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缓激肽对体外培养兔角膜内皮细胞增殖状况及对闭锁小带蛋白-1与相关性核酸结合蛋白表达的影响
目的 观察缓激肽(bradykinin,BK)对体外培养家兔角膜内皮细胞增殖及对紧密连接相关蛋白闭锁小带蛋白-1(zonula occludens-1,ZO-1)、闭锁小带蛋白-1相关性核酸结合蛋白(zonula occludens-l-associated nucleic-acid-binding protein,ZONAB)表达的影响,初步探讨BK促进角膜内皮细胞增殖的作用机制.方法 选择对数生长期的兔角膜内皮细胞,向培养基中分别加入0.01、0.10、1.00、10.00 μmol·L-1 BK(BK组),对照组不做加药处理,倒置相差显微镜下观察细胞的形态变化和增殖状况,MTT法检测各组细胞在24 h、48h、72 h、96 h的吸光度(A)值,Western blot检测72 h各组细胞中紧密连接处ZO-1与核内ZONAB蛋白的表达.结果 加药72 h,各组细胞融合成片并紧密连成单层,加药96 h后各组细胞生长受限,细胞间隙变大,脱落细胞增多.与对照组相比,除0.01 μmol·L-1 BK组24 h外,其余浓度BK处理后A值升高、增殖活力增强,差异均有统计学意义(均为P＜0.001),并呈现出一定的浓度依赖性,其中1μmol·L-1 BK作用强(P＜0.001).Western blot结果显示BK可促进紧密连接处ZO-1与核内ZONAB蛋白的表达,且呈一定的浓度依赖性.结论 BK体外刺激可促进兔角膜内皮细胞的增殖,具有浓度和时间的依赖性,其作用机制可能与ZO-1与ZONAB介导的信号通路有关.
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急性胰腺炎患者肠黏膜屏障功能损害相关研究
目的 探讨急性胰腺炎(AP)患者肠黏膜屏障功能改变机制.方法 61例AP患者按病情程度分为重症组(n=31)和轻型组(n=30),另选肠镜检查志愿者作为对照组(n=30),电镜观察肠黏膜超微结构变化,比较血清内毒素、白细胞介素-18(IL-18)及肠黏膜ZO-1、Occludin的变化.结果 对照组ZO-1和Occludin蛋白为棕黄色,染色较强,成点状聚集;轻型组和重症组患者肠黏膜ZO-1和Occludin蛋白的染色变浅.轻型组和重症组患者肠黏膜ZO-1和Occludin蛋白光密度水平较对照组下降(P＜0.05,0.01).与轻型组比较,重症组患者肠黏膜光密度水平降低(P＜0.05).轻型组和重症组患者肠黏膜ZO-1、Occludin基因水平较对照组下降(P＜0.05,0.01);重症组患者肠黏膜ZO-1、Occludin基因水平较轻型组下降(P＜0.05).轻型组和重症组患者内毒素和IL-18水平均高于对照组,差异有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01).重症组患者肠黏膜内毒素和IL-18水平高于轻型组,差异有统计学意义(P＜0.05).血清内毒素、IL-18水平与ZO-1蛋白和Occludin蛋白表达均呈负相关(r=-0.79、-0.64、-0.71、-0.61,P＜0.05).结论 AP患者早期肠黏膜受损,肠黏膜通透性增加.内毒素和IL-18可能协同或单独参与肠黏膜的破坏.
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辛伐他汀对全脑缺血/再灌注损伤大鼠血脑屏障的保护作用及机制研究
目的:探讨辛伐他汀对全脑缺血/再灌注损伤(CIRI)大鼠血脑屏障(BBB)的保护作用及机制.方法:成年SD大鼠随机分为5组,即假手术组、模型组、10 mg?kg-1辛伐他汀组、20 mg?kg-1辛伐他汀组、40 mg?kg-1辛伐他汀组.模型组和辛伐他汀组采用Kouzumi线栓法建立CIRI模型.再灌注后1h,辛伐他汀组给予10～40 mg?kg-1辛伐他汀灌胃,模型组给予生理盐水.再灌注71h后,比较各组神经功能损伤评分、脑组织含水量;采用western blot法检测梗死灶皮层ZO-1、occludin、claudin-5蛋白表达.结果:与模型组相比较,10～40 mg?kg-1辛伐他汀组神经功能损伤评分、脑组织含水量(P<0.05),同时ZO-1、occludin、claudin-5蛋白表达显著增高(P<0.05).结论:辛伐他汀对大鼠CIRI所致BBB破坏具有一定保护作用,其作用机制与调控紧密连接相关蛋白有关.
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ZO-1和Claudin-1在胆管癌中的表达及其意义
目的 探讨ZO-1及Claudin-1在胆管癌中的表达并分析其与胆管癌侵袭转移的关系.方法 应用免疫组织化学方法检测Claudin-1和ZO-1在胆管癌、肝转移灶和正常胆管组织中的表达;采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)方法检测胆管癌细胞株中Claudin-1及ZO-1基因表达水平.结果 Claudin-1与ZO-1在正常胆管组织中的表达量分别是胆管癌组织中的12.94倍和5.19倍(P＜0.01),分别是胆管癌肝转移组织中的125.62倍和60.31倍(P＜0.01);Claudin-1与ZO-1在胆管癌组织中的表达与胆管癌是否发生局部或者远处转移密切相关(P＜0.05).在3种胆管癌细胞株中,Claudin-1和ZO-1在QBC939和RBE中高表达;在TFK-1中低表达.结论 Claudin-1与ZO-1在胆管癌中的表达与胆管癌的侵袭转移能力密切相关.
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TSG-6对脑出血大鼠血脑屏障的保护作用
目的:探讨肿瘤坏死因子α刺激基因6因子(TSG-6)对脑出血大鼠血脑屏障的保护作用及对Claudin-5和ZO-1表达的影响.方法:大鼠108只,随机分为对照组12只、模型组48只和TSG-6组48只.大鼠自体动脉血注射制备脑出血模型,分光光度法检测各组出血侧和未出血侧大脑皮质及海马组织中伊文思蓝(EB)浓度,Western Blotting检测出血侧和未出血侧大脑皮质及海马组织中Claudin-5和ZO-1蛋白表达水平.结果:干预后4h、1d、3d和7d,模型组和TSG-6组出血侧大脑皮质和海马组织中EB浓度高于对照组(P＜0.05);模型组和TSG-6组出血侧大脑皮质和海马组织中Claudin-5和ZO-1蛋白表达水平低于对照组(P＜0.05);TSG-6组出血侧大脑皮质和海马组织中EB浓度低于模型组(P＜0.05);TSG-6组出血侧大脑皮质和海马组织中Claudin-5和ZO-1蛋白表达水平高于对照组(P＜0.05);TSG-6组和模型组未出血侧大脑皮质和海马组织中的EB浓度、Claudin-5和ZO-1蛋白表达水平与对照组没有显著性差异(P＞0.05).结论:TSG-6对脑出血大鼠的血脑屏障有保护作用,其作用机制可能与升高血脑屏障中的紧密连接蛋白Claudin-5和ZO-1的表达水平有关.
关键词： 肿瘤坏死因子α刺激基因6因子 脑出血 claudin-5 ZO-1 -
促血管生成素-1蛋白减少大鼠尿激酶溶栓后脑出血转化及机制研究
目的:探索促血管生成素-1 (Ang-1)蛋白能否减少尿激酶溶栓的大鼠脑梗死模型出血转化率、出血量及其可能的机制.方法:清洁级SD大鼠按照随机分组法分为4组:假手术组,生理盐水对照组、尿激酶溶栓组、尿激酶+Ang-1组,每组24只.比较各组出血转化率、出血量、脑水肿、血脑屏障破坏情况和紧密连接蛋白oecludin,ZO-1的表达.采用脑组织干湿重法评估脑水肿程度,伊文思蓝通透率评估血脑屏障破坏情况,RT-PCR和Westem blot检测紧密连接蛋白occludin,ZO-1 mRNA的表达水平.结果:尿激酶溶栓组的出血量、脑水肿和血脑屏障破坏程度相较于其余各组明显增高(P＜0.05);occludin,ZO-I的表达低于其余各组(P＜0.05);尿激酶+ Ang-1组的出血转化率、出血量、脑水肿和血脑屏障破坏程度低于尿激酶溶栓组(P＜0.05).Occludin,ZO-1表达比尿激酶溶栓组增高(P＜0.05).结论:Ang-1蛋白可减少尿激酶溶栓所致的脑出血、血脑屏障损失及脑水肿水平,其机制可能与增加紧密连接蛋白occludin,ZO-1的表达从而保护血脑屏障有关.
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紧密连接蛋白ZO-1 PDZ结构域的研究进展
自然界的生物过程常常需要特定的蛋白质间相互作用来实现,而这些相互作用大多数是通过结构域来实现的.结构域是蛋白质的基本结构和功能单位,是蛋白质中具有特异结构和独立功能的区域,决定着蛋白质的主要功能,许多蛋白质的相互作用是通过蛋白质结构域识别另一蛋白质的一段短肽序列而结合完成的.结构域作为一个重要的进化单元,可以在基因组中重复出现,结构域的核苷酸序列比较保守,可以经若干代的进化仍能比较完整地保留下来,这也证明了结构域对于维持蛋白质的功能具有无可替代的重要性.
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一种跨膜蛋白--闭锁蛋白的研究现状
紧密连接存在于上皮细胞的连接复合体中,有屏障功能和保持细胞极性的作用,已证实闭锁蛋白、Claudin和JAM位于紧密连接处,其中闭锁蛋白在维持紧密连接的功能方面有重要作用.闭锁蛋白与质膜下蛋白有密切的联系,其功能受到多方面因素的调控.
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Toll样受体阻断剂对内毒素血症小鼠肠黏膜损伤的影响
目的 探究Toll样受体(TLR)阻断剂对小鼠肠黏膜上皮细胞间紧密连接蛋白ZO-1的影响及对核转录因子-κB(NF-κB)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响.方法 将32只BALB/C小鼠分为对照组、模型组、TLR4处理组、TLR2处理组(n=8),腹腔注射LPS建立内毒素血症小鼠模型,TLR4处理组、TLR2处理组在腹腔注射LPS同时分别给予TLR4抗体和TLR2抗体(10μg/只)腹腔注射,对照组以生理盐水替代.取各组小鼠远端小肠组织,采用RT-PCR及免疫组化法检测ZO-1、NF-κBp65及TNF-α 的mRNA和蛋白定位表达.结果 模型组ZO-1 mRNA及蛋白表达明显低于对照组(P<0.05),NF-κBp65、TNF-αmRNA及蛋白表达明显高于对照组(P<0.05);TLR4处理组及TLR2处理组ZO-1 mRNA及蛋白表达明显高于模型组(P<0.05),NF-κBp65、TNF-αmRNA及蛋白表达明显低于模型组(P<0.05);TLR4处理组与TLR2处理组ZO-1、NF-κBp65、TNF-αmRNA及蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 抗TLR2、TLR4单克隆抗体可减少核转录因子的激活,抑制炎症因子大量分泌,保护紧密连接蛋白,有望对治疗肠源性感染疾病提供新的思路.
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紧密连接蛋白ZO-1、occludin和actin参与缺氧缺血诱导的血脑屏障通透性增加
目的 探讨血脑屏障紧密连接(blood-brain barrier-tisht junction,BBB-TJ)蛋白ZO-1、occludin和ac.tin在缺氧缺血诱导的血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)通透性增加中的变化及其机制.方法 利用人脐静脉内皮细胞系ECV304与星形胶质细胞(astrocytes,AS)共培养建立体外BBB模型,模型随机分为正常对照组和缺氧缺血两组.透射电镜观察两组间BBB-TJ的变化,直接免疫荧光观察细胞骨架蛋白actin分布的改变.γ计数仪检测大分子物质125I-牛血清白蛋白(120I-BSA)通透曲线观察BBB通透性的改变,Western blot检测细胞骨架蛋白actin,胞浆附着蛋白ZO-1,跨膜蛋白occludin的表达量的改变.结果 透射电镜观察培养第10天的体外BBB模型,可见内皮细胞连接紧密,细胞间形成光滑、连续、较高密度的紧密连接.缺氧缺血后5 h,内皮细胞间连接开放,形成裂隙.直接免疫荧光下检测可见周边Actin丝带模糊,部分断裂,形成细胞间裂隙.缺氧缺血组1251-BSA的通透量增加,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).同时ZO-1的表达量显著减少,而occludin和actin的表达量无明显改变.结论 缺氧缺血诱导occludin的位置分布改变和ZO-1的表达量减少进而促使actin蛋白发生重排,是导致缺氧缺血后BBB通透性增加的可能机制之一.
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nephrin和ZO-1在糖尿病大鼠肾组织中的表达及其与足细胞数目的相关关系
目的 探讨糖尿病肾病发展过程中nephrin及ZO-1的表达变化及其与足细胞数目的相关关系.方法 建立STZ诱导的糖尿病大鼠模型,应用免疫组织化学及RT-PCR方法观察在糖尿病肾病发展过程中nephrin、ZO-1蛋白及mRNA表达变化,以及应用WT-1来标记足细胞核,观察足细胞数目的变化.结果 8周时,糖尿病组nephrin和ZO-1染色强度较正常组明显降低(P<0.05),12周时变化更为明显(P<0.01),足细胞数目在两个时间点较正常组均明显减少.足细胞数目与nephrin及ZO-1表达呈正相关(r=0.93 P=0.0024;r=0.923,P=0.0086),而与尿蛋白呈负相关(r=-0.9508 P=0.0036).结论 nephrin和ZO-1在糖尿病肾病发展过程中表达减低,并与足细胞数目呈正相关.nephrin和ZO-1的表达减低与足细胞数目减少以及尿蛋白的发生密切相关.
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intermedin预处理对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的相关修复基因的影响
目的 探讨intermedin(IMD)预处理对大鼠肾脏缺血再灌注损伤(IRI)修复再生过程中相关修复基因的影响.方法 健康雄性Wistar大鼠144只,随机分为假手术组、IRI 组、转染空质粒组和转染IMD组.动物右肾切除后,用超声微泡技术将质粒转染入左肾,1周后制作肾脏IRI模型.分别于再灌注后1d、2d、3d、4d、7d和14 d留取肾组织标本.RTPCR法检测肾组织Pax-2、ZO-1、Ncam、Wt-1和vimentin的mRNA表达变化；Western印迹法分析Pax-2、Wt-1和vimentin蛋白表达变化；ELISIA法检测ZO-1、Ncam的蛋白表达变化.结果 (1 )IRI组大鼠Pax -2、Zo-1、Ncam、Wt-1和vimentin的mRNA和蛋白的表达在IRI后1～3 d增加,2d达到高峰,与假手术组相比差异有统计学意义(P＜0.05),4d后基本恢复.(2)在IRI后1～4 d,转染IMD组上述的mRNA和蛋白表达与同时间点的假手术组、IRI组和转空质粒组相比差异均有统计学意义(均P＜ 0.05),其中2d达高峰.(3)在IRI后7d、14 d,IRI组、转染空质粒组和转染IMD组上述指标的mRNA和蛋白表达和假手术组差异无统计学意义(均P＞ 0.05)；在IRI后4d,IRI组和转空质粒组上述的表达较假手术组增高,但差异无统计学意义(P＞0.05).(4)各时间点IRI组和转染空质粒组上述各指标差异均无统计学意义(P＞0.05).(5)ELISA法检测的ZO-1和Ncam蛋白表达变化趋势与RT-PCR及Western印迹法一致.结论 IMD预处理可通过增加肾脏组织修复基因Pax-2、ZO-1、Ncam、Wt-1和vimentin的表达,从而对肾组织的修复和再生起到重要作用.
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感染后肠易激综合征小鼠IL-17、occludin和ZO-1的动态改变
[目的]观察感染后肠易激综合征小鼠肠组织中IL-17、occludin和ZO-1的动态改变.[方法]40只C57BL/6小鼠随机分为对照组、感染组(感染后2、4、6、8周组).感染组小鼠用0.2 mL含400～ 500条旋毛虫的生理盐水灌胃.于感染后2、4、6、8周,记录小鼠体质量,检测腹壁撤退反射(AWR),连续8h收集小鼠粪便,计算粪便含水百分数.HE染色观察肠道病理改变,免疫组织化学法及Western blotting检测回盲部和结肠中IL-17、occludin和ZO-1的表达.[结果]感染后第2周小鼠肠道出现急性炎症反应,体质量显著降低(P=0.000);至第8周肠道炎症和小鼠体质量基本恢复至正常.结直肠扩张容量为0.35和0.5 mL时,感染组AWR评分均高于对照组(P＜0.01).感染组粪便含水百分数均高于对照组(P＜0.05).免疫组化及Western blotting结果显示:与对照组相比,感染后2周组IL-17降低(P＜0.05),感染后8周组IL-17增高(P＜0.05);感染组occludin和ZO-1均低于对照组(P＜0.05).[结论]IL-17的动态改变及紧密连接蛋白occludin和ZO-1的减少可能是导致PI-IBS小鼠内脏高敏感性和粪便含水百分数增高的原因之一,参与了PI-IBS的发生.
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脑通汤对脑微血管内皮细胞缺氧/复氧损伤内皮屏障抗原及紧密连接相关蛋白Claudin-5、ZO-1表达的影响
目的:探讨脑通汤对脑微血管内皮细胞(BMECs)缺氧/复氧损伤的保护作用及血脑屏障通透性的影响.方法:体外培养大鼠原代BMECs,缺氧/复氧法模拟脑缺血再灌注损伤.免疫组化检测内皮屏障抗原(EBA)蛋白表达;实时荧光定量PCR法检测紧密连接蛋白-5 (Claudin-5) mRNA、紧密连接蛋白(ZO-1)mRNA的表达.结果:免疫组化示,与正常细胞组比较,模型组EBA蛋白表达明显下降(P＜0.05);与模型组比较,脑通汤大、中剂量含药血清组EBA蛋白表达显著升高(P＜0.05);但正常血清组与模型组比较差异无显著性(P＞0.05).买时荧光定量PCR法示,与正常细胞组比较,模型组Claudin-5、ZO-1 mRNA的表达明显下降(P＜0.05);与模型组比较,脑通汤不同剂量含药血清组干预后,Claudin-5、ZO-1 mRNA的表达量明显上调,其中脑通汤大剂量含药血清组显著上调(P＜0.05).结论:脑通汤可以保护脑微血管内皮细胞缺氧/复氧损伤,其保护机制可能与其上调EBA蛋白及Claudin-5、ZO-1基因的表达密切相关.
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Cx43磷酸化及其与ZO-1、Src相互作用的研究进展
缝隙连接(Gap Junction,GJ)是沟通相邻细胞胞质的细胞间通道,介导缝隙连接细胞间通讯(GJIC),缝隙连接蛋白(Connexin,Cx)是实现GJIC的结构基础,主要通过对细胞信号的传导来发挥作用.近年来随着分子生物学发展,有学者认为这种传导主要由Cx43完成[1].
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基于对通透性及紧密连接的影响探讨益艾康对HIV/AIDS肠黏膜屏障损伤的保护作用
目的 通过观察益艾康对IFN-γ损伤肠黏膜屏障通透性及紧密连接的影响,探讨益艾康对HIV/AIDS肠黏膜屏障损伤的保护作用.方法 利用IFN-γ刺激Caco-2单层细胞屏障模拟体内HIV损伤肠黏膜的病理过程,实验分为空白对照组、IFN-γ组、益艾康组、IFN-γ+益艾康组,观察不同时间点下列指标变化:跨细胞膜电阻抗值变化;荧光素钠透过率改变;紧密连接蛋白ZO-1蛋白及mRNA变化.结果 与空白对照组相比,IFN-γ干预不同时间点TEER值均有所降低,48 h降低为明显(P＜0.05),与IFN-γ组相比,益艾康在不同时间点均能提高Caco-2细胞单层TEER值;IFN-γ干预不同时间后,荧光素钠的渗漏量均由不同程度的增加,48 h后降低已非常明显,与空白对照相比差异显著(P＜0.05),与IFN-γ组相比,益艾康能明显降低荧光素钠的渗漏量(P＜0.05);与空白对照组相比,IFN-γ能引起Caco-2细胞单层ZO-1蛋白及mRNA表达下降(P＜0.05),而益艾康含药血清能提高肠黏膜屏障损伤模型ZO-1蛋白及mRNA的表达(P＜0.05).结论 益艾康能降低IFN-γ引起的肠黏膜屏障的通透性增加,维持肠黏膜屏障的完整性,其机制与抑制紧密连接蛋白ZO-1的表达下降从而维持正常的紧密连接相关.
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黄芪注射液对脑缺血再灌注后血脑屏障的保护作用及ZO-1蛋白表达的影响
目的 探讨黄芪注射液对大鼠脑缺血再灌注后血脑屏障的保护作用及ZO-1蛋白表达的影响.方法 采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型.将SD大鼠随机等分为假手术组、生理盐水对照组、黄芪注射液治疗组.采用分光光度计法及免疫组化法分别检测大鼠脑组织伊文氏蓝含量及ZO-1蛋白的表达.结果 与假手术组相比,生理盐水对照组大鼠脑组织伊文氏蓝含量明显增多,ZO-1蛋白的表达明显减少;与生理盐水对照组相比,黄芪注射液组大鼠脑组织伊文氏蓝含量显著减少,ZO-1蛋白的表达湿著增加.结论 黄芪注射液对脑缺血再灌注后血脑屏障具有保护作用,可能与黄芪注射液上调ZO-1蛋白的表达有关.
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严重烧伤后肠黏膜肌球蛋白轻链磷酸化表达改变及其意义
目的 探讨肌球蛋白轻链(myosin light chain,MLC)磷酸化在严重烧伤早期对肠黏膜屏障功能及细胞紧密连接相关蛋白变化的作用.方法 健康成年SD大鼠48只,采用随机数字表法分为正常对照组及烧伤后1、2、6、12、24 h组,用异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITC-Dextran)检测大鼠肠黏膜通透性,免疫荧光法检测肠黏膜细胞紧密连接相关蛋白ZO-1、F-肌动蛋白(F-actin)及磷酸化型MLC(phosphorylated MLC,p-MLC)的变化.结果 烧伤后大鼠肠黏膜通透性明显增加,伤后6 h达高峰,为对照组的3倍(P<0.01);烧伤后肠上皮通透性的增加伴随有紧密连接相关蛋白ZO-1的明显重分布、细胞紧密连接损害以及肠上皮细胞p-MLC表达的增加.结论 MLC磷酸化可能在严重烧伤后肠黏膜屏障功能紊乱及通透性增加的发生机制中起着重要的调控作用.
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冰片配伍灯盏花素对大鼠脑缺血再灌注损伤血脑屏障通透性的影响
目的:研究冰片配伍灯盏花素后对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障通透性的影响.方法:50只雄性大鼠随机分为假手术组、模型组、冰片组、灯盏花素组及冰片配伍灯盏花素组.线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型,缺血2h,再灌注24h进行检测.伊文思蓝法检测血脑屏障通透性,免疫印迹法检测ZO-1和Claudin-5蛋白的表达,RT-PCR法检测ZO-1和Claudin-5基因的表达.结果:冰片配伍灯盏花素能显著降低脑组织中EB浓度(9.87±1.15),提高ZO-1和Claudin-5蛋白(0.83±0.06,1.05±0.07)和mRNA(1.51±0.07,1.58±0.08)的表达.结论:冰片配伍灯盏花素对血脑屏障的保护作用可能与冰片促进灯盏花素透过血脑屏障有关.
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miR-200 b介导血肿瘤屏障通透性增加的机制
目的：研究微小RNA（ microRNA，miRNA）miR-200b是否介导血肿瘤屏障（ blood-tumor barrier， BTB）通透性增加。方法：测量跨内皮阻抗值（ TEER）、辣根过氧化物酶（ HRP）渗漏量，分析血脑屏障（ blood-brain barrier，BBB）和BTB通透性的改变，应用Real-time PCR检测血脑屏障BBB和BTB大鼠脑微血管内皮细胞（ rat cerebral microvascular endothelial cell RCMEC，ECs）miR-200b的表达，应用miR-200b agomir和miR-200b antagomir分别转染GECs（ECs和U87脑胶质瘤细胞共培养的细胞）后分析血肿瘤屏障的通透性改变；应用Western blot检测紧密连接相关蛋白ZO-1（ zonula occludens-1）的表达；应用免疫荧光方法观察GECs紧密连接相关蛋白ZO-1和丝状肌动蛋白（ filamentous actin，F-actin）结构和分布的改变。结果：与BBB 相比，BTB的TEER值显著降低，HRP显著升高；与BBB 的ECs 相比，GECs内源性miR-200b表达显著降低；miR-200b agomir和miR-200b antagomir成功转染到GECs 中；miR-200b agomir 组TEER值显著升高，HRP流量显著降低，以及ZO-1表达显著升高，抑制ZO-1由内皮细胞的边缘向细胞质转移，抑制丝状肌动蛋白由细胞膜边缘向细胞中央区分布，F-actin分布于细胞边缘明显增加，应力纤维形成明显减少；miR-200b an-tagomir结果与miR-200b agomir实验结果相反。结论：MiR-200b介导BTB通透性增加。
