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纤维化引起心房电传导功能障碍导致心房颤动的机制及其抗纤维化治疗
心房纤维化可导致心房电传导速度减慢,传导方向异质性,引起并维持心房颤动的发生.肌成纤维细胞(MFbs)是心肌纤维化的主要作用细胞,其通过转化生长因子β1、结缔组织生长因子、血小板衍生生长因子、基质金属蛋白酶以及金属蛋白酶组织抑制因子等多种细胞因子和酶作用促进心肌纤维化.而MFbs迁移至损伤区域引起的胶原蛋白沉积、缝隙连接蛋白表达异常以及释放旁分泌因子影响心肌电传导功能.在基础疾病早期干预,抑制心房纤维化,改善心房电传导功能,有望成为防治心房颤动的新型手段.
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Cx26和Cx43在大鼠胚胎肝发育过程中的时空表达
目的:观察Cx26和Cx43在大鼠胚胎肝发育过程中的时空表达,以了解其在肝脏发育过程中的作用.方法:用E8d～E20d及P1d的SD大鼠,石蜡切片,免疫组化染色,光镜下观察Cx26和Cx43在大鼠发育E1d～P1d过程中的表达.结果:①Cx26在E15d开始表达,此时只有少数体积大、核大的肝细胞呈Cx26阳性反应,阳性反应产物见于肝细胞浆及细胞核.②E16d开始出现少量Cx26呈弱阳性的造血细胞,E17d和E18d反应阳性强度增加,至E20d时反应消失.③E14d开始出现Cx43呈弱阳性的肝实质细胞,E15d～P1d多数肝细胞浆呈Cx43强阳性,P1d少数肝细胞核呈Cx43阳性反应.④E18d～P1d肝内可见呈Cx43阳性的造血细胞.结论:①Cx26与肝细胞的生长分化关系不大,而与肝细胞的技能分化密切相关;Cx43与肝的结构发育和成熟分化相关;Cx26和Cx43均可能与肝内造血细胞与肝实质细胞之间的信息传递有关.②胚胎肝组织中Cx26和Cx43呈不同表达状态,推测可能是由于胚胎肝细胞间、间质细胞间、肝细胞和间质细胞间以及胚胎肝细胞与造血细胞间装配的缝隙连接通讯通道结构有所不同所致.
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缺血预处理对大鼠缺血再灌注后心房肌Cx43和Cx40的影响
目的 探讨缺血预处理(IPC)对大鼠缺血再灌注(I/R)后心房肌缝隙连接蛋白43 (Cx43)和缝隙连接蛋白40(Cx40)表达和分布的影响.方法 30只Wistar大鼠随机分为假手术组(或对照组,n=5):只穿线不结扎左冠状动脉前降支;缺血再灌注组(I/R组,n=5):给予前降支结扎30 min,再灌注120min;早期缺血预处理组(IPC组,n=5):行IPC处理后,余处理同I/R组;延迟IPC组(L-IPC组,n=5):在IPC处理24h后,余处理同I/R组;早期远程缺血预处理组(RIPC组,n=5):给予RIPC后,余处理同I/R组;延迟RIPC组(L-RIPC组,n=5):RIPC处理24h后,余处理同I/R组.测量心房组织Cx40、Cx43的mRNA表达,Cx40、Cx43蛋白表达,以及用免疫组化法测定Cx40、Cx43的分布.结果 I/R组Cx43和Cx40在mRNA水平和蛋白水平均明显降低,分布无规律且侧面分布相对增加.而各种IPC方式(IPC、L-IPC、RIPC、L-RIPC)在I/R后,心房Cx43和Cx40 mRNA水平和蛋白水平下降不明显,其分布多于心肌细胞闰盘处,仅少量分布于心肌细胞侧面.结论 IPC能维持I/R后心房肌Cx43和Cx40的较高表达,并维持其空间分布相对稳定.
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丹参素对异丙肾上腺素损伤大鼠内皮血管活性的保护作用及机制研究
目的 观察异丙肾上腺素持续给药对大鼠内皮血管活性的影响及丹参素的保护作用.方法 雄性SD大鼠随机分为5组:对照组,模型组,丹参素高、低剂量(3、10 mg/kg)组,缬沙坦(10 mg/kg)阳性对照组.血管切片染色观察组织形态改变;观察各组大鼠内皮完整胸主动脉环对内皮依赖型血管收缩剂杨梅黄酮、内皮依赖型血管舒张剂乙酰胆碱的反应性,观察缝隙连接开放剂AAP-10和阻断剂18α-甘草次酸对模型大鼠血管环舒缩功能的影响;Western blotting法测定血管缝隙连接蛋白Connexin 43 (Cx43)、Connexin 40 (Cx40)的表达水平.结果 模型组大鼠血管中膜厚度明显增加,收缩舒张功能均下降:与模型组相比,丹参素给药组大鼠血管组织结构有所改善,血管舒缩功能显著提高(P＜0.05).与模型组相比,模型大鼠胸主动脉环用18α-甘草次酸孵育后收缩功能显著降低(P＜0.05),用AAP-10孵育后收缩功能恢复,舒张功能改变不明显.Western blotting结果显示,丹参素和缬沙坦治疗组均可有效逆转异丙肾上腺素引起的Cx40、Cx43水平降低(P＜0.05).结论 丹参素可有效保护异丙肾上腺素引起的大鼠血管环收缩与舒张功能损伤,其机制可能与丹参素保护血管上缝隙连接蛋白表达,逆转受损信号传导有关.
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黄芪总黄酮对病毒性心肌炎小鼠心律失常与内质网应激因子的影响
目的:研究黄芪总黄酮(TFA)对病毒性心肌炎小鼠心律失常与内质网应激及缝隙连接蛋白作用,明确TFA抗病毒性心肌炎合并心律失常作用机制.方法:36只雄性Balb/c小鼠分为正常对照组、病毒性心肌炎组和TFA组(n=12),病毒性心肌炎组腹腔内无菌注射含0.1 ml/d 10-950 TCID柯萨奇B3病毒(CVB3),注射3d制备Balb/c小鼠病毒性心肌炎模型,TFA组给予CVB3同时尾静脉注射0.1 ml TFA (20 mg/L),共7d.实验结束后心电图检测心律失常发生率后处死小鼠,取心脏行HE染色,观察心肌病理改变,Western blot检测各组小鼠心肌细胞葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、内质网应激信号通路因子激活转灵因子4(ATF4)及缝隙连接蛋白(Cx43)表达.结果:与正常组比较,病毒性心肌炎组GRP78与ATF4的表达显著升高(P＜0.01),Cx43表达明显下降(P＜0.01);与病毒性心肌炎组比较,TFA组小鼠心肌细胞GRP78与内质网应激信号通路因子ATF4表达明显减少(P＜0.01),Cx43表达明显增多(P＜0.01).结论:TFA抗心律失常作用可能与缓解内质网应激及增加Cx43表达有关.
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黄芪注射液对阿霉素性心肌细胞凋亡、内质网应激与缝隙连接蛋白表达的影响
目的:研究黄芪注射液对阿霉素(ADR)所致心肌病大鼠心肌细胞凋亡、内质网应激与缝隙连接蛋白表达的影响.方法:36只Wistar雄性大鼠随机分为3组(n=12):对照组、ADR组及黄芪注射液组.对照组腹腔注射0.9％ Nacl(10 ml/kg体重);ADR组腹腔注射ADR 2 mg/kg体重;黄芪注射液组在每次腹腔注射ADR 2 mg/kg体重的同时,注射黄芪注射液10 g/kg体重,每周注射1次,共注射3次.实验第7周末,3组大鼠行心脏彩超检测左室舒张末期内径、左室收缩末期内径及左室射血分数;处死大鼠后取左心室组织行HE、Masson、醋酸铀及柠檬酸铅染色,于光镜及透射电镜下观察心肌病理及超微结构改变;采用TUNEL法检测大鼠心肌细胞凋亡,用免疫组化技术检测大鼠心肌细胞缝隙连接蛋白Cx43及p-Cx43表达,采用real time PCR检测大鼠心肌细胞内质网应激伴侣蛋白Grp78,ATF-4及CHOP表达.结果:与对照组比较,ADR组大鼠LVEDD、LVESD增大,LVEF减少;心肌纤维排列紊乱,心肌纤维间质水肿,大量淋巴细胞浸润;线粒体肿胀、破坏,呈空泡样;心肌细胞凋亡数明显增多(P＜0.01);内质网应激相关蛋白Grp78、ATF-4及CHOP表达明显增高(P＜0.01);缝隙连接蛋白Cx43表达减少,而p-Cx43表达增多.与ADR组比较,黄芪注射液组大鼠LVEDD、LVESD减少,LVEF增加;心肌病理及超微结构明显改善,同时心肌细胞凋亡数明显减少(P＜0.01);内质网应激伴侣蛋白Grp78、ATF-4及CHOP表达明显减少(P＜0.01);缝隙连接蛋白Cx43表达增多,而p-Cx43减少.结论:黄芪注射液可有效改善阿霉素导致的心肌损伤,其机制可能与黄芪注射液抑制ADR诱导的内质网应激及缝隙连接蛋白磷酸化有关.
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缝隙连接与抗心肌缺血/再灌注损伤
再灌注疗法是目前治疗心肌缺血及心肌梗死的主要措施,但再灌注治疗中常会伴发缺血/再灌注(I/R)损伤,即在缺血的基础上恢复血流后组织器官的损伤反而加重,减轻或消除心肌I/R损伤是I/R治疗的关键.缺血预处理(IPC)[1]与缺血后处理(IPO)[2]具有减轻I/R损伤、保护心肌的作用,已日渐成为研究的热点问题,国内外报道缝隙连接(GJ)参与I/R损伤,本文就缝隙连接在心肌细胞损伤的发生发展和涉及IPC、IPO对心肌的保护作用进行如下综述.
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缝隙连接蛋白研究进展
缝隙连接蛋白(connexin,Cx)是构成细胞间缝隙连接(gapjunction,GJ)通道的基本结构和功能的一大类膜蛋白.一个连接蛋白分子包括四个跨膜区域,两个细胞外环和一个细胞内环,其羧基端与氨基端位于细胞内.而在胞浆内的羧基末端区域具有明显的差异,它可以因为胞内信号变化而改变蛋白构象,从而对缝隙连接功能状态有影响[1].
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Cx31.1蛋白在舌癌细胞中的表达及其对细胞通讯功能的影响
目的探讨细胞缝隙连接蛋白(connexin)Cx31.1在人舌鳞癌细胞系Tca8113中的表达及其对细胞间隙连接通讯的影响。方法应用流式细胞仪及其Lucifer Yellow划痕荧光传输技术,研究六亚甲基二乙酰胺(HMBA)作用对Tca8113细胞Cx31.1蛋白表达,以及细胞生长状态和间隙连接通讯功能的调节作用。结果 Tca8113细胞经HMBA处理后,流式细胞仪分析,Cx31.1蛋白表达阳性细胞计数率由1.7%上升至30.3%,Tca8113细胞生长明显受到抑制,推测细胞间隙连接通讯功能得到部分恢复。结论 HMBA可上调Cx31.1蛋白在Tca8113细胞中的表达,可能使细胞间隙连接通讯功能得到恢复,并实现对舌癌恶性表型的逆转作用。
关键词： 缝隙连接蛋白 舌癌细胞 细胞间隙连接通讯 流式细胞仪 划痕标记荧光传输技术 -
氯吡格雷联合阿司匹林治疗老年急性心肌梗死的疗效分析
目的 研究氯吡格雷联合阿司匹林治疗老年急性心肌梗死的效果及机制.方法 老年急性心肌梗死患者180例随机分为氯吡格雷治疗组和氯吡格雷联合阿司匹林治疗组,每组90例,选取同期健康体检者100例作为对照组,观察2组治疗后治愈率,观察2治疗组治疗前后及对照组RhoA/ROCK蛋白表达(RhoA、ROCK1、ROCK2)、心肌肌钙蛋白、C-反应蛋白、脑钠肽(NT-proBNP)、炎性反应因子[白介素(IL-2、IL-3、IL-6、IL-10)]、Klotho、缝隙连接蛋白(CX40、CX43)水平.结果 氯吡格雷联合阿司匹林治疗组能有效治疗老年急性心肌梗死,且有效率明显高于氯吡格雷治疗组患者(P<0. 05);氯吡格雷联合阿司匹林治疗组治疗后老年急性心肌梗死后患者血清中 RhoA、ROCK1、ROCK2、白细胞介素蛋白、心肌肌钙蛋白、C-反应蛋白和NT-proBNP及Klotho蛋白水平明显降低,而CX40和CX43蛋白水平明显升高,且与对照组和氯吡格雷治疗组比较差异有统计学意义(P<0. 05).结论 氯吡格雷联合阿司匹林对老年急性心肌梗死有较好的治疗效果,可能与其调控患者体内异常的RhoA/ROCK通路蛋白和炎性反应有关.
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沙美特罗联合丙酸氟替卡松治疗老年COPD效果及对血清MMP-2和MMP-9水平的影响研究
目的 研究对沙美特罗联合丙酸氟替卡松治疗老年慢性阻塞性肺病(COPD)的效果及对血清基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMPO水平的影响进行研究,为临床治疗提供参考.方法 150例COPD患者随机分为沙美特罗治疗组、丙酸氟替卡松治疗组和沙美特罗联合丙酸氟替卡松治疗组,每组50例.分析治疗后患者的肺功能改善情况,并检测治疗前后患者血清中基质金属蛋白酶及其抑制剂、缝隙连接蛋白和白细胞介素水平变化.结果 研究发现经沙美特罗联合丙酸氟替卡松治疗组治疗后老年COPD患者肺功能FEV1、FVC、FEV1/FVC得到明显改善(P＜0.05),血清中基质金属蛋白酶及其抑制剂水平明显降低而缝隙连接蛋白水平明显升高(P＜0.05).结论 沙美特罗联合丙酸氟替卡松能通过抑制基质金属蛋白酶及其抑制剂、提高缝隙连接蛋白表达发挥治疗老年慢性阻塞性肺病的作用.
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三七总皂甙对大鼠体内肝卵圆细胞增殖的调控及机制
目的:观察三七总皂甙对大鼠肝卵圆细胞增殖模型肝脏缝隙连接蛋白32、43表达、缝隙连接细胞间通讯功能和肝卵圆细胞增殖的影响,探讨三七总皂甙调节肝卵圆细胞增殖的可能机制.方法:实验于2004-07/2006-02在江西省分子医学重点实验室完成.①实验材料:健康雄性清洁级Wistar大鼠,体质量150 g左右,随机分成对照组(n=6)、模型组(n=38)、三七总皂甙组(n=37).三七总皂甙注射剂(昆明制药集团股份有限公司惠赠).②实验方法:模型组大鼠按20 mg/(kg·d)剂量灌喂2-乙酰氨基芴,连续4 d,第5天不灌喂,行2/3肝切除,术后次日按20 mg/(kg·d)剂量继续灌喂5 d;三七总皂甙组大鼠按模型组建模时,即第1次2-乙酰氨基芴灌胃前1 h予以三七总皂甙25 mg/(kg·d)腹腔内注射,并持续实验结束.模型组、三七总皂甙组在术后4 h,4 d,8 d,12 d,16 d随机取6只大鼠检测.对照组大鼠未作特殊处理,作正常对照.③实验评估:采用组织病理技术观察肝组织的形态学变化;免疫组织化学和细胞形态学方法计数肝卵圆细胞;切开标记/染料示踪技术确定缝隙连接细胞间通讯;免疫组织化学及RT-PCR技术检测缝隙连接蛋白32蛋白及m RNA表达;免疫组织化学、Western blot及RT-PCR技术分析CX43蛋白及m RNA水平.结果:肝功能衰竭导致模型组大鼠死亡8只,三七总皂甙组死亡7只,共66只进入结果分析.①大鼠肝卵圆细胞的活化、增殖情况:对照组,模型组和三七总皂甙组4 h未见肝卵圆细胞增殖.模型组4 d汇管区有肝卵圆细胞增殖反应,8 d肝卵圆细胞增殖达峰值,12 d肝卵圆细胞从汇管区向肝实质内浸润,16 d肝卵圆细胞增殖较12 d减少.与模型组比较,三七总皂甙组4,8,16 d减少(P＜0.05),12 d增殖肝卵圆细胞增多(P＜0.05).②大鼠肝脏缝隙连接细胞间通讯的变化:各时点模型组、三七总皂甙组大鼠肝脏缝隙连接细胞间通讯均低于对照组(P＜0.01),与模型组比较,三七总皂甙组各时点缝隙连接细胞间通讯升高(P＜0.01).③大鼠肝脏CX32、CX43蛋白及CX32、CX43 mRNA表达:模型组、三七总皂甙组各时点CX32蛋白表达低于对照组(P＜0.05),与模型组比较,三七总皂甙组4 d表达上调(P＞0.05),余时点均明显升高(P＜0.05).模型组CX32mRNA水平4 h～16 d各时点均低于对照组,与模型组比较,三七总皂甙组4 h上调(P＞0.05),4～16 d明显升高(P＜0.05);模型组、三七总皂甙组CX43蛋白表达上调,模型组4 h～16 d各时点CX43蛋白均高于对照组.与模型组比较,三七总皂甙组在4 h下凋(P＞0.05),4 d、8 d时点表达下降(P＜0.01),12,16 d时点升高(P＜0.05,P＜0.01).模型组CX43mRNA4 h～16 d各时点均高于对照组.与模型组比较,三七总皂甙组CX43 mRNA水平与蛋白趋势一致,呈现表达峰值低、持续时间长的特点.结论:三七总皂甙可使大鼠2-乙酰氨基芴喂食+肝切除术模型肝脏的肝卵圆细胞增殖峰低、滞后、持续时间长,其机制与调节大鼠2-乙酰氨基芴喂食+肝切除术模型肝脏的缝隙连接蛋白时空表达模式改变肝脏缝隙连接细胞间通讯功能相关.
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同种异体骨髓间充质干细胞移植急性心肌梗死大鼠缝隙连接蛋白43及缝隙连接蛋白45 mRNA的表达
背景:细胞移植可以修复受损的心肌组织,但移植细胞是否和宿主细胞形成有效的电-机械偶联,并引起移植后细胞缝隙连接蛋白重构及心律失常等尚缺乏系统观察.目前只有少数研究发现心肌梗死后缝隙连接蛋白45表达上谓,而对于骨髓间充质干细胞移植后缺血区缝隙连接蛋白45的表达尚无报道.目的:课题组假设通过改变缝隙连接蛋白水平、干预异常的GJ通道,来尝试治疗心肌梗死后心律失常,为此探讨同种异体骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死大鼠缝隙连接蛋白43及缝隙连接蛋白45 mRNA表达的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-01/2009-05在广西医科大学实验中心完成.材料:健康Wistar大鼠180只,随机分为正常对照组、假手术组、心肌梗死组、细胞移植组,45只,组.各组按干预后4,8,12周又分为3个亚组,15只/亚组.另取1月龄健康雄性Wistar大鼠20只,用于分离培养骨髓间充质干细胞.方法:取传至第3代的大鼠骨髓间充质干细胞,加入10 μmol/L 5-氮胞昔进行诱导,4周后用于移植,在移植前2 h行DAPI标记.心肌梗死组、细胞移植组大鼠建立急性心肌梗死模型,假手术组只穿线不结扎冠状动脉.造模后7 d,细胞移植组将2×10~(10) L~(-1)骨髓间充质干细胞悬液分多点注射到心肌梗死的边缘区和中心区,心肌梗死组、正常对照组、假手术组均注射等量生理盐水.主要观察指标:荧光定量PCR法检测缝隙连接蛋白43及缝隙连接蛋白45 mRNA的表达.结果:①干预后4,8,12周,各组正常区缝隙连接蛋白43、缝隙连接蛋白45 mRNA表达基本相似.②与正常区比较,心肌梗死组、细胞移植组缺血区的缝隙连接蛋白43 mRNA表达均显著减少(P＜0.01),缝隙连接蛋白45 mRNA表达均显著增加(P＜0.01).③同一时间点与心肌梗死组比较,细胞移植组缺血区缝隙连接蛋白43mRNA表达显著增高(P＜0.01),缝隙连接蛋白45 mRNA表达显著减少(P＜0.01).结论:课题创新性证实急性心肌梗死导致心肌缝隙连接蛋白43 mRNA水平下降,缝隙连接蛋白45 mRNA水平升高.5-氮胞苷诱导的同种异体骨髓间充质干细胞移植后,能上调梗死边缘区缝隙连接蛋白43 mRNA的表达.并下调边缘区缝隙连接蛋白45mRNA的表达.
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黄芩苷可影响帕金森病模型大鼠纹状体星形胶质细胞缝隙连接蛋白43的表达
背景:在帕金森病发病中,缝隙连接蛋白 43(connexin43,Cx43)作为一种重要的调节蛋白,如何更大的发挥其减少多巴胺能神经元损伤的作用目前还不十分明确.研究显示黄芩苷具有抑制帕金森病的炎症反应及氧化应激等作用,可以预防帕金森病模型大鼠的多巴胺神经元的变形损伤.目的:探讨黄芩苷对帕金森病模型大鼠行为学及星形胶质细胞Cx43表达的影响.方法:80只SD雄性大鼠中随机取10只设为正常组(不造模),另外70只采用6-羟基多巴胺在右侧纹状体单侧双点毁损法制作偏侧帕金森病大鼠旋转模型.将造模成功的 40 只大鼠随机分成模型组(生理盐水)、美多芭治疗组(美多芭125 mg/kg)、黄芩苷低剂量组(50 mg/kg)和黄芩苷高剂量组(100 mg/kg),药物连续治疗28 d.行为学测试观察各组大鼠旋转行为的改变,免疫组化检测TH细胞数量变化、免疫组化及Western Blot法确定Cx43的表达量.结果与结论:①行为学测试结果:正常组干预前后均未有旋转行为,其他4组模型大鼠在注射阿扑吗啡5 min后开始出现旋转行为,药物干预前均为13 r/min左右(P ＞ 0.05),干预后美多芭治疗组和黄芩苷高剂量组旋转圈数较模型组显著减少(P ＜ 0.01);②黑质区TH阳性细胞数量:与模型组比较,黄芩苷低剂量组增加不明显(P ＞ 0.05),美多芭治疗组和黄芩苷高剂量组TH细胞数量均较模型组明显增加(P ＜ 0.01);③Cx43表达:免疫组化及Western Blot结果示,模型组Cx43表达较正常组显著升高(P ＜ 0.01);黄芩苷低剂量组与模型组比较差异无统计学意义(P ＞ 0.05),美多芭治疗组和黄芩苷高剂量组Cx43表达水平相似,但均较模型组显著降低(P ＜ 0.01);④提示:100 mg/kg黄芩苷可显著改善帕金森病大鼠的转圈行为,可明显提高TH细胞的活性,减少6-羟基多巴胺对帕金森病黑质神经元的损害.Cx43在帕金森病模型大鼠纹状体星形胶质细胞中的表达上调,黄芩苷对Cx43的表达有下调作用,100 mg/kg黄芩苷的作用与美多芭相似.
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缝隙连接蛋白的非通讯功能
缝隙连接是相邻细胞间通道结构,其"看家功能"是细胞通讯,又称缝隙连接细胞间通讯参与许多重要生物学过程的调节.近年大量研究证实,缝隙连接蛋白作为一个单独的功能单位,可调节细胞的生长、增殖、分化、凋亡等生物学过程.本文对缝隙连接蛋白上述功能作一综述,并探讨其可能机制.
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缝隙连接蛋白家族与冠心病及冠状动脉内支架术后再狭窄的研究进展
再狭窄是限制冠状动脉内支架术远期成功的重要因素.缝隙连接蛋白信号通路通过参与了血管内皮的增殖、迁移等过程的信号转导从而对支架置入后损伤的内膜增生过程产生影响.同时缝隙连接蛋白家族表达改变及其基因多态性与心血管疾病的发生发展有着密切的相关性.
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GABA受体基因转染对癫痫大鼠海马CX32表达的影响
目的 探讨在下丘脑乳头体上核内转染γ-氨基丁酸(GABA)受体基因后对海人酸(KA)致痫大鼠海马区缝隙连接蛋白32(CX32)表达的影响.方法 在右侧杏仁核内注射KA制备癫痫动物模型作对照组,GABA基因转染组则利用仙台病毒(HVJ)-脂质体转染法预先在下丘脑的乳头体上核内转染被脂质体包被的GABA受体基因,48 h后在杏仁核内注射KA,两组大鼠分别进行CX32原位杂交观察.结果 GABA基因转染组大鼠CX32表达在各个时程均有下降.结论 下丘脑内转染GABA受体基因后可以抑制癫痫发作的程度.
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连接蛋白43在猪冠状动脉平滑肌细胞表型转换中的作用
目的 探讨缝隙连接蛋白(Cx)43表达对冠状动脉平滑肌细胞(SMC)增殖及表型转换的影响.方法 体外培养猪原代冠状动脉平滑肌细胞,应用血小板源生长因子(PDGF-BB)进行诱导,电子显微镜观察平滑肌细胞增殖及形态变化,采用Western印迹方法及实时荧光定量PCR测定Cx43、Cx40、α-SMA、S100A4蛋白和mRNA表达;然后应用Cx43阻断剂进行干预,再次检测上述指标变化.结果 PDGF-BB促进冠状动脉平滑肌细胞增殖,并细胞形态由纺锤型(S-SMC)向长菱形(R-SMC)转变,同时伴随Cx43表达上调,而Cx40表达明显下降;通过反义RNA降低Cx43表达,这种变化受抑制,并且纺锤型(S-SMC)平滑肌细胞保持原有形态,同时表达α-肌动蛋白.结论 抑制Cx43表达可以抑制冠状动脉平滑肌细胞增殖及表型的转换,提示Cx43可能成为预防冠状动脉介入术后再狭窄的新靶点.
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缝隙连接反义寡核苷酸对大鼠局灶性脑缺血后缝隙连接蛋白表达的影响
目的 观察Cx43与Cx32反义寡核苷酸对大鼠局灶性脑缺血后星形胶质细胞Cx43及神经元Cx32表达的影响.方法 设计、合成Cx43、Cx32反义寡核苷酸,Cx43、Cx32正义寡核苷酸.正常SD大鼠侧脑室旁立体定位注射Cx43正义寡核苷酸、Cx43反义寡核苷酸,Cx32正义寡核苷酸、Cx32反义寡核苷酸、无菌生理盐水(NS),24h后行颈外动脉插入线栓脑缺血手术,经心冲灌固定取脑,免疫组化法检测Cx43、Cx32蛋白表达；RT-PCR及Western-blot分析Cx43mRNA、Cx32mRNA表达情况.结果 在mRNA和蛋白水平上,模型组星形胶质细胞Cx43、神经元Cx32的量表达明显增加；侧脑室注射ACx43、ACx32大鼠,星形胶质细胞与神经元Cx43、Cx32表达均下降,与模型组比较均有统计学差异(P＜0.05)；侧脑室注射SCx43、SCx32及NS的大鼠脑缺血后,Cx43与Cx32在mR-NA与蛋白水平上表达无明显变化,与模型组比较均无统计学差异(P＞0.05).结论 Cx43、Cx32反义寡核苷酸能够抑制Cx43与Cx32在大鼠脑缺血后星形胶质细胞及神经元中的表达.
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抑胶素对C6脑胶质瘤细胞缝隙连接蛋白作用的体外实验研究
目的探讨抑胶素对C6脑胶质瘤细胞缝隙连接蛋白的影响.方法体外培养C6脑胶质瘤细胞,通过GFAP鉴定,应用免疫组化方法检测应用抑胶素前后C6脑胶质瘤细胞缝隙连接蛋白43(Cx43)的表达变化,并与临床上常用的抗肿瘤药物顺铂进行比较分析.结果抑胶素能够增加体外培养的C6脑胶质瘤细胞Cx43的表达,并呈剂量依赖性.结论抑胶素抑制脑胶质瘤细胞生长的作用机制之一可能与影响肿瘤细胞间的缝隙连接蛋白功能有关.
