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生长抑素抑制人低分化胃癌细胞株BGC-823的生长及其机制初探
生长抑素(SS)广泛存在于神经内分泌系统和消化道,研究发现,SS能影响细胞的增殖能力[1,2],促使我们探讨外源性SS可否作为肿瘤治疗的一种选择方法.胃癌是消化道常见肿瘤之一,本文旨在观察对人低分化胃癌细胞株BGC-823生长的影响,并进一步探讨SS对细胞内信息传递途径的影响,为临床治疗胃癌提供理论依据.
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微小 RNA－143诱导胃癌细胞株 BGC－823凋亡机制的探讨
目的：探讨微小RNA－143（miRNA－143）诱导胃癌细胞BGC－823产生凋亡的机制。方法生物信息学预测B淋巴细胞瘤－2基因（B－cell lymphoma－2， bcl－2）3′非编码区（untranslation region，UTR）是否存在miRNA－143的结合位点；荧光定量及免疫印迹方法检测胃癌细胞株（BGC－823）及正常胃黏膜细胞株（GES－1）中Bcl－2 mRNA及其蛋白含量；荧光素酶报告基因法验证结合位点；化学法合成miRNA－143－mimics、inhibitor及NC序列并转染BGC－823细胞，转染后48 h收集细胞、蛋白质印迹法检测细胞内Bcl－2蛋白含量；实时定量PCR检测转染后不同时间点BGC－823细胞内miRNA－143含量变化，同时流式法检测BGC－823细胞凋亡。结果与GES－1细胞比较，BGC－823细胞中Bcl－2蛋白含量及miRNA－143含量差异有统计学意义（ P＜0．01）；miRNA－143－mimics、miRNA－143－inhibitor与野生型荧光素酶报告基因共转染组可以明显抑制或者增强荧光素酶活性，转染后48 h，组间酶活性差异有统计学意义（P＜0．05），miRNA－143－mimics和miRNA－143－inhibitor转染对突变型荧光素酶报告基因活性无明显影响，差异无统计学意义（ P＞0．05）；BGC－823细胞转染miRNA－143－mimics和miRNA－143－inhibitor能够明显抑制或者促进细胞内Bcl－2蛋白表达，差异有统计学意义（ P＜0．05）；miRNA－143－mimics和miRNA－143－inhibitor转染细胞能够明显引起细胞内miRNA－143含量的改变，转染后48 h，miRNA－143－mimics转染组细胞内miRNA－143含量明显上升，miRNA－143－in－hibitor转染组细胞内miRNA－143含量明显下降，差异有统计学意义（P＜0．05），阴性对照转染对照组和转染对照组比较，差异无统计学意义（ P＞0．05）；细胞凋亡检测结果表明，miRNA－143表达量的升高能够明显引起BGC－823细胞的凋亡，基因干预组与转染对照组相比较，差异具有统计学意义（P＜0．05）。结论 miRNA－143通过抑制Bcl－2基因表达，可引起胃癌细胞株BGC－823细胞产生凋亡。
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消癌平对SGC-7901胃癌细胞的作用及机制的实验研究
目的探讨消癌平治疗胃癌的肿瘤细胞抑制作用的机制.方法 1. 观察不同浓度消癌平对SGC-7901胃癌细胞的抑制率并进行体外抑制试验;2. 取对数生长期的SGC-7901细胞,浓缩体积到1ml,先后加入纤维蛋白原和凝血酶工作液使之形成细胞凝块,并将其切成等体积小块,将瘤体置于昆明种水鼠肾囊下.移植后次日开始采用消癌平0.4,0.6,0.8ml/kg浓度腹腔内注射,连续7d.注射后第8天处死小鼠,于显微镜下测量肿瘤的各径,以计算肿瘤体积和肿瘤抑制率,探讨对人胃癌SGC-7901细胞生长的抑制作用;3. 采用流质细胞仪观察消癌平对人体胃癌SGC-7901细胞株的抑制机制.结果 1. 体外抑制试验:消癌平50,40,30,20,10mg/ml浓度时对SGC-7901胃癌细胞的抑制率为100%,59%,29%,19%和15%,与空白对照组差异明显.其高浓度的抑制率与HCPT(98%)相仿,药物作用7d后的IC50为21mg/ml.2. 昆明种水鼠胃癌细胞株移植后,采用的消癌平为0.4,0.6,0.8ml/kg,腹腔内注射的肿瘤抑制率为50%,53%,71%.Logit法计算消癌平对荷瘤小鼠的ED50为0.44/kg,t检验表明各用药剂量组的抑瘤率与空白对照组比较有显著差异,高剂量时消癌平的抑瘤率(71%)与阳性对照组5-Fu的抑瘤率(76%)相似.消癌平各组给药后体重和毛色均无明显改变.3. 消癌平治疗后胃癌细胞株的各期分布为G0-G1期:65.70%,G2-M期为16.22%,S期18.09%,G2/G1=1.86;形态学检查显示,消癌平作用7d后核浆比例缩小.结论消癌平对胃癌细胞有较好的抑制作用,不适为一种治疗胃肿瘤的较好中药.
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胰岛素样生长因子结合蛋白7基因在胃癌细胞中的表达及甲基化调控
目的 研究胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7)mRNA在胃癌细胞中的表达及其甲基化调控.方法 分别培养胃癌细胞株高分化MKN-28、中分化SGC-7901和AGS、低分化MKN- 45以及胃黏膜正常上皮细胞(GES-1).提取细胞RNA,采用RT-PCR法检测IGFBP7 mRNA在各细胞株中的表达.提取细胞基因组DNA,甲基化修饰后采用甲基特异性PCR(MSP)分析其CpG岛甲基化状态.采用不同浓度去甲基化药物5'-杂氮-2'-脱氧胞嘧啶(5-aza-dc)处理细胞株后,经Real-time PCR定量药物处理前后各细胞株IGFBP7 mRNA的相对表达量.结果 各肿瘤细胞株中IGFBP7 mRNA表达较GES-1降低或消失.MSP检测IGFBP7 mRNA表达降低和消失的细胞株均有CpG岛不同程度的甲基化.不同浓度5-aza-dc处理细胞后,IGFBP7 mRNA的表达量呈剂量依赖性增高.结论 IGFBP7 mRNA在胃癌细胞株中低表达或不表达,其表达下调与其CpG岛甲基化有关.5-aza-dc可使IGFBP7 mRNA表达降低的胃癌细胞株重新表达IGFBP7 mRNA,提示IGFBP7基因CpG岛甲基化可能是IGFBP7在胃癌细胞系中表达缺失的分子机制.
关键词： 胰岛素样生长因子结合蛋白7基因 胃癌细胞株 甲基化 -
人参皂甙Rg3在体外对胃癌细胞生长和凋亡的影响
目的 研究人参皂甙Rg3在体外对低、中分化胃腺癌细胞株MKN-45和SGC-7901生长及凋亡的影响.方法 取处于对数生长期的MKN-45和SGC-7901细胞,加入不同终浓度(20、30、40、50 μg/mL)的人参皂甙Rg3分别培养24、48 h或24、48和72 h,以不加药细胞作为阴性对照.MTT法检测MKN-45和SGC-7901细胞生长抑制率;流式细胞仪Annexin V/PI双染法检测SGC-7901细胞凋亡率;流式细胞仪分析SGC-7901细胞周期;透射电子显微镜观察50 μg/mL人参皂甙Rg3处理组SGC-7901细胞的形态学改变.结果 人参皂甙Rg3各处理组SGC-7901和MKN-45细胞生长抑制率均明显高于对照组(P<0.05),且随药物浓度的增加和作用时间的延长而上升(P<0.05).与对照组比较,人参皂甙Rg3各处理组SGC-7901细胞凋亡率和G_0/G_1期细胞百分比均明显上升,且呈浓度和时间依赖性.透射电子显微镜观察50 μg/mL人参皂甙Rg3处理组SGC-7901细胞,可见典型的凋亡细胞结构.结论 人参皂甙Rg3在体外对胃癌细胞生长具有抑制作用,且呈现一定的时效和量效关系,其机制可能与诱导胃癌细胞凋亡有关.
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Smad4基因抑制人类胃癌细胞株生长的作用机制
目的 研究Smad4基因对人类胃癌细胞株细胞周期和细胞凋亡的影响,探讨其对人类胃癌细胞生长抑制的作用机制.方法 运用脂质体介导转染方法将Smad4基因导入其表达缺失的胃癌MKN28细胞株中,经G418筛选,获得稳定表达Smad4基因的Smad4+-MKN28细胞和作为对照的Smad4--MKN28细胞.体外培养亲本细胞、Smad4+-MKN28细胞和Smad4--MKN28细胞,各组细胞于第1、3、5、7天取三瓶细胞计数,计算平均值,并绘制生长曲线;细胞培养48 h后应用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率的改变;用RT-PCR和Western blotting方法检测细胞Bcl-2、Bax基因的mRNA和蛋白的表达.结果 稳定转染Smad4重组质粒的Smad4+-MKN28细胞较未转染的Smad4--MKN28细胞生长速度减慢(P＜0.05);流式细胞仪检测结果示Smad4+-MKN28细胞G0-G1期细胞百分数增加(P＜0.05),S期细胞百分数减少(P＜0.05),细胞凋亡增加(P＜0.05);RT-PCR结果示Smad4+-MKN28细胞Bax基因表达增加(P＜0.05),Bcl-2基因表达减少(P＜0.05),Western blotting结果示两者的编码蛋白也出现相应的变化.结论 恢复Smad4表达后细胞增殖减慢,凋亡增加,促凋亡基因表达上调,抑制凋亡基因表达下调,两者比值增大,从而使肿瘤细胞的生长受到抑制.
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苦参碱体外对胃癌细胞的杀伤作用
目的研究苦参碱对不同分化程度的胃癌细胞株在体外的杀伤作用及其机制.方法用不同剂量的苦参碱分别作用于中、低分化胃癌细胞株SGC-7901和AGS 24、48、72 h,以MTT法检测药物对肿瘤细胞的杀伤作用;透射电镜和流式细胞术检测苦参碱诱导SGC-7901凋亡的作用.结果随药物浓度的增加和作用时间的延长,苦参碱对胃癌细胞的杀伤作用逐渐增强(P＜0.01);低分化的AGS较中分化的SGC-7901更为敏感.透射电镜、流式细胞术检测均显示苦参碱能够诱导胃癌细胞凋亡.结论苦参碱在体外对胃癌细胞具有杀伤作用,且呈明显的量效和时效关系;低分化的胃癌细胞株AGS对苦参碱更为敏感;苦参碱对胃癌细胞株的体外杀伤作用与其诱导胃癌细胞凋亡有关.
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"胃安宁颗粒"抑制肿瘤血管生成的实验研究
目的:观察胃安宁颗粒对SGC-7901荷瘤裸鼠肿瘤血管生成的影响.方法:将裸鼠皮下接种胃癌SGC-7901细胞后随机分为模型对照组(灌胃生理盐水)、阳性药组(肌肉注射5-Fu)及胃安宁颗粒大、中、小剂量组(灌胃1500、750、375mg/mL的胃安宁颗粒药液),用药后分别计算瘤重系数,并将肿瘤组织进行免疫组织化学染色,检测VEGF、Ki-67表达的情况.结果:胃安宁颗粒大、中剂量均能明显降低荷瘤裸鼠瘤重和瘤重系数,免疫组织化学染色显示,应用胃安宁颗粒后肿瘤组织VEGF、Ki-67的表达有所下降.结论:胃安宁颗粒可能通过抑制VEGF、Ki-67的表达起到抑制肿瘤血管生成的作用,从而达到抗肿瘤的目的.
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原位逆转录PCR检测ppGalNAcT-2在胃癌细胞株SGC-7901的表达
目的探索建立原位逆转录聚合酶链式反应方法以用于检测ppGalNAcT-2在细胞株中的表达.方法采用原位逆转录聚合酶链式反应检测胃癌细胞株SGC-7901中ppGalNAcT-2的表达.结果胃癌细胞株 SGC-7901中ppGalNAcT-2表达有差异,在细胞株中约有30%的细胞表达.结论原位逆转录PCR技术用于探索 ppGalNAcT-2在肿瘤细胞中的表达是可行的,它有助于对ppGalNAcT-2功能的进一步了解.
关键词： 原位逆转录PCR 多肽 N-乙酰氨基半乳糖转移酶-2 胃癌细胞株 -
ppGalNAc-T2对胃癌细胞株SGC-7901生物学性能的影响
目的 探讨多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2)对胃痈细胞株SGC-7901细胞性能的影响.方法 构建ppGalNAc-T2 RNA干扰真核载体(pSilenCircle-SiT2)、正义真核表达载体(pEGFP-C1-T2)及空载体(pEGFP-C1),分别转染胃癌细胞株SGC-7901细胞.MTT法检测上述各组转染后细胞对SGC-7901细胞增殖的影响;细胞黏附和穿膜实验分别检测其黏附力和迁移力的变化;同时采用RT-PCR和Western blot检测MMP2、MMP14、TGF-β1等与肿瘤细胞浸润、转移、增殖相关基因mRNA及蛋白的表达水平.结果 转染正义真核表达载体的SGC-7901细胞,随着ppGalNAc-T2表达量的增加,细胞的生长增殖受到抑制,并对纤连蛋白、基质胶和透明质酸的黏附能力降低,但其侵袭迁移能力变化不明显;而转染ppGalNAc-T2 RNA干扰载体的SGC-7901细胞,细胞生长快.ppGalNAc-T2与肿瘤细胞相关因子TGF-β1、MMP2的mRNA表达水平成负相关,但对MMP14无明显影响,Western blot检测相关蛋白结果与mRNA表达水平基本一致.结论 ppGalNAc-T2可影响胃癌细胞株SGC-7901细胞的增殖、黏附能力,并影响与肿瘤细胞浸润、转移、增殖相关基因mRNA及蛋白的表达水平.
关键词： ppGalNAc-T2 胃癌细胞株 生物学性能 -
穿心莲内酯对不同分化胃癌细胞株的体外增殖的影响
[目的]明确穿心莲内酯对不同分化胃癌细胞株的体外增殖的影响.[方法]以不同浓度的穿心莲内酯处理低分化(MKN45)、中分化(SGC7901)和高分化(MKN28)胃腺癌细胞株,分别温育24h、48h,72h;采用噻唑蓝比色法检测各和穿心莲内酯对癌细胞的药物半数抑制浓度(IC50),比较穿心莲内酯对不同分化胃癌细胞株的体外增殖抑制作用的异同.[结果]穿心莲内酯对胃癌细胞株MKN45、SGC7901、MKN28的体外增殖均具有显著的抑制作用,并且呈剂量效应和时间效应关系.低分化的MKN45细胞株对穿心莲内酯的敏感性明显高于高分化的MKN28细胞株和中分化的SGC7901细胞株.[结论]穿心莲内酯对不同分化程度的胃腺癌细胞株体外增殖抑制作用不同.
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单味中药抑制胃癌细胞株体外增殖作用的实验研究进展
胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一,传统中医药治疗肿瘤具有低毒、有效、价廉等特点,成为筛选胃癌防治药物的较理想研究领域.本文按照单体、单味中药提取的有效成分的分类将近几年来单味中药抑制人胃癌细胞株体外增殖作用的实验基础研究近况做一综述,为进一步的相关研究提供参考依据及确定方向,从而筛选出疗效肯定有应用前景的中药有效成分(或单体),充分发挥中药作用范围广、副作用小的优势,使中医药在治疗胃癌方面发挥更大的作用.
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水杨酸抑制胃癌细胞体外增殖及侵袭转移能力研究
目的：探讨水杨酸抑制人胃癌细胞侵袭转移的分子机制。方法不同浓度水杨酸体外处理胃癌细胞株MGC-803后，采用基质胶黏附试验、迁移试验和Transwel 侵袭试验检测胃癌细胞黏附、迁移和侵袭能力的变化；采用荧光定量PCR、Western blot检测细胞黏附相关分子核纤层蛋白（Lamin）、核纤层蛋白C1（LaminC1）、核纤层蛋白B1（LaminB1）、纤连蛋白（FN1）、CD44、整合素A9（ITGA9）、连环蛋白A1（CTNNA1）和E钙粘素（CDH1）表达水平的变化。结果与空白对照比较，0.5mmol/L和1mmol/L水杨酸体外处理胃癌细胞24h后，胃癌细胞的增殖、黏附、迁移和侵袭能力均受抑制（均P＜0.05）；Lamin、LaminC1、LaminB1、FN1、CD44、ITGA9和CTNNA1 mRNA表达水平均下降（均 P＜0.05），CDH1 mRNA表达水平均升高（均P＜0.05）；LaminB1、FN1、CD44和CTNNA1蛋白表达水平均升高（均P＜0.05）。结论一定浓度的水杨酸可体外抑制胃癌细胞增殖、黏附、侵袭能力，从而抑制胃癌转移，其作用机制可能与调节细胞黏附相关分子的表达水平和抑制胃癌细胞上皮间质转化有关。
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KISS-1及MMP-9基因在胃癌侵袭转移中的作用及相关性
目的 探讨肿瘤转移抑制基因KISS-1在胃癌侵袭、转移中的作用及其与MMP-9表达的关系.方法 采用Lipofectamine脂质体介导将pcDNA3.1-KISS-1真核表达质粒转染胃癌BGC-823细胞,经G418筛选,建立稳定高表达KISS-1蛋白的细胞系,通过RT-PCR和Western blotting法证实转染成功,并检测细胞中MMP-9蛋白及mRNA的表达情况;采用Transwell体外侵袭实验,探讨KISS-1对胃癌细胞株侵袭能力的影响.结果 Western blotting和RT-PCR结果显示:转基因组BGC-823细胞中KISS-1蛋白及mRNA的表达与转空质粒组和对照组相比均明显增加(P均<0.05);转基因组BGC-823细胞中MMP-9蛋白及mRNA的表达与转空质粒组和对照组相比均明显降低(P均<0.05);Transwell检测结果显示:转基因组BGC-823细胞的穿膜数与转空质粒和对照组相比均明显降低(P<0.05),侵袭力抑制率达到25%.结论 pcDNA3.1-KISS-1的有效转染可降低MMP-9的表达并对胃癌细胞BGC-823的侵袭能力具有抑制作用.KISS-1基因对胃癌侵袭转移的抑制作用可能是通过下调MMP-9的功能实现的.
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用变性高效液相色谱检测CpG岛胞嘧啶甲基化
目的：建立一种新型的CpG岛胞嘧啶甲基化快速检测方法。方法：用亚硫酸氢钠处理DNA，再用链特异性聚合酶链式反应(PCR)对错配修复基因hMLH1启动子含CpG位点的靶序列进行扩增；利用变性高效液相色谱(DHPLC)在部分变性温度下测定靶序列的保留时间，并与亚硫酸氢钠-酶切法测定结果进行比较。结果：用DHPLC对结肠癌细胞株RKO和胃癌细胞株PACM82的hMLH1启动子进行测定，发现RKO细胞PCR产物的保留时间明显长于PACM82细胞(6.7 min比6.2 min)。RKO细胞PCR产物保留时间延长是亚硫酸氢钠处理后的模板中胞嘧啶和岛嘌呤含量较PACM82高所致。从此结果分析，可以判断出RKO的hMLH1启动子已甲基化，而PACM82细胞未甲基化。此结论与酶切法结果完全一致。结论：新方法可以快速检测CpG岛胞嘧啶甲基化。
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索拉非尼联合化疗用于治疗胃癌细胞株的实验研究
目的 观察索拉非尼治疗胃癌细胞株的作用机制.方法 将胃癌MGC803细胞株扩大培养后,分为4组:对照组,索拉非尼单药组,化疗组,索拉非尼联合化疗同时给药组.各组经处理后观察细胞生长曲线,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,MTT检测细胞增殖率,RT-PCR和Western blot法检测EGFR、VEGF的表达.结果 索拉非尼联合化疗组细胞增殖率明显下降,细胞明显凋亡.结论 索拉非尼联合化疗对胃癌有较好的治疗作用.
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肿瘤坏死因子诱导凋亡配体诱导胃癌细胞株MKN28细胞凋亡及机制探讨
目的 探讨肿瘤坏死因子诱导凋亡配体(TRAIL)对胃癌细胞株MKN28细胞体外诱导凋亡的作用及机制.方法 采用MTT法培养、分析细胞增殖抑制率及细胞存活率,流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期,AO/EB染色观察凋亡细胞.结果 TRAIL可明显抑制MKN28细胞的增殖,并可诱导细胞的凋亡.结论 TRAIL可诱导MKN28细胞株的凋亡,并呈剂量依赖性.
关键词： 肿瘤坏死因子诱导凋亡配体 凋亡 胃癌细胞株 MKN28细胞 -
四君子汤含药血清对SGC-7901细胞株凋亡及其相关蛋白表达的影响
目的:研究四君子汤含药血清对体外培养的人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其凋亡蛋白Bax、Bcl-2表达的影响.方法:应用体外培养方法和流式细胞技术,检测四君子汤含药血清对人胃癌SGC-7901细胞的细胞凋亡率及其凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的阳性标记率.结果:用药后应用流式细胞仪检测胃癌SGC-7901的细胞凋亡,发现6 h、24 h、48 h后四君子汤含药血清高、中剂量组与两对照组相比较细胞调亡率显著增加,其中48 h高、中剂量组凋亡率增加为显著(P<0.01).并且随着时间的延长凋亡率增高,呈时间剂量依赖性,48 h高剂量组与中低剂量组比较,有明显增加(P<0.05).48 h后细胞周期分布,随着四君子汤含药血清剂量的增加,G0/G1期细胞增多,而S期及G1/M期细胞则相应减少.细胞培养48 h后,高、中剂量四君子汤含药血清可促进凋亡诱导Bax表达和下调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达,呈现量效关系.结论:四君子汤含药血清可影响Bax基因及Bcl-2基因的表达而诱导胃癌细胞凋亡.
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PGE2诱导人胃癌BGC-823细胞HIF-1α、VEGF表达的信号转导途径研究
目的研究前列腺素E2(PGE2)诱导人胃癌细胞株(BGC-823)、低氧诱导因子-1 α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的信号转导途径.方法应用100μmol/L的PGE2联合不同浓度的MAPK阻滞剂PD98059(10、50和100μmol/L)或磷酸肌醇3-激酶(PI3K)阻滞剂Wortmannin(50、100和200nmol/L)作用于BGC-823细胞24 h,收集细胞,行Western blot检测HIF-1α、VEGF的表达.结果正常对照组BGC-823细胞低度表达HIF-1α、VEGF蛋白,100μmol/L PGE2刺激细胞24h显著诱导HIF-1α、VEGF蛋白表达.PD98059或Wortmannin均对PGE2诱导的HIF-1α和VEGF蛋白表达产生剂量依赖性抑制,100μmol/L PD98059几乎全部阻断了PGE2对HIF-1α和VEGF蛋白表达的诱导(P＜0.01),而200nmol/L Wortmannin可部分阻断PGE2的这种作用.结论PGE2可能通过激活MAPK和/(或)PI3K信号转导途径调控HIF-1α蛋白表达,进而促进VEGF表达.
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阿司匹林对人胃癌细胞株的作用及机制探讨
目的观察阿司匹林对人胃癌细胞株SGC7901生长及人胃癌裸鼠移植瘤生长的作用,并初步探讨其作用机制.方法采用MTT法及流式细胞术检测不同浓度阿司匹林对胃癌细胞增殖及细胞周期的影响;Western blot法检测阿司匹林对胃癌细胞COX-2、VEGF表达的影响;建立人胃癌裸鼠移植瘤模型,给予阿司匹林20天,观察肿瘤大小,免疫组化检测阿司匹林对肿瘤组织中COX-2、VEGF表达及MVD的影响.结果阿司匹林对胃癌细胞的增殖具有抑制作用,且呈一定的时间、剂量依赖性;细胞周期分析表明阿司匹林主要使细胞阻滞在Gp/G1期;Western blot检测表明阿司匹林能降低胃癌细胞COX-2、VEGF蛋白的表达;阿司匹林对裸鼠移植瘤的生长有抑制作用,免疫组化显示阿司匹林能降低移植瘤组织中COX-2、VEGF的表达及MVD.结论阿司匹林对胃癌细胞及裸鼠移植瘤均具有一定的抑制作用,其机制可能是通过对COX-2和VEGF等血管生成相关因子的抑制起作用.
