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丹参饮加味方诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡及其机制研究
目的:探讨丹参饮加味方体外诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的分子机制.方法:以丹参饮加味方120,240,480 mg· L-作用细胞24,48,72,96 h后,应用四甲基偶氮唑盐法(MTT)和流式细胞仪检测该方对胃癌SGC-7901细胞的抑制率和凋亡率的影响;采用免疫组化法检测丹参饮加味方对Bcl-2,Bax蛋白表达的影响.结果:与空白对照组相比,丹参饮加味方各组细胞抑制率、凋亡率明显升高(P<0.05),Bax蛋白表达量显著增强(P<0.05),Bcl-2蛋白表达量明显降低(P<0.05).结论:丹参饮加味方能体外抑制胃癌细胞的生长,其诱导SGC-7901细胞凋亡的作用机制可能与上调Bax,下调Bcl-2蛋白的表达有关.
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胃康舒宁对胃癌细胞株体外生长及细胞周期的影响
目的:观察中药复方胃康舒宁对胃癌细胞株SGC-7901体外生长情况及细胞周期的影响.方法:以胃康舒宁200,400,800 mg·L-1作用细胞24,48,72,96 h后,采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)和流式细胞仪方法检测细胞抑制率和细胞周期各时相比率变化.结果:与空白对照组相比,胃康舒宁各组细胞抑制率明显升高(P<0.05),其中G0/G1期细胞周期比率明显升高(P<0.05).结论:胃康舒宁能体外抑制胃癌细胞的生长,且能将细胞周期阻滞在G0/G1期.
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核因子-κB活化在胃癌耐药细胞株中作用的实验研究
目的 探讨核因子-κB活化在胃癌细胞株耐药性机制中的作用.方法 诱导培养胃癌细胞耐药亚株SGC7901/ADM,MTT法检测阿霉素对胃癌细胞株的细胞毒作用,流式细胞仪检测胃癌细胞株凋亡率的变化,免疫细胞化学染色法检测胃癌细胞株中的核因子-κB活化.结果 SGC7901/ADM相对耐药度较亲本细胞提高了8.9倍,10ug/ml阿霉素所导致的SGC7901/ADM胃癌细胞株凋亡率在48h低达到17.53%±1.02%,较亲本细胞下降31%.核因子-κB活化在SGC7901/ADM胃癌细胞株达到65%.结论 核因子-κB活化所导致的胃癌细胞株凋亡率下降在SGC7901/ADM胃癌细胞株耐药性机制中发挥一定作用.
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MUC5AC、MUC6核粘蛋白合成肽诱导小鼠抗肿瘤免疫反应
目的:探讨MUC5AC,MUC6核粘蛋白合成肽在诱导小鼠抗肿瘤免疫反应中的作用.方法:采用动物实验方法观察MUC5AC和MUC6黏核蛋白的合成肽诱导小鼠的细胞和体液免疫反应及其淋巴细胞体外抗肿瘤作用.结果:MUC5AC,MUC6合成肽可诱导小鼠产生相应的抗体及迟发型过敏反应,但不能产生脾淋巴细胞的明显增生及体外抗7901胃癌细胞株的作用.结论:MUC5AC,MUC6合成肽免疫小鼠可引发体液及细胞免疫反应,但尚不足以产生淋巴细胞毒作用.
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温热体外对人胃癌细胞株生物学行为的影响
目的:探讨温热对人胃癌细胞株增殖、生存以及黏附、侵袭能力的影响.方法:对人胃癌细胞株(AGS,MKN45,SGC7901,NCI-N87,SNU-1和SNU-16)行43℃2 h的温热处理,以37℃常温培养为对照.处理后用MTT法绘制生长曲线并比较增殖抑制情况;光镜下动态观察细胞生长情况和形态学变化;Hoechst33342/PI荧光染色观察细胞核染色等形态学变化;透射电镜(transmissionelectron microscopy,TEM)观察细胞超微结构和死亡的具体形式;流式细胞术(flowcytometry,FCM)定量分析细胞的凋亡和坏死比例;黏附和侵袭试验观察胃癌细胞的黏附和侵袭能力.结果:MTT提示,温热对SNU-1有显著的增殖抑制作用(P<0.01),对SNU-16则无显著影响(P>0.05),对4株贴壁细胞则表现为暂时性的增殖抑制(d1-d2,P<0.05);光镜观察发现温热处理后SNU-1细胞出现死亡,而其他细胞无;荧光染色和透射电镜未发现AGS在温热处理后24 h有显著的形态学改变,而SNU-1则出现凋亡和坏死;FCM提示温热处理不增加AGS的自然死亡率(t=0.45,P=0.678 8),但能诱导SNU-1发生凋亡和坏死,增加细胞死亡率(9.7%±1.1% vs 20.1%±2.5%,t=6.54,P=0.0028);黏附试验表明温热能不同程度降低4株贴壁细胞的黏附能力[AGS(t=4.86,P=0.008 3),MKN45(t=4.50,P=0.010 8),SGC7901(t=6.83,P=0.002 4),N87(t=4.16,P=0.014 1)];侵袭试验表明温热能不同程度降低6株细胞的侵袭能力[AGS(t=2.94,P=0.042 5),MKN45(t=3.60,P=0.022 7),SGC7901(t=4.70,P=0.0093),N87(t=12.41,P=0.000 2),SNU-1(t=3.63,P=0.022 2),SNU-16(t=4.13,P=0.014 5)].结论:大多数的胃癌细胞株表现对短时间温热的耐受,除了暂时性的增殖抑制作用外,温热并无细胞杀伤作用,SNU-1是一个例外,温热能导致SNU-1细胞的凋亡和坏死;同时,温热处理能降低细胞的黏附和侵袭能力.
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温热对BGC-823胃癌细胞HSP70表达及超微结构的影响
目的:探讨热处理BGC-823人胃癌细胞后,HSP70表达与细胞凋亡及超微结构改变的关系.方法:采用MTT法及流式细胞术对BGC-823胃癌细胞株在42℃及43℃两个温度,分别热处理2、7、12 h后,进行细胞增生、凋亡及HSP表达测定,同时在透射电镜下观察肿瘤细胞的超微结构特点.结果:高热对肿瘤细胞的杀伤作用明显,各加热组均可使BGC-823细胞高表达HSP70,在43℃条件下热休克7 h后,HSP70表达量高,并与细胞的凋亡有关.随着时间延长,对肿瘤细胞超微结构的影响加大.大多数细胞表现出染色质浓缩、DNA分裂的形态学特征.结论:热处理对肿瘤细胞具有杀伤作用,43℃/7 h为诱导BGC-823细胞凋亡的适宜条件,凋亡是BGC-823细胞热诱导死亡的重要机制,热处理后HSP70过表达可能与肿瘤细胞凋亡有关.
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塞来昔布对胃癌细胞生长的抑制作用
目的:观察特异性COX-2抑制剂塞来昔布对体外培养的SGC7901胃腺癌细胞生长及环氧化酶活性的作用.方法:采用MTT比色法观察不同浓度的塞来昔布对COX2高表达的人胃癌细胞SGC7901生长的影响,免疫细胞化学方法检测COX-2蛋白的表达;同时用相差显微镜动态观察细胞形态及生长方式的改变.结果:塞来昔布25 μmol/L对SGC7901细胞生长无抑制作用,作用72 h后细胞存活率为80.0%;50-100μmol/L的塞来昔布与SGC7901细胞相互作用24 h细胞存活率分别为88.5%,80.7%,42.3%,48 h细胞存活率分别为79.8%,60.2%,40.1%,72 h细胞存活率分别为58.6%,37.8%、21.2%.塞来昔布同时减少COX-2蛋白表达;当浓度为50μmol/L的塞来昔布与胃癌SGC7901细胞作用后,COX-2表达明显下降,并呈剂量依赖关系.结论:塞来昔布能抑制SGC7901胃癌细胞株的生长及COX-2蛋白表达.
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奥沙利铂综合治疗胃癌的疗效及机制
目的:评价奥沙利铂(Oxaliplatin,L-OHP)对人胃癌的疗效,探讨其治疗胃癌的作用机制.方法:Ⅳ期胃癌患者22例接受包含L-OHP的联合化疗方案(L-OHP 85 mg/m2,静脉点滴,1 h,第1 d;四氢叶酸钙200 mg/m2,静脉点滴,1 h,第1-5 d;5-FU 300 mg/m2,静脉注射,第1-2 d,5-FU,持续静脉点滴,48 h;2 wk1疗程)4-6(平均4.6)个疗程.观察有效率,无进展生存时间(progression-free survival,PFS),总体生存时间及毒副作用.体外培养人中分化胃癌细胞株SGC-7901,应用MTT法检测L-OHP对细胞生长的抑制作用,并计算50%抑制浓度(IC50);将不同浓度梯度的L-OHP与细胞株作用后,应用流式细胞仪(ANEXIN-V标记)及TUNEL检测细胞凋亡情况.应用RT-PCR检测caspase-3m-RNA的表达.结果:有效(完全有效及部分有效)9例(40.9%).平均PFS4.2 mo,总体生存时间7.2 mo.蓄积性神经毒性(全部为Ⅰ-Ⅱ级),呕吐及腹泻(1例Ⅲ级腹泻),骨髓抑制发生率分别为93.5%,20%,32.9%.浓度为1 mmol/L的L-OHP与细胞株作用30 min,流式细胞仪即可检测出细胞凋亡水平升高,但无统计学差异(P>0.05),1 mmol/L作用2 d,流式细胞仪及TUNEL均可检测到细胞凋亡水平显著性升高(P<0.05).L-OHP作用后的细胞caspase-3 m-RNA表达升高,并与药物诱导的凋亡相关.结论:L-OHP治疗进展期胃癌安全有效.L-OHP在体外可明显抑制胃癌细胞株SGC-7901的生长,诱导细胞caspase-3m-RNA表达及凋亡.
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温热对人胃癌细胞株端粒酶活性及其相关基因表达的影响
目的研究温热对人胃癌细胞株MKN45端粒酶活性以及热处理对端粒酶相关基因表达的影响方法对人胃癌细胞株MKN45实施温热处理,用TRAP方法测定其端粒酶活性,用RT PCR分析hTERT,hTR,p53,cMyc,Madl,WTl的表达水平结果用1000个细胞进行端粒酶活性测定时,热处理后MKN45端粒酶活性降低25%,用1(000个细胞进行活性测定时其活性降低48%.热处理后端粒酶催化亚单位(hTERT)和RNA亚基(hTR)的表达水平在热处理前后没有明显改变.P53基因表达水平没有明显改变,WTl未见表达,c-Myc和Madl在热处理后表达水平则明显升高,可达原水平的1倍以上,且在第2.3次处理后达到高,mRNA表达水平可达原先10倍以上.结论对胃癌细胞株MKN45施行热处理后可在一定程度上抑制端粒酶的活性热处理对端粒酶活性的抑制作用并菲通过对hTERT和hTR两种基因的转录抑制而实现的.
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选择性COX-2抑制剂尼美舒利抑制胃癌细胞株SGC7901端粒酶的活性
目的:探讨选择性COX-2抑制剂尼美舒利对胃癌细胞株SGC7901细胞增生及端粒酶活性的影响,为选择性COX-2抑制剂应用于胃癌的防治提供新的理论依据.方法:用不同浓度的尼美舒利(0,50,100,200及400 μmol/L)处理SGC7901胃癌细胞株后,采用MTT比色试验和PCR-ELSIA半定量法检测细胞的增生和端粒酶活性,同时用相差显微镜动态观察细胞形态及生长方式上的改变.结果:尼美舒利呈时间剂量依赖性抑制SGC7901细胞的生长,同时他也能显著抑制SGC7901细胞的端粒酶的活性,50,100,200及400 μmol/L浓度的尼美舒利实验组的吸光度值分别为2.12±O.11,1.54±0.08,1.13±0.09,0.79:±0.12 vs2.76±0.06(P<0.01),并呈剂量依赖关系.结论:选择性COX-2抑制剂尼美舒利能抑制胃癌细胞株SGC7901的端粒酶活性,进而抑制其细胞生长,这也可能是选择性COX-2抑制剂抗肿瘤作用的又一新的机制.
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吲哚美辛和、或顺铂对胃癌细胞凋亡的影响
目的:探讨吲哚美辛(indomethacin,IN)、顺铂(cisplatin,CDDP)对胃癌细胞株MGC803凋亡的影响,为寻求新的胃癌治疗策略提供理论依据.方法:MGC803细胞经IN、CDDP处理后,用MTT法检测药物对细胞增生的抑制;荧光染色检测细胞凋亡率;流式细胞仪测定细胞周期.结果:IN、CDDP均可抑制MGC803细胞的增生、并诱导其凋亡;IN对胃癌细胞系MGC803的作用有较强的量效和时效依赖关系;高浓度的CDDP(10 mg/L)对此胃癌细胞系有较强的时效依赖关系,而低浓度的CDDP(0.1 mg/L,1 mg/L)在作用24 h后,由于肿瘤细胞的耐药机制,细胞凋亡率不再发生改变;中等剂量IN(200umoL/L)加各种浓度CDDP对此胃癌细胞系也有较强的量效和时效依赖关系,且加IN后,低浓度的顺铂诱导凋亡作用接近于单独作用组高浓度顺铂的效用.结论:吲哚美辛与顺铂对胃癌细胞株MGC803有协同作用,IN可能能够对抗胃癌对化疗药物的耐药.
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TGIF反义寡核苷酸对胃癌细胞增生和凋亡的影响
目的:TGIF(TGinteractingfactor)是TGF-β和视黄醛信号传导通路的抑制分子,且MAPK通路的活化能延长其半衰期,但他在肿瘤发生中的作用尚不清楚,本研究旨在探讨TGIF反义寡核苷酸对胃癌细胞增生和凋亡的影响.方法:将TGIF反义寡核酸瞬时转染胃癌细胞株SGC-7901,RT-PCR检测转染效率,MTT法检测胃癌细胞的增生速度,流式细胞术分析转染细胞的细胞周期和凋亡率的变化.结果:SGC-7901细胞转染TGIF反义寡核苷酸后,细胞增生受到部分抑制,72h后,他的抑制率达20.4%,但细胞的凋亡和细胞周期分布无明显改变.TGF-β1处理后,与突变寡核苷酸转染组细胞和未转染组细胞相比,TGIF反义寡核苷酸转染的SGC-7901细胞的增生受到明显抑制(30%),G1期细胞含量增加更明显.结论:TGIF能抑制TGF-β1对细胞生长和细胞周期的负调控作用,多数肿瘤细胞和间质细胞能分泌TGF-β1,这些肿瘤细胞有可能利用TGIF甚至少量TGIF,抑制TGF-β对自身的生长抑制作用,从而促进肿瘤的发生、发展与转移.
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hTRT反义基因对胃癌细胞端粒酶及凋亡相关基因表达的影响
目的:探讨人端粒酶蛋白催化活性亚单位(human telomerasereversetranscriptase,hTRT)反义基因治疗对胃癌细胞端粒酶及凋亡相关基因表达的影响.方法:采用基因重组的方法,构建hTRT正、反义真核表达载体,并用脂质体导入SGC-7901胃癌细胞株,检测转染细胞增殖能力、细胞周期、端粒酶活性、端粒酶亚单位及bd-2,c-myc基因表达的变化.结果:成功构建hTRT正、反义真核表达载体,并导入胃癌细胞,筛选出稳定表达正、反义hTRT的阳性克隆7901-S,7901-AS1和7901-AS2.反义细胞增生能力明显减弱,凋亡细胞和G0/G1期细胞增多,增生指数下降,端粒酶活性下降,端粒酶亚单位hTRT的表达减少,而TP1,hTR无明显变化,进一步研究发现bd-2和c-myc基因的表达在转录和翻译水平均明显下调.结论:hTRT和c-myc,bcl-2基因的调节作用是相互的,反义hTRT基因可以通过下调胃癌细胞hTRT、c-myc、bcl-2基因的表达,一方面降低端粒酶活性,另一方面一定程度增加凋亡细胞的比率,从而抑制细胞的生长.
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Stat3反义寡核苷酸对人胃腺癌MKN45细胞相关信号传导影响的研究
目的:通过研究Stat3反义寡核苷酸对人胃腺癌MKN45细胞增生活性的影响,寻求胃癌治疗中相关信号传导途径的新靶点.方法:Stat3反义寡核苷酸是一种混合骨架寡核苷酸(MBO),采用脂质体介导的方式将其转染人胃腺癌细胞株MKN45;通过MTT法观察转染前后对细胞增生状态的影响;凝胶阻滞电泳(EMSA)和Western blot方法观察转染前后Stat3DNA的结合活性和磷酸化Stat3蛋白表达的变化.结果:Stat3反义寡核苷酸对MKN45细胞的增生有明显抑制作用;转染反义寡核苷酸后MKN45细胞中Stat3信号的组成性激活水平和磷酸化Stat3蛋白的表达分别下降了50.65%及78.86%.结论:Stat3反义寡核苷酸能显著抑制MKN45细胞中Stat3信号的传导,胃癌细胞株中活化的Stat3信号可作为胃癌治疗新的分子靶点.
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十一丙酸睾酮对胃上皮细胞株生物学特性的影响
目的:观察十一丙酸睾酮对胃癌细胞株SGC-7901以及正常胃上皮细胞株HFI-145生长的影响方法:用不同浓度的十一丙酸睾酮作用细胞,MTT方法研究生长状况,FCM观察细胞周期分布,TUNEL法检测细胞凋亡.比较不同浓度作用组间差异以及与对照组的差异.结果:0.0 004-0.4μmol/L十一丙酸睾酮对SGC-7901细胞生长有促进作用,对HFI-145细胞作用不明显;4μmol/L浓度对两种细胞均产生抑制,有时间依赖性,作用3 d抑制率分别达到17%和27%,4 pmol/L用药组细胞的G0/G1期细胞较对照组增多,FCM以及TUNEL未发现凋亡百分比的改变.结论:高浓度十一丙酸睾酮通过阻滞细胞于G0/G1期抑制胃上皮细胞生长,低浓度促进胃癌上皮细胞生长可能对胃癌的发展及预后产生影响.
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幽门螺杆菌和非甾体消炎药对胃上皮细胞动力学的影响
目的:观察幽门螺杆菌(Hpylori)和非甾体消炎药(NSAID)对胃上皮细胞增生凋亡的影响.方法:胃癌细胞株AGS与H pylori和/或消炎痛,阿司匹林体外共培养,通过MTT比色法,增生细胞核抗原(PCNA)的Western Blotting检测技术,观察细胞增生青况,FITCAnnexin-V/PI双染色流式细胞仪检测,DNA凝胶电泳,透射电镜方法等检测细胞凋亡.结果:MTT比色法和蛋白质印迹检测细胞PCNA表达结果表明细胞毒素相关基因A(CagA)阳性的H pylori菌株NCTC11637能够促进细胞增生,此外,低密度(3.2×107-4×109CFU/L)NCTC11637能促进细胞的增生,而高浓度(>2×1010CFU/L)则抑制细胞的增生.消炎痛和阿司匹林能抑制细胞的活力.当AGS细胞与H pylori和NSAID共同孵育时,细胞的生长亦明显受到抑制.FITC-AnnexinV/PI双染色流式细胞仪检测表明消炎痛和阿司匹林可诱导细胞凋亡明显增强,而Hpylori组则未见凋亡的增强,当二者共同作用于AGS细胞时,细胞凋亡率明显升高,但与非甾体消炎药单独作用组相比,则有所下降.透射电镜和DNA琼脂糖凝胶电泳进一步证实了FITC-Annexin-V/PI双染色流式细胞仪检测的结果.结论:CagA阳性的Hpylori更加容易促进胃上皮细胞的增生.H pylori对细胞生长的影响与H pylori的密度有关.Hpylori和NSAID间的作用是相互拮抗的.
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p16基因逆转录病毒载体的构建及其对人胃癌细胞生长的抑制作用
我们构建了pLNCX-p16逆转录病毒载体,并将其转染至人未分化胃癌细胞,观察其对胃癌细胞生长的抑制作用.资料与方法1.一般资料:白细胞采自正常人外周血,人未分化胃癌细胞株HGC 27购自中科院上海细胞所,DH5α、逆转录病毒载体pLNCX为本实验室保存,PCR试剂盒、反转录PCR扩增试剂盒、DNA连接试剂盒和限制性内切酶购自宝生物工程(大连)有限公司.TRIzol Reagent、 Lipofectamine购自Invitrogen公司.
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Nag1基因对胃癌细胞增殖与凋亡的影响
新近研究表明,非甾体抗炎剂(NSAIDs)类药物能预防结肠腺瘤和腺癌发生及抑制多种肿瘤的生长[1].研究显示,NSAIDs抑瘤作用除了研究较多的COX-2途径外,另存在非COX-2途径,而后一途径与诱导下游基因Nag-1表达有关[2].本研究构建Nag-1基因载体,将其转染胃癌细胞株SGC-7901和MKN-28,观察对胃癌细胞生长、凋亡与侵袭能力的影响.
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切除修复交叉互补基因1表达与胃癌细胞株耐药关系的实验研究
切除修复交叉互补基因1 (excision repair cross complementing 1,ERCC1)是核苷酸切除修复途径的关键基因,其过度表达导致顺铂耐药[1].本研究通过检测不同胃癌细胞系中ERCC1的表达并观察其对顺铂的敏感性,了解ERCC1表达与顺铂耐药之间关系,并通过顺铂诱导胃癌SGC7901细胞后观察ERCC1表达的变化,为探讨胃癌耐药机制和指导临床的个性化治疗提供理论依据.
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五味子乙素联合氟尿嘧啶对人胃癌细胞增殖及凋亡的影响
目的:探讨五味子乙素(Sch B)与5-氟尿嘧啶(5-FU)体外协同作用及对人胃癌细胞增殖及凋亡的影响.方法:MTT法检测不同浓度Sch B单用或与5-FU联用对细胞增殖的抑制作用;光学显微镜观察细胞生长状态变化并计数细胞分裂指数;电镜观察药物对细胞超微结构的影响;TUNEL法检测细胞凋亡.结果:Sch B单独应用对细胞增殖的抑制作用弱,与5-FU联用抑制作用显著,呈剂量依赖性;药物处理48 h后,联合用药组细胞分裂指数为(1.1±0.28)%,与Sch B组(13.7±0.43)%、5-FU组(5.1±0.52)%比较显著降低,P<0.05;电镜下可见细胞皱缩,胞膜界限模糊,核膜消失,核质浓缩及凋亡小体形成,以双药联用为显著.TUNEL法分析示,联合用药组细胞凋亡率为(73.9±5.1)%,与Sch B组(16.4±2.4)%、5-FU组(34.6±3.2)%比较差异有统计学意义,P<0.05.结论:Sch B与5-FU联合应用能有效抑制胃癌细胞增殖,促进细胞凋亡,二药具有协同增效作用.