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Cocktail探针药物法评价半夏泻心汤及不同配伍组对CYP450酶活性的影响
目的:采用Cocktail探针药物法研究半夏泻心汤及不同配伍组对大鼠肝细胞色素P450酶活性的影响.方法:大鼠连续7d灌胃半夏泻心汤全方组,甘补组,苦降组和辛组的煎煮液(15 mL·kg-1)后尾静脉注射Cocktail探针药物咖啡因(CYP1A2)、甲苯磺丁脲(CYP2C6)、氯唑沙宗(CYP2E1)、咪达唑仑(CYP3A1/2).建立LC-MS/MS法测定大鼠血浆中4种探针药物的浓度,DAS 2.0软件计算其药动学参数.结果:与空白组相比,全方组中甲苯磺丁脲的AUC0-24h值明显增大,CL显著减小,说明全方组对大鼠体内CYP2C6起抑制作用,而氯唑沙宗的AUC明显减少,CL增大,说明对CYP2E1起诱导作用；而对CYP1A2,3A1/2无显著性差异.同理,辛开组仅对CYP2C6起抑制作用,对其他的亚型酶无显著性差异；苦降组对CYP1A2,CYP2C6具有显著抑制作用,对CYP2E1有诱导作用,而对CYP3A1/2无显著性差异；甘补组对CYP1A2,CYP2E1有诱导作用,抑制CYP2C6,而对CYP3A1/2亦无显著性差异.结论:半夏泻心汤及不同配伍组对肝脏CYP450酶的活性影响不同,为阐明半夏泻心汤组方配伍的规律用以推测其在联合用药中可能发生的药物相互作用,指导临床合理用药.
关键词： Cocktail探针药物法 半夏泻心汤 配伍 细胞色素P450 -
应用Cocktail探针药物法分析中药对CYP450酶活性影响的研究进展
Cocktail探针药物法作为一种快速、准确、高通量的评价CYP450酶活性的研究方法广泛应用于药物研发早期筛选、药物代谢途径及机制研究、药物相互作用研究、指导临床合理用药、上市药物再评价及协助肝肾病理研究等诸多领域.该文对Cocktail探针药物法的特点做简要说明,着重介绍其在中医药领域内的应用进展,从中药活性成分的代谢机制研究,炮制过程,方剂配伍对CYP450的影响,揭示中成药CYP450代谢特点规律,民族药学应用情况,中药保肝作用及中医证候模型研究等,并总结归纳现有研究成果,比较其在中西医药领域内应用的异同点,为该领域的深入研究工作提供参考.
关键词： Cocktail探针药物法 细胞色素P450酶 中医药 代谢 -
基于Cocktail探针法的玉屏风散复方配伍研究
目的:以Cocktail探针约物法评价玉屏风散对肝微粒体CYP450主要亚型活性的影响,探讨复方配伍规律.方法:按拆方设计,设计7个组方,采用大鼠肝微粒体孵育体系,测定其对CYP主要亚型的半数抑制浓度(IC50).结果:玉屏风散及拆方对肝药酶CYPs的IC50均大于生药1.0g·L-1,对CYP1 A2,CYP2C19,CYP3A4 而言,玉屏风散及拆方配伍后的IC50较方中主要影响因子的IC50有增大的趋势(对酶活性的影响减小)；对CYPs而言,配伍后的实测IC50较线性预测值有减小的趋势.结论:从药物对代谢酶活性影响的角度而言,玉屏风散配伍应用具有一定优势和合理性.
关键词： 玉屏风散 CYP450 中药配伍 IC50 Cocktail探针药物法 -
Cocktail探针药物法评价灯盏花素对大鼠CYP450体内代谢活性的影响
目的 用C0cktail探针药物法研究灯盏花素对大鼠CYPl A2、CYP2C9、CYP2E1和CYP2D6体内代谢活性的影响.方法 将大鼠随机分为3组,空白对照组、低剂量组和高剂量组.低剂量组和高剂量组分别尾静脉给予灯盏花素粉针剂1.8,5.4 mg·kg-1·d-1,空白对照组给予生理盐水,共14 d.各组分别于第15 d注射Cocktail探针溶液,用HPLC检测各探针药物的血药浓度,用DAS2.0计算药代动力学参数,评价相应的CYP450亚型的体内代谢活性.结果 高剂量组美托洛尔的AUC和t1/2显著高于空白对照组,CL显著低于空白对照组(P＜0.05).低剂量组美托洛尔虽然也有相同趋势,但差异无统计学意义(P＞0.05).各组咖啡因、氯唑沙宗和甲苯磺丁脲的主要药代动力学参数均无显著差异(P＞0.05).结论 高剂量灯盏花素粉针剂可明显抑制大鼠CYP2D6的体内代谢活性,而对CYP1A2、CYP2E1和CYP2C9无显著性影响.
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银杏内酯B注射液对大鼠体内CYP酶活性的影响
目的:研究银杏内酯B注射液对大鼠细胞色素P450酶(CYP)亚型CYP1A2,CYP3A4和CYP2E1活性的影响,为临床合理用药提供参考.方法:将Wistar大鼠随机分组,给药组静脉推注银杏内酯B注射液10 mg·kg-1,qd,对照组给予相同体积的注射液空白溶媒,均给予7d.d8各组静脉注射茶碱20 mg· kg-1、氨苯砜10 mg·kg-1和氯唑沙宗20 mg· kg-1混合溶液,于给药后5,10,15,30 min及1,1.5,2,4,8,12,24 h采集血浆样品.用HPLC同时测定3种探针药物的血药浓度,用DAS2.0软件计算药动学参数.结果:同对照组相比,给药组茶碱和氯唑沙宗的主要药动学参数均无显著差异,但氨苯砜的表观分布容积(V1)显著增加(P＜0.05),消除半衰期(t1/2β)有明显延长趋势.结论:银杏内酯B注射液对大鼠CYP1A2,CYP2E1活性无显著影响,对大鼠CYP3A4活性可能有抑制作用.
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Cocktail法考察益气复脉对大鼠CYP450酶亚型活性的影响
目的:研究注射用益气复脉(冻干)对大鼠3种细胞色素P450酶亚型1A2,3A和2El体内代谢活性的影响.方法:将大鼠随机分为3组,低、高剂量组和空白对照组.低和高剂量组分别尾静脉注射益气复脉542和1 084 mg·kg-1·d-1,空白对照组给予等体积0.9％ NaCl溶液,连续7d.d8灌胃(ig)给予探针药混合溶液,用UPLC检测各探针的血药浓度.结果:与空白对照组相比,高剂量组氯唑沙宗的清除率(CL/F)升高,差异有统计学意义(P＜0.05).各组茶碱和氨苯砜的主要药动学参数均无显著差异.结论:高剂量益气复脉对大鼠CYP2E1有一定的诱导作用,而对CYPl A2和3A并无显著性影响.
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参麦注射液对大鼠细胞色素P450酶亚型活性的影响
目的 用Cocktail探针药物法研究参麦注射液对大鼠细胞色素P450酶(CYP450)6种亚型活性的影响.方法 将SD大鼠随机分组,实验组ip给予参麦注射液(10 mL/kg),对照组ip给予等量生理盐水,诱导7d,分别以非那西丁、安非他酮、甲苯磺丁脲、奥美拉唑、美托洛尔和咪达唑仑作为CYP1A2、CYP2B1、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4的探针药物.UPLC-MS/MS法检测大鼠血浆中探针药物的血药浓度,采用DAS3.0软件估算药动学参数.结果 与对照组相比,非那西丁、安非他酮和奥美拉唑的AUC0～∞、CL和Cmax显著降低(P＜0.05),甲苯磺丁脲、美托洛尔和咪达唑仑的AUC0～∞、CL和Cmax无显著性差异.结论 参麦注射液对大鼠CYP1A2、CYP2B1和CYP2C19亚型的活性有明显的抑制作用,而对CYP2C9、CYP2D6和CYP3A4亚型的活性无显著性影响.
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Cocktail探针药物法评价糖尿病大鼠体内细胞色素P450不同亚型的活性
目的:探讨链脲佐菌素(STZ)诱导糖尿病模型大鼠体内细胞色素P450酶(CYPs)6种亚型活性及蛋白含量的变化,为临床合理用药提供参考.方法:将大鼠随机分为空白对照组、糖尿病1周组、4周组和8周组.应用"Cocktail"探针药物法评价各组大鼠血浆中各探针药物的浓度,比较空白对照组和3组糖尿病模型组各探针药物的药动学参数,评价糖尿病大鼠体内细胞色素P450酶亚型1A2、2D6、2C19、2C9、2E1和3A4活性的变化;选择酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测糖尿病大鼠肝脏中此6种CYPs亚型酶蛋白相对表达量的变化.结果:相比于空白组,糖尿病4周和8周组大鼠体内咖啡因AUC分别降低了62.78%和79.31%(P<0.01),校正后的清除率(CL Z)分别升高了5.12和52.35倍(P<0.05,P<0.01);糖尿病模型组大鼠体内美托洛尔AUC、t 1/2z和CL Z均无显著变化;糖尿病8周大鼠体内氯唑沙宗AUC降低了60.58%(P<0.01),CL Z升高了1.2倍(P<0.01);糖尿病4周和8周组大鼠体内奥美拉唑AUC降低了55.60%和81.42%(P<0.05,P<0.01),CL Z升高了27.50和41.25倍(P<0.01);8周大鼠甲苯磺丁脲AUC降低了45.39%(P<0.05)、CL Z升高了83.33%(P<0.01);糖尿病1周和8周组大鼠体内咪达唑仑AUC降低了43.23%和53.87%(P<0.05,P<0.01),CL Z升高了1.33和2.04倍(P<0.05).相比于空白组,糖尿病1周和4周组大鼠肝脏中CYP1A2蛋白相对表达量升高了24.60%和26.41%(P<0.05),糖尿病1周组大鼠CYP3A4蛋白相对表达量降低了24.62%(P<0.05),CYP2D6、2E1、2C19和2C9蛋白相对表达量无变化.结论:与空白组相比,糖尿病模型组大鼠体内CYP1A2、2E1、2C19、2C9和3A4活性均被诱导,而CYP2D6活性未发生变化;与空白组相比,糖尿病1周、4周组的大鼠肝脏中CYP1A2蛋白相对表达量明显升高,糖尿病1周组大鼠肝脏中CYP3A4蛋白相对表达量明显降低,CYP2D6、2E1、2C9和2C19亚型酶蛋白相对表达量均未发生显著变化.
关键词： 细胞色素P450 Cocktail探针药物法 糖尿病大鼠 链脲佐菌素 -
Cocktail探针药物法评价威麦宁胶囊对大鼠体内CYP450活性的影响
目的 采用Cocktail探针药物法评价威麦宁胶囊对大鼠体内6种CYP450亚型酶活性的影响.方法 分别选用甲苯磺丁脲、氯唑沙宗、茶碱、咪达唑仑、奥美拉唑和右美沙芬作为CYP2C6、CYP2E1、CYP1A2、CYP3A2、CYP2D1和CYP2D2的探针底物.大鼠每日灌胃威麦宁胶囊1.6 g·kg-1,采用LC-MS/MS测定给药前后大鼠体内6种混合探针的血药浓度,计算药动学参数.结果 威麦宁胶囊连续给药2周后,与给药前相比,奥美拉唑ρmax、AUC0-t、tmax及AUC0-∞显著升高(P＜0.05);咪达唑仑ρmax、AUC0-t和AUC0-∞显著升高(P＜0.01或P＜0.05);右美沙芬ρmax、AUC0-t升高(P＜0.05);甲苯磺丁脲t1/2、AUC0-∞和tmax显著升高(P＜ 0.01或P＜0.05),而CL/F显著降低(P＜0.01),ρmax、AUC0-t无显著改变(P＞0.05);氯唑沙宗ρmax升高(P＜0.05),CL/F降低(P＜0.05),AUC0-t升高但无显著差异(P＞0.05);茶碱ρmax、AUC0-t升高但无显著差异(P＞0.05).表明奥美拉唑、咪达唑仑和右美沙芬代谢明显减慢(均P＜0.05),茶碱、甲苯磺丁脲、氯唑沙宗的代谢无显著差异;威麦宁胶囊对大鼠体内CYP2D1、CYP3A2、CYP2D2酶有抑制作用,对CYP1A2、CYP2C6、CYP2E1酶的活性无显著影响.结论 当威麦宁胶囊与CYP2C19、CYP3A4、CYP2D6酶的底物药物合用时,需要调整给药剂量,避免因药物相互作用使体内血药浓度过高产生毒副作用.
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Cocktail探针药物法评价灯盏乙素及其苷元对大鼠细胞色素P450酶的影响
通过cocktail探针药物法考察灯盏乙素及其苷元体外对大鼠细胞色素P450 (CYP450)酶的影响.采用UPLC-MS/MS法定量测定孵育体系中的灯盏乙素和灯盏乙素苷元;加入不同的辅助因子,考察灯盏乙素的代谢机制;以非那西丁、奥美拉唑、双氯芬酸、睾酮和右美沙芬为探针药,UPLC-MS/MS法测定混合探针药物的浓度,研究灯盏乙素及其苷元在体外孵育体系中对CYP1A2、CYP2C 19、CYP2C9、CYP3A4和CYP2D6酶活性的影响.灯盏乙素在体外肝微粒体中主要代谢为灯盏乙素苷元;NADPH和NADH对灯盏乙素的代谢基本无影响;灯盏乙素对5种主要亚型酶IC50值均大于50μmol/L,灯盏乙素苷元对CYP1A2、CYP2C 19、CYP2C9和CYP2D6酶的IC50值均为10～50 μmol/L.表明灯盏乙素苷元对这4种酶有弱抑制作用,在与经由上述酶代谢的药物合用时,可能会产生药物相互作用.
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天然冰片对大鼠细胞色素P450四种亚型活性的影响
目的:用Cocktail探针药物法研究天然冰片对大鼠细胞色素P450四种亚型CYP1A2、CYP2C6/11、CYP2E1和CYP3A活性的影响.方法:将大鼠随机分为2组,给药组灌胃给予天然冰片-0.8％ CMCNa混悬液,剂量90 mg/kg,对照组灌胃给予不含药物的0.8％CMC-Na溶液,每天1次,连续7d.于第8天,两组大鼠均尾静脉注射混合探针药物溶液(茶碱10 mg/kg、甲苯磺丁脲2.5 mg/kg、氯唑沙宗10 mg/kg、氨苯砜5 mg/kg),眼内眦静脉采血,超高效液相色谱法检测各探针药物的血药浓度,采用WinNonlin 5.0.1计算药代动力学参数.结果:与对照组相比,天然冰片组中甲苯磺丁脲的t1/2、AUC0-t、AUC0-∞和MRT(0-∞), 明显减小,两组之间的差异具有统计学意义(P＜0.05)；而两组之间茶碱、氯唑沙宗和氨苯砜的药代动力学参数则没有明显差异.结论:天然冰片对大鼠CYP2C6/11的活性具有诱导作用,对CYP1A2、CYP2E1和CYP3A活性无显著影响.
关键词： 天然冰片 细胞色素P450 Cocktail探针药物法 -
Cocktail探针药物法在中药细胞色素P450酶代谢研究中的应用
细胞色素P450酶是人体内重要的药物代谢酶,中药可抑制或诱导某个或某些细胞色素P450亚酶,从而影响合用药物的代谢,导致药物相互作用发生.中药代谢研究是中药现代化研究的重要方面,可提高中药使用的有效性和安全性,促进临床合理用药.Cocktail探针药物法能全面、真实地反映药物代谢的过程,其优点在于多个代谢途径的信息可在单个实验过程获得,并将个体间影响降至低,此法省时、经济.Cocktail探针药物法用于中药的代谢研究是一个比较新的研究领域,近几年开始有文献报道.该文介绍了Cocktail法在中药细胞色素P450酶代谢研究中的国内外应用进展,以期系统了解并指导该领域的研究.
关键词： 细胞色素P450酶 中药 Cocktail探针药物法 代谢 研究进展 -
中药注射剂对CYP450酶的影响研究进展
通过查阅、整理和分析近年来国内外有关中药注射剂对CYP450酶影响的文献,研究中药注射剂对CYP450酶的影响,从代谢性相互作用角度讨论中药注射剂在临床应用中的安全性问题.关于中药注射剂对CYP450酶影响的研究较少,部分中药注射剂对CYP450酶存在不同程度的影响.深入分析研究中药注射剂对CYP450酶活性的影响,预测可能发生的药物相互作用,对指导中药注射剂的合理使用,减少由药物联用所致不良反应具有重要意义.
关键词： 中药注射剂 CYP450酶 Cocktail探针药物法 药物相互作用 不良反应 -
Cocktail探针药物法评价钩藤总生物碱对大鼠CYP450亚型的影响
目的 建立同时测定细胞色素P450(CYP450)亚型CYP1A2、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4活性的Cocktail探针药物溶液的高效液相色谱(HPLC)检测方法,并利用该方法研究口服钩藤总生物碱(TAU)对上述4种亚酶活性的影响.方法 以咖啡因、甲苯磺丁脲、氯唑沙宗和氨苯砜分别作为CYP1 A2、CYP2C9、CYP2E1和CYP3A4的探针底物,以卡马西平作为内标物质,建立了乙腈-0.5％甲酸的梯度洗脱法同时测定4种探针药物的血药浓度,并对该方法进行方法学考察.雄性SD大鼠随机分为3组,分别给予空白溶剂(0.5％羧甲基纤维素)以及40、80 mg/kg的TAU,连续灌胃给药10 d,在第11天给予Cocktail探针药液后于不同的时间点采集大鼠血样.利用HPLC测定大鼠血浆中该4种探针药物浓度,血药浓度-时间数据采用DAS2.0软件进行药动学分析.结果 与空白对照组比较,80 mg/kg的TAU给药组灌胃10 d后,咖啡因的AUC0-t、AUC0-∞、MRT0-t、MRT0-∞和t1/2z均显著减小,CLz/F均显著增大;甲苯磺丁脲的AUC0-t和AUC0-∞均显著减小,CLz/F显著增大;氯唑沙宗的AUC0t、AUC0-∞、MRT0-tMRT0-∞和t1/2z减小,CLz/F增大,但差异无统计学意义;氨苯砜的药代学参数基本无变化.40 mg/kg的TAU给药组与空白组比较,该4种探针底物的药动学参数基本无变化.结论 本方法准确,灵敏度较高,适用于同时评价药物对CYP1A2、CYP2C9/11、CYP2E1和CYP3A4该4种亚酶的影响.80 mg/kg的TAU给药组给药10 d后对大鼠肝药酶CYP1 A2、CYP2C9和CYP2E1均存在不同程度的诱导作用,对CYP3A4的活性基本无影响,而40 mg/kg的TAU给药组对以上4种亚酶基本无影响.提示TAU在临床使用过程中,尤其是与其他药物联用时,应注意调整用药剂量,防止药物相互作用可能造成的不良反应;本文为临床合理配伍使用该药提供参考.
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超高效液相色谱法检测6种探针底物代谢产物并评价人细胞色素P450同工酶活性
目的：建立同时测定非那西丁（CYP1A2）、氯唑沙宗（CYP2E1）、甲苯磺丁脲（CYP2C9）、奥美拉唑（CYP2C19）、睾酮和咪达唑仑（CYP3A4）6种探针底物代谢产物的Cocktail体外方法，评价药物对人肝微粒体CYP450同工酶活性的影响。方法：人肝微粒体与6种探针底物在还原系统NADPH的作用下，37℃共同孵育；以蛋白沉淀法处理样品，采用超高效液相色谱系统（ UPLC-MS/MS），建立Cocktail混合探针，对药物的6种代谢物进行定量分析，并分析药物对人肝微粒体CYP450同工酶活性的影响。结果：6种探针底物物代谢产物乙酰氨基酚（0.26～8.35μmol/L）、6-羟基氯唑沙宗（3.02～96.63μmol/L）、5-羟基奥美拉唑（0.10～3.09μmol/L）、羟基甲苯磺丁脲（0.15～4.88μmol/L ）、6β-羟基睾酮（3.67～117.37μmol/L ）和α-羟基咪达唑仑（1.64～52.37μmol/L）线性关系良好，各成分相关系数（ R2）＞0.996，准确度为95.96％～103.10％，日内和日间精密度RSD（％）＜15％，提取回收率、基质效应RSD（％）＜11％，稳定性好。结论：UPLC-MS/MS准确、灵敏度高，可作为研究受试药物对CYP450酶影响及相关研究的分析测定方法。
关键词： 色谱法 液相 细胞色素P450酶系统 肝微粒体 Cocktail探针药物法 -
左归饮对大鼠体内Cyp3a1、Cyp2d2、Cyp1a2代谢酶活性的研究
目的:全面系统地探讨左归饮对大鼠体内3种细胞色素P450酶不同亚型体内代谢活性的影响,为临床安全、合理用药提供基础研究.方法:采用Cocktail探针药物法,结合LC-MS/MS检测技术,选择咪达唑仑、氢溴酸右美沙芬、非那西丁作为探针底物,研究左归饮对大鼠肝脏细胞色素P450不同亚型Cyp3a1、Cyp2d2、Cyp1a2活性的影响.结果:建立的LC-MS/MS方法,可以同时测定3种探针药物非那西丁、氢溴酸右美沙芬及咪达唑仑在大鼠体内的血药浓度.各吸收峰分离完全,线性关系良好,准确度、精密度及稳定性均符合生物样本检测要求,操作简便.同空白组相比,实验组咪达唑仑和氢溴酸右美沙芬的主要药动学参数T1、V、CL、AUC(0～t)和AUC(0～∞)有显著性差异,而非那西丁无显著性差异.结论:左归饮在大鼠体内对Cyp3a1酶和Cyp2d2酶活性有诱导作用,对Cyp1a2无显著影响.
关键词： 左归饮 Cocktail探针药物法 抑制或诱导作用 -
HPLC法测定CYP450不同亚型探针药物浓度
目的:建立同时测定细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)亚型CYP1 A2、2D6、2E1、2C19、2C9和3A4活性的Cocktail探针药物溶液的高效液相色谱(HPLC)检测方法.方法:分别选择咖啡因、美托洛尔、氯唑沙宗、奥美拉唑、甲苯磺丁脲和咪达唑仑作为CYP1A2、2D6、2E1、2C19、2C9和3A4的特异性探针药物,根据其各自理化特点配制成Cocktail组合探针溶液.使用HPLC-UV梯度洗脱法同时测定该6种探针药物的血药浓度,并对其进行专属性、精密度、准确度、稳定性的验证.结果:本研究建立的HPLC检测方法,可以同时测定大鼠血浆中6种探针药物的浓度,各探针药物的吸收峰分离完全,无杂质峰干扰.线性关系良好,线性范围为0.2 ～ 50 μg·mL-,低检测限为0.2 μg·mL-1.日内、日间精密度均小于9％,绝对回收率均大于75％,相对回收率在91％～107％之间,稳定性高,冷冻30 d内的RSD小于10％,室温条件下稳定性RSD小于9％,反复冻融条件下稳定性RSD小于10％.将此方法应用于同时研究大鼠体内该6种酶的活性,证明其具有较好的灵敏度.结论:经方法学验证,本法可以同时测定6种探针药物咖啡因、美托洛尔、氯唑沙宗、奥美拉唑、甲苯磺丁脲和咪达唑仑的血浆浓度.
