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中药复方对胃癌细胞株体外实验研究进展
目的:总结中药复方对胃癌细胞株体外实验研究的概况.方法:对近十年的相关文献进行收集、整理、归纳、总结与分析.结果:中药复方可通过对胃癌细胞株的毒性作用、影响细胞生长周期、抑制端粒酶活性、影响增殖和凋亡的相关基因表达、抑制胃癌细胞转移,影响信号传导通路等途径,直接或间接诱导胃癌细胞凋亡或抑制胃癌细胞增殖.结论:中药复方对胃癌细胞株体外实验达到体外抗肿瘤的效果.
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三氧化二砷对人胃癌细胞株nm23及PCNA基因表达的影响
目的:研究三氧化二砷对人胃癌细胞株nm23及PCNA基因表达的影响.方法:将体外培养的人胃癌细胞株分2组,实验组给予三氧化二砷5μmol/L,对照组未作任何处理,于给药后1、3、5及7 d通过免疫组化技术检测nm23及PCNA基因蛋白表达.结果:给药后实验组nm23及PCNA基因蛋白表达明显低于对照组(P＜0.05).结论:三氧化二砷可下调nm23及PCNA基因蛋白表达,具有抗肿瘤作用.
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微小RNA-10b在不同分化程度胃癌细胞株中的表达
目的 观察微小RNA-10b(miR-10b)在不同分化程度的胃癌细胞株中的表达水平.方法 选择5种胃癌细胞株,根据其不同分化程度分为3组,即高分化组(AGS)、中分化组(N87、SGC-7901)、低分化组(MKN-45、BGC-823),以胃黏膜上皮永生化细胞GES-1为第4组,即正常组,通过实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和荧光素酶报告基因定量检测,观察miR-10b在6种不同分化水平的细胞株中的表达.结果 miR-10b在正常组及高分化组中几乎不存在表达,设定其在GES-1中的表达量为1.0,高分化组相对表达量为2.5,中分化组弱表达,相对表达量为7.5、7.0,在包括BGC-823、MKN45这种具有高度转移倾向的低分化组中明显高表达,相对表达量为10.5、12.5.结论 miR-10b在低分化胃癌细胞株中过表达,同时其表达水平与胃癌细胞侵袭转移能力呈正相关.
关键词： 胃癌细胞株 微小RNA-10b 实时定量聚合酶链反应 -
复方苦参注射液经P13K/Akt信号通路抑制胃癌细胞株BGC-823生长
目前研究提示,复方苦参注射液(MI)能通过抑制核因子(NF)-κB的活化发挥抗肿瘤作用[1].本研究旨在探讨MI对胃癌细胞BGC-823增殖的抑制作用及相关的信号通路.
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CpG ODN1826增强树突状细胞抗胃癌效应研究
近年研究结果 显示,含有非甲基化的CpG基序具有强大的免疫激活作用[1].前期研究表明,CpG ODN可增强树突状细胞(DC)对胃癌细胞株MKN45的杀伤作用[2].本研究旨在观察CpGODN诱导DC的抗胃癌效应.
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去甲基化Runx3基因对荷人胃癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用
Runx3基因作为转化生长因子(TGF-β)信号传导通路中的一个重要因素参与对上皮细胞的负向调控.在众多的肿瘤中均发现了染色体1p36的异常[1],而其中Runx3甲基化对胃癌的发生发展的影响越来越受到广泛关注.为进一步明确Runx3基因甲基化在胃癌发生、发展中的作用,本研究运用5-aza-2'-deoxycytidine药物处理胃癌细胞株达到去甲基化效果并接种于BALB/c裸鼠观察成瘤率和肿瘤体积,从而深入探讨Runx3基因在胃癌中的表达情况及其临床意义.
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短发夹状RNA对胃癌细胞株血管内皮生长因子mRNA表达的影响
RNA干扰已成为当前肿瘤基因治疗的新策略[1],我们设计了针对血管内皮生长因子(VEGF)短发夹RNA(shRNA),观察其对人胃癌细胞血管VEGF表达的影响.
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长春新碱对MGC803细胞多药耐药的短期诱导及PD098059、myr-ψPKC对其耐药的逆转
本实验采用长春新碱(VCR)在短期内对胃癌细胞株MGC803的作用,观察其多药耐药(MDR)相关基因表达的变化.并通过特异性促分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)/ERK蛋白激酶(MEK1/2)抑制剂PD098059及特异性蛋白激酶C(PKC)抑制剂myr-ψPKC,观察其对MDR的影响.
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外源性胃泌素在胃癌细胞增殖和凋亡中的作用
我们应用MKN45胃癌细胞株通过四唑蓝(MTT)比色分析法及流式细胞仪观察胃泌素在细胞增殖、凋亡中的作用，同时观察丙谷胺对胃泌素的拮抗作用，并与5-氟尿嘧啶(5-Fu)作比较，结果报道如下。 一、材料与方法 1.细胞培养：MKN45胃癌细胞株(上海市消化疾病研究所提供)培养于RPMI 1640培养液中，加入体积分数为10%小牛血清，置37 ℃5%CO2恒温培养箱，隔天换液，3 d传代。 2.试剂配制及实验分组：用5%的小牛血清的1640液将胃泌素(上海丽珠东风生物技术公司)配为25 mg/L浓度，丙谷胺(江苏金坛制药厂)浓度为32 mg/L，5-Fu浓度为10 mg/L。实验共分5组：空白对照组、胃泌素组、丙谷胺组、胃泌素＋丙谷胺组和5-Fu组。 3.MTT比色分析法：取传代后72 h的细胞，用含10%小牛血清的培养液调整细胞浓度为1× 108个/L，接种于96孔培养板，每孔100 μl，待细胞贴壁后弃去培养液，空白对照组加5 %小牛血清培养液100 μl，胃泌素组加胃泌素液100 μl，丙谷胺组加丙谷胺液100 μl ，胃泌素＋丙谷胺组二者各加50 μl。5-Fu组加5-Fu液100 μl，每组设8个复孔，培养72 h，结束培养前6 h加质量分数为5%MTT(Sigma公司)20 μl/孔，继续培养6 h,离心，弃上清，每孔加质量分数为20%十二烷基硫酸钠(SDS)100 μl，震荡5 min，室温30 min后，在酶标仪上测定570 nm波长处的吸光度值(A)。 4.流式细胞术：传代后72 h细胞用含体积分数为10%小牛血清培养液调整细胞浓度为1×10 9个/L，接种于6孔培养板，每孔1.2 ml，细胞贴壁后弃去培养液，空白对照组加5%小牛血清培养液2.0 ml，胃泌素组加胃泌素液2.0 ml，丙谷胺组加丙谷胺液2.0 ml，胃泌素＋丙谷胺组二者各加1.0 ml。培养48 h后，分别收集每孔细胞，磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤2次，2 ml 1640液制成细胞悬液，测定前离心弃上清，碘化丙啶(PI)染色，ANNEX IN-V(Boehringer mannheim公司)标记，测定凋亡细胞百分率。 5.统计学方法：两组间吸光度值采用t检验；凋亡百分率采用U检验。 二、结果 1.胃泌素对MKN45胃癌细胞的增殖作用：对照组吸光度A值为0.561±0.056；胃泌素组为0.767±0.065与对照组比较，MKN45增殖作用明显加快；丙谷胺组0.556±0.040与对照组间差异无显著性(P＞0.05)；胃泌素联合应用丙谷胺可抑制细胞的增殖［A值为0. 583±0.032，与胃泌素组比较，P＜0.01，但不如5-Fu (0.453±0.045)强( P＜0.01)］。 2.胃泌素对MKN45胃癌细胞凋亡的影响：胃泌素对MKN45细胞的凋亡有明显的抑制作用，胃泌素组细胞凋亡百分率仅为1.39%，明显低于对照组的9.58%(P＜0.01)，联合应用丙谷胺后凋亡增加(表1)。
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survivin及bcl-2基因表达在胃癌细胞株MGC803顺铂耐药中的作用
目的 探讨胃癌细胞株MGC803对顺铂(CDDP)耐药产生的有关机制.方法观察不同浓度CDDP(0.1、1.0、10.0mg/L)对MGC803细胞增殖、凋亡及抗凋亡基因survivin,bcl-2 mRNA表达的影响,用MTT法检测细胞生长抑制率;荧光染色检测细胞凋亡率;流式细胞仪测定细胞周期的变化;RTPCR检测survivin、bcl-2 mRNA的表达.结果 10mg/L的CDDP对MGC803细胞有较强的抑制增殖、促进凋亡作用,而0.1、1.0mg/L的CDDP干预24h后,其抑制细胞增殖,促进细胞凋亡的作用逐渐消失;CDDP作用于细胞48h后,细胞S期增加,G2/M期下降;MGC803细胞在1.0mg/L的CDDP作用下,survivin mRNA表达自24h后逐渐增高,bcl-2 mRNA表达逐渐下降(P＜0.05).结论 CDDP可干扰MGC803细胞周期,但该细胞对低浓度CDDP易于产生耐药,survivin mRNA表达增高可能是MGC803细胞对CDDP产生耐药原因之一.
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生存素及bcl-2基因表达在吲哚美辛抗胃癌细胞株 MGC803 增殖、诱导凋亡中的作用
目的:探讨吲哚美辛(IN)对胃癌细胞株MGC803增殖、凋亡的影响及可能的机制.方法:观察不同浓度IN(50,100,200μmoL稬-1)对MGC803细胞增殖、凋亡及抗凋亡基因生存素、bcl-2 mRNA表达的影响,MTT法检测细胞生长抑制率;荧光染色检测细胞凋亡率;流式细胞仪测定细胞周期变化;RT-PCR检测生存索、bcl-2 mRNA的表达.结果:IN对MGC803细胞具有抑制增殖、促进凋亡的作用,并具有浓度、时间依赖性;IN作用于细胞48 h后,细胞周期改变表现为G0/G1期比例增加,S期及G2/M期下降;细胞经200μmoL稬-1IN作用后,生存素mRNA表达逐渐减弱(P<0.05),bcl-2 mRNA表达无明显变化.结论:IN可抑制MGC803细胞增殖、诱导凋亡,干扰细胞增殖周期,生存素mRNA表达下调可能是其作用机制之一.
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基于基因表达谱分析的胃癌诊断及预后相关长链非编码RNA谱识别及鉴定
目的：筛选可靠的胃癌诊断及预后相关长链非编码RNA(lncRNA)谱，建立基于lncRNA谱的胃癌预后风险评分系统。方法：下载4个已发表的胃癌cDNA芯片数据集，对训练集GSE63089采用6种不同分类器筛选得到胃癌相关lncRNA谱，十字交叉验证及ROC曲线评估其诊断价值。在测试集(GSE27342， GSE38749和GSE50710)中验证模型的稳定性。经随机森林算法进一步筛选得到胃癌预后相关lncRNA，基于此建立胃癌风险评分，进而与性别、年龄等参数行单因素及多因素Cox回归。GSEA分析揭示胃癌预后相关lncRNA 的生物学功能。后，通过7株胃癌细胞株、胃上皮永生化细胞株GES-1及30对胃癌组织以qRT-PCR法检测胃癌预后相关lncRNA在体内外的表达水平及对胃癌的诊断能力。结果：经训练集GSE63089筛选，得到35个具诊断胃癌价值的lncRNA；十字交叉验证显示6种分类器基于35个lncRNA诊断胃癌的准确率分别为90%、87%、89%、88%、89%和92%；3种线性分类器(CC、DLDA和SVM)ROC曲线的AUC分别为0.957，0.961和0.986。验证集中诊断胃癌的准确率同样可达70~100%，证明模型的稳定性。随机森林算法进一步筛选出5个与胃癌预后相关的lncRNA(AK001094、AK024171、AK093735、BC003519和NR_003573)，基于其表达值建立胃癌预后风险评分。该评分系统对预后判断的AUC值为0.732；单因素及多因素分析发现，风险评分是胃癌预后的独立风险因素[单因素分析，HR =2.718，95% CI,1.452~5.090]；多因素分析，HR =5.249，95% CI,1.718-16.034]。GSEA分析显示，5个lncRNA主要参与细胞粘附等信号通路。体内外实验验证发现，AK093735、BC003519及NR_003573在胃癌中表达上调(P<0.05)，而AK001094、AK024171则表达下调(P<0.05)，与芯片结果一致；5个lncRNA诊断胃癌的AUC值分别为0.693、0.745、0.896、0.769和0.845，5者联合诊断的AUC值为0.958。结论：LncRNA谱可以作为胃癌诊断及预后的可靠标志物，但其具体生物学机制尚待进一步研究证实。
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hMUC4通过HER2介导的胃癌耐药及机制研究
目的：研究人黏蛋白4(MUC4)及HER2在胃癌组织中的表达，并探讨其对胃癌常规化疗及靶向HER2治疗的影响。方法：通过免疫组化检测MUC4及HER2在胃癌组织中的表达及分布；构建MUC4的干扰慢病毒并感染人胃癌HER2阳性细胞株BGC823及SGC7901，定量PCR及western blot验证MUC4的干扰效率；MTT法和流式细胞术检测各细胞株对化疗的敏感性；Western blot及定量PCR法检测下游机制；小鼠皮下成瘤及胃癌原位肝转移模型检测MUC4对常规化疗及靶向HER2的疗效影响。结果：MUC4与HER2在胃癌组织中异常表达(45% vs.24.3%)，且在肿瘤细胞中共定位，回归分析显示MUC4与胃癌的淋巴结转移具有相关性(P=0.045)；MUC4干扰细胞株对顺铂的敏感性升高(P<0.01)；抑制HER2的激活后，野生型胃癌细胞株对顺铂的敏感性升高(P=0.021)，但MUC4干扰株未见明显改变(P=0.873)；Western blot结果显示MUC4可以上调并激活HER2，进而激活下游FAK-PI3K-AKT通路；体内实验也证实，MUC4干扰组皮下肿瘤对化疗敏感性升高(P<0.01)，且原位肿瘤肝转移的发生率降低(P=0.03)。结论：MUC4在胃癌组织中异常表达并通过HER2引起胃癌耐药，其下游机制可能由PI3K-AKT通路介导；抑制HER2后可逆转MUC4的耐药；MUC4阳性HER2阳性的细胞比MUC4阴性HER2阳性的细胞对HER2单抗具有更好的疗效。
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尼美舒利对丝裂霉素-c抑制人胃癌细胞株细胞增殖及诱导凋亡影响的实验研究
目的研究环氧化酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2)选择性抑制剂尼美舒利(Nimesulide,NIM)对丝裂霉素-c(Mitomycin,MMC-c)抑制体外培养人胃癌细胞株SGC7901及MGC803细胞增殖及诱导凋亡作用的影响.方法采用MTT比色法观察NIM对MMC-c抑制人胃癌细胞SGC7901及MGC803细胞增殖的影响;采用流式细胞仪技术及吖啶橙荧光染色观察MM对MMC-c诱导人胃癌细胞SGC7901及MGC803细胞凋亡的影响.结果 NIM能增强MMC-c抑制SGC7901细胞增殖及诱导SGC7901细胞凋亡,而对MGC803细胞元明显影响.结论 COX-2选择性抑制剂NIM能增强MMC-c对部分人胃癌细胞抑制增殖与诱导凋亡作用,作用有无可能取决于癌细胞COX-2的表达情况.
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尼美舒利对SGC-7901胃癌细胞系增殖及端粒酶hTERT-mRNA表达的影响
目的探讨不同浓度的尼美舒利(nimsulide)对人胃腺癌SGC-7901细胞系增殖及其端粒酶hTERT-mRNA表达的作用.方法不同浓度的尼美舒利(50,100,150 μmol/L)与SGC-7901细胞系共同培养24、48、72 h,MTT检测细胞增殖,相差显微镜动态观察细胞形态及生长方式上的改变,RT-PCR检测细胞端粒酶hTERT-mRNA的表达. 结果尼美舒利呈时间剂量依赖性抑制SGC-7901细胞的生长,hTERT-mRNA的表达降低,并且呈剂量依赖关系.结论尼美舒利能抑制SGC-7901胃癌细胞系hTERT-mRNA的表达,进而抑制其生长,这可能是选择性COX-2抑制剂抗肿瘤的机制之一.
关键词： 尼美舒利 胃癌细胞株 端粒酶hTERT-mRNA -
PCDNA3/p33ING1、wt-p53转染对胃癌细胞株SGC-7901生长抑制及凋亡的影响
目的 研究p33ING1基因与p53基因间的协同功能对胃癌细胞生长抑制和细胞凋亡的影响.方法 构建PCDNA3/p33ING1真核表达质粒(正义,反义)与wt-p53质粒,将其单、共转染至胃癌细胞株SGC-7901;应用流式细胞仪检测细胞生长周期曲线比例;TUNEL法、MG-P-MY法染色观察SGC-7901的凋亡情况.结果 p33ING1单转染和wt-p53共转染的SGC-7901胃癌细胞株较反义组和转染空载体组细胞生长速度减慢,细胞周期G0/G1期延长,S期变短(P＜0.05),细胞调亡数增加(P＜0.05).结论 p33 ING1具有抑癌功能及生物活性,与p53基因共同抑制胃癌细胞的生长,诱导细胞的凋亡,使细胞周期阻滞,二者呈协同依赖关系.
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尼美舒利与丝裂霉素联合应用对人胃癌细胞增殖及凋亡的影响
目的研究环氧合酶-2(COX-2)选择性抑制剂尼美舒利(NIM)与丝裂霉素-c(MMC-c)联合应用对体外培养人胃癌细胞株SGC7901的细胞增殖及凋亡的影响.方法MTT比色法及集落形成实验研究NIM与MMC联合应用对人胃癌细胞SGC7901细胞增殖的影响;流式细胞仪技术及吖啶橙荧光染色观察NIM与MMC联合应用对人胃癌细胞SGC7901细胞凋亡影响.结果MTT及集落形成实验结果显示:联合应用NIM与单用MMC比较,MMC对SGC7901细胞的半数抑制浓度(IC50)降低0.74μg/ml,集落形成相对率下降46.4%,均(P＜0.01);AO染色及流式细胞仪分析细胞凋亡结果基本一致,联合应用NIM,细胞凋亡率较两药单用均显著升高(P＜0.01).结论COX-2选择性抑制剂NIM与MMC联合应用对抑制体外培养人胃癌细胞株SGC7901的细胞增殖及诱导其凋亡有协同作用.
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榄香烯对胃癌细胞株耐药性的影响
目的:研究榄香烯对胃癌耐药细胞株SGC7901/ADM耐药性的影响及机制.方法:耐药肿瘤细胞SGC7901/ADM分为对照组和榄香烯处理组,MTT法检测各组对胃癌细胞株的细胞毒作用,免疫细胞化学染色法检测各组胃癌细胞株中的核转录因子活化,流式细胞仪检测胃癌细胞株凋亡率.结果:免疫细胞化学染色显示SGC7901/ADM胃癌细胞于阿霉素处理后9～12h后可检测到核转录因子活化,高达到60～65％,而榄香烯处理组胃癌细胞株可检测到核转录因子活化明显降低,并随其浓度升高呈反比,低至8～12％.SGC7901胃癌细胞株凋亡率随榄香烯浓度而升高(5.30±0.81)％～(48.53±1.02％),在同一浓度下,凋亡率随ADM作用时间的延长而升高.MTT法结果示非细胞毒浓度的榄香烯能增强ADM对SGC7901/ADM细胞的杀伤作用,并与ADM有协同作用,作用强度与榄香烯剂量呈正相关.结论:榄香烯可逆转胃癌细胞株耐药性,抑制核因子-kB活化可能在其中发挥一定作用.
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胃癌细胞株中NPRA基因启动子区CpG岛的甲基化分析
目的 NPRA-cGMP信号通路系统可激活cGMP依赖的蛋白激酶,活化的蛋白激酶调控离子转运蛋白和转录因子的表达,从而终影响细胞生长、凋亡、增殖和炎症反应.本研究旨在研究NPRA基因在胃癌细胞中的甲基化状态及其对下游mRNA表达的影响.方法 应用亚硫酸氢钠处理基因组DNA后PCR并测序,我们分析了6株胃癌细胞株NPRA基因的甲基化状态及去甲基化试剂对下游mRNA表达的影响.结果 在胃癌细胞中发现NPRA基因启动子区存在甲基化畸变并导致下游mRNA表达减少或沉默.去甲基化试剂可逆转mRNA表达沉默.结论 胃癌细胞中存在NPRA基因甲基化畸变.
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PTP抑制剂对VacA空泡活性的影响
近期在VacA的研究中发现,该毒素对多种生长因子(尤其是EGF)作用于胃粘膜上皮细胞的信号转导通路有显著影响,VacA对EGF诱导的受体蛋白酪氨酸激酶(receptor protin-tyrosine kinase,RPTK)自身磷酸化及随后一系列的信号转导过程有明显的抑制作用.国外学者已初步分离并克隆出胃癌细胞株膜表面的VacA受体,分子量大小约250kDa,氨基酸序列同源性分析显示该受体属于受体蛋白酪酸磷酸酶家族(receptor protin-tyrosine phosphatase,RPTP),RPTPT是细胞信号转导过程中与RPTK相拮抗的一类具有酶活性的受体,可导致多种信号肽的去磷酸化,从而减弱EGF等生长因子对胃粘膜上皮细胞增殖、修复的促进作用.
