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多重耐药不动杆菌主要β-内酰胺酶基因型及同源性研究
随着广谱抗生素的广泛应用,多重耐药的不动杆菌的比例不断上升,并在全球多处的重症监护病房发生暴发流行,成为抗感染治疗的棘手问题.近年来我院鲍曼不动杆菌分离率不断增加,耐药率也不断上升,本研究分析了我院2007年7月-2008年5月临床分离的61株多重耐药不动杆菌属菌株的耐药性、同源性及主要β-内酰胺酶基因型.
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肠炎沙门菌PFGE分子分型及耐药性研究
目的 分析龙岩市肠炎沙门菌脉冲场凝胶电泳(PFGE)分子分型特点和耐药特征,为食源性疾病暴发的发现及疫情控制和临床诊治提供参考依据. 方法 对收集自2014、2016年龙岩市食物中毒、食品安全风险监测和临床散发病例分离的77株肠炎沙门菌进行PFGE分析,并测定其中57株对16种常用药物的小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC). 结果 77株肠炎沙门菌分为17个PFGE型别,其中P4、P6和P8为优势型别;按照90%的相似度可得到3个优势PFGE型别簇(Cluster 1~3).暴发相关的带型主要为P8、P6、P4和P14,分别与5次食物中毒事件有关.57株肠炎沙门菌药敏结果以耐萘啶酸高(93%),其次是氨苄西林(74%)和链霉素(54%).耐3种或3种以上抗生素的多重耐药菌占71.93%(41/57). 结论 龙岩市肠炎沙门菌PFGE型别呈现多态性,存在3个优势PFGE型别簇,在食物中毒事件中以PFGE分子分型检测能快速预警肠炎沙门菌散在暴发和溯源.肠炎沙门菌多重耐药现象应引起重视,需加强对多重耐药株的监控及抗菌药物使用的监管.
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鲍曼不动杆菌多重耐药性与主动外排机制的相关性研究
目的 了解多重耐药鲍曼不动杆菌主动外排系统及双组分调节系统编码基因的携带情况,并观察外排泵抑制剂对多重耐药鲍曼不动杆菌耐药水平的影响程度,以探讨鲍曼不动杆菌多重耐药性与胞膜主动外排系统的关系.方法 PCR方法 扩增外排泵编码基因adeB及双组分调节系统编码基因adeR和adeS.采用琼脂稀释法测定50株多重耐药鲍曼不动杆菌对环丙沙星、阿米卡星、头孢噻肟和亚胺培南的低抑菌浓度(MIC),并观察在含25μg/ml利血平条件下MIC值的变化程度.结果 50株多重耐药鲍曼不动杆菌adeB、adeR及adeS基因的携带率分别为94%、96%及92%.以环丙沙星、头孢噻肟、阿米卡星和亚胺培南作为底物,分别有49、50、50和46株菌在含25μg/ml利血平的条件下MIC值降低4倍或4倍以上,呈现明显的外排作用.结论 主动外排机制是本地区鲍曼不动杆菌多重耐药的重要原因之一.
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肠杆菌科细菌多药外排系统AcrAB的研究进展
细菌耐药性的产生及扩散使新型抗生素从一问世就面临耐药的威胁,尤为突出的是,当细菌接触某种抗生素时,其可产生对多种结构不相关抗生素的多重耐药,这种表型通常是多药外排系统超表达的结果.现已认识到,在决定细菌对各种抗微生物制剂固有及获得性耐药的因素中,主动外排机制居主要地位[1].其中AcrAB-TolC是大肠埃希菌主要的、占绝对优势的多药外排系统,并存在于其它肠杆菌科细菌中,其与细菌对氟喹诺酮耐药及多重耐药密切相关[2-4].本文就AcrAB多药外排系统的结构、调控等研究进展作一综述.
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hBD1稳定表达细胞株的建立及其表达产物对多重耐药菌的活性检测
目的 构建人β防御素1( hBD1)稳定表达细胞株并检测其对多种多重耐药菌的抗菌活性.方法 将重组质粒pCMV-hBD1通过阳离子脂质体转染于非洲绿猴SV40转化的肾细胞(COS-7细胞),经过G418压力筛选后获得单克隆细胞株；提取细胞总RNA,用RT-PCR检测目的基因在转录水平的表达；收集细胞培养上清液,用Western blot检测hBD1基因蛋白的表达；将含有表达产物hBD1的细胞培养上清液分别同各耐药菌液混合,37℃孵育不同时间后涂布于LB平板,以各实验组和对照组的菌落数的比值作为该耐药菌的存活率.结果 经过G418压力筛选所得到的稳定表达细胞株,在转录水平和蛋白水平均检测到目的基因hBD1的表达,在表达产物hBD1的作用下,多重耐药鲍氏不动杆菌、多重耐药大肠埃希菌存活率和多重耐药肺炎克雷伯杆菌的存活率可以分别降至9%、22%和50%,多重耐药嗜麦芽窄食单胞菌的存活率同对照组没有明显差异.结论 成功获得hBD1稳定表达细胞株,目的基因hBD1的表达产物对多种多重耐药菌均具有抗菌活性.
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2株产KPC-2型碳青霉烯酶肠聚集性大肠埃希菌的分离
肠聚集性大肠埃希菌（ EAEC）可引起成人和儿童的持续性水样腹泻。多重耐药的EAEC菌株在多个国家和地区均有报道，国内尚未见相关报道。本研究首次报道重症监护病房中分离到2株对碳青霉烯类抗生素耐药的EAEC菌株。
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2015年广东省沙门菌监测及其耐药性分析
目的 了解广东省腹泻患者感染沙门菌的情况,分析沙门菌的血清型分布和耐药特征.方法 采集粪便标本进行传统分离培养,对沙门菌进行血清分型和药物敏感试验.结果 2015年广东省沙门菌监测阳性率为7.64％,男女之比为1.52∶1,各年龄段患者均可感染沙门菌,以0～6岁的儿童感染为主,所占比例为81.74％.夏秋季沙门菌的分离率为10.73％,高于冬春季的分离率4.24％,差异有统计学意义(X2 =463.77,P<0.01).不同地区沙门菌分离率分别为:珠海16.82％, 河源15.85％, 阳江11.81％, 江门10.68％, 中山8.49％,茂名8.07％,揭阳8.05％,韶关7.35％,佛山6.97％,东莞6.03％,广州5.48％,湛江0.00％, 地区之间比较,差异有统计学意义(X2 =367.67,P<0.01).除1株沙门菌不能分型外,其余2 376株菌分为108种血清型.前4位优势血清型分别为4,5,12:i:-沙门菌、肠炎沙门菌、斯坦利沙门菌和鼠伤寒沙门菌.沙门菌对亚胺培南、阿奇霉素、头孢他啶、头孢噻肟和甲氧苄啶/磺胺甲噁唑的敏感率较高,但多重耐药现象严重.结论 广东省人源沙门菌以4,5,12:i:-沙门菌和肠炎沙门菌为主.头孢他啶和头孢噻肟可作为治疗沙门菌感染的首选用药.沙门菌多重耐药现象严重,需要进一步加强耐药监测.
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多重耐药铜绿假单胞菌MexAB-OprM、MexXY-OprM主动外排系统的耐药作用
目的 探讨MexAB-OprM、MexXY-OprM主动外排系统(外排泵)在多重耐药铜绿假单胞菌耐药机制中的作用.方法 选取25株外科监护室分离的多重耐药铜绿假单胞菌,用实时定量RTPCR测定结构基因mexA、mexX的mRNA表达水平来判断MexAB-OprM、MexXY-OprM外排泵表达情况;用PCR分别扩增其调控基因mexR、mexZ,并对其产物测序,用Blast软件在GenBank与已知序列比较,研究其过度表达的机理.结果 25株多重耐药铜绿假单胞菌中,14株高表达MexAB-OprM系统(56%),3株高表达MexXY-OprM系统(12%),这3株菌同时高表达2种外排泵.在8株mexA高表达的菌株中,5株菌发生mexR基因突变,出现氨基酸替代,1株mexR提前出现终止密码子,2株菌未发现mexR基因突变.2株mexX高表达的菌株均发生基因mexZ突变,出现氨基酸替代.结论 主动外排系统MexAB-OprM、MexXY-OprM在多重耐药铜绿假单胞菌中过度表达,是此菌多重耐药机制之一;外排泵MexAB-OprM、MexXY-OprM高表达分别与调控基因mexR、mexZ发生变异有关,同时存在其他调控机制.
关键词： 多重耐药 铜绿假单胞菌 主动外排系统(外排泵) -
多重耐药鲍曼不动杆菌相关耐药基因检测分析
目的 为了解多重耐药鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶(BLA)基因、氨基糖苷类修饰酶(AMEs)基因、消毒剂与磺胺类耐药基因(qacE△1-sul1)和1类整合子酶基因(intl1)存在情况.方法 对2005年1-6月份临床分离的31株多重耐药菌株(耐哌拉西林、第三代头孢菌素、环丙沙星和阿米卡星),应用聚合酶链反应及序列分析方法分析其BLA、AMEs、qacE△1-sul1和intl1基因类型.结果 31株多重耐药鲍曼不动杆菌对多黏菌素B敏感,有3株(9.7%)对受试的其他18种抗菌药物均耐药.19株(61.3%)检出了β-内酰胺酶基因,其中TEM、PER、DHA阳性率分别为61.3%、19.4%、3.2%,未检出SHV、OXA-23、OXA-24、GES、IMP和VIM等基因.25株(80.6%)检出氨基糖苷类修饰酶基因,其中aac(3).Ⅰ、aac(6')-Ⅰ、ant(3")-Ⅰ、ant(2")-Ⅰ、aog(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅱ阳性率分别为67.7%、45.2%、29.0%、22.6%、9.7%、3.2%.qacE△1-sul1、intl1阳性率分别为80.6%、58.1%.分离株常见的基因组合是TEM+qacE△-sul1+intl1和TEM+PER+qacE△1-sul1+intl1,分别占25.8%和19.4%.分离株AMEs的常见的基因组合是aac(3)-Ⅰ+aac(6')-Ⅰ和aac(3)-Ⅰ+aac(6')-Ⅰ+ant(2")-Ⅰ,分别占19.4%和12.9%.结论 临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌TEM、aac(3)-Ⅰ、aac(6')-Ⅰ、ant(3").Ⅰ、aac(2")-Ⅰ、qacE△1-sul1和intl1基因携带率高.
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儿童重症监护病房多重耐药鲍氏不动杆菌肺部感染危险因素及耐药性分析
目的 调查儿童重症监护病房(PICU)多重耐药鲍氏不动杆菌(MDRAb)肺部感染危险因素及药物敏感性,为减少MDRAb感染发生及有效治疗提供帮助.方法 以45例非MDRAb肺部感染患儿(NMDRAb组)为对照,回顾性分析2009年1月至2011年8月武汉市儿童医院PICU收治的115例MDRAb肺部感染(MDRAb组)药敏结果,采用单因素和多因素Logistic回归分析方法,分析各研究因素与MDRAb感染关系,找出感染危险因素.结果 共检出Ab 176株,其中MDRAb 128株,占72.73％.药敏结果显示,除头孢哌酮/舒巴坦外,其他β-内酰胺类药物耐药率均＞70％,碳青霉烯类药物耐药率高达90％以上,普遍高于NMDRAb感染组,阿米卡星、环丙沙星、左旋氧氟沙星及米诺环素耐药率低(＜20％)；多因素Logistic回归分析显示ICU入住时间、机械通气时间、贫血、低蛋白血症、前期碳青霉烯类抗生素的使用为MDRAb肺部感染独立危险因素.结论 MDRAb是PICU肺部感染的重要条件致病菌,耐药现象严重,严重影响患儿预后,针对感染相关危险因素,积极采取行之有效的预防措施是降低其发生率的关键.
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儿童医院重症监护病房金黄色葡萄球菌分子特征的研究
目的 了解儿童医院重症监护病房(intensive care unit,ICU)金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)的分子学分型、毒力基因携带及耐药情况.方法 收集鉴定2016年1月至2016年12月北京儿童医院新生儿及儿童ICU患儿临床送检标本中培养出的金葡菌,采用头孢西丁纸片法和mecA检测鉴定耐甲氧西林金葡菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)或甲氧西林敏感金葡菌(methicillin-susceptible Staphylococcus aureus,MSSA);对所有菌株进行多位点序列分型(muhilocus sequence typing,MLST)和spa分型,并对MRSA菌株进行葡萄球菌盒氏染色体(staphylococcal cassette chromosome mec,SCCmec)分型;采用PCR方法检测21种超抗原基因和杀白细胞素(Panton-Valentine leukocidin,pvl)基因;采用E-test方法检测12种抗生素药物敏感性.使用Fisher's确切概率法比较MRSA与MSSA菌株在毒力因子携带及耐药方面的差异.结果 共收集金葡菌39株(其中MRSA菌株18株),分别来源于肺炎(包括重症肺炎)、败血症和皮肤软组织感染;ST59-SCCmecⅣa-t437 (55.6％)和ST398-t571 (28.6％)分别是MRSA和MSSA分离株常见的流行克隆.26株(66.7％)金葡菌菌株至少携带一种超抗原基因,常见的分别是seb(38.5％)、sek (30.8％)和seq (20.5％),常见的超抗原基因型为seb-sek-seq,占18.0％.在本研究中,pvl基因阳性率为25.6％,MRSA和MSSA分离株pvl基因携带率的差异无统计学意义(P＜0.05).所有菌株的多重耐药率为79.9％,红霉素耐药率为100％,其次为青霉素、克林霉素和氯霉素,耐药率分别为94.9％、53.8％和51.3％,均对复方新诺明、利福平、万古霉素和利奈唑胺敏感.结论 儿童医院ICU金葡菌分离株主要来源于肺炎、败血症和皮肤软组织感染,MRSA和MSSA分离株常见的流行克隆分别是ST59-SCCmecⅣa-t437和ST398-t571.金葡菌分离株的超抗原基因携带率和多重耐药率较高.
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整合子系统介导铜绿假单胞菌多重耐药机制的研究进展
铜绿假单胞菌(P.Aeruginosa)原称绿脓杆菌(以下均以PA表示).在自然界分布广泛,为土壤中存在的常见的细菌之一.各种水、空气、正常人的皮肤、呼吸道和肠道等都有本菌存在.铜绿假单胞菌广泛存在于医院环境中,并成为医院感染的主要病原菌之一,具有易定植、易变异和多耐药的特点[1,2].由其引起的医院获得性肺炎(HAP)、呼吸机相关性肺炎(VAP)约占10%～35%,已成为医院获得性肺炎的主要致病菌.
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2007～2010年临床标本常见病原菌构成及耐药性分析
目的 了解医院临床分离病原菌种类分布及对抗菌药物耐药性变化.方法 对2007～2010年住院病人所分离菌株进行分析,药敏试验使用纸片扩散法,按照美国国家临床实验室标准委员会(NCCLS)的标准进行.结果 G+球菌感染呈下降趋势,杆菌、真菌感染呈上升趋势,而G-杆菌中大肠埃希菌、铜绿假单胞菌的增长也较快.各种细菌对多种抗菌药物有较高的耐药性,尤其是常见的细菌对四环素、复方新诺明、红霉素、氨苄西林、青霉素的耐药性均高达80%以上;个别细菌同时对多种抗菌药物具有多重高度的耐药性,如铜绿假单胞菌,达80%以上.结论 条件致病菌的感染呈上升趋势,细菌感染的耐药性在增加,监测细菌分布和耐药性的变化很有意义,应加强耐药性监测及抗菌药物合理使用的管理,以有效控制细菌感染和耐药性播散.
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肠球菌鉴定和药敏试验室间质控结果分析
肠球菌属是目前院内感染的重要病原菌之一,具有耐药性强和多重耐药的特点,可引起人体多种组织脏器的感染,特别是免疫功能低下患者的严重感染[1].近年来肠球菌属细菌所致感染有不断增加的趋势,因此做好肠球菌的鉴定和药敏试验具有十分重要的意义,而做好肠球菌鉴定和药敏试验的室间质量控制是提高肠球菌检验水平的有效方法之一.
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鲍曼不动杆菌临床分离株分布特征及药敏分析
目的：分析我院鲍曼不动杆菌的分布特征及耐药现状，为临床防治方案的制定提供依据。方法运用VITEK 2 compact全自动微生物鉴定仪对2013年6月至2013年12月我院临床分离的不动杆菌属菌株进行菌种鉴定，选用VITEK 2药敏试验卡AST-GN13进行鲍曼不动杆菌对17种抗菌药物的药敏试验，分析患者临床资料及鲍曼不动杆菌药敏试验结果。结果我院鲍曼不动杆菌在627株不动杆菌属临床分离株中的分离率为86．3％（541/627），该菌主要分布于50岁以上年龄组，占84．1％（455/541），痰液标本分离率高为85．2％（461/541），主要分布于ICU（35．7％，193/541）和呼吸内科病区（25．5％，138/541）；临床常用的17种抗菌药物中，仅对亚胺培南耐药率较低为28．8％，多重耐药鲍曼不动杆菌占64．5％（349/541）。结论鲍曼不动杆菌为不动杆菌属主要临床分离菌，主要引起老年患者、ICU患者呼吸道感染。该菌呈现高耐药率，多重耐药现象严峻。
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产超广谱β-内酰胺酶多重耐药的肺炎克雷伯菌相关基因研究
目的 了解山西地区五家医院多重耐药的肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KP)的耐药特点,并研究其产超广谱β-内酰胺酶(extended spectrum β-lactamaes,ESBLs)多重耐药的KP相关基因的流行情况.方法 收集2010年1月-2012年12月山西地区五家医院临床标本中分离的KP2516株,采用药敏试验(K-B法)和ESBLs确证实验筛选多重耐药的KP,采用PCR法扩增ESBLs多重耐药的KP相关基因,选取阳性产物进行测序并在Genbank进行分析.结果 2516株KP中,筛选出40株产ESBLs的多重耐药KP.PCR法基因扩增检测出40株blaTEM型,1株SHV型和4株KPC型;检测出染色体介导的GyrA型32株,质粒介导的qnrA型8株,qnrB型15株,以及qnrS型2株;没有检出金属酶NDM-1基因.结论 多重耐药的KP耐药机制非常复杂,多重耐药菌株的出现导致同一菌株中同时携带几种基因.因此,应加强临床病例的监测,合理使用抗菌药物,减少泛耐药菌株的传播.
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淋球菌临床分离株药敏分析
目的 明确本院淋球菌的耐药情况及产青霉素酶的淋球菌(PPNG)和质粒介导的耐四环素淋球菌(TRNG)流行现状,为临床防治方案的制定提供依据.方法 运用VITEK2 Compact全自动微生物鉴定仪对2014年1月至2015年12月本院临床分离菌株进行菌种鉴定,采用琼脂微稀释法测定青霉素、四环素、环丙沙星、头孢曲松和大观霉素5种抗菌药物对淋球菌进行药敏实验,用纸片酸度定量法测定淋球菌株的β-内酰胺酶.结果 183株受试淋球菌中检出PPNG 57株(31.1％),质粒介导的TRNG 59株(32.2％);青霉素、四环素、环丙沙星耐药率分别为91.8％、75.4％和97.3％;未检出头孢曲松耐药菌株,低敏菌株检出率为11.5％;未检出大观霉素耐药及低敏菌株;青霉素、四环素和环丙沙星50％低抑菌浓度(MIC50)及90％低抑菌浓度(MIC90)值均已超过耐药标准;淋球菌多重耐药菌株检出率为91.8％(168/183).结论 佛山地区淋球菌临床分离株对青霉素和环丙沙星呈现高耐药率,多重耐药现状严峻.
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凝固酶阴性葡萄球菌生物膜形成与多重耐药关系的研究
目的 探讨临床标本中凝固酶阴性葡萄球菌(coagulase negative Staphylococci,CNS)生物膜形成的状况,及其对细菌耐药的影响和多重耐药的关系,提高临床对CNS感染的重视,并帮助临床根据药敏试验结果选用抗菌药物.方法 采用微孔板法制备生物膜,结晶紫染色,酶标仪比色检测42株CNS的生物膜形成情况；对临床标本分离的CNS进行鉴定,并采用纸片法进行药敏试验；所有数据采用SPSS 17.0统计软件进行统计学分析.结果 比色法检测CNS的生物膜阳性率为76.19％(32/42).药敏试验结果显示生物膜阳性的CNS耐药情况较严重,尤其是对青霉素G和红霉素,耐药率分别为96.88％和78.13％,对复方新诺明、克林霉素、四环素、环丙沙星耐药率亦超过50.00％,且呈多重耐药；生物膜阴性的CNS耐药情况较轻,仅对青霉素G和红霉素耐药情况较严重,耐药率分别为60.00％和40.00％；尚未发现对万古霉素耐药的CNS菌株.生物膜阳性CNS菌株对青霉素G、红霉素、克林霉素和复方新诺明的耐药率均显著高于生物膜阴性CNS菌株,差异均有统计学意义(P均＜0.05).CNS生物膜生成多少与多重耐药的严重情况呈正相关性(r=0.975,P＜ 0.01).结论 临床标本分离出的CNS绝大部分能产生生物膜,对常见抗菌药物的耐药情况严重,且生物膜形成多少与多重耐药情况呈正相关关系.
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分析9年不动杆菌院内感染的耐药性变化及其与Ⅰ类整合子的相关性
目的 了解我院9年间鲍曼不动杆菌和洛菲不动杆菌的耐药性变化,并探讨其耐药性与Ⅰ类整合子的相关性.方法 收集2001年1月至2009年12月我院分离培养的不动杆菌共1552株,采用VITEK-2全自动细菌鉴定仪进行检验及耐药分析.采用PCR检测60株鲍曼不动杆菌和30株洛菲不动杆菌的Ⅰ类整合子,分析Ⅰ类整合子与细菌耐药性的相关性.结果 1552株不动杆菌中以鲍曼不动杆菌1360株(87.6%),洛菲不动杆菌 154株(9.9%)为主.药敏结果显示不动杆菌的耐药率总体呈逐年上升的趋势.PCR检测结果显示38株(63.3%)鲍曼不动杆菌和17株(56.7%)洛菲不动杆菌为Ⅰ类整合子阳性,Ⅰ类整合子阳性菌株的耐药率及多重耐药(multidrug resistance,MDR)率显著高于Ⅰ类整合子阴性菌株,且差异均有统计学意义(P均<0.05).结论 经验性用药或抗生素滥用导致了9年间不动杆菌的耐药率呈逐年上升的趋势.Ⅰ类整合子在不动杆菌的耐药率及MDR率升高中起重要作用.
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耐亚胺培南铜绿假单胞菌的耐药情况及其产金属酶的相关基因VIM-2的研究
目的 了解临床分离耐亚胺培南铜绿假单胞菌(imipenem-resistant Pseudomonas aeruginosa,IMPRPA)的耐药特征,探讨该菌产金属β-内酰胺酶及其相关基因VIM-2对抗菌药物耐药性的影响.方法 收集3年临床分离的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)共1426株,采用MIC法测定抗生素耐药性；用复合纸片法筛查IMPRPA产金属β-内酰胺酶的菌株；聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)法对金属酶相关基因VIM-2进行检测并测序确定.采用SPSS 11.5统计软件对数据进行统计学分析.结果 1426株PA中,IMPRPA为910株(63.8％),非IMPRPA为516株(36.2％)；IMPRPA对12善抗生素的耐药率除四环素外,均显著高于非IMPRPA,差异均有统计学意义(P均＜0.05).910株IMPRPA均为多重耐药株,多重耐药率为63.8％,显著高于非IMPRPA的5.0％(71株),差异具有统计学意义(P＜0.05).910株IMPRPA中检出产金属β-内酰胺酶168株,占18.5％(168/910);168株IMPRPA采用PCR扩增,检出135株IMPRPA (80.4％,135/168)携带有blaVIM-2型基因.结论 IMPRPA耐药性强,多重耐药现象严重,VIM-2型金属酶基因型在产金属β-内酰胺酶的1MPRPA菌株中检出率高,但该基因并不是PA产金属β-内酰胺酶对12种抗菌药物耐药的主要原因.
