致大鼠纹状体细胞外液羟自由基升高的影响,探讨制首乌对脑保护的作用机理.方法用脑内微透析造模,水杨酸捕获羟自由基,高效液相-电化学检测器测定活体脑内羟自由基所形成的2,3二羟基苯甲酸(2,3-DHBA)和2,5二羟基苯甲酸(2,5-DH-BA).结果6-OHDA脑内灌流后,模型组大鼠纹状体细胞外液2,3-DHBA和2,5-DHBA均迅速增高,前者在观察全程中一直显著高于对照组(P＜0.01);后者部分时间点显著高于对照组(P＜0.05或P＜0.01);制首乌组的2,3-DHBA有5个时点显著低于模型组(P＜0.05或P＜0.01).结论制首乌对6-OHDA脑内灌流引起的细胞外液羟自由基升高有一定程度的抑制作用,提示其脑保护作用的机理之一与抗氧化有关.
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川芎嗪对帕金森病大鼠脑内灌流左旋多巴引起的脑氧化损伤的作用
目的 探讨川芎嗪对左旋多巴(L-DOPA)脑内灌流引起的帕金森病(PD)大鼠脑氧化损伤的影响.方法 用6-羟基多巴胺(6-OHDA)脑内注射造成PD大鼠模型;采用微透析技术脑内灌流L-DOPA和水杨酸捕获羟自由基,高效液相-电化学检测,动态观察大鼠纹状体细胞外液羟自由基被捕获所形成的2,3-二羟基苯甲酸(2,3-DHBA)、2,5-二羟基苯甲酸(2,5-DHBA)浓度的变化.结果 模型组大鼠2,3-DHBA和2,5-DHBA浓度较假手术组分别出现6和7个时间点的显著升高(P＜0.05或P＜0.01);与模型组比较,川芎嗪大、小剂量组在多个时间点其水平明显降低(P＜O.05或P＜0.01).结论 川芎嗪可减轻L-DOPA引起的PD大鼠脑氧化损伤.
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脑内微透析监测
脑内微透析监测(Intracerebral microdialysis monitoring)是一种床边连续性监测脑内生化功能的一种技术.它的功能在于能够准确地显示脑内生化物质之改变,从而有效帮助尽早发现脑部因伤病患(例如:头部受伤)而出现的脑细胞缺血之现象,及尽早施行相应的治疗.脑内微透析监测之技术初在1970年初期于欧洲瑞典出现,¨]现将该技术的装置、原理及临床应用与护理,介绍如下.
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异丙酚麻醉中大脑皮质体感诱发电位变化的作用机制
目的:探讨中枢性去甲基肾上腺素(NA)机制在异丙酚麻醉中大脑皮质体感诱发电位(SEP)变化中的作用.方法:SD 雄性大鼠15只,体重220～250 g,右侧海马内植入微透析探头,按国际脑电10/20系统法安置银针头皮电极,左侧前爪腕部正中神经处安置刺激电极,强度5.2 mA,刺激间隔0.2 ms.动物随机分为3组.A组:经微量泵依次以10、60 mg·kg-1·h-1静滴异丙酚各45 min后停止给药直至动物清醒.B组和C组于开始输注异丙酚的同时分别腹腔内注射α2-肾上腺素受体激动剂(可乐定)或拮抗剂(育亨宾)0.5 mg/kg,其余操作和A组相同.分别于麻醉前(基础值)、麻醉中不同浓度给药时及苏醒期经微透析管收集透析液,检测海马细胞外液中NA浓度,记录皮质SEP N20波的潜伏期和波幅.结果:①各指标基础值各组间差异无显著性(P＞0.05).②A组和B组海马NA释放在异丙酚以60 mg·kg-1·h-1给药时与基础值相比均降低(P<0.05),B组更为明显,C组则随着异丙酚给药浓度增加直至停药后麻醉恢复期均显著增高 (P<0.05).③3组动物SEP N20波潜伏期均无明显变化(P>0.05).④A组不影响 SEP N20波幅(P>0.05);B组在异丙酚低浓度、高浓度给药期和麻醉恢复期SEP N20波幅与基础值相比均显著减低,而C组则增高(P<0.05).结论:α2-肾上腺素受体激动剂和抑制剂所引起的海马NA释放与SEP N20波幅变化的一致性可能与镇痛有关,而异丙酚对海马NA释放的抑制可能是一种催眠反应.
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高效液相色谱法分析大鼠脑微透析液中的去甲肾上腺素
采用微透析方法研究异丙酚对大鼠脑海马区去甲基肾上腺素(NA)释放的影响.采用美国Beckman公司新高效液相色谱仪和BAS公司电化学检测仪,建立测定大鼠脑海马微透析液中NA的方法.
关键词： 海马 脑内微透析 去甲基肾上腺素 高效液相色谱-电化学检测 -
帕金森病模型大鼠血液和纹状体细胞外液左旋多巴药动学同步研究
目的 采用清醒自由活动大鼠血-脑双位点微透析采样的方法,同步探讨左旋多巴(L-DOPA)在帕金森病(PD)大鼠血液和纹状体细胞外液药物浓度随时间变化的规律.方法 SD大鼠随机分为5组,对照组、模型组、高剂量对照组、高剂量模型组和低剂量模型组,脑内注射6-羟基多巴胺(6-OHDA)造模,血-脑双位点微透析采样,分别用高效液相-荧光法(HPLC-FED)、高效液相-电化学法(HPLC-ED)检测血、纹状体细胞外液L-DOPA浓度.应用 DAS 软件拟合药动学参数.结果 PD 大鼠腹腔给药后,药物迅速吸收入血,并通过血脑屏障进入纹状体.血液、纹状体细胞外液L-DOPA药-时曲线符合一室模型;纹状体细胞外液L-DOPA的达峰时间(t<,max>)晚于血液,药-时曲线下面积(AUC<,0-∞>)和达峰浓度(p<,max>)小于血液.结论 清醒PD模型大鼠纹状体细胞外液药动学过程与血液相比存在时间滞后;血、脑药物浓度与给药剂量存在依赖关系,血液药动学行为不能完全反映纹状体中的情况.
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川芎嗪对左旋多巴处理的PD大鼠纹状体细胞外液DA及其代谢产物、羟自由基水平的影响
目的 探讨川芎嗪对左旋多巴(L-DOPA)处理后帕金森病(PD)大鼠纹状体细胞外液多巴胺(DA)及其代谢产物、羟自由基水平的影响.方法 SD大鼠,随机分为对照组、模型组、川芎嗪大剂量组、川芎嗪小剂量组、古拉定组.脑内注射6-羟基多巴胺(6-OHDA)制造部分损伤的PD大鼠模型,并应用脑微透析技术在清醒、自由活动状态下,各组进行L-DOPA脑内灌流处理.动态观察大鼠纹状体细胞外液DA及其代谢产物浓度和羟自由基的变化.结果 L-DOPA处理后,对照组DA浓度在4个时间点较模型组显著增高;模型组DA代谢率在9个时间点较对照组增高、羟自由基的指标2,3-DHBA和2,5-DHBA浓度分别有6和7个时间点显著增高(P＜0.05或P＜0.01);川芎嗪大、小剂量组、古拉定组与模型组相比,多个时间点降低了2,3-DHBA,2,5-DHBA水平和DA代谢比率(P＜0.05或P＜0.01).结论 川芎嗪对L-DOPA处理的PD大鼠具有改善纹状体细胞外液DA代谢率和减轻其氧化应激损伤的作用.
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脑内微透析研究麻醉下鼠海马去甲肾上腺素释放的模型
为研究全麻药物对大鼠脑海马组织去甲肾上腺素(NA)释放的影响,我们建立了一种比较经济、方便可行的脑微透析方法.
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延缓go/no-go任务操作中猴尾核兴奋性氨基酸水平变化的微透析研究
本研究将脑内在体(in vivo)微透析采样技术和高效液相色谱-荧光检测分析法相结合,监测了猕猴(Macaca mulatta)在履行一种延缓go/no-go任务中其尾核内的兴奋性氨基酸水平的变化.在这种行为任务操作中,猴必须根据记忆中保持的暗示信号的位置来发动(go)或抑制(no-go)随后的运动反应,因此具有短时工作记忆性质.我们发现,在这种行为任务操作过程中,猴尾核透析液中的Glu和Asp水平较操作前基础水平分别降低(31.68±3.85)%(n=10)和(26.25±5.95)%(n=10),具有极显著的统计意义(Glu:t9=6.51,P＜0.001;Asp:t9=3.39,P＜0.01).同时,透析液中的Gln和Asn水平也显著降低(P＜0.05).相反,在没有延缓期的go/no-go任务和单纯的延缓go任务操作过程中,尾核透析液中Glu,Asp,Gln和Asn的水平均无显著性变化.这一结果提示,尾核内的兴奋性氨基酸递质传递参与延缓go/no-go任务的操作过程,为尾核内谷氨酸能传递参与运动工作记忆调控提供了直接的实验证据.
关键词： 尾核 延缓go/no-go任务 兴奋性氨基酸 脑内微透析 猕猴 -
重型颅脑损伤脑监护进展
重型颅脯损伤是目前诊治的重点和难点,而严密观察病情,加强监护,使患者得到良好的治疗和护理,是提高治愈率和降低死亡率的重要措施[1].近年来有关脑的监测技术的不断发展,可借助仪器对脑代谢等进行精确监测,使得对以控制颅内压(ICP)和/或保持脑灌注压(CPP)为目的的处理更有依据,弥补了一般临床检查的不足.现代神经监护利用联合各种监测技术来确认或预测脑损伤,并动态指导治疗,以提高治愈率和改善预后[1-3].现将重型颅脑损伤后颅内压、脑血流和脑内微透析等方面监护的进展作一综述.
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脑内灌流6-羟基多巴胺对大鼠纹状体细胞外液氨基酸类神经递质的影响及美多芭的作用
目的 探讨脑内灌流6-羟基多巴胺(6-OHDA)对大鼠纹状体细胞外液氨基酸类神经递质的影响以及美多芭的作用.方法 SD大鼠,随机分为对照组、模型组及美多芭高、低剂量组.采用微透析技术脑内灌流6-OHDA造模,邻苯二甲醛柱前衍生,高效液相-荧光检测技术,动态监测清醒自由活动大鼠纹状体细胞外液氨基酸神经递质水平.结果 6-OHDA脑内灌流40 min后,模型组大鼠纹状体细胞外液谷氨酸(Glu)浓度有4个时间点、γ-氨基丁酸(GABA)浓度有1个时间点、牛磺酸(Tau)浓度有8个时间点较对照组升高(P<0.05或P<0.01).美多芭高、低剂量组与模型组比较分别有5个和4个时间点Glu浓度降低、有7个和2个时间点GABA水平升高(P<0.05或P<0.01).结论 6-OHDA脑内灌流引起大鼠纹状体细胞外液氨基酸类神经递质变化,美多芭可以剂量依赖性地抑制其引起的Glu升高,并进一步增加GABA的浓度.
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应用脑微透析技术建立L-DOPA引起的PD大鼠脑氧化损伤的模型
目的 应用脑微透析技术建立左旋多巴(L-DOPA)引起的PD大鼠脑氧化损伤的模型.方法 6-羟基多巴胺(6-OHDA)脑内注射造成PD大鼠模型,采用微透析技术,脑内灌流L-DOPA、水杨酸捕获羟自由基和高效液相-电化学检测,动态观察L-DOPA处理前后大鼠纹状体细胞外液多巴胺(DA)及其代谢产物,羟自由基被捕获所形成的2,3-二羟基苯甲酸(2,3-DHBA)、2,5-二羟基苯甲酸(2,5-DHBA)浓度的变化.结果 L-DOPA处理后,模型组大鼠2,3-DHBA和2,5-DHBA浓度分别有6个和7个时间点较对照组明显升高(P＜0.05,P＜0.01);还原型谷胱甘肽在多个时间点抑制了这种升高(P＜0.05,P＜0.01).结论 应用脑微透析技术建立L-DOPA引起的PD大鼠脑氧化应激损伤的急性模型,可以进行在体的和动态的监测,为筛选协同L-DOPA治疗PD的抗氧化损伤药物提供有用的方法.
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大鼠脑透析液中羟自由基和单胺类递质及其代谢产物同步监测的方法
目的 建立同时监测脑透析液中羟自由基和单胺类递质及其代谢产物水平的方法.方法 应用脑内微透析技术、水杨酸捕获羟自由基和高效液相-电化学检测器(HPLC-ED)同步监测清醒自由活动大鼠纹状体细胞外液羟自由基和单胺类递质及其代谢产物的水平.结果 从NE、EPI、DOPAC、DA、5-HIAA、2,5-DHBA、HVA、2,3-DHBA、3-MT和5-HT的保留时间、小检测值、标准曲线在20～160μg·L-1浓度范围内与峰高的相关系数、同日4次测定混合标准的变异系数CV等表明本色谱分析的方法是可靠的;Ringer液和水杨酸(SASS)-Ringer液灌流时纹状体细胞外液单胺类递质及其代谢产物的水平无明显变化(P均＞0.05).SASS-Ringer灌流时可测出羟自由基的水平,且不影响单胺类的测定.结论 用SASS-Ringer灌流收集的透析液可在本实验的条件下,一次进样后同时测定羟自由基和单胺类递质及其代谢产物.
关键词： 脑内微透析 羟自由基 单胺类及其代谢产物 高效液相色谱-电化学检测器 -
建立脑内灌流6-OHDA所致大鼠纹状体细胞外液羟自由基升高的模型
目的建立脑内灌流6-羟基多巴胺(6-OHDA)所致大鼠纹状体细胞外液羟自由基升高的模型,为老年退行性病变和其它氧化应激所致脑细胞损伤的研究和药物筛选提供可利用的方法.方法微透析脑内灌流6-OHDA造模,采用水杨酸捕获羟自由基,高效液相-电化学检测技术,对活体脑内羟自由基所形成的2,3二羟基苯甲酸(2,3-DHBA)和2,5二羟基苯甲酸(2,5-DHBA)进行测定. 结果 6-OHDA脑内灌流后,模型组大鼠纹状体细胞外液2,3-DHBA和2,5-DHBA在75 min分别为对照组的6.6和3.4倍;2,3-DHBA在观察的全程中,一直高于对照组(P<0.01);2,5DHBA大部分时间点也高于对照组(P<0.05或P<0.01);维生素EC组的2,3-DHBA有4个时点低于模型组(P<0.05或P<0.01),2,5-DHBA各时点均低于模型组,但差异无显著性.结论 6-OHDA脑内灌流可以造成大鼠纹状体细胞外液羟自由基升高的急性模型.
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动态监测清醒自由活动大鼠纹状体细胞外液乙酰胆碱和胆碱水平的方法
目的建立动态监测正常清醒自由活动大鼠纹状体细胞外液中乙酰胆碱(ACh)和胆碱(Ch)水平的方法.方法应用脑内微透析与高效液相色谱(HPLC )-柱后固定化酶反应器(IMER )-电化学检测法(ED)相结合的技术,动态监测正常清醒自由活动大鼠纹状体细胞外液中ACh和Ch水平.结果大鼠纹状体细胞外液中ACh和Ch浓度在灌流开始时较高,然后逐渐降低,ACh在灌流进行240 min后达到较稳定水平;Ch浓度则在灌流的450 min内持续下降.HPLC-IMER-ED检测ACh和Ch的极限可达150 fmol,且至少在0.125～1.0 μmol*L-1的范围内线性关系良好.结论 HPLC-IMER-ED是一种灵敏且可靠的测定ACh和Ch的方法,和微透析技术相结合可以动态监测清醒自由活动大鼠脑内细胞外液中ACh和Ch的水平.
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预运动训练对大鼠脑梗死后脑内谷氨酸水平动态变化的影响
目的 研究预先电动跑台运动训练对大鼠脑梗死后大脑中枢兴奋性氨基酸水平变化的影响,探讨预运动对缺血脑损伤保护作用的机制.方法 将Sprague-Dawley大鼠随机分为5组(每组实验用时均为4周):运动1周组(运动训练1周,在第4周实施)、运动2周组(运动训练2周,在后2周实施)、运动4周组(运动训练4周)、假手术组和缺血组.各组大鼠在实验4周后,于脑内纹状体留置微透析管,进行大脑中动脉缺血术,采用微透析技术收集大鼠缺血前、缺血期间(40,80和120 min)和再灌注后(40,80,120,160,200和240 min)的脑细胞外液.测定大脑兴奋性氨基酸含量的变化,选取谷氨酸(Glu)含量作为兴奋性氨基酸的主要参考值.同时测量缺血再灌注24 h时的脑梗死体积.结果 缺血再灌注24 h时不同组间脑梗死体积变化差异有统计学意义(P<0.05).2周和4周的预先电动跑台运动训练可显著下调因缺血而过度升高的Glu浓度(P<0.01).结论 至少2周的预运动训练对随后发生的脑损伤缺血期及再灌注期间,大脑内重要的兴奋性氨基酸递质--Glu的过度释放有一定程度的抑制作用,这可能是运动对早期脑缺血损伤的保护机制之一.
